Композиции, включающие экстракт клюквы крупноплодной и фосфолипиды

Группа изобретения относится к композиции для профилактики или лечения инфекций нижних мочевых путей. Композиция для профилактики или лечения инфекций нижних мочевых путей, включающая: a) экстракт Vaccinium macrocarpon в количествах в пределах от 20% до 50% по массе в расчете на общую массу композиции и b) по меньшей мере один фосфолипид, выбранный из соевого лецитина или подсолнечного лецитина, в количествах в пределах от 50% до 80% по массе в расчете на общую массу композиции. Способ получения композиции для профилактики или лечения инфекций нижних мочевых путей, включающей: a) экстракт Vaccinium macrocarpon в количествах в пределах от 20% до 50% по массе в расчете на общую массу композиции и b) по меньшей мере один фосфолипид, выбранный из соевого лецитина или подсолнечного лецитина, в количествах в пределах от 50% до 80% по массе в расчете на общую массу композиции, где указанный способ включает солюбилизацию или диспергирование экстракта Vaccinium macrocarpon, по меньшей мере одного фосфолипида и необязательно одного или несколько технологических адъювантов, выбранных из водорастворимых или водонерастворимых разбавителей, смазывающих веществ и/или глидантов и поверхностно-активных веществ, в органическом растворителе при температуре в пределах от 30°C до 90°C с получением раствора или дисперсии, с последующей сушкой раствора или дисперсии с получением твердой композиции. Твердая композиция для профилактики или лечения инфекций нижних мочевых путей, получаемая вышеописанным способом. Применение композиции для получения фармацевтических композиций для профилактики или лечения инфекций нижних мочевых путей. Твердый препарат для профилактики или лечения инфекций нижних мочевых путей, включающий композицию в смеси с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми эксципиентами. Вышеописанная композиция эффективна для профилактики или лечения инфекций нижних мочевых путей, введение пациентам вышеописанной композиции приводит к значительному увеличению некоторых метаболитов, полученных из проантоцианидинов Vaccinium macrocarpon и других активных компонентов экстракта, таких как флавонолов, фенольных кислот, в моче, эффективному ингибированию адгезии образования биопленок различными штаммами Candida albicans. 5 н. и 8 з.п. ф-лы, 4 ил., 1 табл., 7 пр.

 

Изобретение относится к фармацевтическим или нутрицевтическим композициям, включающим растительные экстракты, и, в частности, к композициям, полезным для лечения и профилактики бактериальных инфекций мочевых путей.

Предшествующий уровень техники

Сок и экстракты клюквы крупноплодной (Vaccinium macrocarpon Aiton) стали предметом многочисленных клинических испытаний для лечения и профилактики инфекций нижних мочевыводящих путей (Burleigh A.E. et al. Nutr J 2013; 12: 139, Ledda A. et al. Eur Rev Med Pharmacol Sci 2017; 21: 389-393, Jepson RG. et al. Cochrane Database Syst Rev 2012; 10: CD001321). Рецидивирующие инфекции нижних мочевых путей поражают около 50% взрослых женщин (Wang A. et al. Prim Care 2013; 40: 687-706), а также могут поражать мужчин, хотя и с меньшей частотой. У мужчин частота инфекций нижних мочевых путей значительно увеличивается с возрастом из-за структурных и функциональных изменений, которым подвергаются мочевыводящие пути в результате старения. Указанное изменение обычно проявляется как состояние, известное как доброкачественная гиперплазия простаты (Schaeffer AJ. et al. N Engl J Med 2016; 374: 562-571).

Основным возбудителем инфекций нижних мочевыводящих путей является бактерия Escherichia coli, за которой следуют Proteus spp., Staphylococcus saprophyticus, Klebsiella spp. и другие энтеробактерии (Kahlmeter G.J. Antimicrob Chemother 2000; 46: 15-22).

Инфекции нижних мочевых путей классифицируются как рецидивирующие, если происходит не менее трех эпизодов в год или двух эпизодов в течение шести месяцев. Частоту этих эпизодов можно уменьшить путем профилактики с использованием антибиотиков, но длительное лечение антибиотиками увеличивает затраты на здоровье и может вызвать резистентность к эффективности лечения противомикробными препаратами и изменения кишечной бактериальной флоры.

Поэтому определение неантибиотических методов лечения, способных предотвратить возникновение рецидивирующих инфекций нижних мочевых путей, будет представлять большой интерес.

Возможные неантибиотические методы лечения включают пищевые добавки, содержащие экстракты клюквы крупноплодной, которым уделяется большое внимание. Клюква крупноплодная содержит множество органических веществ, включая проантоцианидины (PAC), флавонолы, полифенолы и гидроксикоричные кислоты, которые вместе со своими активными метаболитами обладают как непосредственной, так и опосредованной бактерицидной активностью. Последнее связано с их способностью предотвращать адгезию к слизистой оболочке уротелия, тем самым предотвращая образование биопленок указанными патогенами. Указанная антиадгезивная активность была продемонстрирована, в частности, для проантоцианидинов, основных активных компонентов клюквы крупноплодной. Тесты in vitro и in vivo продемонстрировали, что проантоцианидины ингибируют адгезию P-фимбрий Escherichia coli к уротелиальной слизистой оболочке мочевыводящих путей (Howell AB. et al. N Engl J Med 1998; 339: 1085-1086, Di Martino P. et al. J Urol 2006; 24: 21-27).

Антибактериальная активность некоторых основных метаболитов активных компонентов, присутствующих в экстрактах клюквы крупноплодной, таких как протокатеховая кислота и галловая кислота, в отношении штаммов, ответственных за инфекции нижних мочевых путей, описана, например, в Kakkar, Sahil et al., ISRN pharmacology 2014 (2014), Miklasińska, Maria, et al. Molecules 20.8 (2015): 13536-13549, и в Jayaraman, Premkumar, et al. International journal of biological sciences 6.6 (2010): 556 - Mensah, J.K. et al., Current Science Perspectives 1.2 (2015): 69-76).

Однако данные об эффективности, полученные на сегодняшний день для производных клюквы крупноплодной при лечении и профилактике инфекций мочевыводящих путей, несколько различаются. Частично это связано с использованием экстрактов, которые недостаточно охарактеризованы и воспроизводимы, и имеют слишком низкое содержание активного ингредиента, и, прежде всего, с использованием неподходящих композиций и составов, которые не могут способствовать абсорбции активных ингредиентов после перорального введения, и, кроме того, не позволяют активным метаболитам достигать эффективных концентраций в моче.

Доступность композиций, которые могут способствовать абсорбции активных компонентов клюквы крупноплодной и ее метаболитов после перорального введения и обеспечивать достижение эффективных концентраций в моче, может поэтому представлять собой важный инструмент, который является альтернативой или дополнением к лечению антибиотиками, при лечении и профилактике инфекций мочевывых путей.

Композиции, полученные из комбинации экстрактов растений с природными или синтетическими фосфолипидами, описаны, например, в EP 0209037 (IdB Holding S.p.A.), EP 0275005 (Indena S.p.A.), EP 0283713 (Indena S.p.A.) и WO 2007/118631 (Indena S.p.A.).

WO2010/150051 (Lipoid GmbH) описывает композиции, содержащие активный растительный ингредиент или растительный экстракт, сахар, предпочтительно мальтодекстрин, и фосфолипиды. Указанные композиции получают растворением или диспергированием ингредиентов одновременно или последовательно при комнатной температуре в воде. За этой стадией следует процесс гомогенизации, фильтрации и сушки и, возможно, измельчение до желаемого размера частиц. В частности, в WO2010/150051 заявлено содержание активного растительного ингредиента в диапазоне от 0,5% до 40% по массе, содержание мальтодекстрина в диапазоне от 10% до 90% по массе и содержание фосфолипидов в диапазоне от 0,5% до 30% по массе. В указанном документе описано, что композиции характеризуются высокой стабильностью при транспортировке и хранении и простотой включения в различные лекарственные формы для фармацевтической, пищевой и косметической промышленности. В нем также указано, что композиции характеризуются хорошей растворимостью и смачиваемостью, что гарантирует высокую биодоступность активного растительного ингредиента. Активные растительные ингредиенты, указанные в WO2010/150051, включают экстракт клюквы крупноплодной (Vaccinium macrocarpon). Однако конкретно не описана композиция, содержащая экстракты клюквы крупноплодной. Более того, не указаны данные in vivo, демонстрирующие, что действительно повышается биодоступность активных ингредиентов, содержащихся в композициях, и, в частности, что эффективные концентрации активных метаболитов достигаются в экскретируемой моче после перорального введения, состояние, которое представляет собой необходимое условие для лечения и профилактики мочевых инфекций.

Следовательно, все еще существует потребность в обеспечении композиций на основе клюквы крупноплодной, которые гарантируют измеримые эффективные уровни активных ингредиентов и, в частности, их метаболитов в моче.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к композиции, типично в твердой форме, включающей:

a) экстракт Vaccinium macrocarpon в количествах в пределах от 20% до 50% по массе в расчете на общую массу композиции, и

b) по меньшей мере один фосфолипид в количествах в пределах от 50% до 80% по массе в расчете на общую массу композиции.

Изобретение также относится к способу получения указанной композиции и фармацевтических или нутрицевтических композиций для перорального введения, включающих указанную композицию. Изобретение также относится к композициям, описанным выше, и к соответствующим препаратам для применения для лечения и профилактики инфекций мочевых путей.

Подробное описание изобретения

Неожиданно было обнаружено, что путем комбинирования экстракта клюквы крупноплодной (Vaccinium myrtillus), предпочтительно экстракта, характеризующегося высоким содержанием проантоцианидина (PAC), с высоким процентным содержанием фосфолипида (PL), в частности, посредством описанного ниже способа получения, измеримые эффективные концентрации в моче активных метаболитов активных ингредиентов, содержащихся в экстракте, могут достигаться in vivo. В частности, было обнаружено, что композиции по изобретению можно вводить в меньших количествах, чем экстракт клюквы крупноплодной, имеющий такое же содержание проантоцианидина, но не в комбинации с фосфолипидами, при этом гарантируя достижение эффективных концентраций в моче, и, следовательно, контакта со уротелиальной слизистой оболочкой.

Также неожиданно было обнаружено, что после введения композиций по изобретению основные метаболиты появляются в моче в разное время, в частности, в более позднее время, чем те, которые наблюдаются после введения контрольных композиций, содержащих экстракт “как таковой”, т.е. без фосфолипида. Следовательно, изобретение также относится к композициям, содержащим экстракт клюквы крупноплодной в комбинации с фосфолипидами и экстракт клюквы крупноплодной “как таковой”, т.е. не в комбинации с фосфолипидами.

Композиции в соответствии с изобретением содержат:

a) от 20% до 50% (масс./масс.) экстракта клюквы крупноплодной, предпочтительно характеризующегося содержанием проантоцианидинов в пределах от 15 до 40% (масс./масс.);

b) 50% до 80% (масс./масс.) фосфолипида или смеси фосфолипидов.

Композиции в соответствии с изобретением, необязательно, могут содержать 1% до 30% по массе, в расчете на общую массу композиции, одного или нескольких технологических адъювантов, таких как разбавители, глиданты или смазывающие вещества, которые улучшают физические характеристики композиций и способствуют их включению в препараты.

В предпочтительном аспекте композиции состоят из экстракта клюквы крупноплодной и фосфолипида или смеси фосфолипидов в количествах, указанных выше, соответствующих массовому соотношению между экстрактом и фосфолипидом в диапазоне от 1:1 до 1:4. В другом предпочтительном аспекте композиции состоят из экстракта клюквы крупноплодной, фосфолипида или смеси фосфолипидов и одного или нескольких адъювантов в количествах, указанных выше. Экстракт клюквы крупноплодной и фосфолипиды в указанных соотношениях и условиях могут принимать форму молекулярного комплекса в результате взаимодействия между химическими функциональными группами ингредиентов экстракта и фосфолипидов.

Для целей изобретения выражение “экстракт клюквы крупноплодной” обозначает экстракт, который можно получить в процессе органической экстракции из ягод Vaccinium macrocarpon, предпочтительно из сока, полученного при их измельчении. Затем экстракт можно концентрировать для увеличения содержания проантоцианидинов, которые считаются основными, но не единственными, активными ингредиентами биомассы. Экстракт предпочтительно имеет содержание проантоцианидинов в диапазоне от 15% до 40% (масс./масс.), более предпочтительно от 25% до 35% (масс./масс.), измеренное при помощи DMAC (4-диметиламинноциннамальдегид) колориметрическим методом (R. L. Prior et al., J Sci Food Agric 2010; 90; 1473-1478).

Предпочтительным примером экстракта клюквы с высоким содержанием проантоцианидинов является коммерчески доступный продукт Anthocran^® от Indena S.p.A.

Для целей настоящего изобретения термин “фосфолипид” обозначает лецитины, получаемые из соевых бобов, подсолнечника или другого растительного или животного источника, предпочтительно растительного источника, и предпочтительно лецитины, выбранные из фосфатидилхолина, фосфатидилсерина и фосфатидилэтаноламина, имеющие одинаковые или разные ацильные группы, в основном производные пальмитиновой, стеариновой, олеиновой, линолевой и линоленовой кислот. Термин “смесь”, относящийся к фосфолипидам, обозначает смесь лецитинов, происходящих из одного и того же растительного источника или из разных растительных источников. Выражение “по меньшей мере один фосфолипид” обозначает отдельный фосфолипид или смесь фосфолипидов.

Адъюванты, которые могут содержаться в композициях по изобретению, обычно выбирают из одного или нескольких:

- разбавители, которые являются водорастворимыми или нерастворимыми в воде при комнатной температуре, такие как, например, микрокристаллическая целлюлоза, фосфат кальция, карбонат кальция, маннит, мальтодекстрины, изомальт или их комбинации;

- смазывающие вещества и/или глиданты, такие как диоксид кремния, тальк, стеариновая кислота, стеарат магния или их комбинации;

- поверхностно-активные вещества, такие как сложные эфиры сахарозы, полисорбаты, полиоксиэтиленовые производные касторового масла, D-α-токоферил-полиэтиленгликоль сукцинат (витамин E TPGS) или их комбинации.

Эти и другие эксципиенты описаны в Remington: “The Science and Practice of Pharmacy”, 22nd edition, Pharmaceutical Press, 2013.

В предпочтительном аспекте композиции не содержат сахаров и, в частности, не содержат мальтодекстринов, маннита, изомальта или их комбинаций.

Во втором аспекте изобретение относится к способу получения композиций и к композициям, которые можно получить указанным способом.

В частности, способ включает солюбилизацию или диспергирование экстракта клюквы крупноплодной и по меньшей мере одного фосфолипида и, необязательно, по меньшей мере одного адъюванта в органическом растворителе, подходящем для фармацевтического и/или нутрицевтического применения, предпочтительно выбранном из этилового спирта, этилацетата и ацетона, при температуре от 30°С до 90°С, предпочтительно от 50°С до 90°С, для получения раствора или дисперсии, из которых затем удаляют органический растворитель, с получением твердой композиции в соответствии с изобретением.

В предпочтительном аспекте способ включает одновременную солюбилизацию или диспергирование экстракта клюквы крупноплодной и по меньшей мере одного фосфолипида в органическом растворителе с последующим необязательным добавлением одного или нескольких адъювантов. В соответствии с указанным аспектом, способ включает следующие стадии:

а-1) солюбилизация или диспергирование экстракта и фосфолипида в 10-20 объемах органического растворителя, предпочтительно выбранного из этилового спирта, этилацетата и ацетона, до получения раствора или гомогенной дисперсии;

b-1) нагревание раствора/дисперсии, полученной на стадии а), при температуре в диапазоне от 30°C до 90°C, предпочтительно между 50°C и 90°C, обычно поддерживая систему при перемешивании до получения раствора или гомогенной дисперсии. Нагревание необходимо для максимальной растворимости экстракта и фосфолипида;

c-1) необязательно добавление одного или нескольких адъювантов к раствору или дисперсии стадии b-1), поддерживая перемешивание при тех же температурных условиях, как на стадии b), до получения раствора или гомогенной дисперсии;

d-1) удаление растворителя, предпочтительно путем выпаривания при низком давлении, более предпочтительно от 10 до 60 МПа, из раствора или дисперсии, полученной на стадии b) или c), поддерживая температуру предпочтительно в диапазоне от 50°C до 70°C, более предпочтительно при 70°C, необязательно завершая удаление растворителя сушкой в вакууме в печи с температурой, установленной в диапазоне от 50°C до 90°C, до тех пор, пока не будет получена твердая композиция, которая обычно имеет остаток растворителя ниже пределов, определенных в ICH Guideline Q3C (R6) в отношении остаточных растворителей;

e-1) калибровка твердой композиции, полученной по завершении стадии d), на сите с размером отверстий 0,25-2,0 мм, и необязательно добавление смазывающего вещества и/или глиданта, предпочтительно выбранных из стеариновой кислоты, стеарата магния и диоксида кремния, предпочтительно диоксида кремния.

В другом предпочтительном аспекте способ включает солюбилизацию или диспергирование экстракта в растворителе до получения раствора или дисперсии и добавление по меньшей мере одного фосфолипида и, необязательно, одного или нескольких адъювантов к указанному раствору или дисперсии. В частности, в соответствии с указанным аспектом, способ включает:

а-2) солюбилизацию или диспергирование экстракта клюквы крупноплодной или фосфолипида в органическом растворителе до получения гомогенного раствора или дисперсии;

b-2) добавление экстракта клюквы крупноплодной или фосфолипида к полученному раствору или дисперсии, нагревание и поддержание смеси при перемешивании в экспериментальных условиях, описанных в пункте b);

- осуществление стадий c-1), d-1) и e-1), описанных выше, до завершения способа.

Во избежание сомнений, для целей настоящего изобретения термин “раствор” означает жидкую композицию, которая кажется прозрачной при визуальном осмотре; термин “дисперсия” означает жидкую композицию, которая при визуальном осмотре содержит взвешенные частицы и кажется непрозрачной и мутной, но все же однородной.

Кроме того:

- когда в настоящем описании и формуле изобретения указаны числовые диапазоны, крайние значения диапазонов считаются включенными;

- термин “способ” является синонимом “методу”;

- выражения “по меньшей мере один” и “один или несколько из” эквивалентны и могут использоваться взаимозаменяемо;

В третьем аспекте изобретение относится к твердым препаратам для перорального введения, которые включают композицию по изобретению, смешанную с одним или несколькими фармацевтически или нутрицевтически приемлемыми эксципиентами. Примеры препаратов включают грануляты, таблетки и капсулы, необязательно подходящие для модифицированного высвобождения, которые квалифицированный специалист может получить известными методами и с известными эксципиентами, такими как описанные в Remington: “The Science and Practice of Pharmacy”, 22nd edition, Pharmaceutical Press, 2013. Препараты обычно включают количество композиции в диапазоне от 20% до 50% масс./масс. в расчете на общую массу препарата, чтобы таким образом обеспечить содержание экстракта в диапазоне от 30 до 80 мг на дозу и количество проантоцианидина в пределах от 9 мг до 25 мг на дозу. В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления, препараты предпочтительно включают, помимо композиции в соответствии с изобретением, композицию, которую можно получить описанными выше способами, и экстракт “как таковой”, то есть не в комбинации с фосфолипидами.

В четвертом аспекте изобретение относится к способу профилактики или лечения инфекций мочевых путей, в частности инфекций нижних мочевых путей, который включает введение композиции или препарата, предпочтительно препарата, пациенту, нуждающемуся в этом. Способ предпочтительно включает введение такого количества композиции, или предпочтительно препарата, в соответствии с изобретением, чтобы обеспечить ежедневное потребление проантоцианидинов в диапазоне от 9 до 25 мг.

Приведенные ниже примеры более подробно иллюстрируют изобретение.

Экспериментальная часть

Материалы

Экстракт клюквы крупноплодной (Vaccinium macrocarpon Aiton) является коммерчески доступным от Indena S.p.A. под торговой маркой Anthocran^®.

Соевый лецитин или подсолнечный лецитин получали от Cargill. Мальтодекстрин, используемый в примере 3, получали от Roquette. Диоксид кремния, используемый в примере 3, получали от Grace GmbH & Co. Микрокристаллическую целлюлозу, используемую в примерах 4 и 5, получали от FMC Biopolymer, стеарат магния, используемый в примерах 4 и 5, получали от Peter Greven, дикальций фосфат дигидрат, используемый в примере 5, получали от Budenheim, и поливинилполипирролидон, используемый в примере 5, получали от Ashland.

В примерах 1-3 проценты представляют собой массовые проценты в расчете на общую массу композиции.

Примеры получения

Пример 1 - Композиция (C1), содержащая экстракт клюквы крупноплодной и соевый лецитин

Экстракт клюквы крупноплодной (Vaccinium macrocarpon)	25,0%
Соевый лецитин	75,0%

Композицию получали следующим способом:

1. Экстракт и соевый лецитин диспергировали в 10 объемах, в расчете на общую массу экстракта и лецитина, насыщенного водного раствора этилацетата при перемешивании магнитной мешалкой.

2. Дисперсию, полученную на стадии 1, нагревали до температуры кипения с обратным холодильником (около 70°C) и оставляли в указанных условиях при перемешивании в течение 3 часов.

3. Растворитель удаляли выпариванием при пониженном давлении из дисперсии, полученной на стадии 2, поддерживая температуру при ≤ 70°C.

4. Сушку продукта, полученного на стадии 3, завершали в печи в условиях вакуума при 50°C до получения этилацетатного остатка, соответствующего пределам, определенным в ICH Guideline Q3C(R6).

5. Продукт, полученный на стадии 4, калибровали на сите 60-меш.

Пример 2 - Композиция (C2), содержащая экстракт клюквы крупноплодной и соевый лецитин

Экстракт клюквы крупноплодной (Vaccinium macrocarpon)	33,3%
Соевый лецитин	66,7%

Композицию получали следующим способом:

1. Соевый лецитин суспендировали в 15 объемах технического этанола при перемешивании магнитной мешалкой, нагревая до 50°C до получения дисперсии.

2. К дисперсии, полученной на стадии 1, добавляли экстракт клюквы крупноплодной при перемешивании магнитной мешалкой. Дисперсию нагревали до температуры кипения с обратным холодильником (около 70°C) и оставляли в указанных условиях при перемешивании в течение 2 часов.

3. Из дисперсии, полученной на стадии 3, удаляли растворитель выпариванием при пониженном давлении, поддерживая температуру при ≤ 70°C.

4. Сушку продукта, полученного на стадии 3, завершали в печи в условиях вакуума при 50°C до получения остатка растворителя, соответствующего пределам, определенным в ICH Guideline Q3C(R6).

5. Продукт, полученный на стадии 4, калибровали на сите 20-меш.

Пример 3 - Композиция (C3), содержащая экстракт клюквы крупноплодной, подсолнечный лецитин, мальтодекстрин и диоксид кремния

Экстракт клюквы крупноплодной (Vaccinium macrocarpon)	30,0%
Подсолнечный лецитин	55,0%
Мальтодекстрин	13,0%
Диоксид кремния	2,0%

Композицию получали следующим способом:

1. Экстракт диспергировали в 10 объемах насыщенного водного раствора этилацетата при перемешивании магнитной мешалкой.

2. К дисперсии, полученной на стадии 1, добавляли лецитин при перемешивании магнитной мешалкой.

3. Дисперсию нагревали до температуры кипения с обратным холодильником (около 70°C) и оставляли в указанных условиях при перемешивании в течение 2 часов.

4. К дисперсии, полученной на стадии 3, добавляли мальтодекстрин, поддерживая такие же условия перемешивания и температуры, как описано на стадии 3, в течение 30 минут.

5. Из дисперсии, полученной на стадии 4, удаляли растворитель выпариванием при пониженном давлении, поддерживая температуру при ≤ 70°C.

6. Сушку продукта, полученного на стадии 5, завершали в печи в условиях вакуума при 50°C до получения остатка растворителя соответствующего пределам, определенным в ICH Guideline Q3C(R6).

7. Продукт, полученный на стадии 6, калибровали на сите 20-меш.

8. К продукту, полученному на стадии 7, добавляли диоксид кремния в количестве, равном 2% смеси, смешивая в течение около 2 минут в V-смесителе (MultiGel).

Пример 4 - Препарат (F1) в форме твердых капсул, содержащих композицию (C1)

Композиция (C1)	120,0 мг
Микрокристаллическая целлюлоза	133,5 мг
Диоксид кремния	4,5 мг
Стеарат магния	2,0 мг

Препарат (F1) получали следующим способом:

1. Композицию (C1) смешивали около 5 минут в V-смесителе (MultiGel) с микрокристаллической целлюлозой.

2. К смеси, полученной на стадии 1, добавляли диоксид кремния, и смешивание продолжали около 2 минут.

3. К смеси, полученной на стадии 2, добавляли стеарат магния и смешивание продолжали около 1 минуты.

4. Смесь, полученную на стадии 3, распределяли между твердыми желатиновыми капсулами или капсулами на растительной основе, в количестве 260 мг/капсула.

Пример 5 - Препарат (F2) в форме таблеток, содержащих композицию (C1)

Композиция (C1)	120,0 мг
Дикальций фосфат дигидрат	180,0 мг
Микрокристаллическая целлюлоза	150,0 мг
Поливинилполипирролидон	30,0 мг
Стеарат магния	10,0 мг
Коллоидный диоксид кремния	10,0 мг

Препарат (F1) получали следующим способом:

1. Композицию (C1) смешивали около 10 минут в V-смесителе (MultiGel) с дикальцийфосфатом дигидратом, микрокристаллической целлюлозой и поливинилполипирролидоном.

2. К смеси, полученной на стадии 1, добавляли диоксид кремния и смешивание продолжали около 2 минут.

3. К смеси, полученной на стадии 2, добавляли стеарат магния и смешивание продолжали около 1 минуты.

4. Смесь, полученную на стадии 3, прессовали в роторном таблеточном прессе, снабженном матрицей с круглыми углублениями с диаметром 12 мм.

Анализы In-vivo

Пример 6 - Количественное определение в моче активных ингредиентов и активных метаболитов препарата, содержащего композицию (C1)

Исследование осуществляли путем введения здоровым добровольцам (некурящим женщинам на диете с низким содержанием полифенолов) в течение одной недели по две капсулы в день, каждая из которых содержала 120 мг экстракта клюквы крупноплодной, не связанного с фосфолипидами, содержащего 30% проантоцианидинов, что составляет 36 мг проантоцианидинов [контрольные капсулы (F0)]. После недельного периода отмывки те же добровольцы снова в течение одной недели получали две капсулы препарата (F1), полученные в соответствии с примером 4, каждая из которых содержала 120 мг композиции (C1), что соответствует 30 мг экстракта клюквы крупноплодной, содержащего 30% проантоцианидинов. Мочу собирали перед первым введением как контрольных капсул (F0), так и капсул препарата (F1), а также через 1, 2, 4, 6, 10, 12 и 24 часа после последнего введения. С целью идентификации и количественного определения в моче аналитов, связанных с вводимыми продуктами, собранные образцы мочи разбавляли 1:5 об/об 1% раствором трихлоруксусной кислоты, а затем экстрагировали в твердой фазе на колонке C18 HyperSep^TM. Экстрагированные метаболиты, присутствующие в моче, затем подвергали кислотному и ферментативному гидролизу и затем количественно определяли методом ВЭЖХ-масс-спектрометрии с использованием колонки SB-C18 Zorbax для разделения и трехквадрупольного масс-спектрометра (TSQ Quantum^TM Triple Quadrupole) в качестве детектора.

Неожиданно было обнаружено, что хотя количество экстракта клюквы крупноплодной и, следовательно, проантоцианидинов, вводимое с препаратом (F1), содержащим 120 мг композиции (C1), было в четыре раза меньше, чем количество, вводимое с капсулами, содержащими экстракт “как таковой” [контрольные капсулы (F0)], некоторые метаболиты, образованные как из проантоцианидина, так и из других активных ингредиентов экстракта (флавонолы и фенольные кислоты), присутствовали в большем количестве после введения препарата (F1). В частности, следующие метаболиты были более распространенными, в пересчете на количество введенного экстракта: эпикатехин, катехин-3-O-галлат, мирицетин-3-β-O-галактозид, мирицетин-3-O-глюкозид, кверцетин-3-O-рамнозид, изорамнетин-3-O-глюкозид, кемпферол-3-O-глюкозид, галловая кислота, гиппуровая кислота и протокатеховая кислота.

Гистограммы, демонстрирующие это экспериментальное наблюдение, показаны на прилагаемых Фиг. 1-4, которые показывают площадь под кривой (AUC) четырех основных ингредиентов экстракта клюквы крупноплодной: эпикатехина (Фиг. 1), мирицетин-3-O-глюкозида (Фиг. 2), мирицетин-3-β-O-галактозида (Фиг. 3) и катехин-3-O-галлата (Фиг. 4). Термин “КЛЮКВА” относится к данным, полученным при введении контрольных капсул (F0), тогда как термин “Фитосома” относится к данным, полученным при введении капсул, содержащих композицию (С1).

Указанные данные подтверждают, что композиция по изобретению, в отличие от экстрактов клюквы, не связанных с фосфолипидами, гарантирует, что измеримые эффективные уровни основных метаболитов активных ингредиентов экстракта будут достигаться в моче и, следовательно, находиться в контакте с уротелиальной слизистой оболочкой, которая представляет собой субстрат бактериальных инфекций.

Также неожиданно было обнаружено, что различные метаболиты появляются в моче в разное время, в зависимости от того, вводили ли контрольные препараты (F0), содержащие экстракт клюквы “как таковой”, или препараты (F1) в соответствии с изобретением, как ясно показано на гистограммах ниже, где значения, соответствующие введению контрольных препаратов (F0), обозначены как “КЛЮКВА”, тогда как значения, соответствующие введению препаратов (F1) по изобретению, обозначены как “ФИТОСОМА”.

Эти результаты демонстрируют, что путем комбинирования экстракта “как такового” (т.е. не связанного с фосфолипидами) с композицией в соответствии с изобретением можно гарантировать длительное антибактериальное действие на уротелиальную слизистую оболочку нижних мочевых путей, обеспечивая, таким образом эффективное профилактическое действие против указанных рецидивирующих инфекций.

Пример 7 - Исследование эффективности препарата, содержащего композицию (C1), в отношении ингибирования адгезии и образования биопленок различными штаммами Candida albicans

Эффективность препарата, содержащего композицию (С1), оценивали в испытании ex-vivo, в частности, для оценки эффекта ингибирования клеточной адгезии и образования биопленок на культуре клеток, инокулированной различными штаммами Candida albicans, полученными из вагинальных мазков, а также из эталонного штамма Candida albicans (SC5314). Степень образования биопленок определяли путем окрашивания генциановым фиолетовым и последующего спектрофотометрического считывания при 540 нм.

Здоровые женщины-добровольцы принимали в течение одной недели по 2 капсулы в день, каждая из которых содержала 120 мг экстракта клюквы крупноплодной, не связанного с фосфолипидами, содержащего 30% проантоцианидинов, что составляет 36 мг проантоцианидинов [контрольные капсулы (F0)]. Затем культуру клеток с биопленкой приводили в контакт с мочой указанных добровольцев, и указанную мочу сушили вымораживанием и восстанавливали той же средой, которую использовали для культуры клеток (RPMI-1640). После недельного периода вымывания те же здоровые добровольцы получали препарат (F1) в течение одной недели по две капсулы в день, каждая из которых содержала 120 мг композиции (C1) (что соответствует 30 мг экстракта клюквы крупноплодной, содержащего 30% проантоцианидинов). В обоих случаях мочу собирали через 1, 2, 4, 6, 10, 12 и 24 часа после приема последней капсулы, необходимой для лечения.

В приведенной ниже таблице 1 показаны данные поглощения, относящиеся к спектрофотометрическим показаниям при 540 нм, которые количественно определяют степень присутствия биопленки в культуре клеток. Значения U до (F0) и U до (F1) относятся к показаниям мочи до введения.

Композиция F(0)	SC5314	U до (F0)	(F0) 1ч	(F0) 2ч	(F0) 4ч	(F0) 6ч	(F0) 10ч	(F0) 12ч	(F0) 24ч
Среднее значение	1,4272	1,3319	1,0650	1,2624	1,3717	1,1608	1,0467	0,8644	1,1179
SD	0,2924	0,4094	0,3378	0,3933	0,3261	0,4417	0,2169	0,1253	0,1291
Композиция F1	SC5314	U до (F1)	(F1) 1ч	(F1) 2ч	(F1) 4ч	(F1) 6ч	(F1) 10ч	(F1) 12ч	(F1) 24ч
Среднее значение	1,4272	1,2434	1,2335	0,9742	1,2231	1,2700	1,1579	0,8976	1,1252
SD	0,2924	0,3659	0,2831	0,2387	0,3507	0,4343	0,3153	0,2507	0,2626
SC5314 (C+) = биопленка

Сравнение значений демонстрирует, что ингибирующая активность четко проявляется в образцах мочи, собранных через 1 и 12 часов в случае лечения с использованием 120 мг клюквы крупноплодной [контрольные капсулы (F0)], и в образцах мочи, собранных через 2 и 12 часов у субъектов, получавших капсулы препарата (F1). Неожиданно было обнаружено, что, хотя препарат (F1) содержит количество экстракта клюквы крупноплодной, и следовательно проантоцианидинов, в четыре раза меньше, чем количество, вводимое с капсулами, содержащими экстракт “как таковой” [контрольные капсулы (F0], ингибирующая активность в точках времени, указанных выше, была сопоставимой. Кроме того, неожиданно было обнаружено, что максимальная ингибирующая активность имела место в разное время в случае введения экстракта препарата (F0) (1 и 12 часов, P <0,0001, тест Манна-Уитни) и препарата (F1) (2 и 12 часов, P <0,0001), демонстрируя, что путем комбинирования экстракта клюквы крупноплодной “как такового” (т.е. не связанного с фосфолипидами) с композицией по изобретению более длительное действие, ингибирующее адгезию и образование биопленок, может быть гарантировано против различных штаммов Candida albicans, и, следовательно, более эффективное профилактическое действие против рецидивирующих инфекций мочевых путей.

1. Композиция для профилактики или лечения инфекций нижних мочевых путей, включающая:

a) экстракт Vaccinium macrocarpon в количествах в пределах от 20% до 50% по массе в расчете на общую массу композиции и

b) по меньшей мере один фосфолипид, выбранный из соевого лецитина или подсолнечного лецитина, в количествах в пределах от 50% до 80% по массе в расчете на общую массу композиции.

2. Композиция по п. 1, где экстракт Vaccinium macrocarpon имеет содержание проантоцианидинов в пределах от 15% до 40% по массе в расчете на общую массу экстракта.

3. Композиция по п. 1 или 2, дополнительно включающая один или несколько технологических адъювантов, выбранных из водорастворимых или водонерастворимых разбавителей, смазывающих веществ и/или глидантов и поверхностно-активных веществ.

4. Композиция по п. 3, где разбавитель не является мальтодекстрином, маннитом, изомальтом или их комбинацией.

5. Способ получения композиции для профилактики или лечения инфекций нижних мочевых путей, включающей:

a) экстракт Vaccinium macrocarpon в количествах в пределах от 20% до 50% по массе в расчете на общую массу композиции и

b) по меньшей мере один фосфолипид, выбранный из соевого лецитина или подсолнечного лецитина, в количествах в пределах от 50% до 80% по массе в расчете на общую массу композиции,

где указанный способ включает солюбилизацию или диспергирование экстракта Vaccinium macrocarpon, по меньшей мере одного фосфолипида и необязательно одного или несколько технологических адъювантов, выбранных из водорастворимых или водонерастворимых разбавителей, смазывающих веществ и/или глидантов и поверхностно-активных веществ, в органическом растворителе при температуре в пределах от 30°C до 90°C с получением раствора или дисперсии, с последующей сушкой раствора или дисперсии с получением твердой композиции.

6. Способ по п. 5, где органический растворитель выбран из этилового спирта, этилацетата и ацетона.

7. Способ по п. 5 или 6, включающий одновременную солюбилизацию или диспергирование экстракта Vaccinium macrocarpon и по меньшей мере одного фосфолипида, выбранного из соевого лецитина или подсолнечного лецитина, с последующим необязательным добавлением одного или нескольких адъювантов.

8. Способ по п. 5 или 6, включающий солюбилизацию или диспергирование экстракта Vaccinium macrocarpon или по меньшей мере одного фосфолипида, выбранного из соевого лецитина или подсолнечного лецитина, в органическом растворителе с получением раствора или дисперсии и последующее добавление к указанному раствору или дисперсии по меньшей мере одного фосфолипида или экстракта Vaccinium macrocarpon и необязательно одного или нескольких технологических адъювантов.

9. Способ по любому из пп. 5-8, где один или несколько адъювантов используют в таких количествах, чтобы их масса составляла от 1% до 30% от общей массы композиции.

10. Твердая композиция для профилактики или лечения инфекций нижних мочевых путей, получаемая способом по любому из пп. 5-9.

11. Применение композиции по любому из пп. 1-4 или 10 для получения фармацевтических композиций для профилактики или лечения инфекций нижних мочевых путей.

12. Твердый препарат для профилактики или лечения инфекций нижних мочевых путей, включающий композицию по любому из пп. 1-4 или 10 в смеси с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми эксципиентами.

13. Препарат по п. 12, дополнительно включающий дополнительное количество экстракта Vaccinium macrocarpon в свободной форме, не в смеси с фосфолипидами, выбранными из соевого лецитина или подсолнечного лецитина.