Способ прогноза прогрессирования заболевания у больных раком желудочно-кишечного тракта после проведенного лечения

Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии и эпигенетике. Предложен способ прогноза прогрессирования заболевания у больных раком желудочно-кишечного тракта после проведенного лечения. Осуществляют забор периферической крови у пациента, получение образцов суспензии, содержащей лимфоциты, приготовление цитогенетических препаратов. Исследуют частоту нестимулированных лимфоцитов с асинхронной репликацией (ЛАР) генов AURKA и TP53 с помощью метода флуоресцентной in situ гибридизации (FISH). Если в образце частота ЛАР гена AURKA превышает 31,4% и одновременно с этим частота ЛАР гена TP53 превышает 23,0%, то данного пациента относят к группе риска прогрессирования заболевания. Изобретение обеспечивает создание нового, простого в исполнении, с достаточно высокой чувствительностью, точностью, специфичностью и недорогостоящего способа прогнозирования развития прогрессирования заболевания у больных раком желудочно-кишечного тракта после проведенного лечения. 2 ил., 7 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии и эпигенетике, и касается способа отбора лиц в группу риска прогрессирования заболевания после проведенного лечения злокачественных новообразований желудочно-кишечного тракта.

В общей (оба пола) структуре онкологической заболеваемости рак ободочной кишки (6,9%), рак желудка (5,9%) и рак прямой кишки (5,0%) занимают достаточно высокие позиции. Заболеваемость данными видами рака в России в 2019 г составила: рак ободочной кишки – 45277 чел., рак прямой кишки – 31785 чел., рак желудка – 36171 чел. [А.Д. Каприн, В.В. Старинский, А.О. Шахзадова «Злокачественные новообразования в России в 2019 году (заболеваемость и смертность)», Москва, 2020]. Прогноз при хирургическом лечении местно-распространенного рака желудка остается неутешительным: 5-летняя выживаемость при прорастании опухолью всей стенки желудка (T4) и наличии метастазов в регионарные лимфатические узлы (N1-3) составляет 20-35%, а при сочетании этих факторов (T4N1-3) не превышает 15%. Общая пятилетняя выживаемость для больных раком ободочной и прямой кишки составляет 61%, при наличии региональных метастазов - 63%, при наличии отдаленных метастазов - 7%.

В настоящее время все большую актуальность приобретает прогнозирование возникновения рецидивов или прогрессирования опухолевого процесса на основе биологических маркеров на уровне генома. Одной из характеристик злокачественной трансформации является неконтролируемый клеточный рост, причиной которой часто является накопление генетических нарушений, вызванных повышенным мутагенезом и нестабильностью генома [Cell. 2011; 144(5): 646-677, DOI: 10.1016/j.cell.2011.02.013]. По этой причине правильная репликация генома важна для нормального клеточного деления как гарантия, что генетическая информация в неизменном виде перейдет в следующее клеточное поколение. ДНК репликация является строго регулируемым процессом, в результате которого большая часть гомологичных генов и локусов в геноме реплицирует в одно время, т.е. синхронно, и только малая его часть имеет различия во времени репликации [Epigenetics. 2009; 4(2): 93-97]. В нормальных клетках этот процесс очень стабилен, в то время как опухолевые клетки характеризуются аберрантной асинхронной репликацией тех генов и локусов, которые в нормальном состоянии реплицируются синхронно. Результаты многочисленных исследований показали, что нарушения во времени репликации, в том числе и асинхронная репликация, являются важным компонентом в развитии опухоли и ранним эпигенетическим событием при канцерогенезе. В работах [Seminars in Cancer Biology. 2013; 23(2): 80-89, Genome Research. 2012; 22(10): 1833-1844, Neoplasia. 2010; 12(8): 668-674, International Journal of Cancer. 2004; 111(1): 60-66, Успехи молекулярной онкологии. 2018; 5(1): 26-34. DOI:10.17650/2313-805X-2018-5-1-26-34] по исследованию частоты лимфоцитов с асинхронной репликацией (ЛАР) биаллельно экспрессирующих генов было показано, что у здоровых лиц данный показатель не превышает 20%, а у пациентов с онкологическими заболеваниями находится в диапазоне 28-45%. Потеря синхронности репликации генов у онкологических больных – это обратимый эпигенетический феномен связанный, в том числе, и с аномальным метилированием. В экспериментах in vitro при культивировании лимфоцитов периферической крови онкологических больных в присутствии ингибитора метилирования 5-azacytidine (AZA), асинхронная репликация возвращалась к нормальной. В культурах лимфоцитов от здоровых лиц, присутствие AZA практически не изменяло процентное содержание ЛАР изучаемых генов, которое колебалось в пределах 18-21%. В культурах клеток от онкогематологических больных встречаемость ЛАР генов без ингибитора варьировала в пределах 39-41%, а в культурах с AZA – 22-25%. Тот же эффект установлен для больных раком простаты [Int J Cancer. 2004; 111(1): 60-66. DOI: 10.1002/ijc.20237, BMC Cancer. 2008; 8(1): 390. DOI: 10.1186/1471-2407-8-390]. В работе [2002;133 (1): 34-38. DOI: 10.1016/S0165-4608(01)00560-X] была изучена частота ЛАР генов RB1, HER-2/neu у больных миелопролиферативными заболеваниями – полицитемией и эссенциальной тромбоцитемией до и после лечения гидроксикарбамидом, тормозящим синтез ДНК. Установлено, что процент ЛАР исследованных генов в группе здоровых лиц составлял в среднем 10%, а в группе больных до и после лечения составил 21% и 16% соответственно. В работе [BMC Cancer. 2010;10(1):230. DOI: 10.1186/1471-2407-10-230] изучали частоту ЛАР генов TP53 и AML1 у здоровых лиц и больных острой миелоидной лейкемией, хронической миелоидной лейкемией, острой лимфобластной лейкемией и неходжкинской лимфомой до и после аллогенной трансплантации костного мозга. Было установлено, что у здоровых лиц она составила 20%, а у онкогематологических больных до и после трансплантации 38% и 21%, соответственно. Авторы данной работы делают заключение, что аберрантная репликация у онкогематологических больных полностью восстанавливается до уровня здоровых лиц после проведенной терапии (аллогенной трансплантации), и данный тест может быть потенциальным эпигенетическим маркером успешности трансплантации.

Известен способ прогнозирования развития метастазов в регионарные лимфоузлы у пациентов с аденокарциномой желудка (RU 2661600 С1). У пациентов с аденокарциномой желудка получают ДНК из операционного материала опухолевой и условно здоровой ткани пациента и осуществляют амплификацию фрагментов генетических локусов В2М, NFKB1 и HER2 методом ПЦР в реальном времени с помощью высокоспецифичных праймеров на матрице выделенной ДНК, а затем проводят количественную интерпретацию результатов амплификации и расчет относительной копийности генов по формулам.

Недостатком способа является сложность интерпретации результатов, а также то, что способ предназначен только для прогнозирования вероятности развития метастазов в лимфоузлы.

Известен способ прогнозирования перитонеальных метастазов рака желудка (RU 2686689). Во время операции по поводу рака желудка в ткани большого сальника и брюшины методом иммуноферментного анализа определяют содержание белка СА-19.9, при его уровне в сальнике, равном 1465,1±181,2 ед/г ткани и уровне в ткани брюшины, равном 1234,5±105,6 ед/г ткани, прогнозируют развитие в этих органах метастазов в сроки 4-6 месяцев.

Недостатком способа является прогнозирование метастазов только в определенных органах.

Известен способ прогнозирования гематогенного метастазирования при диффузном типе рака желудка (RU 2493568 С1). Проводят иммуногистохимические исследования препаратов первичной опухоли. Для проведения исследования используют антитела Cyclophilin A Antibody (CypA) клон NBP 1-54388 при рабочем разведении 1:1200, и при наличии позитивной цитоплазматической экспрессии CypA в клетках первичной опухоли прогнозируют низкий риск развития гематогенных метастазов.

Недостатком способа является прогнозирование только гематогенных метастазов, а также то, что анализ является качественным.

Известен способ прогнозирования развития метастазов в печени при раке прямой кишки (RU 2585122). Сущность способа состоит в том, что после радикального оперативного вмешательства в ткани злокачественной опухоли у больных раком прямой кишки определяют уровень активной формы васкулоэндотелиального фактора роста A (VEGF-A) и растворимого рецептора васкулоэндотелиального фактора роста (VEGF-R) и вычисляют их соотношение.

Недостатком способа является прогнозирование развития метастазов только в печени.

Известен способ прогноза исхода рака прямой и ободочной кишки при использовании маркеров экспрессии генов («Gene expression markers for colorectal cancer prognosis» патент [EN] WO 2007/082099, 2007). Сущность способа состоит в том, что после хирургической резекции рака прямой или ободочной кишки определяют уровни экспрессии одного или более предложенных авторами прогностических РНК-транскриптов или их продуктов экспрессии в биологическом образце пациента, содержащем раковые клетки. По уровню экспрессии одного или более генов или их соответствующих продуктов экспрессии, предложенных авторами, определяют прогноз исхода болезни по таким показателям, как «интервал времени до появления рецидивов», «общая продолжительность жизни после операции», «время жизни без рецидивов» или «интервал времени от операции до появления рецидивов в периферических органах».

Недостатком способа является прогнозирование исхода рака в результате хирургического лечения только для II и III стадий рака прямой или ободочной кишки.

В качестве прототипа предлагаемого изобретения выбран способ скрининга злокачественных новообразований у человека (RU 2665965 С1). Осуществляют забор периферической крови. Получают образцы суспензии, содержащие лимфоциты. На цитогенетических препаратах, приготовленных из суспензий, определяют частоту лимфоцитов с асинхронной репликацией (ЛАР) гена AURKA. При частоте ЛАР гена AURKA, превышающей 28,0%, подтверждают обнаружение у человека злокачественного новообразования. 

Недостатком способа является невозможность прогноза прогрессирования онкологического заболевания у пациентов после проведенного лечения.

Техническим результатом заявляемого изобретения является создание нового, простого в исполнении, с достаточно высокой чувствительностью, точностью, специфичностью и недорогостоящего способа прогнозирования развития прогрессирования заболевания у больных раком желудочно-кишечного тракта после проведенного лечения.

Технический результат заключается в том, что также как и в известном способе делают забор периферической крови, получают образцы суспензий, содержащие лимфоциты и применяют метод флуоресцентной in situ гибридизации.

Особенностью заявляемого способа является то, что после проведенного лечения у больных раком желудочно-кишечного тракта, исследуют частоту нестимулированных лимфоцитов с асинхронной репликацией (ЛАР) одновременно двух генов AURKA и TP53 с помощью метода флуоресцентной in situ гибридизации (FISH), и если в исследуемом образце частота ЛАР гена AURKA превышает 31,4%, и одновременно с этим частота ЛАР гена TP53 превышает 23,0%, то данного пациента относят к группе риска прогрессирования заболевания.

Изобретение поясняется подробным описанием, таблицами, клиническими примерами и иллюстрациями, на которых изображено:

фиг. 1 - лимфоцит с нереплицированными аллелями гена: 1 – ядро клетки, 2 – флуоресцентные сигналы, показывающие нереплицированные аллели гена;

фиг. 2 - лимфоцит с асинхронно реплицированными (ЛАР) аллелями гена: 1 – ядро клетки, 2 – флуоресцентный сигнал, показывающий нереплицированный аллель гена; 3 – флуоресцентный сигнал, показывающий реплицированный аллель гена.

Способ осуществляют следующим образом.

В период постклинических обследований у пациентов забирают 3 мл венозной крови при помощи вакуумной системы, содержащей Li-гепарин в концентрации 12-30 МЕ на 1 мл крови. В центрифужную пробирку переносят 1 мл цельной крови, добавляют 9 мл t+37°С гипотонического раствора KCl (550 мг/110 мл) и помещают в термостат при t+37°С на 30 мин. После окончания гипотонизации пробирки центрифугируют при 1000 об/мин в течение 10 минут. Затем удаляют супернатант, оставив в пробирке 0,5 мл. Осадок ресуспендируют и заливают, непрерывно перемешивая на шейкере, до 10 мл свежеприготовленным фиксатором: 3 части метанола и 1 часть ледяной уксусной кислоты. Далее смесь центрифугируют 1000 об/мин в течение 15 минут. Смену фиксатора с последующим центрифугированием и удалением супернатанта до 0,5 мл производят трижды. Пробирку с суспензией клеток в последнем фиксаторе заклеивают парафилмом и помещают в морозильную камеру при t –20°С для хранения и/или дальнейшего использования.

Перед приготовлением препаратов пробирку вынимают из морозильной камеры, хорошо встряхивают и центрифугируют (1000 об/мин) 10 минут. Затем удаляют супернатант, оставив 0,5 мл, и непрерывно перемешивая на шейкере добавляют свежеприготовленный фиксатор. Клеточную суспензию раскапывают на охлажденные в морозильной камере (–20°С), предварительно очищенные предметные стекла на теплом термостолике (+30°С). Готовые препараты помещают в термостат (+37°С) на ночь для досушивания. На следующий день на предметное стекло наносят 100 мкл раствора РНК-азы (10 мкл раствора RNAse (10 мг/мл), 100 мкл 20×SSC (стандартный цитратный буфер) (pH 5.3) и 890 мкл бидистиллированной воды), закрывают покровным стеклом (22×50мм) и, поместив во влажную камеру, убирают на 60 мин в термостат (+37°С). Затем стряхивают покровное стекло и отмывают препарат при комнатной температуре в фосфатном буфере (PBS) (pH 7.0-7.2) в течение 5 мин, далее – в растворе пепсина (85 мкл 37% (12N) HCl, 50 мкл рабочего 10% раствора пепсина, доведенного до 100 мл дистиллированной водой) в течение 12 мин на водяной бане при +37°С. Переносят препарат в стакан с PBS (pH 7.0-7.2) комнатной температуры на 5 мин. Далее отмывают в растворе MgCl₂ (5 мл 1M MgCl₂, 3 мл 37% формальдегида, доведенные до 100 мл PBS (pH 7.0-7.2)) при комнатной температуре в течение 10 мин. После чего отмывают в PBS (pH 7.0-7.2) 5 мин. Затем проводят дегидратацию препарата в серии спиртов (этанол) разной концентрации (70%, 85% и 96%) по 3 мин в каждом. Препарат высушивают при комнатной температуре и используют коммерческие молекулярные ДНК-зонды на гены AURKA и TP53 согласно протоколу фирмы-производителя. Анализ препаратов проводят на флуоресцентном микроскопе AxioImager A-2 (Carl Zeiss, Германия) с набором фильтров DAPI, Orange/Green, Gold (Vysis, США). На препарате для каждого гена анализируют 300 клеток, имеющих отчетливые хорошо определяемые флуоресцентные сигналы. Анализируемые флуоресцентные сигналы в клетках (Фиг.1, Фиг.2) подразделяют на 2 категории: "S" – единичный сигнал, представляющий собой участок еще нереплицированной ДНК (Фиг.1, стрелка 2, Фиг.2, стрелка 2) и "D" – двойной сигнал от реплицированного участка ДНК (Фиг.2, стрелка 3). Таким образом, одна часть клеток имеет нереплицированные аллели гена AURKA или TP53 (Фиг.1), другая часть клеток отражает асинхронную репликацию аллелей гена AURKA или TP53 – когда в клетке виден один сигнал одинарный, а второй двойной (Фиг.2). Статистическую обработку данных проводили с помощью стандартных методов статистического анализа с использованием компьютерной программы MS Excel (2007). Оценку достоверности различий среднегрупповых показателей проводили с помощью однофакторного дисперсионного анализа и двустороннего t-критерия Стьюдента. Различия считались статистически значимыми при уровне значимости p<0,05. Пациента относят к группе риска прогрессирования заболевания, если в исследуемом образце частота лимфоцитов с асинхронной репликацией (ЛАР) гена AURKA превышает 31,4% и одновременно с этим частота ЛАР гена TP53 превышает 23,0%. Для оценки информативности и разрешающей способности предлагаемого способа проводился расчет чувствительности, специфичности и точности. Специфичность метода определялась как доля людей, не имеющих онкологического заболевания, среди «отрицательных» анализов. Чувствительность – как доля людей, имеющих подтвержденное онкологическое заболевание среди «положительных» анализов. Точность рассчитывалась как доля «правильно сработавших анализов» среди всех обследованных людей.

Подтверждение достижения технического результата.

Методом интерфазной флуоресцентной in situ гибридизации (FISH) определялась частота лимфоцитов периферической крови с асинхронной репликацией генов AURKA и TP53. Контрольная группа составила 77 человек здоровых доноров и пациентов без онкологической патологии. В группу больных злокачественными новообразованиями желудочно-кишечного тракта после лечения, которые наблюдались в течение 1-5 лет, вошло 97 (48 мужчин и 49 женщин) человек с различными нозологиями: рак желудка (26 человек), рак ободочной кишки (29 человек) и рак прямой кишки (42 человека). На момент исследования частоты ЛАР генов AURKA и TP53 в данной группе прогрессирование заболевания не наблюдалось. В группу больных злокачественными новообразованиями желудочно-кишечного тракта после лечения с подтвержденным прогрессированием заболевания на момент исследования частоты ЛАР генов AURKA и TP53 вошло 14 человек.

Среднегрупповая частота лимфоцитов с асинхронной репликацией в исследованных группах составила:

- 21,8±0,4% для гена AURKA и 17,2±0,4% для гена TP53 в контрольной группе;

- 30,4±0,4% для гена AURKA и 21,7±0,5% для гена TP53 в группе «после лечения без прогрессирования заболевания»;

- 39,9±1,2% для гена AURKA и 31,2±1,2% для гена TP53 в группе «после лечения с прогрессированием заболевания».

После проведенного лечения у большинства больных злокачественными новообразованиями желудочно-кишечного тракта сохраняется статистически значимо (р<0,05) повышенная по сравнению с контролем частота лимфоцитов с асинхронной репликацией (ЛАР). Среднегрупповые частоты ЛАР генов AURKA и TP53 в различные сроки после проведенного лечения онкологического заболевания незначительно колеблются. У части пациентов наблюдается снижение индивидуальной частоты ЛАР до контрольного уровня. Пациенты с прогрессированием заболевания имеют высокие индивидуальные и среднегрупповые частоты ЛАР обоих генов. В этой группе среднегрупповая частота ЛАР генов AURKA и TP53 статистически значимо (р<0,01) превышает этот показатель в контрольной группе и группе «после лечения без прогрессирования заболевания». У 14 человек из 97 прогрессирование заболевание было установлено через 1-13 мес. После проведенного исследования лимфоцитов с асинхронной репликацией. В этой подгруппе частота ЛАР генов AURKA и TP53 была выше и статистически значимо отличалась от группы «без прогрессирования» (33,8% vs 30,4%, 25,3% vs 21,7%, р<0,05).

В качестве точки отсечения, отделяющей группу больных с прогрессирование заболевания от группы пациентов после лечения и контрольной группы доноров, была взята нижняя граница 95% доверительного интервала (ДИ) группы больных с прогрессированием основного заболевания. Нижняя граница 95% ДИ частоты ЛАР гена AURKA в группе с прогрессированием составила 31,4% и для гена TP53 - 23,0%. Оценка информативности и разрешающей способности частоты ЛАР генов AURKA и TP53 в периферической крови пациентов как прогностического теста выявления прогрессирования заболевания показала чувствительность 76%, специфичность 74% и точность 75%.

Клинические примеры выполнения.

Пример 1.

Больной А., 1946 года рождения. Находился на лечении в отделении лучевого и хирургического лечения заболеваний абдоминальной области с диагнозом рак сигмовидной кишки pT2N0M0. Диагноз установлен по месту жительства и верифицирован в Центре патоморфологическим исследованием (умеренно дифференцированная аденокарцинома). В апреле 2018 г. проведено хирургическое лечение (лапароскопически-ассистированная резекция сигмовидной кишки D3). Образцы периферической крови были взяты во время постклинических контрольных осмотров через 13 и 20 месяцев после проведенного лечения. Проведен анализ частоты ЛАР генов AURKA и TP53.

Частота ЛАР гена AURKA составила 33,3±2,7% и 37,0±2,8% и частота ЛАР гена TP53 – 24,7±2,5% и 25,0±2,5% соответственно. Таким образом, при обследованиях частота ЛАР гена AURKA превышала 31,4% и одновременно с этим частота ЛАР гена TP53 превышала 23,0% - данного пациента отнесли к группе риска прогрессирования заболевания. Через 6 месяцев после взятия последнего образца крови у больного было подтверждено прогрессирование заболевания (метастазы в печени и лимфоузлах брюшной полости) на основании КТ исследования органов грудной клетки, брюшной полости и малого таза с в/в контрастированием.

Пример 2.

Больной К., 1982 года рождения. Находился на лечении в отделении лучевого и хирургического лечения заболеваний абдоминальной области с диагнозом рак желудка рT4аN3bM0. Диагноз установлен по месту жительства и верифицирован в Центре патоморфологическим исследованием (перстневидноклеточный рак). В декабре 2013 г. проведено хирургическое (гастроэктомия) и химиотерапевтическое (7 курсов по схеме XELOX) лечение. Образцы периферической крови были взяты во время постклинических контрольных обследований через 24 и 34 месяца. Проведен анализ частоты ЛАР генов AURKA и TP53. Частота ЛАР гена AURKA составила 33,0±2,8% и 49,5±2,9%%, частота ЛАР гена TP53 – 22,5±2,5% и 32,8±2,8% соответственно. Видно, что при последнем обследовании частота ЛАР гена AURKA превышала 31,4% и одновременно с этим частота ЛАР гена TP53 превышала 23,0% - данного пациента отнесли к группе риска прогрессирования заболевания. При взятии последнего образца крови у больной было установлено прогрессирование заболевания (канцероматоз брюшины) на основании УЗИ, КТ исследований органов грудной клетки, брюшной полости и малого таза.

Пример 3.

Больной Б., 1959 года рождения. Находился на лечении в отделении лучевого и хирургического лечения заболеваний абдоминальной области с диагнозом рак прямой кишки ycT3N1M0. Диагноз был подтвержден патоморфологическим исследованием (низкодифференцированная инвазивная аденокарцинома). С августа по октябрь 2017 г. было проведено химиолучевое (СОД 50 Гр+4 курса по схеме CAPOX) и химиотерапевтическое (6 курсов по схеме FOLFOX) лечение. Наблюдалась выраженная положительная динамика от проведенного лечения: регрессия правосторонней тазовой и двусторонней паховой лимфоаденопатии и полная регрессия опухоли (колоноскопия, октябрь 2018 г.). Образец крови был взят через 12 мес. после проведенного лечения во время контрольного осмотра. Проведен анализ частоты ЛАР генов AURKA и TP53.

Частота ЛАР гена AURKA составила 40,0±2,8%, частота ЛАР гена TP53 – 26,7±2,6%. Видно, что частота ЛАР гена AURKA превышала 31,4% и одновременно с этим частота ЛАР гена TP53 превышала 23,0% - данного пациента отнесли к группе риска прогрессирования заболевания. Через 2 месяца после проведения исследования частоты ЛАР генов AURKA и TP53 у больного было установлено прогрессирование заболевания (метастазы печени и легких) на основании СКТ грудной клетки и брюшной полости с в/в контрастированием.

Пример 4.

Больная Ж., 1958 года рождения. Находилась на лечении в отделении лучевого и хирургического лечения заболеваний абдоминальной области с диагнозом рак слепой кишки T3N2aM0. Диагноз подтвержден патоморфологическим исследованием (умеренно дифференцированная аденокарцинома). В 2016 г. больной выполнена правосторонняя гемиколэктомия + 6 курсов ПХТ по схеме FOLFOX. При контрольном обследовании в 2018 г., у больной выявлено двустороннее поражение яичников на основании ПЭТ-КТ, МРТ и УЗИ исследований брюшной полости. Образец крови взят через 24 месяца после проведенного лечения в момент установления прогрессирования заболевания. Проведен анализ частоты ЛАР генов AURKA и TP53. Частота ЛАР гена AURKA составила 36,7±2,8%, частота ЛАР гена TP53 – 31,4±2,7%. Видно, что частота ЛАР гена AURKA превышала 31,4% и одновременно с этим частота ЛАР гена TP53 превышала 23,0% - данного пациента отнесли к группе риска прогрессирования заболевания.

Пример 5.

Больной Г., 1956 года рождения. Находился на лечении в отделении лучевого и хирургического лечения заболеваний абдоминальной области с диагнозом рак нисходящего отдела толстой кишки рT3N0M0. Диагноз был подтвержден патоморфологическим исследованием (высокодифференцированная аденокарцинома). В 2017 г. было проведено хирургическое (резекция нисходящей ободочной кишки, одноствольная десцендостомия) и монохимиотерапевтическое лечение (7 курсов капецитабином). Образцы периферической крови были взяты во время постклинических контрольных осмотров (инструментальные методы, анализ крови на онкомаркеры CА-19-9, CА-72-4, РЭА, АФП) через 18, 22 и 29 месяцев после проведенного лечения. Проведен анализ частоты ЛАР генов AURKA и TP53. Частота ЛАР гена AURKA составила 29,3±2,6%, 24,3±2,5%, 21,0±2,6% и частота ЛАР гена TP53 – 25,3±2,5%, 16,0±2,1% и 18,0±2,2% соответственно. Видно, что при всех сроках обследовании частота ЛАР гена AURKA не превышала 31,4% и одновременно с этим частота ЛАР гена TP53 при двух последних обследованиях не превышала 23,0% - данный пациент не относится к группе риска прогрессирования заболевания. Данных за прогрессирование заболевания, полученных на основании инструментальных методов (УЗИ, МРТ брюшной полости, СКТ грудной клетки и брюшной полости, колоноскопия) не обнаружено.

Пример 6.

Больной К., 1966 года рождения. Находился на лечении в отделении лучевого и хирургического лечения заболеваний абдоминальной области с диагнозом рак желудка T2N0M0. Опухоль субкардиальной зоны желудка была выявлена при плановой ЭФГДС в ноябре 2017 г. Диагноз был подтвержден патоморфологическим исследованием (аденокарцинома G2). В декабре 2017 г. было проведено хирургическое лечение: расширенная (D2), лапароскопическая проксимальная субтотальная резекция желудка с восстановлением непрерывности ЖКТ посредством double tract реконструкции. Образцы периферической крови были взяты во время проведения постклинических контрольных осмотров (инструментальные методы, анализ крови на онкомаркеры CА-19-9, CА-72-4, РЭА, АФП) через 15 и 24 месяца после проведенного лечения. Проведен анализ частоты ЛАР генов AURKA и TP53. Частота ЛАР гена AURKA составила 22,0±2,4%, 20,3±2,3% и частота ЛАР гена TP53 – 15,0±2,1%, 13,7±2,0% соответственно. Видно, что при всех сроках обследовании частота ЛАР гена AURKA не превышала 31,4% и одновременно с этим частота ЛАР гена TP53 не превышала 23,0% - данный пациент не относится к группе риска прогрессирования заболевания. Данных за прогрессирование заболевания, полученных на основании инструментальных методов (УЗИ, МРТ брюшной полости, СКТ грудной клетки и брюшной полости, ЭГДС) не обнаружено.

Пример 7.

Больная П., 1961 года рождения. Находилась на лечении в отделении лучевого и хирургического лечения заболеваний абдоминальной области с диагнозом рак верхнеампулярного отдела прямой кишки cT4aN2aM0 III C стадия. Диагноз был подтвержден патоморфологическим исследованием (аденокарцинома G2). В 2017 г. проведено хирургическое (лапароскопическая передняя резекция прямой кишки) и химиотерапевтическое (6 курсов неоадъювантной ХТ по схеме FOLFOX и 6 курсов адъювантной ПХТ по схеме XELOX) лечение. Образцы периферической крови были взяты во время проведения постклинических контрольных осмотров (инструментальные методы, анализ крови на онкомаркеры CА-19-9, CА-72-4, РЭА, АФП) через 15 и 25 месяцев после проведенного лечения.

Проведен анализ частоты ЛАР генов AURKA и TP53. Частота ЛАР гена AURKA составила 27,0±2,6%, 23,7±2,5% и частота ЛАР гена TP53 – 12,3±1,9%, 15,3±2,1% соответственно. Видно, что при всех сроках обследовании частота ЛАР гена AURKA не превышала 31,4% и одновременно с этим частота ЛАР гена TP53 не превышала 23,0% - данный пациент не относится к группе риска прогрессирования заболевания. Данных за прогрессирование заболевания, полученных на основании инструментальных методов (УЗИ, МРТ брюшной полости, СКТ грудной клетки и брюшной полости, колоноскопия) не обнаружено.

Предлагаемое изобретение обеспечивает при использовании следующий технико-экономический эффект:

- способ осуществляют в условиях стандартной молекулярно-цитогенетической лаборатории, без использования специального дорогостоящего оборудования;

- обладает высокой чувствительностью и специфичностью, позволяет объективно и своевременно прогнозировать риск прогрессирования заболевания в постклинический период наблюдения за пациентом и предпринимать адекватные лечебные мероприятия.

Способ прогноза прогрессирования заболевания у больных раком желудочно-кишечного тракта после проведенного лечения, включающий забор периферической крови, получение образцов суспензии, содержащей лимфоциты, приготовление цитогенетических препаратов, использование флуоресцентной in situ гибридизации, отличающийся тем, что одновременно исследуют частоту нестимулированных лимфоцитов с асинхронной репликацией (ЛАР) генов AURKA и TP53 с помощью метода флуоресцентной in situ гибридизации (FISH), и если в исследуемом образце частота ЛАР гена AURKA превышает 31,4% и одновременно с этим частота ЛАР гена TP53 превышает 23,0%, то данного пациента относят к группе риска прогрессирования заболевания.