Способ определения порто-кавальных анастомозов стенки полых органов брюшной полости человека

Изобретение относится к области медицины, а именно к анатомии, гистологии, топографической анатомии и патологической анатомии. Для определения внутристеночных порто-кавальных анастомозов органов брюшной полости осуществляют заполнение предварительно промытых венозных сосудов органа гистологическим красителем «Тушью гистологической HistoSafe». Для чего портальную венозную систему полого органа заливают оранжевым красителем, кавальную – синим. Далее орган фиксируют в 10% растворе забуференного формалина. После фиксации промывают проточной водой. Вырезают образцы ткани. Проводят гистологическую обработку образцов, включающую заливку в парафин и окрашивание срезов гематоксилином Майера. Исследуют срезы с помощью сканирующего микроскопа. Заполнение венозного сосуда красителями обоих цветов расценивают как порто-кавальный анастомоз. Способ позволяет оптимизировать дифференцированное исследование порто-кавальных анастомозов стенки полых органов брюшной полости человека в анатомической, гистологической, топографоанатомической и паталогоанатомической практиках при изучении морфометрических и топографических особенностей в норме и патологии. 2 ил., 2 пр.

 

Изобретение относится к медицине, в частности к анатомии, гистологии, топографической анатомии и патологической анатомии, может быть использовано при изучении особенностей расположения порто-кавальных анастомозов внутри стенки полых органов брюшной полости человека в норме и при патологии, а также в качестве наглядных пособий при преподавании гистологии в учебных заведениях.

Исследование особенностей расположения порто-кавальных анастомозов, характера взаимоотношения сосудов портальной и кавальной систем вне- и внутри стенки полых органов брюшной полости, как некого компенсаторного механизма декомпрессии воротной системы, позволит индивидуализировать лечебную тактику и уменьшить затраты на пациентов с синдромом портальной гипертензии (Никель В.В., Ефремова В.П. Возрастные особенности морфо-функциональных показателей кровеносных сосудов желудка / Сибирское медицинское обозрение, 2018; 6(114): 58-62). Проблемы изучения этих анатомических структур возникают на этапе определения принадлежности сосуда к месту взаимодействия портальной и кавальной системам. Известно несколько способов выявления внеорганных порто-кавальных соустий, имеющих, как преимущества, так и недостатки в решении этого вопроса.

Известен «Способ ангиографической диагностики порто-кавальных анастомозов», суть которого сводится к выполнению флеботестикулографии в дискретном режиме времени до 3 минут при обтурации дистального отдела яичковой вены (Патент РФ №2525776217; А61В 6/00; Бюл. №22, 10.08.2014). При выявлении «смыва» контрастного вещества в проксимальном направлении возможно диагностировать наличие порто-кавальных анастомозов. Преимуществом заявленного авторами способа является увеличение частоты обнаружения брыжеечно-яичковых анастомозов. Однако, данный способ ограничивает себя лишь диагностикой наличия порто-кавальных анастомозов и не может быть использован для исследования места и характера расположения венозного соустья, особенностей его морфометрии и топографии.

Наиболее близким к предлагаемому является способ рентгенологического исследования порто-кавальной системы прямой кишки человека в эксперименте (Патент РФ №2541830; G09B 23/28, А61В 6/00, А61K 49/04; Бюл. №5, 20.02.2015). Оригинальность предлагаемого способа, как результат трехэтапного рентгенконтрастного исследования венозных систем прямой кишки, дает возможность не только обнаружить порто-кавальные анастомозы в аноректальной зоне, но и их количество, уровень и место расположения. Данный способ предоставляет возможность определить особенности пространственного расположения сосудистых образований прямой кишки непосредственно по отношению к самому органа, а также костным структурам малого таза. В то же время, способ применим для визуализации, изучения топографии и морфометрии внеорганных порто-кавальных анастомозов внутренних органов брюшной полости человека. Использование данного способа в момент изучения внутристеночных анастомозов в органах маловероятно в виду отсутствия возможности верификации расположения, принадлежности и характера отношения к оболочкам органа столь мелких по размерам сосудов.

Таким образом, известные способы изучения порто-кавальных анастомозов ограничены рентгенологическими приемами исследования, не имеющими возможностей определения особенностей строения и расположения внутристеночных венозных соустий органов брюшной полости.

Задачей способа является оптимизация исследования порто-кавальных анастомозов стенки полых органов брюшной полости человека в анатомической, гистологической, топографоанатомической и паталогоанатомической практиках при изучении морфометрических и топографических особенностей в норме и патологии.

Поставленную задачу решают за счет одномоментного гистологического окрашивания сосудов портальной и кавальной систем стенки внутренних органов брюшной полости человека разными цветами. В качестве наливной инъекционной среды, контрастирующей сосуды, используют «Тушь гистологическая HistoSafe» - гистологический краситель для маркировки краев резекции макропрепарата, имеющий регистрационное удостоверение медицинского изделия (РЗН 2019/9247 от 15.11.2019 по ТУ 21.20.23-008-89079081-2017), позволяющая заполнять внутристеночные сосуды малого диаметра до 0,1-0,2 мм. Суть способа заключается в следующем: осуществляют плотное равномерное заполнение предварительно промытых венозных структур органа гистологическим красителем через сосуды диаметром более 5 мм при помощи 20 мл шприца. Для селективного окрашивания сосудов разных венозных систем органов используют красители 2-х цветов: оранжевый и синий. Портальную венозную систему полого органа заливают оранжевым красителем, кавальную - синим. Затем макропрепарат погружают в 10% раствор забуференного формалина на срок 48-72 часа. После завершения этапа фиксации, орган извлекают из формалина и промывают проточной водопроводной водой в течение 5 минут. Вырезку образцов ткани (стенки) с формированием фрагментов осуществляют в направлении, перпендикулярном ходу основным сосудам в зоне исследования. Сформированные фрагменты толщиной от 2 до 3 мм подвергают гистологической обработке в условиях вакуумного гистопроцессора закрытого типа. После гистологической обработки проводят заливку образцов в тугоплавкий парафин (температура плавления 59°-62°С) с формированием гистологических блоков и последующей микротомией. Полученные гистологические срезы толщиной 2 мкм помещают на предметные стекла с положительным зарядом для обеспечения адгезии материала. Препараты окрашивают гематоксилином Майера без окраски эозином путем депарафинизации, регидратации, инкубации в течение 20 минут, промывают в проточной воде и просветляют.На завершающем этапе готовые препараты помещают в сканирующий микроскоп Pannoramic 250 Flash II 3DHistech (Венгрия) с тотальным сканированием стекол в автоматическом режиме при увеличении объектива х40. Контроль результатов проводят с применением программы CaseViewer v.2.3 3DHistech. В полученных препаратах просветы селективно окрашенных сосудов заполнены пигментом красителя с соответствующим цветом: сосуды портальной системы оранжевым, кавальной - синим. Те сосуды, которые имеют равномерное заполнение инъекционной средой обоих цветов, расценивают как порто-кавальный анастомоз.

Пример 1. Сосуды кавальной системы стенки кардиального отдела желудка заливаются тушью гистологической синего цвета, сосуды портальной системы - тушью оранжевого цвета. После фиксации ткани, вырезки образцов и гистологической обработки препараты окрашивают гематоксилином Майера (фиг. 1). Так, на срезе кардиального отдела желудка видны: собственная пластинка слизистой оболочки с однослойным призматическим железистым эпителием (1), мышечная пластинка слизистой оболочки (2), подслизистая основа (3), мышечная оболочка (4), а также внутристеночные вены кавальной системы кардиального отдела желудка с красителем в просвете синего цвета (5), его внутристеночные портальные сосуды с красителем в просвете оранжевого цвета (6), сосуды без красителя в просвете - артерии (7), сосуды, равномерно заполненные красителем обоих цветов - порто-кавальные анастомозы (8).

Пример 2. Вены портальной системы прямой кишки заливаются тушью гистологической оранжевого цвета, сосуды кавальной системы - синего цвета. После фиксации ткани, вырезки образцов и гистологической обработки, препараты окрашивают гематоксилином Майера (фиг. 2). Так, на срезе прямой кишки в толще ее мышечной оболочки визуализируются вена портальной системы с окрашенным в оранжевый цвет просветом (6), кавальной системы с красителем в просвете синего цвета (5) и сосуд, равномерно заполненный красителем обоих цветов - порто-кавальный анастомоз (8).

Несомненным преимуществом данного способа являются возможность четкой дифференцированной визуализации порто-кавальных анастомозов внутри стенки полого органа с возможностью изучения их топики относительно оболочек и морфометрических особенностей.

Способ определения внутристеночных порто-кавальных анастомозов органов брюшной полости, отличающийся тем, что осуществляют заполнение предварительно промытых венозных сосудов органа гистологическим красителем «Тушью гистологической HistoSafe», для чего портальную венозную систему полого органа заливают оранжевым красителем, кавальную - синим, далее орган фиксируют в 10% растворе забуференного формалина, после фиксации промывают проточной водой, вырезают образцы ткани, проводят гистологическую обработку образцов, включающую заливку в парафин и окрашивание срезов гематоксилином Майера, исследуют срезы с помощью сканирующего микроскопа, заполнение венозного сосуда красителями обоих цветов расценивают как порто-кавальный анастомоз.