Вакцина против респираторного заболевания крупного рогатого скота

Данное изобретение относится к вакцинам для лечения респираторного заболевания крупного рогатого скота. Такие вакцины содержат комбинацию антигенов вируса гриппа D крупного рогатого скота и Mannheimia haemolytica. Инфицирование верхних дыхательных путей IDV приводит к увеличению вероятности патологии М, haemolytica в легких. Указанные вакцины могут содержать дополнительные антигены из других респираторных патогенов крупного рогатого скота. Изобретение относится к иммуногенной композиции, содержащей антиген вируса гриппа D крупного рогатого скота и антиген Mannheimia haemolytica, обеспечивающей повышение активности. 8 н. и 8 з.п. ф-лы, 10 табл., 2 пр.

 

Данное изобретение относится к вакцинам для лечения респираторного заболевания крупного рогатого скота. Такие вакцины содержат комбинацию антигенов вируса гриппа D крупного рогатого скота и антигенов Mannheimia haemolytica.

Респираторное заболевание крупного рогатого скота (РЗКРС) является наиболее значимым заболеванием, негативно сказывающимся на скотопромышленности в Соединенных Штатах, приводя к ежегодным потерям, которые по оценкам превышают один миллиард долларов. Широко используются многочисленные коммерческие вакцины с переменным составом на основе комбинаций инактивированных и модифицированных живых бактерий и вирусов; тем не менее, заболеваемость РЗКРС увеличивается в течение последних нескольких десятилетий. Считается, что стресс у животных, часто вызываемый перемещением и содержанием животных, предрасполагает крупный рогатый скот к РЗКРС. Ряд вирусов играют установленные роли в патогенезе РЗКРС, включая вирус вирусной диареи крупного рогатого скота, герпесвирус 1 крупного рогатого скота, респираторно-синцитиальный вирус крупного рогатого скота, вирус парагриппа 3 крупного рогатого скота, вирус ринита крупного рогатого скота и, возможно, вирус гриппа D (IDV) (Ferguson et al, J. Virol. 90:5636-42, 2016).

Впервые выделенный из организма свиней с острым респираторным заболеванием, предполагаемый вирус гриппа D был впоследствии идентифицирован у крупного рогатого скота во многих странах. Телята, инокулированные IDV, демонстрировали только легкое респираторное заболевание по сравнению с контролем, а репликация вируса была обнаружена в дыхательных путях, что связано со значительным увеличением числа нейтрофилов в трахее. Наибольшие вирусные титры присутствовали в носовых раковинах со снижением в тканях, находящихся ниже в дыхательных путях. IDV передавался контактирующим животным и всем инокулированным и подвергшимся воздействию сероконвертированным животным. В то время как серологические исследования свиной и человеческой сыворотки выявили низкий уровень распространенности антител (9,5 и 1,3% соответственно), в нескольких исследованиях было обнаружено, что антитела к IDV почти повсеместно распространены у крупного рогатого скота, причем до 94% новорожденных телят мясного крупного рогатого скота являются серопозитивными в отношении IDV, вероятно, благодаря наличию материнских антител. Поскольку известно, что материнские антитела создают помехи для вакцинации и развития активного иммунитета, присутствие антител во время вакцинации может снижать иммунный ответ на вакцину.

Хотя не установлено окончательно, IDV может быть частью комплекса респираторного заболевания крупного рогатого скота (КРЗКРС). Были предложены коммерческие вакцины против IDV, например, в US 9278999 и WO2014/015091, но не были введены в обращение, вероятно, частично вследствие недавнего открытия IDV и его неизвестной (и, возможно, незначительной) роли в патогенезе РЗКРС. Включение IDV в коммерческие вакцины против РЗКРС может повысить их эффективность, если инфекция IDV усугубляет заболевание, вызываемое другими респираторными патогенами крупного рогатого скота, а не IDV является оппортунистической инфекцией при РЗКРС, вызванном другими патогенами.

В данном изобретении предложена иммуногенная композиция, содержащая антиген вируса гриппа D крупного рогатого скота и антиген Mannheimia haemolytica. Комбинированная вакцина обеспечивает повышенную эффективность против РЗКРС по сравнению с моновалентными вакцинами в отдельности. Антиген Mannheimia haemolytica может представлять собой инактивированную бактерию или экстракты из инактивированных бактерий, такие как экстракт белка наружной мембраны. Антиген Mannheimia haemolytica может представлять собой рекомбинантно полученный антиген, такой как рекомбинантный лейкотоксин (rLKT).

В данном изобретении предложена иммуногенная композиция, содержащая антиген вируса гриппа D крупного рогатого скота и антиген Mannheimia haemolytica, при этом антиген вируса гриппа D крупного рогатого скота представляет собой инактивированный вирус. Антиген вируса гриппа D крупного рогатого скота может представлять собой модифицированный живой вирус. Антиген модифицированного живого вируса гриппа D крупного рогатого скота может представлять собой модифицированный живой вирус, модифицированный путем деоптимизации кодонов. Модифицированный живой вирус, модифицированный путем деоптимизации кодонов, может иметь один или более деоптимизированных геномных сегментов с последовательностью кДНК, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 и SEQ ID NO: 19.

В данном изобретении предложена иммуногенная композиция, содержащая антиген вируса гриппа D крупного рогатого скота и антиген Mannheimia haemolytica, которая дополнительно содержит по меньшей мере один антиген из дополнительного патогена крупного рогатого скота. Дополнительным патогеном крупного рогатого скота может быть вирус вирусной диареи крупного рогатого скота (BVDV), респираторно-синцитиальный вирус крупного рогатого скота (BRSV), герпесвирус крупного рогатого скота (BHV), вирус парагриппа 3 (PI3), Pasteurella multocida, виды Leptospira и Histophilus somni, а также любая их комбинация.

В данном изобретении предложена вакцина против респираторного заболевания крупного рогатого скота, содержащая вирус гриппа D крупного рогатого скота и антиген Mannheimia haemolytica и фармацевтически приемлемый наполнитель, стабилизатор, солюбилизатор или разбавитель и, необязательно, адъювант. Антиген Mannheimia haemolytica может представлять собой инактивированную бактерию или экстракты из инактивированных бактерий, такие как экстракт белка наружной мембраны. Антиген Mannheimia haemolytica может представлять собой рекомбинантно полученный антиген, такой как рекомбинантный лейкотоксин. Антиген вируса гриппа D крупного рогатого скота может представлять собой инактивированный вирус. Антиген вируса гриппа D крупного рогатого скота может представлять собой модифицированный живой вирус. Антиген модифицированного живого вируса гриппа D крупного рогатого скота может представлять собой модифицированный живой вирус, модифицированный путем деоптимизации кодонов.

В данном изобретении предложена вакцина против респираторного заболевания крупного рогатого скота, содержащая вирус гриппа D крупного рогатого скота и антиген Mannheimia haemolytica и фармацевтически приемлемый наполнитель, стабилизатор, солюбилизатор или разбавитель и, необязательно, адъювант, которая дополнительно содержит по меньшей мере один антиген из дополнительного патогена крупного рогатого скота. Дополнительным патогеном крупного рогатого скота может быть вирус вирусной диареи крупного рогатого скота (BVDV), респираторно-синцитиальный вирус крупного рогатого скота (BRSV), герпесвирус крупного рогатого скота (BHV), вирус парагриппа 3 (PI3), Pasteurella multocida, виды Leptospira и Histophilus somni, а также любая их комбинация.

В данном изобретении предложен способ лечения респираторного заболевания крупного рогатого скота, включающий введение крупному рогатому скоту иммуногенной композиции, содержащей антиген вируса гриппа D крупного рогатого скота и антиген Mannheimia haemolytica. Антиген Mannheimia haemolytica может представлять собой инактивированную бактерию или экстракты из инактивированных бактерий, такие как экстракт белка наружной мембраны. Антиген Mannheimia haemolytica может представлять собой рекомбинантно полученный антиген, такой как рекомбинантный лейкотоксин. Введение можно осуществлять перорально, интраназально, интратрахеально или путем инъекции, например, подкожно или внутримышечно.

В данном изобретении предложен способ лечения респираторного заболевания крупного рогатого скота, включающий введение крупному рогатому скоту иммуногенной композиции, содержащей антиген вируса гриппа D крупного рогатого скота и антиген Mannheimia haemolytica, при этом антиген вируса гриппа D крупного рогатого скота представляет собой инактивированный вирус. Антиген вируса гриппа D крупного рогатого скота может представлять собой модифицированный живой вирус. Антиген модифицированного живого вируса гриппа D крупного рогатого скота может представлять собой модифицированный живой вирус, модифицированный путем деоптимизации кодонов. Введение можно осуществлять перорально, интраназально, интратрахеально или путем инъекции, например, подкожно или внутримышечно.

В данном изобретении предложен способ лечения респираторного заболевания крупного рогатого скота, включающий введение крупному рогатому скоту иммуногенной композиции, содержащей антиген вируса гриппа D крупного рогатого скота и антиген Mannheimia haemolytica, которая дополнительно содержит по меньшей мере один антиген из дополнительного патогена крупного рогатого скота. Дополнительным патогеном крупного рогатого скота может быть вирус вирусной диареи крупного рогатого скота (BVDV), респираторно-синцитиальный вирус крупного рогатого скота (BRSV), герпесвирус крупного рогатого скота (BHV), вирус парагриппа 3 (PI3), Pasteurella multocida, виды Leptospira и Histophilus somni, а также любая их комбинация. Введение можно осуществлять перорально, интраназально, интратрахеально или путем инъекции, например, подкожно или внутримышечно.

В данном изобретении предложен способ лечения респираторного заболевания крупного рогатого скота, включающий введение крупному рогатому скоту вакцины против респираторного заболевания крупного рогатого скота, содержащей вирус гриппа D крупного рогатого скота и антиген Mannheimia haemolytica и фармацевтически приемлемый наполнитель, стабилизатор, солюбилизатор или разбавитель и, необязательно, адъювант. Антиген Mannheimia haemolytica может представлять собой инактивированную бактерию или экстракты из инактивированных бактерий, такие как экстракт белка наружной мембраны. Антиген Mannheimia haemolytica может представлять собой рекомбинантно полученный антиген, такой как рекомбинантный лейкотоксин. Антиген вируса гриппа D крупного рогатого скота может представлять собой инактивированный вирус. Антиген вируса гриппа D крупного рогатого скота может представлять собой модифицированный живой вирус. Антиген модифицированного живого вируса гриппа D крупного рогатого скота может представлять собой модифицированный живой вирус, модифицированный путем деоптимизации кодонов. Введение можно осуществлять перорально, интраназально, интратрахеально или путем инъекции, например, подкожно или внутримышечно.

В данном изобретении предложен способ лечения респираторного заболевания крупного рогатого скота, включающий введение крупному рогатому скоту вакцины против респираторного заболевания крупного рогатого скота, содержащей вирус гриппа D крупного рогатого скота и антиген Mannheimia haemolytica и фармацевтически приемлемый наполнитель, стабилизатор, солюбилизатор или разбавитель и, необязательно, адъювант, которая дополнительно содержит по меньшей мере один антиген из дополнительного патогена крупного рогатого скота. Дополнительным патогеном крупного рогатого скота может быть вирус вирусной диареи крупного рогатого скота (BVDV), респираторно-синцитиальный вирус крупного рогатого скота (BRSV), герпесвирус крупного рогатого скота (BHV), вирус парагриппа 3 (PI3), Pasteurella multocida, виды Leptospira и Histophilus somni, а также любая их комбинация. Введение можно осуществлять перорально, интраназально, интратрахеально или путем инъекции, например, подкожно или внутримышечно.

В данном изобретении предложено применение комбинации антигена вируса гриппа D крупного рогатого скота и антигена Mannheimia haemolytica при лечении респираторного заболевания крупного рогатого скота. Антиген Mannheimia haemolytica может представлять собой инактивированную бактерию или экстракты из инактивированных бактерий, такие как экстракт белка наружной мембраны. Антиген Mannheimia haemolytica может представлять собой рекомбинантно полученный антиген, такой как рекомбинантный лейкотоксин. Антиген вируса гриппа D крупного рогатого скота может представлять собой инактивированный вирус. Антиген вируса гриппа D крупного рогатого скота может представлять собой модифицированный живой вирус. Антиген модифицированного живого вируса гриппа D крупного рогатого скота может представлять собой модифицированный живой вирус, модифицированный путем деоптимизации кодонов. Лечение можно осуществлять перорально, интраназально, интратрахеально или путем инъекции, например подкожно или внутримышечно. Лечение можно осуществлять терапевтически или профилактически. Указанная комбинация может дополнительно содержать фармацевтически приемлемый наполнитель, стабилизатор, солюбилизатор или разбавитель и, необязательно, адъювант. Указанная комбинация может дополнительно содержать по меньшей мере один антиген из дополнительного патогена крупного рогатого скота. Дополнительным патогеном крупного рогатого скота может быть вирус вирусной диареи крупного рогатого скота (BVDV), респираторно-синцитиальный вирус крупного рогатого скота (BRSV), герпесвирус крупного рогатого скота (BHV), вирус парагриппа 3 (PI3), Pasteurella multocida, виды Leptospira и Histophilus somni, а также любая их комбинация.

В данном изобретении предложено применение антигена вируса гриппа D крупного рогатого скота и антигена Mannheimia haemolytica при производстве лекарственного средства от респираторного заболевания крупного рогатого скота. Антиген Mannheimia haemolytica может представлять собой инактивированную бактерию или экстракты из инактивированных бактерий, такие как экстракт белка наружной мембраны. Антиген Mannheimia haemolytica может представлять собой рекомбинантно полученный антиген, такой как рекомбинантный лейкотоксин. Антиген вируса гриппа D крупного рогатого скота может представлять собой инактивированный вирус. Антиген вируса гриппа D крупного рогатого скота может представлять собой модифицированный живой вирус. Антиген модифицированного живого вируса гриппа D крупного рогатого скота может представлять собой модифицированный живой вирус, модифицированный путем деоптимизации кодонов. Лекарственное средство можно вводить перорально, интраназально, интратрахеально или путем инъекции, например подкожно или внутримышечно. Введение можно осуществлять терапевтически или профилактически. Лекарственное средство может дополнительно содержать фармацевтически приемлемый наполнитель, стабилизатор, солюбилизатор или разбавитель и, необязательно, адъювант.Лекарственное средство может дополнительно содержать по меньшей мере один антиген из дополнительного патогена крупного рогатого скота. Дополнительным патогеном крупного рогатого скота может быть вирус вирусной диареи крупного рогатого скота (BVDV), респираторно-синцитиальный вирус крупного рогатого скота (BRSV), герпесвирус крупного рогатого скота (BHV), вирус парагриппа 3 (PI3), Pasteurella multocida, виды Leptospira и Histophilus somni, а также любая их комбинация.

В данном изобретении предложена композиция, содержащая антиген вируса гриппа D крупного рогатого скота и антиген Mannheimia haemolytica, для применения при лечении, снижении степени или предотвращении респираторного заболевания крупного рогатого скота у крупного рогатого скота. Антиген Mannheimia haemolytica может представлять собой инактивированную бактерию или экстракты из инактивированных бактерий, такие как экстракт белка наружной мембраны. Антиген Mannheimia haemolytica может представлять собой рекомбинантно полученный антиген, такой как рекомбинантный лейкотоксин. Антиген вируса гриппа D крупного рогатого скота может представлять собой инактивированный вирус. Антиген вируса гриппа D крупного рогатого скота может представлять собой модифицированный живой вирус. Антиген модифицированного живого вируса гриппа D крупного рогатого скота может представлять собой модифицированный живой вирус, модифицированный путем деоптимизации кодонов. Указанную композицию можно вводить перорально, интраназально, интратрахеально или путем инъекции, например подкожно или внутримышечно. Указанная композиция может дополнительно содержать фармацевтически приемлемый наполнитель, стабилизатор, солюбилизатор или разбавитель и, необязательно, адъювант. Указанная композиция может дополнительно содержать по меньшей мере один антиген из дополнительного патогена крупного рогатого скота. Дополнительным патогеном крупного рогатого скота может быть вирус вирусной диареи крупного рогатого скота (BVDV), респираторно-синцитиальный вирус крупного рогатого скота (BRSV), герпесвирус крупного рогатого скота (BHV), вирус парагриппа 3 (PI3), Pasteurella multocida, виды Leptospira и Histophilus somni, а также любая их комбинация.

Термин «крупный рогатый скот», употребляемый для обозначения животного, в отношении которого применяют изобретение, означает любого представителя рода Bos, включая домашний крупный рогатый скот (Bos Taurus).

В контексте данного документа термин «вирус гриппа D крупного рогатого скота» (IDV) означает РНК-вирус семейства orthomyxoviridae. IDV считается родом, отдельным от вирусов гриппа А, В и С, хотя IDV оказался наиболее близок к вирусу гриппа С.Геном IDV содержит семь линейных отрицательно-полярных одноцепочечных молекул РНК. Два репрезентативных изолята IDV описаны в Таблице 1 без ограничения заявленного изобретения. Так как IDV является РНК-вирусом, ожидается, что он будет иметь высокую частоту мутаций, приводящую к процессу, называемому «антигенным дрейфом», состоящему в небольших изменениях в геноме, результатом которых являются вирусы с отличающимися антигенными свойствами.

В контексте данного документа термин «вирус» может означать вид вируса или, взаимозаменяемо, отдельную инфекционную единицу, которая может содержать нуклеиновые кислоты, белки и липидную мембрану. Отдельную инфекционную единицу также называют «вирусной частицей» или «вирионом», причем последние термины являются синонимами.

В контексте данного документа термин «штамм» или «изолят» вируса означает набор генетически гомологичных вирионов. Два вируса считаются «гомологичными», если эти вирусы картируются на одну и ту же филогенетическую кладу. Два вируса считаются «гетерологичными», если эти вирусы картируются на разные филогенетические клады. Степень полиморфизма среди изолятов IDV еще не была оценена.

«Процент идентичности» можно определить путем расчета числа идентичных нуклеотидов в одинаковых позициях в нуклеиновой кислоте. Расчет процента идентичности включает определение оптимального выравнивания между двумя или более последовательностями. Для определения процента идентичности можно использовать компьютерные программы и алгоритмы, такие как Basic Local Alignment Search Tool (средство поиска основного локального выравнивания или BLAST). BLAST является одним из многочисленных ресурсов, предоставляемых Национальным центром биотехнологической информации США. Поскольку генетический код является вырожденным, и более чем один кодон может кодировать заданную аминокислоту, кодирующие области нуклеиновых кислот считаются идентичными, если нуклеиновые кислоты кодируют идентичные полипептиды.

В контексте данного документа термин «модифицированный живой вирус» применим к любой отдельной вирусной частице (т.е. «вириону») или множеству вирусных частиц, генетическая последовательность которых была изменена относительно генетической последовательности встречающегося в природе вируса дикого типа. Изменения включают, без ограничения, генетические мутации, такие как вставки и делеции нуклеотидов, а также транзиции и трансверсии, которые приводят к замене одного нуклеотида другим нуклеотидом. Изменения можно осуществлять путем адаптации вируса дикого типа к репликации в тканевой культуральной системе и продолжения пассирования вируса в тканевой культуральной системе, в результате чего вирус накапливает генетические мутации. Изменения также можно осуществлять, используя молекулярные технологии. Одна такая молекулярная технология включает искусственное изменение частоты использования кодонов вируса или «деоптимизацию кодонов». Подобные технологии были описаны, например, в US 8846051; US 9476032; и US 2016/024477 (US Ser. №14/777204), которые в полном объеме включены в данный документ посредством ссылки.

Аттенуированные вирусы составляют подгруппу модифицированных живых вирусов. В контексте данного документа термин «аттенуированный» или «аттенуация» означает, что способность вируса вызывать или усугублять клиническое заболевание была снижена или устранена. Аттенуированный вирус все еще может инфицировать клетку-хозяина in vitro или in vivo, и эта инфекция может приводить к субклиническим эффектам в организме-хозяине, но эта инфекция не приводит к появлению одного или более клинических симптомов заболевания.

Напротив, в контексте данного документа «инактивированные» вирусы или бактерии означают патогены, которые более не могут реплицироваться в организме-хозяине. Инактивированные патогены считаются убитыми или мертвыми. Инактивацию можно осуществлять различными способами, включая, но не ограничиваясь этим, химические изменения, химические или физические изменения в структуре патогена или химические или физические изменения в геномных нуклеиновых кислотах патогена.

«Антиген» представляет собой любую молекулу, которую иммунная система организма способна специфически обнаруживать. Как правило, антиген представляет собой белок, кодируемый геномом патогена или полученный из продуктов генома патогена. Антиген может представлять собой цельный вирион или бактерию или их часть, или выделенный полипептид. Антигены могут быть получены естественным путем или рекомбинантно. Присутствие антигенов может специфически обнаруживаться поверхностными антигенными рецепторами как Т-лимфоцитов организма-хозяина, так и В-лимфоцитов организма-хозяина, и молекулами антител, синтезируемыми клетками-хозяевами. Неограничивающим примером антигена IDV может быть гликопротеин гемагглютинин-эстераза. Неограничивающими примерами антигенов Mannheimia могут быть экстракт белков наружной мембраны (т.е. смесь частично очищенных антигенов) и рекомбинантно экспрессируемый полипептид лейкотоксина.

«Иммуногенность» относится к способности антигена вызывать иммунный ответ, причем указанный иммунный ответ включает как антиген-специфические ответы, так и не-антиген-специфические ответы или естественные иммунные ответы. «Защитный иммунитет» представляет собой иммунный ответ, который может ослаблять или предотвращать клинические симптомы, когда иммунизированное животное стимулируют или подвергают воздействию патогенного штамма. Как понятно специалисту в данной области техники, защитный иммунитет может снижаться со временем или с возрастом иммунизированного животного. В контексте данного документа защитный иммунитет должен быть эффективным в течение по меньшей мере четырех месяцев, но предпочтительно по меньшей мере шести месяцев, от последней даты иммунизации. Защитный иммунитет может быть вызван однократной дозой вакцины. Можно применять вторую или дополнительную дозу для повышения или продления защитного иммунного ответа. Например, повышение защитного иммунного ответа у племенной коровы может привести к повышению уровня материнских антител у телят.

В отличие от антигена «адъювант» представляет собой неспецифический стимулятор иммунного ответа. Адъювант может стимулировать естественный иммунный ответ путем связывания и активации паттерн-распознающего рецептора (ПРР). Такими стимуляторами ПРР могут быть, например, вирусные или бактериальные нуклеиновые кислоты, липиды из бактерий или паразитов или бактериальные белки или токсины, или любой искусственно сконструированный миметик таких молекул. Адъюванты также включают, без ограничения: неорганические соединения, которые агрегируют антигены для облегчения распознавания В-лимфоцитами или поглощения фагоцитами, такие как квасцы, гидроксид алюминия, фосфат алюминия, гидроксид фосфата кальция или сульфат аммония; масла; и детергенты. Адъюванты также могут быть хозяйскими медиаторами иммунной сигнализации, такими как, без ограничения, цитокины, лимфокины, хемокины, интерфероны, анафилатоксины, факторы роста, факторы дифференцировки и молекулы адгезии.

В контексте данного документа «иммуногенная композиция» представляет собой композицию, которая вызывает иммунный ответ при введении животному. Иммуногенная композиция содержит по меньшей мере один антиген и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый наполнитель, стабилизатор, солюбилизатор или разбавитель. Описание фармацевтически приемлемых наполнителей, стабилизаторов, солюбилизаторов или разбавителей можно найти, например, в "Remington: The Science and Practice of Pharmacy," Lloyd V. Allen, ed., Pharmaceutical Press, London, UK, 22^nd edition, 2012. Антиген может быть целым вирусом, бактерией или другим патогеном, живым или инактивированным. Антиген также может быть выделенной, очищенной или частично очищенной антигенной молекулой из вируса, бактерии или другого патогена. Антиген может быть полипептидом, полисахаридом, нуклеиновой кислотой или липидом. Антиген является по меньшей мере частично выделенным из его естественного окружения, которое может содержать факторы, могущие разбавлять, неправильно направлять или препятствовать эффективному иммунному ответу на антиген.

В контексте данного документа термин «вакцина» представляет собой иммуногенную композицию, которая стимулирует иммунную систему животного к развитию защиты, устойчивости, предотвращению или лечению симптома заболевания при введении нуждающемуся в этом животному, причем указанный симптом вызван патогенным организмом, например вирусом или бактерией. Вакцина может содержать, без ограничения, вирусные антигены или интактные вирионы, живые или инактивированные, в композиции с фармацевтически приемлемыми адъювантами, наполнителями, стабилизаторами, солюбилизаторами или разбавителями и, необязательно, адъювантом. Вакцина может содержать, без ограничения, бактериальные антигены или интактные бактерии, живые или инактивированные, в композиции с фармацевтически приемлемыми адъювантами, наполнителями, стабилизаторами, солюбилизаторами или разбавителями и, необязательно, адъювантом. Вакцина может содержать несколько антигенов из нескольких патогенов.

В контексте данного документа термины «процесс лечения», «лечить» или «лечение» включают подавление, замедление, прекращение, уменьшение, улучшение или обращение прогрессирования или тяжести существующего симптома, расстройства, патологического состояния или заболевания. Лечение можно применять профилактически или терапевтически.

В контексте данного документа термин «введение» включает, но не ограничивается этим, кожное, подкожное, внутримышечное, мукозальное, субмукозальное, трансдермальное, интратрахеальное, пероральное или интраназальное введение. Введение можно проводить путем инъекции или местного применения.

Следующие экспериментальные примеры являются иллюстративными в отношении вакцин против респираторного заболевания крупного рогатого скота. Понятно, что другие варианты реализации и применения будут очевидны для специалистов в данной области техники и что изобретение не ограничено этими конкретными иллюстративными примерами или предпочтительными вариантами реализации.

ПРИМЕР 1

В этом исследовании оценивали, развивается ли респираторный патогенез у крупного рогатого скота возрастом 6-9 месяцев при введении вируса гриппа D (IDV) с высоким титром и можно ли уменьшить этот патогенез с помощью гомологичной инактивированной вакцины.

В этом исследовании использовали в общей сложности 83 голштинских или гибридных голштинских телят возрастом приблизительно 6 месяцев. Животным давали акклиматизироваться в течение минимум 5 суток в их новом окружении на испытательной станции. Помещение для содержания состояло из изоляционного помещения ABSL-2 с автоматической линией подачи корма и открытой системой резервуаров с водой в каждом помещении. Животные соответствовали следующим критериям включения: отрицательный результат BVDV-PI по данным ушного выщипа и ИФА с захватом антигена (АСЕ); хорошее состояние здоровья на основании физикального осмотра, проведенного на 0 сутки; и сероотрицательный результат в отношении IDV. Животных случайным образом распределяли по группам обработки (Таблица 2), используя план случайного распределения. От исследовательского персонала, проводящего клинические наблюдения, собирающего образцы и анализирующего образцы, была скрыта информация относительно типа обработки. После применения каждого вида обработки (например, вакцинации) животных помещали в группу обработки таким образом, чтобы каждая группа находилась в изолированном загоне без возможности физического контакта между каждой группой обработки, за исключением телят из четвертой группы обработки (Т04), которых содержали вместе со стимулированными животными (группы Т02 и Т03).

Экспериментальная вакцина содержала инактивированный бета-проприолактоном (BPL) IDV, штамм Р/бычий/КБЛ 4-22/2012. Вакцину стандартизировали до 640 гемагглютинирующих единиц (ГАЕ) на дозу. Антиген разделяли на партии и готовили/дополняли с 30% EMULSIGEN® D. Вакцина проходила модифицированный тест на стерильность, состоящий из нанесения конечного продукта на кровяной агар, инкубации при 37°С и исследования колоний, сформированных приблизительно через 48 часов. Колонии выявлены не были, а продукт считали стерильным. Телят вакцинировали (2,0 мл) путем подкожной (ПК) инъекции в правую сторону шеи (1-дюймовая игла 20 калибра) на 0 сутки и на 14 сутки. Животных осматривали приблизительно через 1 (один) час после вакцинации для оценки ответа на вакцинацию. Никаких аномальных явлений отмечено не было.

Стимуляцию проводили на 35 сутки (возраст ~7 месяцев). На 35 сутки (35 с) каждого теленка интраназально стимулировали (5,0 мл; 2,5 мл/ноздря) IDV, штамм D/бычий/KS/14-22/2012 при 10⁶ TCID₅₀.

Всех животных оценивали в отношении угнетенности, состояния организма и дыхательной недостаточности на 35 сутки посредством вскрытия и делали оценку. Животных оценивали и записывали оценки перед перемещением или кормлением. Ректальную температуру тела измеряли ежесуточно в течение периода стимуляции (сутки 35-45). Температуру измеряли приблизительно в одно и то же время каждые сутки. Один образец крови брали не менее чем за 7 суток до прибытия на испытательную станцию, а остальные образцы крови для определения ингибирования гемагглютинации IDV брали на 0, 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56, 63, 70, 84, 98, 112 сутки. Один образец мазка из носа брали по меньшей мере за 7 суток до прибытия на испытательную станцию, а остальные мазки из носа брали у всех животных на 35 (до стимуляции), 37, 39, 41, 43 и 45 сутки. Мазки помещали в пробирку с транспортной средой. Пробирки метили с указанием даты сбора, идентификации животного (номер ушной бирки), типа образца (носового) и номера исследования. Пробирки незамедлительно охлаждали, помещая их в кулер, содержащий пакеты со льдом. Пробирки хранили при -70°С.

На 35, 37, 39, 41, 43 и 45 сутки соответствующих животных гуманно умерщвляли для оценки поражения легких, сбора жидкости бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ) и соответствующей ткани. У каждого животного удаляли легкие. Жидкость БАЛ собирали в асептических условиях из вырезанных легких. Стерильный фосфатно-солевой буферный раствор (ФСБ) пипетировали в легкие и пипетировали обратно, аккуратно массируя легкие. Извлеченную жидкость БАЛ помещали в пробирку, которую держали на льду. Каждый образец жидкости БАЛ разделяли на две аликвоты и метили с указанием ID животного и даты получения образца. Оба набора аликвот хранили в замороженном виде (≤ -20°С).

Каждую из семи легочных долей исследовали как визуально, так и путем пальпации в отношении наличия характерных грубых поражений, связанных с IDV. Количество поражений/уплотнений в каждой легочной доле оценивали и записывали в виде действительного значения от 0 до 100% от доли. Количество поражений (оценку) в каждой доле подставляли во взвешенную формулу, чтобы рассчитать пораженный процент легких. Вес, приписываемый каждой из семи долей (в соответствии с относительной массой долей легких), является следующим: левая апикальная доля = 10%; левая сердечная доля = 10%; левая диафрагмальная доля = 25%; правая апикальная доля = 10%; правая сердечная доля = 10%; правая диафрагмальная доля = 25%; и добавочная доля = 10%. В результате добавления взвешенных процентов получили композитную оценку легочных поражений.

Ткани легкого, носовой раковины и трахеи исследовали при вскрытии в отношении наличия поражений, а часть вырезали для иммуногистохимии. Трахеобронхиальный лимфатический узел также вырезали для иммуногистохимической оценки. Все образцы окрашивали гематоксилином и эозином для структурной оценки, а также окрашивали в отношении вируса IDV, используя стандартные методы иммуногистохимии.

Назальные мазки оценивали в отношении IDV с помощью РВ-ПЦР, используя набор специфических праймеров, разработанный ветеринарно-диагностической лабораторией Университета штата Канзас (KSU). Среднее значение со стандартным отклонением значения порогового цикла (СТ) исследуемых назальных мазков экстраполировали, используя стандартную кривую известной инфицирующей дозы вируса IDV для тканевой культуры (TCID₅₀), для получения значения вирусного титра в назальных мазках. Значение СТ экстраполировали, используя стандартную кривую известной инфицирующей дозы вируса IDV для тканевой культуры (TCID₅₀), для получения значения вирусного титра (Таблица 3).

Жидкость бронхоальвеолярного лаважа (Таблица 4) и трахеальные мазки (41, 43 и 45 сутки) (Таблица 5) также оценивали в отношении вируса IDV с помощью РВ-ПЦР, а значение СТ экстраполировали, используя стандартную кривую известной инфицирующей дозы вируса IDV для тканевой культуры (TCID₅₀), для получения значения вирусного титра для каждой группы образцов.

Анализ оценок поражения верхних дыхательных путей и легких, как указано выше, проводился заслепленным исследователем. Композитные оценки поражений легких приведены в Таблице 6 в виде средняя композитная оценка/число животных на группу в каждый момент времени.

Наблюдали невысокие оценки поражения легких со слабо выраженной тенденцией к небольшими различиями между вакцинированными и стимулированными животными. Для дополнительного изучения общей патологии легких, вызванной IDV, можно использовать большую статистическую мощность, а также уточнение модели стимуляции. Общие патологические исследования верхних дыхательных путей, исключительно трахеи, продемонстрировали наличие слизистого экссудата с пиковыми результатами через 4 и 6 суток после стимуляции.

Фиксированные образцы ткани из носовой раковины и трахеи обрабатывали, окрашивали гематоксилином и эозином, а затем окрашивали антителом, специфическим в отношении вируса IDV. Количество положительных образцов из общего числа животных на группу для образцов ткани носовой раковины и для образцов ткани трахеи представлено в Таблицах 7 и 8, соответственно.

Серологические титры антител оценивали на 0, 14, 21, 28, 35 и 42 сутки исследования (СИ) для серологической конверсии в вакцину. Средний геометрический титр (СГТ) титра ингибирования гемагглютинации (ИГ) сыворотки из каждой группы приведен в Таблице 9. Серологическая оценка показывает повышение титра ИГ против IDV в вакцинированных группах по сравнению с невакцинированными. Для дополнительного возможного повышения титра антител можно провести обычную оптимизацию дозы и вакцины. Для сравнения, в случае людей считается, что титр ИГ 40 (5,3 log₂) в целом защищает от инфицирования вирусом гриппа А, но не полностью снимает симптомы заболевания.

Клинические проявления угнетенного состояния и оценка состояния тела были в целом обыкновенными. Стимулированные животные демонстрировали дыхательную недостаточность с пиковыми клиническими признаками на 6 сутки после стимуляции. Различий в дыхательной недостаточности между вакцинированными и невакцинированными животными не наблюдали.

Первичная цель этого исследования состояла в том, чтобы оценить, способен ли вирус гриппа D (IDV) крупного рогатого скота вызывать клинический патогенез, и выяснить, способен ли препарат гомологичной инактивированной вакцины предотвращать клинический патогенез. У животных, стимулированных IDV, репликация вируса происходила в верхних дыхательных путях согласно данным РВ-ПЦР. Кинетика репликации вируса указывает на то, что самые высокие вирусные титры приходились на 6 сутки после стимуляции. Наблюдали тенденцию к большему количеству вируса в носовых мазках, трахеальных мазках и ЖБАЛ 2-ой группы лечения (Т02) по сравнению с вакцинированными группами, при этом наибольшие различия наблюдали в трахеальных мазках и образцах ЖБАЛ. Кроме того, проводили иммуногистохимическое окрашивание IDV на фиксированных срезах тканей верхних дыхательных путей (носовые раковины и трахея). Стимулированные животные были положительными в отношении вируса IDV по результатам окрашивания, причем пять из пяти телят были положительными на 6 сутки после стимуляции. Ни одно животное, получавшее вакцину, не было положительным в отношении IDV по результатам ИГХ-окрашивания. Можно предположить, что иммунизация может ограничивать уровень вирусного распространения путем снижения вирусной нагрузки в верхних дыхательных путях. Кроме того, контактирующая контрольная группа (Т04) продемонстрировала, что вирус передавался от стимулированных животных (Т02) наивным животным, которых содержали в том же помещении.

На основании результатов этого исследования можно заключить, что IDV реплицируется в верхних дыхательных путях и вызывает легкое воспаление, на основании иммуногистохимических наблюдений. Эта вирусная инфекция может быть важным фактором комплекса респираторного заболевания крупного рогатого скота, при котором профилактическое вмешательство, такое как применение вакцины, может улучшить общее состояние здоровья крупного рогатого скота.

ПРИМЕР 2

В этом исследовании оценивали предположение, что инфекция верхних дыхательных путей, вызываемая вирусом гриппа D, предшествует или усугубляет более тяжелую вторичную инфекцию Mannheimia haemolytica.

В этом исследовании использовали в общей сложности 70 голштинских или гибридных голштинских телят возрастом 5-9 месяцев. Животным давали акклиматизироваться в течение минимум 5 суток в их новом окружении на испытательной станции. Помещение для содержания состояло из изоляционного помещения ABSL-2 с автоматической линией подачи корма и открытой системой резервуаров с водой в каждом помещении. Животные соответствовали следующим критериям включения: отрицательный результат BVDV-PI по данным ушного выщипа и ИФА с захватом антигена (АСЕ); хорошее состояние здоровья на основании физикального осмотра, проведенного на 0 сутки; и сероотрицательный результат в отношении лейкотоксина (LKT) М. haemolytica.

Экспериментальная вакцина против IDV содержала инактивированный BPL штамм IDV, штамм D/бычий/NE/103795/2012. Штамм вируса гриппа, используемый для иммунизации и стимуляции изменяли с D/бычий/KS/14-22/2012 на D/бычий/NE/103795/2012 из-за того, что последний вирус был лучше для увеличения масштабов. Вакцины стандартизировали до 1280 ГАЕ на дозу. Антиген разделяли на партии и готовили/дополняли 1:1 по массе с SEPPIC MONTANIDE ISA 201 VG. Перед применением вакцина проходила 7-суточный тест на стерильность флаконов со средой в жидкой тиогликолятной среде (FTM) и триптическом соевом бульоне (TSB).

Вакцина М. haemolytica содержала экстракт инактивированных белков наружной мембраны (БНМ) и рекомбинантный LKT (rLKT). Вакцины стандартизировали до 250 мкг БНМ и 125 мкг LKT на дозу. Антиген разделяли на партии и готовили/дополняли 1:1 по массе с SEPPIC MONTANIDE ISA 201 VG. Перед применением вакцина проходила 7-суточный тест на стерильность флаконов со средой в бульонах FTM и TSB.

Комбинированная вакцина содержала инактивированный BPL IDV, штамм D/бычий/NE/103795/2012 плюс экстракт инактивированных белков наружной мембраны (БНМ) и rLKT. Вакцины стандартизировали до 1280 ГАЕ на дозу IDV, 250 мкг БНМ и 125 мкг LKT на дозу. Антиген разделяли на партии и готовили/дополняли 1:1 по массе с SEPPIC MONTANIDE ISA 201 VG. Перед применением вакцина проходила 7-суточный тест на стерильность флаконов со средой в бульоне FTM и TSB.

Все кандидатные животные, которые соответствовали критериям отбора и критериям включения/исключения, подходили для включения. Животных случайным образом распределяли по группам обработки, используя план случайного распределения. От исследовательского персонала, проводящего клинические наблюдения, собирающего образцы и анализирующего образцы, была скрыта информация относительно типа обработки. Исследователь, который проводил оценку поражения легких, был заслеплен в отношении ID конкретного теленка во время оценки.

После прибытия на место испытаний животных содержали в трех изоляционных помещениях ABSL-2. Группы Т01, Т02, Т05, Т06 и Т07 были размещены в двух помещениях (25 животных на помещение) с равным распределением групп лечения по помещениям. Группы Т03 и Т04 были размещены в отдельном третьем помещении для предотвращения заражения наивных животных IDV, который выделяют стимулированные IDV животные. Животных смешивали в трех помещениях. После стимуляции М, haemolytica на 41 сутки исследования (СИ41) проводили повторную сортировку всего стада для равномерного распределения групп лечения (Т01-Т07) между тремя изоляционными помещениями ABSL-2 с 23-24 животными на помещение. После пересортировки получали равномерное представление каждой группы обработки (3-4 животных на группу на помещение).

Телят вакцинировали (2,0 мл) путем подкожной (ПК) инъекции в правую сторону шеи (1-дюймовая игла 18-го калибра) на 0 сутки и в левую сторону шеи на 14 сутки. Животных осматривали приблизительно через 1 (один) час после вакцинации для оценки ответа на вакцинацию. Исследуемых животных ежесуточно осматривали для определения общего состояния здоровья, начиная с -5 суток и вплоть до 48 суток. Наблюдения проводили приблизительно в одно и то же время каждые сутки. Наблюдения за здоровьем животных состояли из визуальной оценки животных в отношении показателей здоровья животных.

Стимуляцию вирусом D проводили на 35 сутки (возраст ~6-10 месяцев) для групп Т01, Т02, Т05, Т06 и Т07. На 35 сутки каждого теленка интраназально стимулировали с помощью одноразового распылителя PREVAL® (10,0 мл; 5 мл/ноздря) IDV, штамм D/бычий/NE/103795/2012 при 10^5,7 TCID₅₀.

IDV получали следующим образом. В три роллерных полистироловых флакона для тканевого культивирования объемом 850 см² высевали клетки ST-C с целевой плотностью 2 × 10⁷ клеток/флакон (т.е. 23529 клеток/см²) в среду ЕМЕМ с 7,5% ФБС и 4 мМ L-глутамином. Роллерные флаконы центрифугировали при 0,25 об/мин при 37°С. Через 7 суток клетки инфицировали. Для инфицирования используемую среду сначала заменяли одной предварительно нагретой средой ЕМЕМ, a IDV (D/бычий/NE/103795/2012) добавляли при множественности заражения (MOI) 0,05. После дополнительных 3 суток инкубации при 0,25 об/мин и 37°С весь роллерный флакон и его содержимое собирали путем замораживания при -80°С, размораживания, и проводили асептическое распределение.

Во время сбора образцов отбирали образцы для анализа вирусных титров. Для анализа клетки ST-C высевали при 15000 клеток/лунка в 96-луночные планшеты. Через 3 суток после высевания, когда клетки были на ~95% конфлюэнтными, лунки два раза промывали ФСБ, после чего в каждую лунку добавляли 100 мкл ЕМЕМ с 0,2 мл/л гентамицина. Затем собранные образцы IDV серийно разводили 1:10 перед добавлением в каждую лунку по 100 мкл каждого разведения. После дополнительных 3 суток инкубации при 37°С и 5% СО₂ планшеты фиксировали 80% ацетоном при -20°С в течение по меньшей мере 20 минут перед высушиванием при 37°С. Для окрашивания первичное антитело разводили в Д-ФСБ, добавляли в каждую лунку и инкубировали при 37°С в течение 1 часа. После трех промывок в ФСБ вторичное антитело разбавляли в Д-ФСБ, добавляли в каждую лунку и инкубировали при 37°С в течение 75 минут. После двух промывок в ФСБ результаты получали визуально под флуоресцентным микроскопом и проводили расчеты по уравнению Спирмена-Карбера.

Стимуляцию Mannheimia haemolytica проводили на 41 сутки (возраст ~6-10 месяцев) для групп Т01, Т03, Т04, Т05, Т06 и Т07. На 41 сутки каждого теленка из групп Т01, Т03, Т05, Т06 и Т07 стимулировали интраназально с помощью одноразового распылителя (5,0 мл; 2,5 мл/ноздря) и интратрахеально с помощью эндоскопа (5,0 мл) в месте бифуркации гортань/трахея штаммом М. haemolytica при 10⁹ КОЕ/мл. На 41 сутки каждого теленка из группы Т04 стимулировали интратрахеально путем определения области бифуркации трахеи и вытягивания приблизительно на 10 см и доставки 60 мл штамма М. haemolytica при 10⁹ КОЕ/мл с помощью эндоскопа.

Ректальную температуру тела измеряли ежесуточно в течение периода стимуляции (сутки 35-48). Температуру измеряли приблизительно в одно и то же время каждые сутки.

Один образец крови брали минимум за 7 суток до прибытия в исследовательский центр, а остальные образцы крови для определения ингибирования гемагглютинации IDV и анти-М. haemolytica LKT антитела брали на -2, 14, 21, 28, 35, 41 и 48 сутки.

Один образец мазка из носа брали минимум за 7 суток до прибытия в исследовательский центр, а остальные мазки из носа брали у всех животных на 35 (до стимуляции), 37, 39, 41, 43, 45 и 47 сутки. Кроме того, мазки из трахеи получали при вскрытии на 48 сутки.

На 48 сутки указанных животных гуманно умерщвляли для оценки поражения легких, сбора жидкости бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ) и сбора ткани. У каждого животного удаляли легкие, а жидкость БАЛ собирали в асептических условиях из вырезанных легких. Стерильный фосфатно-солевой буферный раствор (ФСБ) пипетировали в легкие и собирали пипеткой, аккуратно массируя легкие. Экстракт жидкости БАЛ помещали в пробирку, которую держали на льду. Каждый образец жидкости БАЛ разделяли на две аликвоты и метили с указанием ID животного и даты получения образца. Оба набора аликвот хранили в замороженном виде (≤ -20°С).

Каждую из семи легочных долей исследовали как визуально, так и путем пальпации в отношении наличия характерных грубых поражений, связанных с М. haemolytica и/или IDV. Количество поражений/уплотнений в каждой легочной доле оценивали и записывали в виде действительного значения от 0 до 100% от доли. Количество поражений (оценку) в каждой доле подставляли во взвешенную формулу, чтобы рассчитать пораженный процент легких. Вес, приписываемый каждой из семи долей (в соответствии с относительной массой долей легких), является следующим: левая апикальная доля = 10%; левая сердечная доля = 10%; левая диафрагмальная доля = 25%; правая апикальная доля = 10%; правая сердечная доля = 10%; правая диафрагмальная доля = 25%; и добавочная доля = 10%.

При вскрытии исследовали ткани носовых раковин, трахеи, трахеобронхиального лимфатического узла и легких в отношении поражений и делали срез каждой из них. Срез делили таким образом, чтобы поместить одну половину в фиксатор (забуференный формалин или эквивалентный раствор) для иммуногистохимической оценки, а также окрасить гематоксилином и эозином для структурной оценки, а другую половину поместить в РНК-LATER® или заморозить при -70°С для ПЦР-анализа цитокинов и воспалительных генов.

Первичную переменную, оценку общего процентного поражения легких на СИ48, рассчитывали и анализировали, как в примере 1. Вторичные переменные суммировали или анализировали, в том числе суточную оценку угнетенности, суточную оценку состояния организма, суточную оценку дыхательной активности и суточную ректальную температуру тела от СИ35 до СИ48, а также смертность и исключение от СИ35 до СИ48.

Объединяли и анализировали данные по семи обработкам Т01, Т02, Т03, Т04, Т05, Т06 и Т07. В случае каждой переменной расчеты проводили для каждого животного, потому что животное было экспериментальной единицей. Все испытания проводили на уровне значимости 5%, если не указано иное.

Оценки общего процентного поражения легких на 48 сутки преобразовывали, используя arsin (кв. корень (общая процентная оценка легких)), и анализировали, используя линейный анализ смешанной модели (SAS® PROC MIXED v 9.4 или выше) с фиксированным эффектом, на обработку. Линейные контрасты проводили, используя следующие попарные сравнения:

Т01 против Т02, Т03, Т04;

Т02 против Т03, Т04;

Т03 против Т04; и

Т04 против Т05, Т06 и Т07.

Для каждой группы обработки рассчитывали средние значения, полученные методом наименьших квадратов (LSMEANs), и стандартные погрешности, а также средние арифметические значения и стандартные отклонения, и представляли обратно преобразованные результаты.

Кроме того, представляли сводные статистические данные для минимизированных фракций (MF) (R версия 3.0.3 (2014-03-06)). Распределение по частоте суточных оценок угнетенности, суточной оценки состояния организма и суточных оценок дыхательной активности получали для каждого момента времени для обработки.

Было два случая смерти из-за заболеваемости, оба в группе обработки 4. Ни в одной другой группе смертность зарегистрирована не было.

Основная цель этого исследования состояла в том, чтобы оценить показатели смертности и поражения легких в разных группах обработки и оценить предположение о том, что инфекция верхних дыхательных путей, вызванная вирусом гриппа D, предшествует более тяжелой вторичной инфекции Mannheimia haemolytica. Средние оценки поражения легких у животных, стимулированных интраназально М. haemolytica после стимуляции вирусом гриппа D, продемонстрировали более чем четырехкратное увеличение по сравнению с животными, которых интраназально стимулировали только М, haemolytica (группа Т01 = 5,6 и группа Т03 = 1,2, соответственно). Это подтверждает предположение, что инфицирование верхних дыхательных путей IDV приводит к повышению вероятности миграции М. haemolytica из верхних дыхательных путей, где он обычно колонизируется, в нижние дыхательные пути и легкие, где начинает проявляться патология.

Средняя оценка поражения легких у крупного рогатого скота, стимулированного IDV и М. haemolytica, была ниже, чем наблюдаемая в традиционной модели инфекции М. haemolytica, в которой больший объем бактерий (60 мл по сравнению с 10 мл интраназально/интратрахеально) доставляется непосредственно в легкие. Различия в степени тяжести можно объяснить снижением дозы и анатомической и механической иммунологической защитой между верхними дыхательными путями и легкими.

Кроме того, комбинированная инактивированная вакцина, содержащая антигены как IDV, так и М. haemolytica, обеспечивала статистически значимую защиту (по данным MF) при двойной стимуляции с оценкой поражения легких, которая могла бы считаться эффективной, поскольку существующие статистические критерии описывают для М. haemolytica модели, используемые для лицензирования вакцин (>0,4 MF с положительными верхней и нижней границами). Моновалентные вакцины против IDV (средняя оценка поражения легких 2,5) и М. haemolytica (средняя оценка поражения легких 0,9) обеспечивали MF выше этих критериев, но верхняя и нижняя доверительные границы не соответствовали удовлетворительным критериям. Следовательно, комбинированная вакцина против IDV и М. haemolytica является эффективным подходом для контроля респираторных заболеваний крупного рогатого скота.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> ЭЛАНКО ЮэС ИНК.

<120> ВАКЦИНА ПРОТИВ РЕСПИРАТОРНОГО ЗАБОЛЕВАНИЯ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

<130> P21011

<160> 19

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 2356

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cDNA from influenza D virus

<400> 1

cagaggatgt caccactatt aacgctcgca aaagagtatg caaatctcac aaaggataag 60

aaatcatgca aattgctgtc gcaagggacc gtgtcaagct acaccacttt taagaaatgg 120

acaacatcga gaaaagagaa aaacccatcc cttcgaatga gatgggcaat gggaagcaag 180

ttcccaatca tggcaaacag agaaattttg gaagaagctg ggataccaga acaatgggaa 240

gggatagacc tttggtcaaa aaaggatgat gtttcaaagt tggggatggt gttagcgtct 300

cccgcagcca taacttactg gaatttttgt ggacctggag tggacaattc ttctgtaata 360

agggatgttt acaaagcaaa atttatgaaa aaagagagat ggagagagac tctgtgggga 420

ccaatgaact ttgaactggt gggtaaacaa agaagagtgg ttgaaactca accagtggaa 480

ataaaactaa accaaaaaga aataaaagaa ctaacgatgt gggttctttt tgaggatgaa 540

gcaaaccttg caagcaaatt catacaggaa aatttctcac ttgtcctgtc attaagagaa 600

ctttacaagg gaaaggcagt aaataaagat gttgcagctt ttatgattgc acaccaattt 660

tctcccgaga agaggttctt acccactttt ggccccatta gaccagaaag gatggagcta 720

ctccactgtt tagggggtga cttctggaag atagaggcag taactgcagg gagtctgaat 780

gaagaacaaa agaagagaga tgttagagca gttgccagaa aaatttgcct tagagcaagt 840

gtggacttat ttactccagc agagaagata agggactata tatcaagtgt gacaatgaga 900

tttggaacag tagaaagaac gttcgaagac gtaataagaa acagtgatga tatatctgcg 960

gaagtgacct tatgcaaagc ggcacttgga tgcgaattgg gcaaaagcat gagctttggg 1020

aatctaaatc tgaggaaagt cagtggggaa gcagaaacaa tagaaaaaac agtatattgg 1080

ggattaaagc ccataaaata caaatgctgg agaggagagg aaacatttta ttgcgaactg 1140

aggaaagtaa cttgtatgtt tagaaggtct gaaggcctag attgggctaa cattggacct 1200

ggttcacctg aagaaagaag agagctcttg gcaatggtga tgatattctg cagagatggg 1260

agattctttg aatctgcacc agttaatatt gatgaatcat tctttagaac aagactgaat 1320

aaagaaatac cttatcaata tgtgctgcta aaatgggtaa ggcaatcgag agacaacttg 1380

gatgccttgt tgagtacaag aggactgata cctgctcata ttggacaatt cggaaaagga 1440

atgggaatag atggaagtag ctcatcttct atggtttaca agggggtcat gttgtcgaaa 1500

acaccgatag acatagtgga gagcaaagag aagcacaggc tgtttttaaa tgacaatata 1560

gaagcgataa cagagagagg agcaatggtt gcatccataa tggacctatc agaggataat 1620

agagaaacat ttaacgatgt gacttttaac catgtcgact tagctgttct caaagatgaa 1680

aaaactgcaa taataaagat ctatcgatca ctggtggaaa gaataaacac tgatgatgat 1740

ggcctacctg ctttgataat gggtaaaaga tatttagagt tgtatcaatt agatgaagtg 1800

aaagacgcgg tcgggctaat accaaaacgg atgctggggg cgtattccta ccaggcaaga 1860

cagctcatac aatcgcagat caaaaatgac agttatagcc ttcctgaaat aataaaattg 1920

ctgcccttct gttacagccc tccaaagaaa atgttatttg atgggacttt ccatttcaaa 1980

aatcaaatgt atgttaggcc tgggataaac acaaaccttt tcagttttag taagaccgac 2040

aaaagcaaga tatatgtgaa cggaagcgca gtgaaaataa agcttgtgct cggagacgat 2100

gaaatggaca ccagtcttgc ctttgttgaa ggatttcaag tttgtgaata tgatccaaga 2160

gcacctttga taccaagaag agatttgaga ctgattgggt tcggaaagaa agttagagtt 2220

tttgttggtc agggacagga gaaaaccctg gtgaggacga gctccaaaag agccgcctcc 2280

catgatgtaa acaaaaacat tcgtagaatg cgtctggaag tttgaagcac attgaaaaaa 2340

tcctcttgct actgct 2356

<210> 2

<211> 2261

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cDNA from influenza D virus

<400> 2

acgtcaatga tatcattgac atacccatac actggggcac ctcctatgtc acatggaaca 60

tcgaccaaat actcaatgga gactgtgtca agaacttact cctacagtag aactaaaaaa 120

gaggtacctt cgggaatatt cccaataaag agaaggaaat tctgtaacac aatagaagac 180

aaagaaaacc tggaaaaacc gaatggaaat gttgatataa atttcatgtt atcgctggca 240

gaaatgctgg aagaaaagat gggaaaaggg ttcttcaaat tctgtgccaa tgaagctgaa 300

gctgaaattt tgaagatgca cttcagcaag ctcactgaag gaaggcaaac ttatgactgg 360

acaagtgaaa gaaatatgcc agcagccacc gctcttcagc taacagtaga cgctatacaa 420

gaaacacagg gaacattcaa aggaactacc atggttgaat attgcaacaa gatattagaa 480

atgatggatt ggccagaagt gaaattcaaa aaggtcagaa tgattgttca gaggcattgg 540

gacccgaaaa ccaaaaaaga aataaaaatg aagtctccaa cattgatgat aacaaagatt 600

ggaagagaag aattcataaa gaggatatgc acgataaaca ccatggccaa agacggagaa 660

agaggaaaat acaaaagaag agctatagcc acccccggga tgggaatcag gccattctca 720

aaaattgtgg aaactttagc acaaaagatt tgtgagagac tagcagagag cggtttgcct 780

gttgggggaa atgagaagaa agccaaacta aaaactacgg tctcttcaac aaactcaaaa 840

ctacaagaag ggcagttcat ggtaaacata acaggggaca acagcaagtg gaatgaatgt 900

cagcaaccag aagcttatct tgcaatgttg gcatacatta ctaaagacag cagcaactta 960

atgaaagatc tctgctcagt agctccaaca ttgttctgca ataagtacgt gaaaatggga 1020

caaggtttcc gagcaaaaaa caaaagaaaa accaaagaaa tagtgatacc cgcaaaaagg 1080

atgaaagaaa ggaaagaatt gatgaacgcg gaatggaggg acctgtttga aacaatagaa 1140

ccttacatgg atggagagtg ctgcttcttg gggggaggaa tgctgatggg aatgtttaac 1200

atgttgtcaa ctgtttttgg agtcatgaca ttaaattaca gggaggaagc attggccaga 1260

aggaactgtt actggactgg gctacaaagt tcagatgatt ttgtgctctt ttgcatctct 1320

aaaacttggc cagagatgga gatgactatt ctaaaattca tcgctgtttg caagttgatg 1380

ggaataaaca tgtctttgga aaaatcctac gggtgcttgc ctgaactttt tgagttcaca 1440

agcatgttct tttccgggga ttttgtctca aacatagcct tggagttacc tgctttcaca 1500

acagctggaa tgaatgaagg aaccgacttc acagctgcga tgtctgtcat aagaacaaac 1560

atgatcaata atggactttc tcctgggact gctttaatgg ccctgcgaat ttgtctgcag 1620

gaatttagag caacatacag agtacaccct tatgactctg gagtgaagaa tcatcgaatg 1680

aaaatcataa ggaaattcat tgaaactatt gaaaacaaag atggattgct gatatcagat 1740

ggcgggaaat taatgaacaa tatctcaagt ttgcacatcc ctgaagaaat attgaaagag 1800

gatttgatgg atccctccta caggaacaga gttttcaatc ctaggaaccc ctttacacag 1860

tttgagaaga cagttgacat ctttaaggca agtgggccta taagagtaga ggagaacgaa 1920

gcagttgtat caacgcattc ctttaaaaca aggagcaata ggacattgct aaacacagac 1980

atgagggcaa tggctctcga agagaaaaga taccaagttg tttgcaacat gtaccgatcg 2040

gtcttcgaaa gtgcagacgt taacacccca ataggatcaa tgtcgatggg agaggcaatt 2100

gaagccaaaa tccttgaccg ggccagaacc cagtttgaaa atggaatcat agggggagaa 2160

gaatattctg aaatcaaaag actaatcgag gacgccaagc gtcaacgact gtctgtttaa 2220

gctttgcgtt gtttaataac agaaaaatcc tcttgctact g 2261

<210> 3

<211> 2194

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cDNA from influenza D virus

<400> 3

agcagatatc aggagattta gaaatgtcta gtgtaatcag agaaatcgca aagcgattct 60

tggaacaagc aacgataaac atcgctgaag aagtggtcag agaatatgga gaccatgaaa 120

gaacaatgat atctgttgga gttcatttcc aagcttgctg ccttataagt gatgaatata 180

cccttgagga tgagacaacc ccaagatacg ttcttttgga gggattgaga agacaagagg 240

ctataagcaa gcagaataac atttgctcca ctttgggatt ggaacccttg agaaatctag 300

cagatatttt tgatcgaaaa acaagaagat tccttgaaat aggaattaca aagagagaat 360

ccgatgagta ttaccaggaa aagttcaaca aaataggaaa tgacatggac atacatgttt 420

tcacatatga aggcaaatat ttcagcaaca atcccaatgg gttggaagac atccaaaaga 480

caagaatttt tacattccta tcttttgtgt cagacgaatt gagaaaagag aacatgttca 540

cagaaatgta tgttacagaa gaaggggcac ctgagcttga aatgtacaag tcaaagcttt 600

tcattgcaat gagagacgag agcgtgcctt tgccttacat aaactatgag caccttagga 660

caagatgtga aacattcaaa agaaatcagg ctgaatgcga agcaaaggta gcggatgtgg 720

cttcacggct aaaaatcaaa ctggaacatc tagaagaaaa caaactgcgg ccgctagaga 780

taccgaagga gaaagaggct ccctatacgc acaaatttat gatgaaagat gcttggttct 840

ttgcaaaacc tcatgattcg gagagagcac aaccgcaaca gatattgtat gatttctttg 900

aagcagcaaa catggggttc atgacgacat ccccaaaacc gatattcgga aagcaaggac 960

tgatgtatca ctccctctgg gggcagataa aaagggcaat aaaggacaag agaaatgagt 1020

tggagccttc agaacagagg gacttccttt gtggaattgg aagagcctcc aagaaaatac 1080

aggaggacaa atggcaagaa tccagagagg aagagtttaa acaagaagag actaaagggg 1140

cagctaagag ggggttccca acatggttta atgaagaatg gctttgggca atgagggact 1200

caggggatgg ggacaacaaa ataggggatt ggatacccat ggcagaaatg cctccctgca 1260

agaatgaaat ggaagattat gcaaaaaaga tgtgtgaaga attagaatcc aaaatacagg 1320

gaacaaattg tgctagggaa atgtccaagt tgatacatac aattgggagc ttacatacag 1380

aatgtaggaa ctttcccgga aaggtcaaga tagtgcctat atactgcaga gggacactga 1440

gaggggaatc aactgactgt ttgtttggaa tagcaataaa agggaaatcc catttaaaca 1500

aagatgatgg aatgtatact gttgtaactt ttgagttttc cactgaagaa ccaaatccaa 1560

gcaaacatga aaaatatacg gtcttcgaag ctggaacagt gcctgtggaa gccgtggtgt 1620

taactcccaa aagggaaaga gttctcaaag agaagaaatt gtttctttat tgcagaacta 1680

ctggaatgag caagttaaag aacgattggt tttctaaatg caggagatgt cttataccaa 1740

caatggagac tgtagagcag atagtgctga aagaatgcgc tctgaaagaa gaaaacagag 1800

tttcagagat gttggagaat aagagagctt ggattgccca tgagaacgga gagaatctta 1860

caagattggt atcaacaaag ctcaaagact tgtgtagaat gctaattgtg acacaatttt 1920

attactgtat atataacgac aatcagttgg aaggattctg taacgagcaa aagaaattcc 1980

ttatgtttct tcaagcagat aaggactcaa aatctgcatt tacttttaat cagaaagggt 2040

tatatgaaaa aattgaagag tgtattgtca gcaatccatt atgtattttc ctagctgata 2100

ggctgaacaa attatttctt gtagccaagt ccaatggagc taagtacttt gaatgaccaa 2160

aggccttgta atgttaaaaa tctccttgct actg 2194

<210> 4

<211> 2049

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cDNA from influenza D virus

<400> 4

gcagatagca ggagattttc aaagatgttt ttgcttctag caacaattac agcaataact 60

gcttgccaag cagaaagaga actgatatgt atagtgcaaa gagtgaatga aagcttctct 120

cttcactctg gatttggagg aaatgtttac agcatgaaga ctgagccaat gactggattc 180

acaaatgtga ccaaaggtgc tagtgtcatc aaccaaaaag actgggttgg attcggagat 240

tcaaggacag acttgactaa tgctcagttt ccagcgtctt cagatgtccc attggcagtg 300

gcaaagaagt ttaggtcatt gtcaggggct tcgttaatgt tgtcagcttt tggacctcct 360

ggcaaggttg attaccttta tcaaggatgc gggaaagaaa aagtatttta tgaaggggta 420

aactggtccc ctgaggcagg aattgattgc tttgggtcaa actggactca gacaaaaaag 480

gacttctatt cgaggatata tgaagctgct agaggcagca cgtgcatgac ccttgtaaat 540

tctctagaca ccaagatatc atcaaaaaca gccacagctg gaaccacatc ttcttgttct 600

tcaagctgga tgaaaagccc gttgtggtat gcagaatctt ctgttaatcc tggagctaga 660

cctcaagctt gtgggactga gcaatcagca acttttactt tgccgacaag tttcggaatt 720

tacaaatgca acaagcatgt agtgcaactt tgttactttg tgtatgaaaa caaaacagca 780

tttaacactc ttggctgtgg agattattac caaaattact atgacgggaa tggaaacctg 840

gtagggggag tggataacag agtggcagca tacagaggaa tagcaggctc tagagttaaa 900

attgaatgtc cttcaaaaat cttgaaccct gggacttaca gcattagatc aacaccaaaa 960

ttccttctgg taccaaaaag gtcatattgc ttcgacactg atggagggta ccctatacaa 1020

gtggttcaat ctgagtggtc agcttcacga agatcagata atgccactga agaagcatgc 1080

ctacaaacag aaggatgtat tttcatcaaa aagacaaccc cttatgtagg agaagcagat 1140

gacaaccatg gggacattga gatgaggcaa ctcttgagtg ggcttggcaa caacgacaca 1200

gtgtgtgttt cccaaagtgg atacacaaaa ggagagaccc cttttgtaaa ggattatttg 1260

agtcctccca agtatggcag atgtcagttg aaaactgaca gtggaagaat cccaactcta 1320

ccttctgggt tgataatacc gcaagcaggg actgattctt taatgagaac tttgacacca 1380

gcaacaagga tcttcggaat agatgactta gtcttcgggc ttttattcat agggtttgtc 1440

gcaggaggag ttgcaggagg ttacttctgg ggaagatcaa gtggaggggg tggtggtgcc 1500

tcggtgagca gtacgcaggc tggatttgac aaaatcggaa aagatataca gcagcttcgg 1560

aatgacacaa atgcagcaat tgaaggcttc aacgggagaa ttgcccatga tgagcaagcc 1620

attaagaatt tggcaaaaga aatcgaagat gcaagggcag aagctttggt aggggaactt 1680

ggtataataa gatccctcat agttgccaac ataagcatga acctaaaaga atctttatat 1740

gaactcgcaa accaaataac aaagagagga ggaggaattg cacaagaagc aggcccaggg 1800

tgttggtatg ttgactccga aaactgtgat gcaagctgca aggagtacat tttcaacttc 1860

aatggcagtg ccactgtccc cacattgagg ccagttgaca ccaatgttgt aataacatcg 1920

gatccttatt acttgggctc gaccatagct ctctgtcttt tgggtctgat ggcgattgct 1980

gcttttgttg gtgtgagttg gatctgttgc aagaaataga atcttagaaa aaatctcctt 2040

gctactgct 2049

<210> 5

<211> 1776

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cDNA from influenza D virus

<400> 5

agcagatagc aggagattat taagcaatat ggactcaaca aaagcccaaa cgcctgaaga 60

gcaaagagca aagaatgcca aaaccatcct tgagaacata cagatatatg aaaggatgtg 120

tgatctcttt ggggtgtcag aagatgacaa actgataatt gagaacagta tttcaattga 180

gagaatgata agagttgtaa cagataagaa atatcaagac aagaaactaa agaatgctgg 240

aagtgatctt gaaaagattg caaatgcagg gaaagttttc tgccgattgg tggagtcaac 300

agctgggaaa tgtagtgcaa gattgggaat ggcactgaaa cccaacgttg aggcagtcct 360

gaccgatgta ctcgggaatg agctggatag ggctgctgtg cttgggaaaa ggatggggtt 420

tacagcaatg ttcaaatcaa acctggaaga ggttttgtac caaagaggaa agaatcagct 480

taaaaagagg aatgctgcag aaactttcac tctttcacaa ggtgcttcgc tagaggcaag 540

atttaggccc ataatggaaa aacacctagg tgttgggact gttgtggcgt caataaagaa 600

tatcctggca agcaaaaaga acgggaacta caggaacaag atggtgagga aacctggagg 660

aaacagagaa agctggtcac cattggagag agaaatatcc tttctgaaca agaagttgtt 720

tcctggacca atgaggcagc tctgcaagaa attcgaatac ttgaacgacc aagagaagca 780

actggcctta aacctcatgc tggatgcaag tctcatcctg aagccacaag tgactcataa 840

aatgataatg ccttggtcaa tgtggctggc tgtgaagaaa tatgcagaaa tgaacaaggg 900

atcacccagt cttgaagacc tcgcagccta ttctggagta agagccttta tggccttcaa 960

tacagcttgc tacatgagta aattcaccat tgggaaggga attgtgggag atgcagagat 1020

catggaaaat ggaaacgaca agatgcaaac tcttgcaatg gcttgttttg gactggcgta 1080

tgaagacacc gggattgttg cagcaatgat ctcccaaccc atgaagaaaa gatatcagtt 1140

gagggtgggg aacttcaacc ctccagaaga aggaacaata aaaggaacaa gcgccggcta 1200

tttccacaag tgggctgaat ttggaaatag gctgcctttc aacagttttg gaactggtga 1260

atccaaacag ataagcaact caggagtgtt tgcagtgcag aggcccagca ctactaacat 1320

tcaaagactg gcagagctaa tggctaggaa tactggagaa accagcgaca actttactca 1380

gttggttcag aaaataagag aacaagtggg gacctttgct gatcaaaaag caaatcttcg 1440

agagttcacc ggaggatata tttatgatat tactgacgta acgaagagca accccaagat 1500

acctcagttg ggtggggact ctttcttctt tgagttcacc ggaagcgacg ttccaagaac 1560

tggagccaaa agaagagtgg gaggagctga tgatgtgacc cctggaactt cccagcccaa 1620

gaaaagagga aggcaaggtg ccggagcaga atcaagtatg gacattgaaa cagttggtga 1680

agattaactc ttctttggat ggttctgttg cagtccccag tgggtgttaa aggtgttggt 1740

ttgtcttatt taacaaaaaa tctccttgct actgct 1776

<210> 6

<211> 1219

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cDNA from influenza D virus

<400> 6

agcataagca gaggatattt ttgacgcaat ggcacaagaa caactacttg ctgaacttga 60

gggatacctc agaggaatta acccaatgac caggcaaaca attttgagat ctgcaagagg 120

tggaatggat agcgctaggg atgcagcaag agcagcgaag aagggagaaa tgcaactaac 180

aagtggagag agtatagtgg tgcacatatg cctgagggcc atgtaccctg gaataaagcc 240

atggtcagaa gccaaaaaag atcttgataa agctacagaa ggactgagtg gaaaagacag 300

caaaagcata agaaaggctt tgaggaaggc gggagacctg acagggataa aggagatgat 360

gatgatgtat gaaatgaggg aggacaaaaa agcagaaatg gtggagcaaa tctacgacga 420

tccagaggat tttacagaag atgtaaggct tgggaccgtt gctgcctggc ttcaatgcaa 480

aaacaaaagg agcgagaaat atcatcacaa aatgtcaatg tctggaagca ctgcacttgc 540

cttgggagat gcccaaaaag ctggaatggc catagaaaat atggccagtg ttgtaccaat 600

gaaaaaagag gcccaggcac tgcacaaaga cgcagaagtc ttaattgaac tggcaagaat 660

agcatatggg tcaagagcaa tggaaggaca cctgcaaaat gcaatggacg gaattggaag 720

caaagtcagt ggaatggcta atcttgctct aaaaaggtca gttcttactt tgttaatgtt 780

ggtaatttgt gggatatcca cctgtgtaaa tgctgaaact gtggaagaat tttgtagaaa 840

gaaactaaat cagacggaag aaaaggttta tgtccattgt ttcaatgagg atgatagtcg 900

ggcaatgact ctagctgctt tgatacttgg atgctttagt atgctttaca ttttaataaa 960

ggcaatactg atgcttttgt tgacaatcat aaatggaaga ccaaatggaa gttgggatga 1020

cttgaaacat gttgtaaaat gtttttcaga gactggaagt gagaacttcg ccagggatat 1080

aatggtcctg gagtccaggc gagatgggga ggagacaagc tccctggagg agggactggg 1140

ccctccattg agtggattca atgaaaatgg tgtattcatg gaaacattat aatcgcgaaa 1200

aaatcctctt gctactgct 1219

<210> 7

<211> 869

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cDNA from influenza D virus

<400> 7

gcagatatca ggggtgtaca atttcaatat gtctgaaaat aagtcagtga acacaacaaa 60

tatcagagca gcaatctccg aattggcatt gggcgcagcc agctggatgg attcctctgg 120

attaatgact ttcgagaaaa tgagaaagtc tgctgagaat tcactgagag tcgaacaggt 180

ttatgaaccg agaacttggg aagatgcagt ggccgaaggt agagaaattc taggattcac 240

tactattgct gccttaagaa aaccagagga gactcatgct gttgaattgg gaaagaacat 300

tatctatccc ttaggaggaa atcctttcta tctgagccca tgtaccattg acactctgta 360

tgagccaaag ctcataagac aaggagaagt cttgggagta aaatatcgga actgcaattg 420

ctttgtaaaa actgctgaac tattagtgac cgacatggga gaaatcattg tgctcttttg 480

cagaaacact gagaaaccag cttactgcct taagaatttc cgtagaggag atgacccaga 540

gaagtcagta cgaaagatac tcagaatttg gagaagtgga cttgttgttg ccgttgatgc 600

ggaatctaga gatgagatca gacgatacaa atctggatgt gaaacagatc ccttctggag 660

aagagaaggc gcaactactg gagaggttca ggagttgctt ggtgtcattg ataaggttga 720

aatccaagct gggagtagcg atggtgaact ctttgactaa ccaggatatg agggccgctt 780

tggatgaaat caagtcagtt tcgagaacaa tttcaatgtt aaaagaatgt attcgttctt 840

tagtatgaaa aaaccccttg ctatctgct 869

<210> 8

<211> 2337

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cDNA from influenza D virus

<400> 8

tatcgctcgc aaaagagtat gcaaatctca caaaggataa gaaatcatgc aaattgctgt 60

cgcaagggac cgtgtcaagc tacaccactt ttaagaaatg gacaacatcg agaaaagaga 120

aaaacccatc ccttcgaatg agatgggcaa tgggaagcaa gttcccaatc atggcaaaca 180

gagaaatttt ggaagaagct gggataccag aacaatggga agggatagac ctttggtcaa 240

aaaaggatga tgtttcaaag ttggggatgg tgttagcgtc tccagcagcc ataacttact 300

ggaatttttg tggacctgga gtggacaatt cttctgtaat aagggatgtt tacaaagcaa 360

aatttatgaa aaaagagaga tggagagaga ctctgtgggg accaatgaac tttgaactgg 420

tgggtaaaca aagaagaatg gttgaaactc aaccagtgga aataaaacta aaccaaaaag 480

aaataaaaga actgacgatg tgggttcttt ttgaggatga agcaaacctt gcaagtaaat 540

tcatacagga aaatttctca cttgtcctgt cattaagaga actttacaag ggaaaggcag 600

taaataaaga tgttgcagct tttatgattg cacaccaatt ttctcccgag aagaggttct 660

tacccacttt tggccccatt agaccagaaa ggatggagct gctccactgt ttagggggtg 720

acttctggaa gatagaggca gtaactgcag ggagcttgaa tgaagaacaa aagaagagag 780

atgttagagc agttgccaga aaaatttgcc ttagagcaag tgtggactta tttactccag 840

cagagaagat aagggactat atatcaagtg tgacaatgag atttggaaca gtagaaagaa 900

cgttcgaaga cgtaataaga aacagtgatg atatatctgc ggaagtgacc ctatgcaaag 960

cggcacttgg atgcgaattg ggcaaaagca tgagctttgg gaatctaaat ctgaggaaag 1020

tcagtggaga agcagaaaca atagaaaaaa cagtatattg gggattaaag cccataaaat 1080

acaaatgctg gagaggagag gaaacatttt attgcgaact gaggaaagta acttgtatgt 1140

ttagaaggtc tgaaggccta gattgggcta acattggacc tggttcacct gaagaaagaa 1200

gagagctctt ggcaatggtg atgatattct gcagagatgg gagatttttt gaatctgcac 1260

cagttaatat tgatgaatca ttctttagaa caagactgaa taaagaaata ccttatcaat 1320

atgtgctgct aaaatgggta aggcaatcga gagacaactt ggatgccttg ttgagtacaa 1380

gaggactgat acctgctcat attggacaat ttggaaaagg aatgggaata gatggaagta 1440

gctcatcttc tatggtttac aagggagtca tgttgtcgaa gacaccgata gacatagtgg 1500

agagcaaaga gaagcacagg ttgtttttaa atgacaatat agaagcgata acagagagag 1560

gagcaatggt tgcatccata atggacctat cagaggataa tagagaaaca tttaacgatg 1620

tgacttttaa ccatgtcgac ctagctgttc tcaaagatga aaaaactgca ataataaaga 1680

tctatcgatc actggtggaa agaataaaca ctgatgatga tggcctacct gctttgataa 1740

tgggtaaaag atatttagag ttgtatcaat tagatgaagt gagagacgcg gtcgggctaa 1800

taccaaaacg gatgctgggg gcgtattcct accaggcaag acagctcata caatcgcaga 1860

tcaaaaatga cagttatagc cttcctgaaa taataaagtt gctgcccttc tgttacagcc 1920

ctccaaagaa aatgttattt gatgggactt tccatttcaa aaatcaaatg tatgttaggc 1980

ctgggataaa cacaaacctt ttcagtttta gtaagaccga caaaagcaag atatatgtga 2040

acggaagcgc agtgaaaata aagcttgtgc tcggagacga tgaaatggac accagtcttg 2100

cctttgttga aggatttcaa gtttgtgaat atgatccaag agcacctttg ataccaagaa 2160

gagatttgag actgattggg ttcggaaaga aagttagagt ttttgttggt cagggacagg 2220

agaaaaccct ggtgaggacg agctccaaaa gagccgcctc ccatgatgta agcaaaaaca 2280

ttcgtagaat gcgtctggaa gtttgaagca cattgaaaaa atcctcttgc tactgct 2337

<210> 9

<211> 2307

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cDNA from influenza D virus

<400> 9

caatggaaat aaacccatat ctactcatgc taaacaatga tataacgtca atgatatcat 60

tgacataccc atatactggg gcacctccta tgtcacatgg aacatcgacc aaatactcaa 120

tggagactgt gtcaagaact tactcctaca gtagaactaa aaaagaggta ccttcgggaa 180

tattcccaat agagagaagg aaattctgta acacaataga agacaaagaa aacctggaaa 240

aaccgaatgg aaatgttgat ataaatttca tgttatcgct ggcagaaatg ctggaagaaa 300

agatggggaa agggtttttc aaattctgtg ccaatgaagc tgaagctgaa attttgaaga 360

tgcacttcag caagctcact gaaggaaggc aaacttatga ctggacaagt gaaagaaata 420

tgccagcagc caccgctctt cagctaacag tagacgctat acaagaaaca cagggaacat 480

tcaaaggaac taccatggtt gaatattgca acaagatatt agaaatgatg gattggccgg 540

aagtgaaatt caaaaaggtc agaatgattg ttcagaggca ttgggacccg aaaaccaaaa 600

aagaaataaa aatgaagtct ccaacattga tgataacaaa gattggaaga gaagaattca 660

taaagagaat atgcacgata aataccatgg ccaaagacgg agaaagagga aaatacaaaa 720

gaagagctat agccaccccc gggatgggaa tcaggccatt ctcaaaaatt gtggaaactt 780

tagcacaaaa gatttgtgag agactagcag agagcggttt gcctgttggg ggaaatgaga 840

agaaagccaa actaaaaact acggtctctt caacaaactc aaaactacaa gaagggcagt 900

tcatggtaaa cataacaggg gacaacagca agtggaatga atgtcagcaa ccagaagctt 960

atcttgcaat gttggcatac attactaaag acagcagcaa cttaatgaaa gatctctgct 1020

cagtagcacc aacattgttc tgcaataagt atgtaaaaat gggacaaggt ttccgagcaa 1080

aaaacaaaag aaaaaccaaa gaaatagtga tacccgcaaa aaagatgaaa gaaaggaaag 1140

aattgatgaa cgcggaatgg agggacctat ttgaaacaat agaaccttac atggatggag 1200

agtgctgctt cttgggggga ggaatgctga tgggaatgtt taacatgttg tcaactgttt 1260

ttggagtcat gacattaaat tacagggagg aagcattggc caaaaggaac tgttactgga 1320

ctgggctaca aagttcagat gattttgtgc tcttttgcat ctctaggact tggccagaga 1380

tggagatgac tattctaaaa ttcatcgctg tttgcaagtt gatgggaata aacatgtctt 1440

tggaaaaatc ctacgggtgc ttgcctgaac tttttgagtt cacaagcatg ttcttttccg 1500

gggattttgt ctcaaacata gcattggagt tacctgcttt cacaacagct ggaatgaatg 1560

aaggaaccga cttcacagct gcgatgtctg tcataagaac aaacatgatt aataatggac 1620

tttctcctgg gactgcttta atggccctgc gaatttgtct gcaggaattt agagcaacat 1680

acagagtaca cccttatgat tctggagtga agaatcatcg aatgaaaatc ataaggaaat 1740

tcattgaaac tattgaaaac aaagatggat tgctgatatc agatggcggg aaattaatga 1800

acaatatctc aagtttgcac atccctgaag aaatattgaa agaggatttg atggatccct 1860

cctacaggaa cagagttttc aatcctagga acccctttac acagtttgag aagacagttg 1920

acatctttaa ggcaagtgga cctataaggg tagaggagaa cgaggcagtt gtatcaacgc 1980

attcctttag aacaaggagc aataggacat tgctaaatac agacatgagg gcaatggctc 2040

tcgaagagaa aagataccaa gttgtttgca acatgtaccg atcggtcttc gaaagtgcag 2100

acgttaacac cccaatagga tcaatgtcga tgggagaggc aattgaagcc aaaatccttg 2160

accgggccag aacccagttt gaaaatggaa tcataggggg agaagaatat tctgaaatca 2220

aaagactaat cgaggacgcc aagcgtcaac gactgtctgt ttaagctttg cgttgtttaa 2280

taacagaaaa atcctcttgc tactgct 2307

<210> 10

<211> 2196

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cDNA from influenza D virus

<400> 10

agcagatagc aggagattta gaaatgtcta gtgtaatcag agaaatcgca aagcgattct 60

tggaacaagc aacgataaac atcgctgaag aagtggtcag agaatatgga gaccatgaaa 120

gaacaatgat atctgttgga gttcatttcc aagcttgctg ccttataagt gatgaatata 180

cccttgagga tgagacaacc ccaagatacg ttcttttgga gggattgaaa agacaagagg 240

ctataagcaa gcagaataac atttgctcca ctttgggatt ggagcccttg agaaatctag 300

cagatatttt tgatcgaaaa acaaaaagat tccttgaggt aggaattaca aggagagaat 360

ccgatgagta ttaccaggaa aagttcaaca aaataggaaa tgacatggac atacatgttt 420

tcacatatga aggcaaatac ttcagcaaca atcccaatgg gttggaagac atccaaaaga 480

caagaatttt tacattccta tcttttgtgt cagacgaatt gagaaaagag aacatgttca 540

cagaaatgta tgttacagaa gaaggggcac ctgagcttga aatgtacaag tcaaagcttt 600

tcattgcgat gagagacgag agcgtgcctt tgccttacat aaactatgag caccttagaa 660

caagatgtga aacattcaaa agaaatcagg ctgaatgcga agcaaaggta gcggatgtgg 720

cttcacggct aaaaatcaaa ctggaacatc tagaagaaaa taaactgcgg ccgctagaga 780

taccgaagga gaaagaggct ccctatacac acaaattttt gatgaaagat gcttggttct 840

ttgcaaaacc tcatgattcg gagagagcac aaccgcaaca gatattgtat gatttctttg 900

aagcagcaaa catggggttc atgacgacat ccccaaaacc gatattcgga aagcaaggac 960

tgatgtatca ctccctctgg gggcagacaa aaagagcaat aaaggacaag agaaatgagt 1020

tggagccttc agaacagaga gacttccttt gtggaattgg aagagcctcc aagaaaatac 1080

aggaggacaa atggcaagaa tccagagagg aagagtttaa acaagaagag actaaagggg 1140

cagctaagag ggggttccca acatggttta atgaagaatg gctttgggca atgagggatt 1200

caggggatgg ggacaataaa ataggggatt ggatacccat ggcagaaatg cctccttgca 1260

agaatgagat ggaagattat gcaaaaaaga tgtgtgaaga attagaatcc aaaatacagg 1320

gaacaaattg tgctagggaa atgtccaagt tgatacatac aattgggagc ttacatacag 1380

aatgtaggaa ctttcccgga aaggtcaaga tagtgcctat atactgcaga gggacactga 1440

gaggggaatc aactgactgt ttgtttggaa tagcaataaa agggaaatcc catttaaaca 1500

aagatgatgg aatgtatact gttgtaactt ttgagttttc cactgaagaa ccaaatccaa 1560

gcaaacatga aaaatatacg gtcttcgaag ctggaacagt gcctgtggaa gccgtggtgt 1620

taactcccaa aagggaaaga gttctcaaag agaagaaatt gttcctttat tgcagaacta 1680

ctggaatgag caagttaaag aacgattggt tttctaaatg caggagatgt cttataccaa 1740

caatggagac tgtagagcag atagtgctga aagaatgcgc tctgaaagaa gaaaacagag 1800

tttcagagat gttggagaat aagagagctt ggattgccca tgagaacgga gagaatctta 1860

caagattggt atcaacaaag ctcaaagact tgtgtagaat gctaattgtg acacaatttt 1920

attactgtat atataatgac aatcaattgg aaggattctg taacgagcaa aagaaattcc 1980

ttatgtttct tcaagcagat aaggactcaa aatctgcatt tacttttaat cagaaagggt 2040

tatatgaaaa aattgaagag tgtattgtca gcaatccatt atgtattttc ctagctgata 2100

ggctaaacaa attatttctt gtagccaagt ccaatggagc taagtacttt gaatgaccaa 2160

aggccttgta atgttaaaaa tctccttgct actgct 2196

<210> 11

<211> 2045

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cDNA from influenza D virus

<400> 11

gcagatagca ggagattttc aaagatgttt ttgcttctag caacaattac agcaataact 60

gcttgccaag cagaaagaga actgatatgc atagtgcaaa gagtgaatga aagcttctct 120

cttcactctg gatttggagg aaatgtttac agcatgaaga ctgagccaat gactggattc 180

acaaacgtga ccaaaggtgc tagtgtcatc aaccaaaaag actggattgg attcggagat 240

tcaagaacag acttgaataa tgatcagttt ccagcgtctt cagatgttcc attggcagtg 300

gcgaagaagt ttcggtcatt gtcaggggct tcgctgatgt tgtcagcttt tgggcctcct 360

ggcaaggttg actacctcta tcaaggatgt gggaaagaga aagtatttta tgaaggggta 420

aactggtccc ctgaggcagg aattgattgc tttggatcaa actggactca gacaaagaag 480

gacttctatt cgaagatata tgaagctgct agaagcagca catgcatgac tcttgtaaat 540

tctcttgaca ccaagatatc atcaacaaca gctacggctg gaaccgcatc ttcttgttct 600

tcaagttgga tgaaaagccc gttgtggtat gcagaatctt ctgttaatcc tggagctaaa 660

cctcaagttt gtgggactga gcaatcggca acttttactt tgccgacaag cttcggaatt 720

tacaaatgca acaagcatgt agtgcagctt tgttactttg tatacgaaaa caaaacaaca 780

tttaacactt ttggctgtgg agattattac caaaattact atgatgggaa tggaaacctg 840

atagggggaa tggataacag agtggcagca tacagaggaa tagcaaacgc tggagttaaa 900

attgaatgtc cttccaaaat cttgaaccct gggacttaca gcattagatc aacaccaaga 960

ttcctcctag taccaaaaag gtcatactgc ttcgacactg atggagggta ccctatacaa 1020

gtagttcaat ctgagtggtc agcttcacga agatcagata atgccacaga agaagcatgc 1080

ctacaaacag aaggatgtat tttcatcaaa aagacaaccc cttatgtagg agaagcagat 1140

gacaaccatg gagacattga gatgaggcaa ctcttgagtg ggcttggcaa caatgacaca 1200

gtgtgcgttt cccaaagtgg atacacaaaa ggagagaccc cttttgtaaa ggattatttg 1260

agtcctccca agtatggcag atgtcagttg aaaactgaca gtggaagaat cccaactcta 1320

ccttctgggt tgataatacc gcaagcaggg actgactctt taatgacaac tttgacgcca 1380

gcaacaagga tcttcggaat agatgactta atcttcgggc ttttattcgt ggggtttgtc 1440

gcaggagggg tcgcaggagg ttacttctgg ggaagatcaa atggaagggg tggtggtgcc 1500

tcggtgagca gtacgcaggc tggatttgac aaaatcggaa aagatataca gcagcttcgg 1560

aatgacacaa atgcagcaat tgaaggcttc aacgggagaa ttgcccatga tgagcaagcc 1620

attaagaatt tggcaaaaga aatcgaagat gcaagggcag aggctttggt aggggaactt 1680

ggtataataa gatccctcat agttgccaac ataagcatga atctaaaaga atctttatat 1740

gaactagcaa accaaataac aaaaagagga ggaggaattg cacaagaagc aggcccaggg 1800

tgttggtatg ttgactccga aaactgtgat gcaagctgca aagagtacat tttcaacttc 1860

aatggaagtg ccactgtccc cacattgagg ccagttgaca ccaaggttgt aataacatcg 1920

gatccttatt acttgggttc gaccatagct ctctgtcttt tggggctggt ggcgattgct 1980

gcttctgttg gtgtgatttg gatctgttgc aagaaataga atcttagaaa aaatctcctt 2040

gctac 2045

<210> 12

<211> 1774

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cDNA from influenza D virus

<400> 12

agcagatagc aggagattat taagcaatat ggactcaaca aaagcccaaa cgcctgaaga 60

gcagagagca aagaatgcca aaaccatcct tgagaacata cagatatatg aaaggatgtg 120

tgatctcttt ggggtgtcag aagatgacaa actgataatt gagaacagta tttcaattga 180

gagaatgata agagttgtaa cagataagaa ataccaagac aaaaaactaa agaatgccgg 240

aagtgatcct gaaaagattg caaatgcagg gaaagttttc tgtcgattgg tggagtcaac 300

agctgggaaa tgtagtgcaa gattgggaat ggcactgaaa cccaacgttg aggcagtcct 360

gaccgatgta ctcgggaatg aactggatag ggctgctgtg cttgggaaaa gaatggggtt 420

ttcagcaatg ttcaaatcaa acctggaaga ggttttgtac caaagaggaa agaatcagct 480

taaaaagagg aatgctgcag aaactttcac tctttcacaa ggtgcttcgc tagaggcaag 540

atttaggccc ataatggaaa aacacctagg tgttgggact gttgtggcgt caataaagaa 600

tatcctggca agcaaaaaga acgggaacta caggaacaag atggtgagga aacctggagg 660

aaacagagag agctggtcac cattggagag agagatatcc tttctgaaca agaagctgtt 720

tcctggacca atgaggcagc tctgcaagaa attcgaatac ttgaacgacc aagagaagca 780

actggcctta aaccttatgc tggatgcaag tctcatccta aaaccgcaag tgactcacaa 840

aatgataatg ccttggtcaa tgtggctggc tgtgaagaag tatgcagaaa tgaacaaggg 900

atcacccagt cttgaagacc tcgcagccta ttctggagta agagccttta tggccttcaa 960

tacagcttgc tacatgagta aattcaccat tgggaaggga attgtgggag atgcagagat 1020

catggaaaat ggaaacgaca agatgcaaac tcttgcaatg gcttgttttg gactggcgta 1080

tgaagacacc gggattgttg ctgcaatgat ctcccaaccc atgaagaaaa gatatcagtt 1140

gagagtgggg aacttcaatc ctccagaaga aggaacaata aaaggaacaa gcgccggcta 1200

tttccacaag tgggctgaat ttggaaatag gctgcctttc aacagttttg gaactggtga 1260

atccaaacag ataagcaact caggagtgtt tgcagtgcag aggcccagca ctactaacat 1320

tcaaagactg gcagagctaa tggctaggaa taccggagaa accagcgaca actttactca 1380

gttggttcag aaaataagag aacaagtggg ggcctttgct gatcaaaaag caaatcttcg 1440

agagttcacc ggaggatata tttatgacat tactgacgta acgaagagca accccaagat 1500

acctcagttg ggtggggact ctttcttctt tgaattcacc ggaagcgacg ttccaagaac 1560

tggagccaaa agaagagtgg gaggagctga tgatgtgacc cctggaactt cccagcccaa 1620

gaaaagagga aggcaaggtg ccggagcaga atcaagtatg gacattgaaa cagttggtga 1680

agattaactc atctttggat ggttctgttg cagtccccag tgggtgttaa aggtgttggt 1740

ttgtcttatt taacaaaaaa tctccttgct actg 1774

<210> 13

<211> 1218

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cDNA from influenza D virus

<400> 13

gcagaagcag aggatatttt tgacgcaatg gcacaagaac aactacttgc tgaacttgag 60

ggatacctca gaggagttaa cccaatgacc aggcaaacga ttatgaagtc tgcaagaggt 120

gggatggata gtgctaagga ggcagcaaaa gcagcgaaga agggagaaat gcaactaaca 180

agtggagaga gcatagtggt gcacatatgc ctgagagcca tgtaccctgg aataaagcca 240

tggtcagaag ccaaaaaaga tcttgataaa gctacagaag gactgagtgg aaaagacagc 300

aaaaatataa gaaaagctct gaggaaggca ggagacctga cagggataaa ggagatgatg 360

atgatgtatg aaatgaggga ggacaaaaaa gcagaaatgg tagagcaaat ctacgatgac 420

ccagaggatt ttacagaaga tgtaaggctt gggaccgttg ctgcctggct tcaatgcaaa 480

aacaaaagga gcgagaaata tcatcacaag atgtcaatgt ctggaagcac tgcacttgcc 540

ttgggagatg cccaaaaggc cggaatggcc atagaaaata tggctagtgt tgtgccaatg 600

aaaaaagagg cccaggcact gcacaaagac gcagaagttt tgattgaact ggcaagaata 660

gcatatgggt caagagcaat ggaagggcac ctgcaaaatg caatggacgg aattggaagc 720

aaagtcagtg gaatggctaa tcttgcccta aaaaggtcag ttcttacttt gttaatgttg 780

gtaatttgtg ggatccccac ttgtgtaaat gctgaaactg tggaagaatt ttgtagaaag 840

aaactaaatc agacggaaga aaaggtttat gtccattgtt tcaatgagga tgatggtcgg 900

gcaatgactt tagctgcttt gatacttgga tgctttagta tgctttacat tttaataaag 960

gcaatactga tgcttttgtt gacaatcata aatggaagac caaatggaaa ttgggatgac 1020

ttgaaacatg ttgtaaaatg tttttcagag actggaagtg agaacttcgc cagggatata 1080

atggtcctgg aatccaggcg agatggggag gagacaagct ccccagagga gggactaggc 1140

cctccattga gtggattcaa tgaaaatggt gtattcatgg aaacattata atcgcgaaaa 1200

aatcctcttg ctactgct 1218

<210> 14

<211> 869

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cDNA from influenza D virus

<400> 14

gcagatagca ggggtgtaca atttcaatat gtctgaaaat aagtcagtga acacaacaaa 60

tatcagagca gcaatctccg aattggcatt gggcgcagcc agctggatgg attcctctgg 120

gttaatgact ttcgagaaaa tgagaaagtc tgctgagaat tcactgagag tcgaacaggt 180

ttatgaaccg agaacttggg aagatgcagt ggctgaaggt agagaaattc taggattcac 240

tactattgct gccttaagaa aaccagagga gactcatgct gttgaattgg ggaagaacat 300

tatctatccc ttaggaggaa accctttcta tctaagccca tgtaccattg acactctgta 360

tgagccaaag ctcataagac aaggagaagt ctttggagta aaatatcgga actgcaattg 420

ctttgtaaaa actgctgaac tattagtgac cgacatggga gaaatcattg tgctcttttg 480

cagaaacact gagaaaccag cttactgcct taagaatttc cgtagaggag atgacccaga 540

gaagtcagta cgaaagatac tcagaatttg gagaagtgga cttgttgttg ccgttgatgc 600

ggaatctaga gatgaaatca gacgatacaa atctggatgt gaaacagatc ccttctggag 660

aagagaaggc gcaactactg gagaggttca ggagttgctt ggtgtcatta ataaggttga 720

aatccaagct gggagtagcg atggtgaact ctttgactaa ccaggatatg agggccgctt 780

tggatgaaat caagtcagtt tcgagaacaa tttcaatgtt aaaagaatgt attcgttctt 840

tagtatgaaa aaaccccttg atatctgct 869

<210> 15

<211> 2364

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cDNA from influenza D virus

<400> 15

agcagaagca gaggatgtca ctactattaa cgctcgcaaa agagtatgca aatctcacaa 60

aggataagaa atcatgcaaa ttgctgtcgc aagggaccgt gtcaagctac accactttta 120

agaaatggac aacatcgaga aaagagaaaa acccatccct tcgaatgaga tgggcaatgg 180

gatctaagtt tccgataatg gctaatagag aaatactcga agaggcaggg atacccgaac 240

aatgggaagg tatagatcta tggagtaaaa aagacgatgt gtctaagtta gggatggtgt 300

tagcgtcacc tgcagcaata acgtattgga atttttgtgg tccaggagtg gataactcta 360

gcgtaattag ggatgtgtat aaagcgaaat ttatgaaaaa agagagatgg agagagacac 420

tatggggtcc tatgaatttc gaactcgtag ggaaacaacg gagagtagta gaaacgcaac 480

ccgttgagat aaaactgaat caaaaagaga taaaggaatt gactatgtgg gtgctattcg 540

aagacgaagc gaatctggct agtaaattta tacaggaaaa ctttagctta gtgttgtcac 600

ttagggaatt gtataagggg aaggcagtga ataaagacgt agcagcattt atgatagcac 660

accaatttag tcccgaaaaa agattcttac ctacattcgg acctattaga cccgaaagaa 720

tggaattgtt gcattgctta gggggggatt tttggaaaat cgaagcggtt accgcaggat 780

cacttaacga ggagcagaaa aaaagagacg ttagggcagt cgctagaaag atatgcctta 840

gagctagcgt tgatctgttt acacctgccg aaaaaattag ggattacata tctagcgtta 900

ctatgagatt cggaacagtc gaaagaacat tcgaagacgt aattaggaat agcgatgata 960

taagcgcaga agtgacacta tgtaaagcag cattaggttg cgaattgggg aagtctatgt 1020

cattcggaaa tcttaacctt agaaaggtta gcggagaagc cgaaactatc gaaaaaacag 1080

tgtattgggg acttaagcct ataaaatata aatgttggag aggcgaagag acattctatt 1140

gcgaacttag aaaagtgaca tgcatgttta gacgatccga agggttagat tgggctaaca 1200

tagggccagg atcacccgaa gagagaaggg aattgctcgc aatggttatg atattttgta 1260

gagacggaag atttttcgaa agcgcaccag tgaatataga cgaatcattt tttagaacta 1320

gacttaacaa agagatacca taccaatacg tactgcttaa atgggttagg caatctaggg 1380

ataacttaga cgcactattg tcaactaggg gactgatacc cgcacatata gggcaattcg 1440

gaaagggaat ggggatagac ggatctagta gtagttctat ggtgtataag ggagtgatgc 1500

tatctaagac acctatcgat atagtcgaat cgaaagagaa acatagattg ttccttaacg 1560

ataacataga ggcaataacc gaaagaggcg caatggttgc gtcaattatg gatcttagcg 1620

aagataatag ggaaactttt aacgatgtga cattcaatca cgttgatcta gccgtactga 1680

aagacgaaaa aactgcgata attaagatat atagatcact agtcgaaaga ataaatactg 1740

acgatgacgg actgccagca ctgataatgg gaaagagata tctcgaattg tatcaattgg 1800

acgaagtgaa agacgccgtg ggactgatac ctaaaagaat gttaggcgca tactcatatc 1860

aggctagaca attgatacaa tcgcaaatta aaaacgatag ttatagtctg ccagagataa 1920

taaaactgtt accattttgt tatagtccac ctaaaaaaat gctattcgac ggaacttttc 1980

actttaaaaa ccaaatgtac gttagaccag ggataaatac taatctgttt agcttttcga 2040

aaaccgataa gtctaagata tacgttaacg gatccgcagt taagataaag ttagtgttag 2100

gcgatgacga aatggatact agtctcgcat tcgttgaggg atttcaggtc tgcgaatacg 2160

atcctagagc accactgata ccaagaagag atttgagact gattgggttc ggaaagaaag 2220

ttagagtttt tgttggtcag ggacaggaga aaaccctggt gaggacgagc tccaaaagag 2280

ccgcctccca tgatgtaagc aaaaacattc gtagaatgcg tctggaagtt tgaagcacat 2340

tgaaaaaatc ctcttgctac tgct 2364

<210> 16

<211> 2330

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cDNA from influenza D virus

<400> 16

agcagaagca gaggatttta taacaatgga aataaaccca tatctactca tgttaaacaa 60

tgatataacg tcaatgatat cattgacata cccatacact ggggcacctc ctatgtcaca 120

tggaacatcg accaaatact caatggagac tgtgtcaaga acttactcct acagtagaac 180

taaaaaagag gtaccttcgg gaatattccc aataaagaga aggaaattct gtaacacaat 240

agaagacaaa gaaaacctgg aaaaaccgaa tggaaatgtt gatataaatt tcatgttatc 300

gttagccgaa atgttagagg aaaaaatggg aaagggtttc tttaaatttt gcgctaacga 360

agccgaagcc gaaatactga aaatgcactt tagcaagttg accgaaggta gacagacata 420

cgattggact agtgaacgaa atatgccagc cgcaaccgca ttgcaattga cagtcgacgc 480

tatacaggaa acacagggga cattcaaagg gactactatg gtcgaatact gtaataagat 540

actcgaaatg atggattggc ctgaagtgaa attcaaaaaa gttagaatga tagtgcaacg 600

acattgggat cctaagacta aaaaagagat taaaatgaaa agtcctacat tgatgattac 660

gaaaatcgga agagaggaat tcataaaaag gatatgcaca atcaatacta tggctaaaga 720

cggagagaga gggaagtaca aaagaagggc aatcgctaca cctggaatgg ggattaggcc 780

attctctaag atagtcgaaa cattagcgca aaagatatgc gaaaggttag ccgaatccgg 840

attgcccgta gggggaaacg aaaaaaaggc taagcttaag actaccgtta gtagtactaa 900

ctctaagttg caggaagggc aatttatggt taacataaca ggcgataact caaaatggaa 960

cgaatgccag caaccggaag catacttagc tatgttggca tacataacga aagactcatc 1020

taaccttatg aaagacctat gtagcgttgc gccaacattg ttttgcaata aatacgttaa 1080

gatgggacag gggtttaggg ctaaaaacaa acgaaaaact aaagagatag tgatacccgc 1140

taagagaatg aaagagagaa aagagttgat gaacgctgaa tggagagacc tattcgaaac 1200

aatcgaacca tacatggacg gagagtgttg tttcttagga ggggggatgt tgatgggaat 1260

gttcaatatg ctatcaaccg tattcggagt tatgacactt aactataggg aagaggcact 1320

agctagacga aattgttatt ggacagggtt gcaatctagc gacgatttcg tactgttttg 1380

catatctaag acatggcctg aaatggaaat gacaatactg aaattcatag ccgtatgcaa 1440

attgatgggg attaacatgt cactcgaaaa atcatacgga tgcttacccg aattgttcga 1500

attcacttca atgtttttta gcggagattt cgtttcgaat atcgcactcg aattgcctgc 1560

attcactacc gcaggaatga acgagggaac cgatttcaca gccgcaatgt ccgttattag 1620

gactaacatg attaataacg gactgtcacc aggaaccgca ttgatggcac ttaggatatg 1680

cttgcaggaa tttagggcta catacagagt gcatccatac gatagcggag tgaaaaacca 1740

tagaatgaaa attattagga aatttatcga aacaatcgaa aacaaagacg gactattgat 1800

tagcgacgga gggaaattga tgaataacat atctagtcta cacatacccg aagagatact 1860

gaaagaggat ctgatggacc catcatatag gaatagggtt tttaacccta gaaacccatt 1920

tacgcaattc gaaaagacag tcgacatatt caaagctagc ggacctatta gggtcgaaga 1980

gaacgaagcc gttgtgtcaa cacactcatt caaaactagg tctaatagga cactactgaa 2040

taccgatatg agagctatgg cactcgaaga gaaaagatac caagtcgtat gcaatatgta 2100

tagatccgta ttcgaatccg cagacgttaa cacacctatc ggatcaatgt cgatgggaga 2160

ggcaattgaa gccaaaatcc ttgaccgggc cagaacccag tttgaaaatg gaatcatagg 2220

gggagaagaa tattctgaaa tcaaaagact aatcgaggac gccaagcgtc aacgactgtc 2280

tgtttaagct ttgcgttgtt taataacaga aaaatcctct tgctactgct 2330

<210> 17

<211> 2195

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cDNA from influenza D virus

<400> 17

agcagaagca ggagatttag aaatgtctag tgtaatcaga gaaatcgcaa agcgattctt 60

ggaacaagca acgataaaca tcgctgaaga agtggtcaga gaatatggag accatgaaag 120

aacaatgata tctgttggag ttcatttcca agcttgctgc cttataagtg atgaatatac 180

cttggaggac gaaactacac ctagatacgt actgttggag ggattgagac ggcaagaggc 240

aatatccaaa cagaataaca tttgttcaac attggggttg gaacccctta gaaacctagc 300

cgatatattc gatagaaaga ctaggagatt cttagagata gggattacga aaagggaatc 360

cgacgaatat tatcaagaga aattcaataa gatagggaac gatatggaca tacatgtgtt 420

tacatacgaa gggaaatatt tttccaataa ccctaacgga ttggaagaca tacaaaaaac 480

taggattttt acattcctat cattcgtttc cgacgaattg agaaaagaga atatgtttac 540

ggaaatgtac gttaccgaag agggagcacc cgaactcgaa atgtataagt ctaagttgtt 600

catagctatg agagacgaat ccgttccctt accctatatt aattacgaac atcttagaac 660

tagatgcgaa acattcaaac ggaatcaggc agaatgcgaa gctaaagtgg cagacgtagc 720

tagcagactg aaaattaagc ttgagcatct cgaagagaat aagcttagac ccttagagat 780

accgaaagag aaagaggcac catatacaca taagtttatg atgaaagacg catggttttt 840

cgctaaacca cacgattccg aaagagcgca accgcaacag atactatacg attttttcga 900

agcagctaat atggggttta tgacaacatc ccctaagcct atattcggaa aacagggatt 960

gatgtatcat agcctatggg ggcaaattaa gagagcaatt aaggataaga gaaacgaact 1020

cgaacctagc gaacagagag actttctttg cggaataggg agagctagca aaaagataca 1080

agaggataaa tggcaagagt ctagggaaga ggaattcaaa caggaagaga ctaagggagc 1140

agctaaaagg gggtttccga catggtttaa cgaagaatgg ttatgggcta tgagggatag 1200

cggagacgga gacaataaga taggcgattg gatacctatg gccgaaatgc caccatgtaa 1260

aaacgaaatg gaggattacg ctaaaaaaat gtgcgaagag ttagagtcta agatacaggg 1320

aactaattgc gctagggaaa tgtcaaaact gatacataca atagggtcat tgcatacaga 1380

gtgtagaaac tttcccggaa aggttaagat agtgccaatt tattgtagag ggacacttag 1440

gggggaatca actgattgcc tattcggaat cgcaattaag ggaaaatccc atcttaacaa 1500

agacgacgga atgtatacag ttgtgacatt cgaattctca actgaggaac ctaatccctc 1560

aaaacacgaa aagtatacgg tattcgaagc aggaacagtg ccagtcgaag ccgtagtgtt 1620

gacacctaag agagagagag tgcttaaaga gaaaaaattg tttttgtatt gtagaacaac 1680

agggatgtca aaactgaaaa acgattggtt ttcgaaatgt agacgatgtc tgataccgac 1740

aatggagaca gtcgaacaga tagtgcttaa ggaatgcgca cttaaggaag agaatagggt 1800

tagcgaaatg cttgagaata agagagcatg gatcgcacac gaaaacggag agaatctgac 1860

tagattggtg tcaactaagc ttaaagacct atgtagaatg ttgatagtga cacaattcta 1920

ttattgtata tataacgata accaattgga ggggttttgt aacgaacaga aaaaattcct 1980

tatgtttttg caggcagata aggattccaa atccgcattt acttttaatc agaaagggtt 2040

atatgaaaaa attgaagagt gtattgtcag caatccatta tgtattttcc tagctgatag 2100

gctgaacaaa ttatttcttg tagccaagtc caatggagct aagtactttg aatgaccaaa 2160

ggccttgtaa tgttaaaaat ctccttgcta ctgct 2195

<210> 18

<211> 2049

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cDNA from influenza D virus

<400> 18

agcagaagca ggagattttc aaagatgttt ttgcttctag caacaattac agcaataact 60

gcttgccaag cagaaagaga actgatatgt atagtgcaaa gagtgaatga aagcttctct 120

cttcactctg ggttcggtgg taacgtatac tctatgaaaa ccgaacctat gacagggttt 180

actaacgtta ctaagggggc tagtgtaatt aaccaaaagg attgggtcgg gttcggagac 240

tctaggaccg atcttactaa cgcacaattt cccgcatcat ctgacgtacc attagcagtc 300

gcaaaaaaat ttagatcgct atctggagca tcacttatgc ttagcgcatt cggcccacca 360

ggaaaggttg actatttgta tcagggatgt ggaaaggaaa aagtgtttta cgaaggagtt 420

aattggtcac ctgaagccgg catcgattgt ttcggatcta attggacaca aactaaaaaa 480

gacttttact ctagaatata cgaagccgct aggggatcga catgcatgac attggttaac 540

tcacttgaca ctaagattag ttcgaaaacc gctacagccg gaactactag ttcatgttca 600

tctagttgga tgaaatcacc attgtggtat gctgaatcta gcgttaaccc aggagctagg 660

ccgcaagcat gcggcactga gcaatccgct acatttacat tgcctacatc attcggaata 720

tataagtgta ataagcatgt agtgcaattg tgttatttcg tatacgaaaa caaaaccgca 780

ttcaatacgt taggttgcgg agactattat cagaattatt acgacggaaa cggaaacctc 840

gtggggggaa tggacaatag agtcgcagca tataggggga tagccggatc aggagttaaa 900

atcgaatgcc ctagcaagat acttaatccc ggcacatact caattaggtc tacacctaaa 960

tttctgttag tgcctaagag gtcatattgt ttcgatacag acggagggta tccgatacag 1020

gtagtgcaat ccgaatggtc agctagtaga agatccgata acgcaaccga agaggcatgc 1080

ttgcagactg agggatgtat ttttattaaa aaaactacac catacgtagg agaagcagac 1140

gataatcatg gcgatatcga aatgagacaa ttgttgtcag ggttagggaa taacgatacc 1200

gtatgcgttt cgcaatctgg gtatactaaa ggcgaaacac cattcgttaa ggattatctg 1260

tcaccaccta aatacggtag atgtcaattg aaaaccgata gcggcagaat acctacattg 1320

cctagcggat tgattatacc gcaagccgga actgactcac ttatgcggac attgacacct 1380

gcaactcgaa tattcggaat agacgattta gtgttcggac tattgttcat agggttcgtt 1440

gcaggaggcg tcgcaggggg gtatttttgg ggtagatcta gcggaggggg agggggagct 1500

agcgttagta gtacacaagc cggattcgat aagataggga aggatataca gcaacttagg 1560

aacgatacta acgcagcaat cgaagggttt aacggtagaa tcgcacatga cgaacaggca 1620

attaagaatc tcgctaaaga gatagaggac gctagagccg aagcactcgt aggcgaattg 1680

gggataatta gatcattgat cgttgcgaat atatctatga atcttaaaga gtcactatac 1740

gaactagcta accaaattac gaaaagagga gggggaatcg cacaagaggc aggacctgga 1800

tgttggtatg ttgatagcga aaattgcgac gctagttgta aagagtatat ttttaacttt 1860

aacggatccg caacagtgcc tacacttagg ccagtcgata ctaacgtagt gattactagt 1920

gatccttatt acttgggctc gaccatagct ctctgtcttt tgggtctgat ggcgattgct 1980

gcttttgttg gtgtgagttg gatctgttgc aagaaataga atcttagaaa aaatctcctt 2040

gctactgct 2049

<210> 19

<211> 1775

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cDNA from influenza D virus

<400> 19

agcagaagca ggagattatt aagcaatatg gactcaacaa aagcccaaac gcctgaagaa 60

caaagagcaa agaatgccaa aaccatcctt gagaacatac agatatatga aaggatgtgt 120

gatctctttg gagttagtga agacgataaa ttgataatag aaaactcaat tagtatcgaa 180

agaatgatta gggtggtgac cgataaaaag tatcaggata agaaactgaa aaacgcaggt 240

tccgatctgg aaaaaatcgc taacgcaggg aaggtgtttt gtagactggt ggagtcaact 300

gccggaaagt gtagcgctag actgggaatg gcacttaagc ctaacgttga ggcagtgttg 360

actgacgtac tgggtaacga actcgatagg gccgcagtgt tgggaaagag aatgggtttt 420

accgctatgt tcaaatctaa tctcgaagag gttctgtatc agagagggaa gaaccaactg 480

aaaaagagaa acgctgcaga gacattcaca ctgtcacagg gtgctagtct tgaggctagg 540

tttagaccaa ttatggagaa acacctaggg gttggaaccg tagtcgctag tattaagaat 600

atactcgcta gcaagaaaaa cggtaactat aggaataaga tggttaggaa acccggaggg 660

aatagggagt catggtcacc ccttgagaga gagattagct ttctgaataa aaaactgttt 720

cccggaccta tgcgacaatt gtgcaaaaaa ttcgaatacc ttaacgatca ggaaaagcaa 780

ttggcattga accttatgct tgacgctagt ctgatactga aaccacaagt gacacataag 840

atgattatgc catggtcaat gtggttagcc gttaagaaat acgctgagat gaataaggga 900

tcaccctcac tcgaagacct agccgcatat tccggcgtga gagcgtttat ggcattcaat 960

accgcatgct atatgtcaaa gtttactatc ggaaagggga tcgtgggaga cgcagagatt 1020

atggaaaacg gaaacgataa gatgcagaca ctagctatgg catgcttcgg actggcatac 1080

gaagataccg gaatagtggc agcaatgata tcccaaccta tgaaaaaacg ttatcaattg 1140

agagttggaa actttaaccc acccgaagag ggaactatta agggaactag cgcagggtat 1200

tttcacaaat gggccgaatt cggaaataga ctgccattca atagtttcgg aactggagaa 1260

tcgaaacaga ttagcaatag cggagtgttc gcagtgcaac gacctagtac tactaacata 1320

cagagactag ccgaattgat ggctaggaat accggagaga ctagcgataa ctttacgcaa 1380

ttggtgcaaa agattaggga acaggttgga acattcgcag accaaaaggc taaccttagg 1440

gaattcacag gggggtatat atacgatata actgacgtta ctaagtctaa ccctaagata 1500

ccccaactcg ggggggattc attctttttc gaatttaccg gatccgacgt acctagaacc 1560

ggagcgaaaa gaagggttgg gggggcagac gacgttactc ccggaactag ccaacctaaa 1620

aaaaggggga gacagggagc cggagcagaa tcaagtatgg acattgaaac agttggtgaa 1680

gattaactct tctttggatg gttctgttgc agtccccagt gggtgttaaa ggtgttggtt 1740

tgtcttattt aacaaaaaat ctccttgcta ctgct 1775

<---

1. Иммуногенная композиция против инфекции дыхательных путей, вызываемой вирусом гриппа D, и инфекции Mannheimia haemolytica, содержащая антиген вируса гриппа D крупного рогатого скота и антиген Mannheimia haemolytica.

2. Иммуногенная композиция по п. 1, отличающаяся тем, что антиген Mannheimia haemolytica выбран из группы из инактивированной бактерии, экстракта белков наружной мембраны и рекомбинантного лейкотоксина и любой их комбинации.

3. Иммуногенная композиция по п. 1 или 2, отличающаяся тем, что антиген вируса гриппа D крупного рогатого скота представляет собой инактивированный вирус.

4. Иммуногенная композиция по п. 1 или 2, отличающаяся тем, что антиген вируса гриппа D крупного рогатого скота представляет собой модифицированный живой вирус.

5. Иммуногенная композиция по п. 4, отличающаяся тем, что антиген модифицированного живого вируса гриппа D крупного рогатого скота представляет собой модифицированный живой вирус, модифицированный путем деоптимизации кодонов.

6. Иммуногенная композиция по п. 4, отличающаяся тем, что антиген модифицированного живого вируса гриппа D крупного рогатого скота содержит по меньшей мере один кодон-деоптимизированный геномный сегмент, имеющий последовательность кДНК, выбранную из группы SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18 и SEQ ID NO:19.

7. Вакцина против респираторного заболевания крупного рогатого скота, вызываемого вирусом гриппа D и Mannheimia haemolytica, содержащая антиген вируса гриппа D крупного рогатого скота и антиген Mannheimia haemolytica и фармацевтически приемлемый наполнитель, стабилизатор, солюбилизатор или разбавитель и необязательно адъювант.

8. Вакцина по п. 7, дополнительно содержащая по меньшей мере один антиген из дополнительного патогена крупного рогатого скота.

9. Вакцина по п. 8, отличающаяся тем, что дополнительный патоген крупного рогатого скота выбран из группы из вируса вирусной диареи крупного рогатого скота (BVDV), респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота (BRSV), герпесвируса крупного рогатого скота (BHV), вируса парагриппа 3 (PI3), Pasteurella multocida, видов Leptospira и Histophilus somni, а также любой их комбинации.

10. Способ лечения респираторного заболевания крупного рогатого скота, вызываемого вирусом гриппа D и Mannheimia haemolytica, включающий введение крупному рогатому скоту иммуногенной композиции по пп. 1-6 или вакцины по пп. 7-9.

11. Способ по п. 10, отличающийся тем, что введение осуществляют перорально, интраназально, интратрахеально или путем инъекции.

12. Применение комбинации антигена вируса гриппа D крупного рогатого скота и антигена Mannheimia haemolytica при лечении респираторного заболевания крупного рогатого скота, вызываемого вирусом гриппа D и Mannheimia haemolytica.

13. Применение антигена вируса гриппа D крупного рогатого скота и антигена Mannheimia haemolytica при производстве лекарственного средства от респираторного заболевания крупного рогатого скота, вызываемого вирусом гриппа D и Mannheimia haemolytica.

14. Композиция, содержащая антиген вируса гриппа D крупного рогатого скота и антиген Mannheimia haemolytica, для применения при лечении, снижении степени или предотвращении респираторного заболевания крупного рогатого скота, вызываемого вирусом гриппа D и Mannheimia haemolytica, у крупного рогатого скота.

15. Применение иммуногенной композиции по пп. 1-6 или вакцины по пп. 7-9 при лечении респираторного заболевания крупного рогатого скота, вызываемого вирусом гриппа D и Mannheimia haemolytica.

16. Применение иммуногенной композиции по пп. 1-6 или вакцины по пп. 7-9 при производстве лекарственного средства от респираторного заболевания крупного рогатого скота, вызываемого вирусом гриппа D и Mannheimia haemolytica.