Способ гистологического окрашивания внутристеночных вен полых органов брюшной полости человека



Способ гистологического окрашивания внутристеночных вен полых органов брюшной полости человека
Способ гистологического окрашивания внутристеночных вен полых органов брюшной полости человека
G01N1/28 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

Владельцы патента RU 2756252:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к области медицины, а именно к анатомии, гистологии, топографической анатомии, патологической анатомии и гастроэнтерологии. Для гистологического окрашивания внутристеночных вен полых органов брюшной полости человека заполняют венозные сосуды наливной массой. Выполняют вырезку образцов ткани, гистологическую обработку и окрашивание. Перед гистологической обработкой проводят промывание вен раствором 10% аммиака и водой дистиллированной. Наливку венозных сосудов осуществляют краской «Тушь гистологическая HistoSafe». Далее в просвет органов вводят марлевые прокладки, фиксируют в 10% растворе забуференного формалина. После фиксации промывают проточной водой, вырезают образцы. Проводят гистологическую обработку образцов, включающую заливку в парафин и окрашивание срезов гематоксилином Майера. Способ оптимизирует изготовление окрашенных гистологических препаратов полых органов брюшной полости человека с контрастированием внутристеночных вен, дает возможность определить месторасположение вен относительно оболочек стенки полого органа брюшной полости, их принадлежность к кавальной, либо портальной венозным системам, обеспечивает определение расположения и строения различных частей вен и, как следствие, позволяет детально подобрать соответствующее лечение при патологии. 3 ил., 3 пр.

 

Изобретение относится к медицине, в частности к анатомии, гистологии, топографической анатомии, патологической анатомии и гастроэнтерологии, может быть использовано при изучении особенностей венозной ангиоархитектоники полых органов брюшной полости человека в норме и при патологии, а также в качестве наглядных пособий при преподавании гистологии в учебных заведениях.

Изготовление гистологических препаратов сосудов полых органов организма человека подразумевает окрашивание вен до или в момент гистологической обработки ткани (Авторское свидетельство СССР №78420; A01N 1/00; 01.01.1949; Авторское свидетельство СССР №1091058; G01N 1/28, А61В 10/00; 28.10.1982; Патент РФ №2213966; А61В 1/00; Бюл. №28, 10.10.2003). Результатом подобной обработки является окрашенный гистологический препарат ткани органа с дифференцированными сосудами. В большинстве случаев окрашивание сосудов в гистологическом препарате используется для создания наглядного пособия внутристеночной сосудистой системы органов, либо тканей, в которых они не доступны непосредственному изучению (Вайнер Ю.С., Атаманов К.В., Верятин Я.А. Особенности ангиоархитектоники тонкой кишки при различных способах пересечения ее стенки / Сибирское медицинское обозрение, 2017; 3(105):56-60; Патент РФ №2220411; А61В 1/00; Бюл. №36, 27.12.2003). При создании окрашенных гистологических препаратов с дифференцированными сосудами, как правило, возникают проблемы с выбором оптимального красителя, который бы отвечал всем требованиям, предъявляемым в каждом конкретном случае (Горбачева А.А. Сравнительная оценка некоторых способов заливки сосудистого русла млекопитающих / Научный результат. Серия «Физиология» Ветеринарные науки, 2016; 2(2):3-8; Гулькевич Ю.В. Методы патологической анатомии. Многотомное руководство по патологической анатомии, т. 1. М., Медгиз, 1963. 19-33). Большинство авторов предпочитают использование широкодоступных, недорогих красителей, удобных в приготовлении и работе (Коржевский Д.Э., Иванов И.Н. Гистологические методы окраски, применяемые в судебной медицине. СПб., Издательский дом СПбМАПО, 2003; Чумасов Е.И., Шайдаков Е.В., Коржевский Д.Э., Петрова Е.С. Медицинская технология гистологического исследования венозных сосудов у человека: методические рекомендации. Санкт-Петербург: Институт экспериментальной медицины, 2015. 55 с).

Известен способ изготовления учебных окрашенных анатомических препаратов кровеносных сосудов на трупном материале, заключающийся в том, что проводят наливку в сосуды наливочной массы, при этом основу массы составляет 100%-ный силикон, разбавленный бензином с добавлением масляных красок - кадмий красный и хром-кобальт для введения в артерии, берлинская лазурь или пражская синяя для вен (Патент РФ №2202776; G01N 1/30; Бюл. №27, 22.09.2000; Патент РФ №2270483; G09B 23/28; Бюл. №5, 20.02.2006). Способ обеспечивает доступность наливочной массы и качества наливки сосудов с одновременной окраской их изнутри и снаружи, упрощает процедуры, сокращает сроки приготовления препарата при сохранении естественного вида, формы и эластичности сосудов. Однако, в результате вымывания красителей в процессе гистологической обработки препаратов применять этот способ не представляется возможным при создании окрашенных гистологических препаратов с дифференцированными сосудами.

Другой известный способ «Препаровка сосудов после заполнения их инъекционными растворами желатина и целлоидина» (Закономерности строения периферической нервной системы человека и животных: [Сборник статей] / [Ред. Н.Н. Лавров и В.А. Латышев]. - Краснодар: [б. и.], 1968 [вып. дан. 1969]. 224) также имеет ряд недостатков. Во-первых, желатин при затвердевании становится твердым и хрупким, что затрудняет создание срезов на микротоме. Во-вторых, приготовление цветной желатиновой массы для наливки сосудов требует определенной последовательности смешивания различных веществ и процесс достаточно трудоемкий (набухание желатина в течение 24 ч в воде, его отжатие, нагревание на водяной бане, смешивание красителя с аммиачной водой при постепенном нагревании с последующим добавлением к смеси расплавленного желатина, глицерина и хлоралгидрата.

Известен способ окраски кровеносных сосудов внутренних органов на гистологическом препарате, содержащий в своем составе одновременно двухромовокислый калий, хромовокислый калий, формалин и воду, что позволяет повысить контрастность кровенаполненных сосудов от окружающих тканей, фиксацию и окрашивание. В результате, как заявляют авторы, на срезах видны кровенаполненные сосуды на фоне неокрашенной паренхимы органа (Авторское свидетельство СССР №957046; G01N 1/28, А61В 10/00; 02.03.1981). К недостаткам данного способа можно отнести несколько моментов. Во-первых, способ не позволяет одновременно окрашивать паренхиму органа, что уменьшает возможность разностороннего исследования сосудов в образце в целом и на уровне различных оболочек органа. Во-вторых, окрашивание сосудов возможно только с учетом их кровенаполнения, что также влияет на чистоту эксперимента, так как не все сосуды могут быть кровенаполнены в момент исследования.

Наиболее близким к предлагаемому является способ гистологического окрашивания внутристеночных вен полых органов брюшной полости человека, включающий заполнение венозных сосудов наливной массой, вырезку образцов, гистологическую обработку и окрашивание (Заболотько Л.А. Интрамуральные вены желудка в постнатальном онтогенезе и структурные механизмы, регулирующие по ним ток крови, Автореферат дисс. на соискан. докт. мед. наук, Новосибирск, 1992, с. 9, Д1). Для характеристики ангиоархитектоники интрамурального венозного русла желудка автор предлагает использовать в качестве наливной среды тушь-желатиновую массу или тонко-тертые масляные краски, а изучение морфометрических параметров вен желудка проводить на импрегнированных нитратом серебра различных отделах органа. Однако, способ подразумевает окрашивание кровенаполненных сосудов без их дифференцировки на артерии и вены той или иной венозной системы. Следовательно, использование данного способа для изучения морфометрических особенностей внутристеночных вен полых органов брюшной полости в зависимости от их системной принадлежности недопустимо.

Задачей способа является оптимизация изготовления окрашенных гистологических препаратов полых органов брюшной полости человека с контрастированием внутристеночных вен в научной, научно-исследовательской деятельности студентов, преподавателей, научных работников при изучении анатомических, топографоанатомических и гистологических вопросов изучения сосудистого русла органов, в практической деятельности врачей гастроэнтерологов, хирургов при изучении особенностей внутристеночной венозной ангиоархитектоники полых органов брюшной полости человека в норме и при патологии.

Поставленную задачу решают за счет того, что в качестве наливной инъекционной среды, контрастирующей сосуды, используют «Тушь гистологическая HistoSafe» - гистологический краситель для маркировки краев резекции макропрепарата, имеющий регистрационное удостоверение медицинского изделия (РЗН 2019/9247 от 15.11.2019 по ТУ 21.20.23-008-89079081-2017). Хорошая проницаемость туши позволяет заполнять внутристеночные сосуды малого диаметра до 0,1-0,2 мм. Текучесть массы без особых затрат и усилий проводит наполнение сосудистых структур при помощи 20 мл шприца для инъекций. Проточность массы сохраняется на открытом воздухе продолжительное время, что позволяет работать с материалом без ограничений по времени. Суть гистологического окрашивания внутристеночных вен полых органов брюшной полости человека заключается в следующем: предварительно промытые раствором 10% аммиака и воды дистиллированной венозные структуры органа плотно равномерно заполняют гистологическим красителем при помощи 20 мл шприца.

Для селективного окрашивания сосудов разных венозных систем органов используют красители 2-х цветов: оранжевый и синий (примеры окрашивания структур приведены ниже). Макропрепарат погружают в 10% раствор забуференного формалина на срок 48-72 часа. Для обеспечения полноценной фиксации полых органов в их просвет вводят марлевые прокладки. После завершения этапа фиксации, орган извлекают из формалина и промывают проточной водопроводной водой в течение 5 минут. Вырезку образцов ткани (стенки) с формированием фрагментов осуществляют в направлении перпендикулярном ходу основным сосудам в зоне изучения. Сформированные фрагменты толщиной от 2 до 3 мм подвергают гистологической обработке в условиях вакуумного гистопроцессора закрытого типа. После гистологической обработки проводят заливку образцов в тугоплавкий парафин (температура плавления 59-62 С°) с формированием гистологических блоков и последующей микротомией. Полученные гистологические срезы толщиной 2 мкм помещают на предметные стекла с положительным зарядом для обеспечения адгезии материала. Препараты окрашивают гематоксилином Майера без окраски эозином путем депарафинизации, регидратации, инкубации в течение 20 минут, промывают в проточной воде и просветляют. На завершающем этапе готовые препараты помещают в сканирующий микроскоп Pannoramic 250 Flash II 3DHistech (Венгрия) с тотальным сканированием стекол в автоматическом режиме при увеличении объектива х40. Контроль результатов проводят с применением программы CaseViewer v.2.3 3DHistech. В полученных препаратах просветы селективно окрашенных сосудов заполнены пигментом красителя с соответствующим цветом.

Пример 1. Сосуды кавальной системы стенки кардиального отдела желудка заливаются тушью гистологической синего цвета, сосуды портальной системы - тушью оранжевого цвета. После фиксации ткани, вырезки образцов и гистологической обработки, препараты окрашивают гематоксилином Майера (фиг. 1). На срезе кардиального отдела желудка представлены: слизистая оболочка с однослойным призматическим железистым эпителием (1), подслизистая основа (2), мышечная оболочка (3), серозная оболочка (4), а также внутристеночные вены кавальной системы кардиального отдела желудка с красителем в просвете синего цвета (5), его внутристеночные портальные сосуды с красителем в просвете оранжевого цвета (6) и сосуды без красителя в просвете - артерии (7).

Пример 2. Вены портальной системы стенки тощей кишки заливаются тушью гистологической оранжевого цвета. После фиксации ткани, вырезки образцов и гистологической обработки, препараты окрашивают гематоксилином Майера (фиг. 2). На срезе тощей кишки: слизистая оболочка с однослойным призматическим каемчатым эпителием (1), подслизистая основа (2), мышечная оболочка (3), серозная оболочка (4), а также внутристеночные вены с окрашенным в оранжевый цвет просветом подслизистой основы (5), мышечной оболочки (6), серозной оболочки (7), сосуды без красителя в просвете - артерии (8).

Пример 3. Вены портальной системы стенки поперечно-ободочной кишки заливаются тушью гистологической оранжевого цвета. После фиксации ткани, вырезки образцов и гистологической обработки, препараты окрашивают гематоксилином Майера (фиг. 3). На срезе поперечно-ободочной кишки показаны: слизистая оболочка с однослойным цилиндрическим каемчатым эпителием (1), подслизистая основа (2), мышечная оболочка (3), серозная оболочка (4), а также внутристеночные вены с окрашенным в оранжевый цвет просветом подслизистой основы (5), мышечной оболочки (6) и серозной оболочки (7), сосуды без красителя в просвете - артерии (8).

Высокое качество окрашенных гистологических препаратов с дифференцированными сосудами, получаемое в результате применения предлагаемого способа, не требующего больших финансовых затрат и специального технического оборудования, является его несомненным достоинством.

Таким образом, предлагаемый способ гистологического окрашивания внутристеночных вен полых органов брюшной полости человека, в отличие от ближайшего аналога, не зависит от кровенаполнения окрашиваемого сосуда и дифференцировки на артерии и вены той или иной венозной системы, а также позволяет одновременно с окрашиванием вен окрашивать паренхиму органа, что увеличивает возможность разностороннего исследования сосудов в образце в целом и на уровне различных оболочек органа.

Способ гистологического окрашивания внутристеночных вен полых органов брюшной полости человека, включающий заполнение венозных сосудов наливной массой, вырезку образцов, гистологическую обработку и окрашивание, отличающийся тем, что перед гистологической обработкой проводят промывание вен раствором 10% аммиака и водой дистиллированной, наливку венозных сосудов осуществляют краской «Тушь гистологическая HistoSafe», далее в просвет органов вводят марлевые прокладки, фиксируют в 10% растворе забуференного формалина, после фиксации промывают проточной водой, вырезают образцы, проводят гистологическую обработку образцов, включающую заливку в парафин и окрашивание срезов гематоксилином Майера.



 

Похожие патенты:

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложен способ улучшения фармакокинетики антитела, включающий замену по меньшей мере одной аминокислоты вариабельной области указанного антитела на гистидин.

Группа изобретений в целом относится к области биотехнологии, в частности к оборудованию, используемому в данной области, а именно к электрофоретическим чипам и способу их использования, а конкретно к электрофоретическим чипам, содержащим углеродные матричные электроды, и к способу электрофоретического накопления, сепарации и/или обнаружения аналитов.

Изобретение относится к технологии и технике отбора проб жидкости из трубопровода и может найти применение в нефтедобывающей и других отраслях промышленности. Раскрыто устройство для отбора проб жидкости из трубопровода, содержащее пробозаборный элемент, установленный на трубопроводе с ориентацией входного отверстия навстречу потоку, перед пробозаборным элементом в трубопроводе соосно с ним установлен смеситель для перемешивания потока, включающий последовательно расположенные перфорированную трубу и блок поперечно суживающихся и расширяющихся секций.

Изобретение относится к технологии и технике отбора проб жидкости из трубопровода и может найти применение в нефтедобывающей и других отраслях промышленности. Способ отбора проб жидкости из трубопровода (2) пробозаборным элементом (1) включает предварительное перемешивание потока циклонным гидродинамическим воздействием с помощью устройства для отбора проб.

Изобретение относится к технологии и технике отбора проб многофазной жидкости из трубопровода и может найти применение в нефтедобывающей и других отраслях промышленности. Способ отбора проб многофазной жидкости из трубопровода (2) пробозаборным элементом (1) включает предварительное перемешивание потока путем комплексного гидродинамического воздействия на поток отрывных, струйных и пульсирующих вихревых течений с помощью устройства для отбора проб.

Заявленное изобретение относится к области анализа растворов, а именно: предназначено для определения степени растворения. Техническим результатом является повышение точности измерения.

Изобретение относится к области удовлетворения потребностей человека, более точно к инструментам для диагностики в области медицины, биологии, химии, микробиологии. Тампон для сбора, нанесения, хранения и транспортировки химических или биологических материалов, выполненный из полимерного порошкового материала, содержит стержень, состоящий из держателя в виде утолщенной нижней части и более тонкой верхней части, оканчивающейся наконечником.

Изобретение относится к нефтяной промышленности, конкретно к устройствам для отбора проб жидкости в резервуарах. Раскрыт пробоотборник жидкостный, включающий полую, заглушенную сверху емкость с грузовым и технологическим тросами, дно которой оборудовано клапаном с поворотной вокруг петли крышкой, и запирающим механизмом.
Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии и клинической фармакологии. Предложен способ диагностики этиологии увеита и прогнозирования характера течения.

Изобретение относится к способу анализа следов загрязняющих веществ в криогенной жидкости. Способ заключается в том, что известное количество жидкости L, составляющей исходную жидкость, впрыскивают под давлением P в корпус (E); заранее определенную долю жидкости, присутствующей в корпусе, испаряют при ее нагревании; образующийся таким образом пар (13) выпускают из испарительного корпуса, чтобы поддерживать давление не выше, чем давление P, во время фазы испарения; количество испарившейся таким образом жидкости, составляющее менее чем L, точно контролируют, вследствие чего количество загрязняющего вещества в остаточной жидкости, присутствующей в корпусе, по существу равно количеству исходной жидкости, что означает, что его концентрацию умножают на предварительно определенный коэффициент; отбирают пробу остаточной жидкости; после полного испарения пробы остаточной жидкости измеряют содержание загрязняющего вещества и по измеренному содержанию загрязняющего вещества в остаточной жидкости определяют содержание загрязняющего вещества в исходной жидкости.

Изобретение относится к средствам радиационной, химической и биологической (РХБ) защиты, в частности к средствам РХБ разведки. На кольцо, прикрепленное к канату лебедочной системы, установленной на БПЛА, подвешивается батометр. Летательный аппарат запускается с помощью пульта управления и после перемещения в зону отбора проб зависает на заданной высоте, и по команде оператора включается лебедочная система, которая спускает батометр на поверхность воды. Батометр опрокидывается на бок при помощи балласта. Вода поступает внутрь корпуса через водозаборные отверстия крышки, при этом стержень с диском транспортного клапана опускаются внутрь корпуса. Продолжительность отбора пробы воды определяется оператором. Отобрав пробу, БПЛА поднимает канат, вследствие чего диск транспортного клапана, упираясь в грань, перекрывает доступ воды в корпус батометра и поднимает устройство из водоема для его транспортирования к месту нахождения оператора. Обеспечивается отбор проб воды, зараженной радиоактивными, отравляющими веществами, а также биологическими средствами в определенной локации по дистанционным командам оператора на большом расстоянии. 3 з.п. ф-лы, 6 ил.
Наркология
Наверх