Сконструированные клетки - естественные киллеры и их применение

Авторы патента:

О'ДВАЙЕР, Майкл Имон Питер (IE)

C12N5/0783 - Недифференцированные клетки человека, животных или растений, например клеточные линии; ткани; культивирование или сохранение их; питательные среды для них (размножение растений из тканевых культур A01H 4/00)

A61P35/00 - Противоопухолевые средства

A61K35/15 - Лекарственные препараты, содержащие вещества или продукты реакции неизвестного строения

Владельцы патента RU 2777284:

ОНК ТЕРАПЬЮТИКС ЛИМИТЕД (IE)

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к NK-клетке, экспрессирующей химерный антигенный рецептор (CAR) к CD38. Изобретение эффективно для лечения рака, экспрессирующего CD38. 11 з.п. ф-лы, 26 ил., 18 пр.

Область техники изобретения

[0001] Настоящее изобретение относится к видам терапии, в которых используют модифицированные клетки естественные киллеры (NK-клетки) или линии NK-клеток для лечения рака. Методы лечения и строение клеток также формируют часть настоящего изобретения, в частности, в лечении раковых заболеваний крови.

Уровень техники изобретения

[0002] Клетки естественные киллеры (NK-клетки) представляют собой лимфоциты периферической крови, которые играют определенную роль во врожденном иммунитете. NK-клетки экспрессируют активирующие и ингибирующие рецепторы, которые отвечают за разграничение между здоровыми клетками и клетками, инфицированными вирусом, или трансформированными (раковыми) клетками. В отличие от Т-клеток, NK-клетки проявляют свою антиген-независимую цитотоксичную активность на клетках-мишенях. В результате NK-клетки не требуют примирования с антигеном и могут проявлять повышенную цитотоксичность при отсутствии определенного антигена.

[0003] За последнее время получены химерные антигенные рецепторы (CAR) для целенаправленного введения цитотоксичных Т-клеток в определенные типы клеток и тканей. Большинство CAR обладают доменом распознавания антигена, полученного из антитела, а также трансмембранной и внутриклеточной частью, полученной из иммунного сигнального белка, задействованного в сигнальной трансдукции Т-клетки, таким образом, позволяя активацию цитотоксичной функции Т-клетки при связывании с целевым антигеном, экспрессированным на популяции клеток-мишеней.

[0004] Более подробно, CAR представляют собой рецепторы рекомбинирующего антигена, которые вводят определенную специфичность антигена в иммунные эффекторные клетки, в случае настоящего изобретения, NK-клетки. CAR включает определенную полипептидную последовательность, полученную из экзогенного полинуклеотида, введенного в иммунную эффекторную клетку. Химерные антигенные рецепторы включают лидерную последовательность, целенаправленно воздействующий домен, трансмембранный домен и один или несколько внутриклеточных сигнальных доменов. Соответственно, целенаправленно воздействующий домен выводится из молекулы антитела и включает один или несколько гипервариабельных участков (CDR) от молекулы антитела, которые придают CAR специфичность антигена. Соответственно, целенаправленно воздействующий домен CAR для использования в выведенных NK-клетках по настоящему изобретению представляет собой одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv). scFv включает различные части легкой цепи иммуноглобулина и тяжелой цепи иммуноглобулина, которые разделены посредством гибкого полипептидного линкера. Гибкий полипептидный линкер позволяет обеспечить взаимосвязь тяжелых и легких цепей и восстановление антигенсвязывающего домена иммуноглобулина.

[0005] Существует необходимость альтернативных и предпочтительно улучшенных видов терапии раковых заболеваний с применением NK-CAR-клеток.

[0006] Цель настоящего изобретения обеспечение NK-CAR-клеток и линий NK-CAR-клеток, которые являются более эффективными при лечении раковых заболеваний, чем виды терапии, которые основываются только на NK-клетках. Конкретные варианты осуществления направлены на обеспечение методов лечения определенных раковых заболеваний, например, раковых заболеваний крови, избегая распространенные проблемы с видами терапии на основании клеток, таких как, самонаведение.

Сущность изобретения

[0007] В настоящем изобретении предлагаются клетки-естественные киллеры (NK), экспрессирующие химерные рецепторы антигена (CAR) для CD38 в целях использования в лечении видов рака с экспрессией CD38.

[0008] В настоящем изобретении дополнительно предлагаются композиции, включающие клетки KHYG-1, экспрессирующие химерные рецепторы антигена (CAR) для CD38.

[0009] В настоящем изобретении дополнительно предлагаются методы лечения раковых заболеваний с экспрессией CD38 посредством введения пациенту клеток-естественных киллеров (NK), экспрессирующих химерные антигенные рецепторы (CAR) для CD38.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0010] В настоящем изобретении предлагаются фармацевтические композиции, включающие NK-клетки: как первичные клетки, так и линии клеток, выведенные как минимум с одним химерным антигенным рецептором. Данные композиции являются полезными в лечении рака, как солидных опухолей, так и гематологических злокачественных опухолей (системы крови). Также описываются методы использования и получения. Фармацевтическая композиция, описанная в настоящем документе, включает первичные NK-клетки и линии NK-клеток, такие как KHYG-1, которые экспрессируют химерные антигенные рецепторы. Соответственно, CAR выявляют раковые специфические антигены. Например, раковый специфический антиген может включать CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF17/BCMA, SYND1/CD138, CD229, CD47, Her2/Neu, рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, мезотелин, ЕрСАМ, MUC1, MUC16, антиген Tn, NEU5GC, NeuGcGM3, GD2, CLL-1 или HERV-K. В конкретных вариантах осуществления химерный антигенный рецептор может быть специфическим в отношении CD38. Дополнительно NK-клетки включают как минимум одну другую модификацию, которая приводит к увеличению цитотоксичной активности NK-клетки. Соответственно, модификация включает удаление или понижение экспрессии ингибитора контрольных точек или повышения экспрессии TRAIL или варианта TRAIL с высокой аффинностью к рецептору TRAIL, например, DR4 или DR5. Предпочтительно, чтобы выведенные NK-клетки по настоящему изобретению проявляли повышенную экспрессию лигандов для Е-селектина и/или пониженную экспрессию рецепторов TRAIL, например, DR4, DR5 или обоих. Эти выведенные NK-клетки могут использоваться для лечения лиц, у которых обнаружили рак, посредством адоптивного переноса при внутривенном введении. Эти NK-клетки могут выводиться разнообразными способами, известными на существующем уровне техники, включая вирусную трансдукцию или электроимпульсное открытие клеточных пор полинуклеотидов/векторов, которые экспрессируют CAR и/или молекулы, вызывающие цитотоксичную активность NK-клеток, например, вариантный белок TNF-связанного апоптоз-индуцирующего лиганда (TRAIL), или векторы, которые обеспечивают делецию или понижение уровня экспрессии ингибирующих рецепторов посредством малой интерферирующей РНК, короткой шпилечной РНА или целенаправленно действующего механизма CRISPR/Cas9. NK-клетки могут быть первичными клетками или устойчивыми линиями NK-клеток, которые сохраняют некоторые функции и характеристики первичных NK-клеток. В конкретном варианте осуществления выведенная линия NK-клеток представлена клеткой KHYG-1 или клеткой наподобие KHYG-1, которая обладает отличительными свойствами от общей клетки типа NK-92, например, высоким уровнем экспрессии лиганда для Е-селектина и низкой экспрессией рецепторов TARIL DR4 и DR5. Адоптивный перенос может выполняться с аутологичными (изологичными) или гетерологичными (аллогенными) NK-клетками.

[0011] В настоящем изобретении предлагается фармацевтическая композиция, включающая выведенную клетку-естественного киллера; при этом выведенная клетка естественный киллер демонстрирует высокий уровень экспрессии лиганда для Е-селектина на клеточной поверхности; при этом выведенная естественная клетка-киллер включает химерный антигенный рецептор (CAR). В определенном варианте осуществления под выведенной естественной клеткой-киллером понимается множество выведенных естественных клеток-киллеров, более 25% которых демонстрируют положительную реакцию на связь с антигеном посредством антитела НЕСА-452. В определенном варианте осуществления выведенная естественная клетка-киллер демонстрирует низкий уровень экспрессии рецептора TRAIL на клеточной поверхности, при этом рецептор TRAIL включает TNFRSF10A (DR4) или TNFRSF10B (DR5). В определенном варианте осуществления выведенная клетка-естественный киллер включает первичную выведенную клетку-естественного киллера. В определенном варианте осуществления выведенная клетка-естественный киллер включает трансформированную линию клеток-естественных киллеров. В определенном варианте осуществления трансформированная линия выведенных естественных клеток-киллеров представляет собой линии клеток NK-92 или KHYG-1. В определенном варианте осуществления трансформированная линия выведенных естественных клеток-киллеров представляет собой линии клеток KHYG-1. В определенном варианте осуществления CAR специфические связывается с раковым антигеном. В определенном варианте осуществления раковый специфический антиген включает CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF17/BCMA, SYND1/CD138, CD229, CD47, Her2/Neu, рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, мезотелин, ЕрСАМ, MUC1, MUC16, антиген Tn, NEU5GC, NeuGcGM3, GD2, CLL-1 или HERV-K. Соответственно, раковый специфический антиген включает антиген, специфический для рака крови. Соответственно, антиген, специфический для рака крови, включает CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF17/BCMA, SYND1/CD138, CD229, CD47, CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, или CLL-1. Соответственно, антиген, специфический для рака крови, включает CD38. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 80% идентична указанной в SEQ ID №: 1-6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 1-6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 95% идентична указанной в SEQ ID №: 1-6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 98% идентична указанной в SEQ ID №: 1-6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая идентична указанной в SEQ ID №: 1-6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 1 и 2. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 95% идентична указанной в SEQ ID №: 1 и 2. Соответственно, при этом CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 98% идентична указанной в SEQ ID №: 1 и 2. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая идентична указанной в SEQ ID №: 1 и 2. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 3 и 4. В определенном варианте осуществления CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 95% идентична указанной в SEQ ID №: 3 и 4. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 98% идентична указанной в SEQ ID №: 3 и 4. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая идентична указанной в SEQ ID №: 3 и 4. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 5 и 6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 95% идентична указанной в SEQ ID №: 5 и 6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 98% идентична указанной в SEQ ID №: 5 и 6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая идентична указанной в SEQ ID №: 5 и 6. Соответственно, CAR включает полипептид С08-альфа человека. Соответственно, CAR включает DAP10, DAP12, 2В4 (CD244) или полипептид человека 4-1ВВ. Соответственно, CAR включает полипептид человека 4-1ВВ. Соответственно, CAR включает полипептид человека CD3-дзета. Соответственно, CAR включает в себя целенаправленно воздействующий домен, который получается из антитела, демонстрирующего более низкую аффинность к CD38, чем Даратумумаб. В дополнительном аспекте выведенная клетка-естественный киллер включает второй химерный антигенный рецептор, представляющий собой CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF17/BCMA, SYND1/CD138, CD229, CD47, Her2/Neu, рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, мезотелин, ЕрСАМ, MUC1, MUC16, антиген Tn, NEU5GC, NeuGcGM3, GD2, CLL-1 или HERV-K. В дополнительном аспекте выеденные клетки-естественные киллеры включают мутантный полипетид TNF-связанного апоптоз-индуцирующего лиганда (TRAIL), при этом мутантный полипептид TRAIL приводит к более интенсивной сигнализации или обладает увеличенной аффинностью связывания с лигандом TRAIL. Соответственно, лиганд TRAIL включает TNFRSF10A (DR4) или TNFRSF10B (DR5). Соответственно, мутантный полипептид TRAIL включает мутацию D269H/E195R TRAIL человека. Соответственно, мутантный полипептид TRAIL включает мутацию G131R/N199R/K201H TRAIL человека. Соответственно, CAR или мутантный полипептид TRAIL встраивается в геном выведенной клетки-естественного киллера. Соответственно, выведенная естественная клетка-киллер дополнительно включает делецию или уменьшение активности ингибирующего рецептора контрольной точки. Соответственно, ингибирующий рецептор контрольной точки включает CD85d, CD85j, CD96, CD152, CD159a, CD223, CD279, CD328, SIGLEC9, TIGIT или TIM-3. Соответственно, ингибирующий рецептор контрольной точки включает CD96, CD152 или CD328. Соответственно, ингибирующий рецептор контрольной точки включает CD96. Соответственно, ингибирующий рецептор контрольной точки включает CD152. Соответственно, ингибирующий рецептор контрольной точки включает CD328. Соответственно, выполняется полная или частичная делеция ингибирующего рецептора контрольной точки из генома выведенной клетки-естественного киллера или его разрыв посредством вставки или делеции одного или нескольких нуклеотидов на хромосомном уровне. Соответственно, выведенная естественная клетка-киллер включает малую интерферирующую РНК, которая выявляет ингибирующий рецептор контрольной точки. Соответственно, фармацевтическая композиция дополнительно включает в себя фармацевтически приемлемый носитель, стабилизирующий агент или эксципиент. Соответственно, фармацевтическая композиция формулируется для интраперитонеального введения. Соответственно, фармацевтическая композиция формулируется для интраперитонеального введения. Соответственно, фармацевтическая композиция предназначена для применения в лечении раковых заболеваний. Соответственно, к раковым заболеваниям относятся лейкемия, лимфома или миелома. Соответственно, к раковым заболеваниям относится множественная миелома.

[0012] В настоящем изобретении предлагается способ лечения рака, включающий введение пациенту фармацевтической композиции, включающей в себя выведенную естественную клетку-киллер а; при этом выведенная естественная клетка-киллер демонстрирует высокий уровень экспрессии лиганда для E-селектина на клеточной поверхности; при этом выведенная естественная клетка-киллер включает химерный антигенный рецептор (CAR). В определенном варианте осуществления под выведенной естественной клеткой-киллером понимается множество выведенных естественных клеток-киллеров, более 25% которых демонстрируют положительную реакцию на связь с антигеном посредством антитела НЕСА-452. В определенном варианте осуществления выведенная естественная клетка-киллер демонстрирует низкий уровень экспрессии рецептора TRAIL на клеточной поверхности, при этом рецептор TRAIL включает TNFRSF10A (DR4) или TNFRSF10B (DR5). В определенном варианте осуществления выведенная естественная клетка-киллер включает первичную выведенную естественную клетку-киллера. В определенном варианте осуществления выведенная естественная клетка-киллер включает трансформированную линию естественных клеток-киллеров. В определенном варианте осуществления трансформированная линия выведенных естественных клеток-киллеров представляет собой линии клеток NK-92 или KHYG-1. В определенном варианте осуществления трансформированная линия выведенных естественных клеток-киллеров представляет собой линии клеток KHYG-1. В определенном варианте осуществления CAR специфические связывается с раковым антигеном. В определенном варианте осуществления раковый специфический антиген включает CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF17/BCMA, SYND1/CD138, CD229, CD47, Her2/Neu, рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, мезотелин, ЕрСАМ, MUC1, MUC16, антиген Tn, NEU5GC, NeuGcGM3, GD2, CLL-1 или HERV-K. Соответственно, раковый специфический антиген включает антиген, специфический для рака крови. Соответственно, антиген, специфический для рака крови, включает CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF17/BCMA, SYND1/CD138, CD229, CD47, CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, или CLL. Соответственно, антиген, специфический для рака крови, включает CD38. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 80% идентична указанной в SEQ ID №: 1-6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 1-6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 95% идентична указанной в SEQ ID №: 1-6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 98% идентична указанной в SEQ ID №: 1-6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая идентична указанной в SEQ ID №: 1-6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 1 и 2. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 95% идентична указанной в SEQ ID №: 1 и 2. Соответственно, при этом CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 98% идентична указанной в SEQ ID №: 1 и 2. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая идентична указанной в SEQ ID №: 1 и 2. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 3 и 4. В определенном варианте осуществления CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 95% идентична указанной в SEQ ID №: 3 и 4. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 98% идентична указанной в SEQ ID №: 3 и 4. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая идентична указанной в SEQ ID №: 3 и 4. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 5 и 6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 95% идентична указанной в SEQ ID №: 5 и 6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 98% идентична указанной в SEQ ID №: 5 и 6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая идентична указанной в SEQ ID №: 5 и 6. Соответственно, CAR включает полипептид CDS-альфа. Соответственно, CAR включает DAP10, DAP12, 2В4 (CD244) или полипептид человека 4-1ВВ. Соответственно, CAR включает полипептид человека 4-1ВВ. Соответственно, CAR включает полипептид человека CD3-дзета. Соответственно, CAR включает в себя целенаправленно воздействующий домен, который получается из антитела, демонстрирующего более низкую аффинность к CD38, чем Даратумумаб. В дополнительном аспекте выведенная клетка-естественный киллер включает второй химерный антигенный рецептор, представляющий собой CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF17/BCMA, SYND1/CD138, CD229, CD47, Her2/Neu, рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, мезотелин, ЕрСАМ, MUC1, MUC16, антиген Tn, NEU5GC, NeuGcGM3, GD2, CLL-1 или HERV-K. В дополнительном аспекте выеденные клетки-естественные киллеры включают мутантный полипетид TNF-связанного апоптоз-индуцирующего лиганда (TRAIL), при этом мутантный полипептид TRAIL приводит к более интенсивной сигнализации или обладает увеличенной аффинностью связывания с лигандом TRAIL. Соответственно, лиганд TRAIL включает TNFRSF10A (DR4) или TNFRSF10B (DR5). Соответственно, мутантный полипептид TRAIL включает мутацию D269H/E195R TRAIL человека. Соответственно, мутантный полипептид TRAIL включает мутацию G131R/N199R/K201H TRAIL человека. Соответственно, CAR или мутантный полипептид TRAIL встраивается в геном выведенной естественной клетки-киллера. Соответственно, выведенная естественная клетка-киллер дополнительно включает делецию или уменьшение активности ингибирующего рецептора контрольной точки. Соответственно, ингибирующий рецептор контрольной точки включает CD85d, CD85j, CD96, CD152, CD159a, CD223, CD279, CD328, SIGLEC9, TIGIT или TIM-3. Соответственно, ингибирующий рецептор контрольной точки включает CD96, CD152 или CD328. Соответственно, ингибирующий рецептор контрольной точки включает CD96. Соответственно, ингибирующий рецептор контрольной точки включает CD152. Соответственно, ингибирующий рецептор контрольной точки включает CD328. Соответственно, выполняется полная или частичная делеция ингибирующего рецептора контрольной точки из генома выведенной естественной клетки-киллера или его разрыв посредством вставки или делеции одного или нескольких нуклеотидов на хромосомном уровне. Соответственно, выведенная естественная клетка-киллер включает малую интерферирующую РНК, которая выявляет ингибирующий рецептор контрольной точки. Соответственно, ингибирующий рецептор контрольной точки подвергается делеции из генома выведенных естественных клеток-киллеров. Соответственно, фармацевтическая композиция включает в себя фармацевтически приемлемый носитель, стабилизирующий агент или эксципиент. Соответственно, фармацевтическая композиция формулируется для внутривенного введения. Соответственно, фармацевтическая композиция формулируется для интраперитонеального введения. Соответственно, к раковым заболеваниям относятся лейкемия, лимфома или миелома. Соответственно, к раковым заболеваниям относится множественная миелома. Соответственно, фармацевтическая композиция вводится до, во время или после введения ингибитора протеасом. Соответственно, фармацевтическая композиция вводится до, во время или после курса лечения с периодическим приемом циклофосфамида в малых дозах.

[0013] В настоящем изобретении предлагается способ получения фармацевтической композиции, включающей в себя выведенную естественную клетку-киллера; при этом выведенная естественная клетка-киллер демонстрирует высокий уровень экспрессии лиганда для Е-селектина на клеточной поверхности; при этом выведенная естественная клетка-киллер включает химерный антигенный рецептор (CAR); при этом способ включает выдерживание естественной клетки-киллера с полинуклеотидом, кодирующим CAR. Соответственно, полинуклеотид включает вирусный вектор. Соответственно, вирусный вектор представляет собой лентивирус. Соответственно, вирусный вектор представляет собой ретровирус. Соответственно, полинуклеотид включает мРНК. Соответственно, полинуклеотид встраивается в геном выведенной естественной клетки-киллера. Соответственно, выеденная естественная клетка-киллер подвергается химической обработке для увеличения ее фукозилирования. Соответственно, под выведенной естественной клеткой-киллером понимается множество выведенных естественных клеток-киллеров, более 25% которых демонстрируют положительную реакцию на связь с антигеном посредством антитела НЕСА-452. Соответственно, выведенная естественная клетка-киллер демонстрирует низкий уровень экспрессии рецептора TRAIL на клеточной поверхности, при этом рецептор TRAIL включает TNFRSF10A (DR4) или TNFRSF10B (DR5). Соответственно, выведенная естественная клетка-киллер включает в себя первичную естественную клетку-киллера. Соответственно, выведенная естественная клетка-киллер включает трансформированную линию первичной естественной клетки-киллера. Соответственно, трансформированная линия естественных клеток-киллеров представляет собой линии клеток NK-92 или KHYG-1. Соответственно, трансформированная линия естественных клеток-киллеров представляет собой линии клеток KHYG-1. Соответственно, CAR специфически связывается с раковым антигеном. Соответственно, раковый специфический антиген включает CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF17/ВСМА, SYND1/CD138, CD229, CD47, Her2/Neu, рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, мезотелин, ЕрСАМ, MUC1, MUC16, антиген Tn, NEU5GC, NeuGcGM3, GD2, CLL-1 или HERV-K. Соответственно, раковый специфический антиген включает антиген, специфический для рака крови. Соответственно, антиген, специфический для рака крови, включает CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF17/ВСМА, SYND1/CD138, CD229, CD47, CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, или CLL-1. Соответственно, антиген, специфический для рака крови, включает CD38. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 80% идентична указанной в SEQ ID №: 1-6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 1-6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 95% идентична указанной в SEQ ID №: 1-6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 98% идентична указанной в SEQ ID №: 1-6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая идентична указанной в SEQ ID №: 1-6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 1 и 2. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 95% идентична указанной в SEQ ID №: 1 и 2. Соответственно, при этом CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 98% идентична указанной в SEQ ID №: 1 и 2. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая идентична указанной в SEQ ID №: 1 и 2. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 3 и 4. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 95% идентична указанной в SEQ ID №: 3 и 4. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 98% идентична указанной в SEQ ID №: 3 и 4. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая идентична указанной в SEQ ID №: 3 и 4. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 5 и 6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 95% идентична указанной в SEQ ID №: 5 и 6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 98% идентична указанной в SEQ ID №: 5 и 6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая идентична указанной в SEQ ID №: 5 и 6. Соответственно, CAR включает полипептид CD8-альфа человека. Соответственно, CAR включает DAP10, DAP12, 2В4 (CD244) или полипептид человека 4-1ВВ. Соответственно, CAR включает полипептид человека 4-1ВВ. Соответственно, CAR включает полипептид человека CD3-дзета. Соответственно, CAR включает в себя целенаправленно воздействующий домен, который получается из антитела, демонстрирующего более низкую аффинность к CD38, чем Даратумумаб. В дополнительном аспекте выведенная естественная клетка-киллер включает второй химерный антигенный рецептор, представляющий собой CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF17/BCMA, SYND1/CD138, CD229, CD47, Her2/Neu, рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, мезотелин, ЕрСАМ, MUC1, MUC16, антиген Tn, NEU5GC, NeuGcGM3, GD2, CLL-1 или HERV-K. В дополнительном аспекте выеденные естественные клетки-киллеры включают мутантный полипетид TNF-связанного апоптоз-индуцирующего лиганда (TRAIL), при этом мутантный полипептид TRAIL приводит к более интенсивной сигнализации или обладает увеличенной аффинностью связывания с лигандом TRAIL. Соответственно, лиганд TRAIL включает TNFRSF10A (DR4) или TNFRSF10B (DR5). Соответственно, мутантный полипептид TRAIL включает мутацию D269H/E195R TRAIL человека. Соответственно, мутантный полипептид TRAIL включает мутацию G131R/N199R/K201H TRAIL человека. Соответственно, CAR или мутантный полинуклеотид TRAIL встраивается в геном выведенной естественной клетки-киллера. Соответственно, способ дополнительно включает выдерживание выведенной естественной клетки-киллера с полинуклеотидом, обеспечивающим делецию или снижение активности ингибирующего рецептора контрольной точки. Соответственно, ингибирующий рецептор контрольной точки включает CD85d, CD85j, CD96, CD152, CD159a, CD223, CD279, CD328, SIGLEC9, TIGIT или TIM-3. Соответственно, ингибирующий рецептор контрольной точки включает CD96, CD152 или CD328. Соответственно, ингибирующий рецептор контрольной точки включает CD96. Соответственно, ингибирующий рецептор контрольной точки включает CD152. Соответственно, ингибирующий рецептор контрольной точки включает CD328. Соответственно, выполняется полная или частичная делеция ингибирующего рецептора контрольной точки из генома выведенной естественной клетки-киллера или его разрыв посредством вставки или делеции одного или нескольких нуклеотидов на хромосомном уровне. Соответственно, выведенная естественная клетка-киллер включает малую интерферирующую РНК, которая выявляет ингибирующий рецептор контрольной точки. Соответственно, способ дополнительно включает смешивание выведенных естественных клеток-киллеров с фармацевтически приемлемым носителем, стабилизирующим агентом или эксципиентом.

[0014] В определенном аспекте, описанном в настоящем документе, предлагается фармацевтическая композиция, включающая выведенную естественную клетку-киллера; при этом выведенная естественная клетка-киллер демонстрирует высокий уровень протеина FUT6 или FUT7; при этом выведенная естественная клетка-киллер включает химерный антигенный рецептор (CAR). Соответственно, выведенная естественная клетка- киллер включает экзогенный полинуклеотид, кодирующий протеин FUT6 или FUT7. Соответственно, CAR специфические связывается с раковым антигеном. Соответственно, раковый специфический антиген включает CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF 17/ВСМА, SYND1/CD138, CD229, CD47, Her2/Neu, рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, мезотелин, ЕрСАМ, MUC1, MUC16, антиген Tn, NEU5GC, NeuGcGM3, GD2, CLL-1 или HERV-K. Соответственно, раковый специфический антиген включает антиген, специфический для рака крови. Соответственно, антиген, специфический для рака крови, включает CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF17/ВСМА, SYND1/CD138, CD229, CD47, CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, или CLL-1. Соответственно, антиген, специфический для рака крови, включает CD38. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 80% идентична указанной в SEQ ID №: 1-6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 1-6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 95% идентична указанной в SEQ ID №: 1-6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 98% идентична указанной в SEQ ID №: 1-6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая идентична указанной в SEQ ID №: 1-6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 1 и 2. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 95% идентична указанной в SEQ ID №: 1 и 2. Соответственно, при этом CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 98% идентична указанной в SEQ ID №: 1 и 2. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая идентична указанной в SEQ ID №: 1 и 2. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 3 и 4. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 95% идентична указанной в SEQ ID №: 3 и 4. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 98% идентична указанной в SEQ ID №: 3 и 4. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая идентична указанной в SEQ ID №: 3 и 4. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 5 и 6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 95% идентична указанной в SEQ ID №: 5 и 6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 98% идентична указанной в SEQ ID №: 5 и 6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая идентична указанной в SEQ ID №: 5 и 6. Соответственно, CAR включает полипептид CD8-альфа человека. Соответственно, CAR включает внутриклеточный домен, полученный из DAP10, DAP12, 2В4 (CD244) или полипептида человека 4-1 ВВ. Соответственно, CAR включает внутриклеточный домен, полученный из полипептида человека 4-1ВВ. Соответственно, CAR включает внутриклеточный домен, полученный из полипептида человека CD3-дзета. Соответственно, CAR включает в себя целенаправленно воздействующий домен, который получается из антитела, демонстрирующего более низкую аффинность к CD38, чем Даратумумаб. В дополнительном аспекте выведенная естественная клетка-киллер включает второй химерный антигенный рецептор, представляющий собой CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF17/BCMA, SYND1/CD138, CD229, CD47, Her2/Neu, рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, мезотелин, ЕрСАМ, MUC1, MUC16, антиген Tn, NEU5GC, NeuGcGM3, GD2, CLL-1 или HERV-K.

[0015] В определенном аспекте, представленном в настоящем документе, приводится способ лечения рака, включающий введение пациенту фармацевтической композиции, включающей в себя выведенную естественную клетку-киллера; при этом выведенная клетка-естественная киллер демонстрирует высокий уровень экспрессии протеина FUT6 или FUT7; при этом выведенная естественный клетка-киллер включает химерный антигенный рецептор (CAR). Соответственно, выведенная естественная клетка-киллер включает экзогенный полинуклеотид, кодирующий протеин FUT6 или FUT7. Соответственно, CAR специфические связывается с раковым антигеном. Соответственно, раковый специфический антиген включает CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF17/BCMA, SYND1/CD138, CD229, CD47, Her2/Neu, рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, мезотелин, ЕрСАМ, MUC1, MUC16, антиген Tn, NEU5GC, NeuGcGM3, GD2, CLL-1 или HERV-K. Соответственно, раковый специфический антиген включает антиген, специфический для рака крови. Соответственно, антиген, специфический для рака крови, включает CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF17/BCMA, SYND1/CD138, CD229, CD47, CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, или CLL-1. Соответственно, антиген, специфический для рака крови, включает CD38. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 80% идентична указанной в SEQ ID №: 1-6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 1-6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 95% идентична указанной в SEQ ID №: 1-6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 98% идентична указанной в SEQ ID №: 1-6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая идентична указанной в SEQ ID №: 1-6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 1 и 2. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 95% идентична указанной в SEQ ID №: 1 и 2. Соответственно, при этом CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 98% идентична указанной в SEQ ID №: 1 и 2. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая идентична указанной в SEQ ID №: 1 и 2. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 3 и 4. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 95% идентична указанной в SEQ ID №: 3 и 4. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 98% идентична указанной в SEQ ID №: 3 и 4. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая идентична указанной в SEQ ID №: 3 и 4. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 5 и 6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 95% идентична указанной в SEQ ID №: 5 и 6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 98% идентична указанной в SEQ ID №: 5 и 6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая идентична указанной в SEQ ID №: 5 и 6. Соответственно, CAR включает полипептид CDS-альфа. Соответственно, CAR включает DAP10, DAP12, 2В4 (CD244) или полипептид человека 4-1ВВ. Соответственно, CAR включает полипептид человека 4-1ВВ. Соответственно, CAR включает полипептид человека CD3-дзета. Соответственно, CAR включает в себя целенаправленно воздействующий домен, который получается из антитела, демонстрирующего более низкую аффинность к CD38, чем Даратумумаб. В дополнительном аспекте выведенная естественная клетка-киллер включает второй химерный антигенный рецептор, представляющий собой CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF17/BCMA, SYND1/CD138, CD229, CD47, Her2/Neu, рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, мезотелин, ЕрСАМ, MUC1, MUC16, антиген Tn, NEU5GC, NeuGcGM3, GD2, CLL-1 или HERV-K.

[0016] Предпочтительно, чтобы NK-клетки с экспрессией CD38-CAR имели пониженную аффинность к нормальным (незлокачественным) клеткам с экспрессией CD38 в сравнении с их аффинностью к раковым клеткам с экспрессией CD38. Это может произойти, например, из-за того, что раковые клетки экспрессируют более высокий уровень CD38 чем нормальные клетки и/или из-за того, что CD38-CAR обладают увеличенной аффинностью к определенной форме CD38, экспрессируемого на раковых клетках, и/или пониженную аффинность к определенной форме CD38, экспрессируемого на нормальных клетках. Предпочтительно, чтобы повышение аффинности NK-клетки с экспрессией CD38-CAR к раковой клетке составляло как минимум 10%, 20%, 50% и более предпочтительно 100% в сравнении с аффинностью NK-клетки с экспрессией CD38-CAR к нормальной клетке. Предпочтительно, чтобы понижение аффинности NK-клетки с экспрессией CD38-CAR к нормальной клетке составляло как минимум 10%, 20%, 50% и более предпочтительно 100% в сравнении с аффинностью NK-клетки с экспрессией CD38-CAR к раковой клетке. Предпочтительно, чтобы повышение аффинности NK-клетки с экспрессией CD38-CAR к раковой клетке было как минимум в 1,5, 2, 5, 100 и более предпочтительно 100 раз больше в сравнении с аффинностью NK-клетки с экспрессией CD38-CAR к нормальной клетке. Предпочтительно, чтобы понижение аффинности NK-клетки с экспрессией CD38-CAR к нормальной клетке было как минимум в 1,5, 2, 5, 100 и более предпочтительно 100 раз меньше в сравнении с аффинностью NK-клетки с экспрессией CD38-CAR к раковой клетке. Предпочтительно, чтобы NK-клетки с экспрессией CD38-CAR обладали низкой аффинностью к нормальным клеткам с экспрессией CD38; при этом «низкая аффинность» определяется как наличие достаточно высокой аффинности для закрепления цитотоксической реакции на раковые клетки-мишени с увеличенной экспрессией (в отношении нормальных клеток) CD38 (например, клетки миеломной болезни), но достаточно низкой для избежания закрепления цитотоксической реакции на нормальные клетки с экспрессией CD38.

[0017] В определенном аспекте, представленном в настоящем документе, предлагается способ получения фармацевтической композиции, включающей себя выведенную естественную клетку-киллера; при этом выведенная естественная клетка-киллер демонстрирует высокий уровень экспрессии протеина FUT6 или FUT7; при этом выведенная естественная клетка-киллер включает химерный антигенный рецептор (CAR); при этом способ включает выдерживание естественной клетки-киллера с полинуклеотидом, кодирующим CAR. Соответственно, выведенная естественная клетка-киллер включает экзогенный полинуклеотид, кодирующий протеин FUT6 или FUT7. Соответственно, CAR специфические связывается с раковым антигеном. Соответственно, раковый специфический антиген включает CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF17/BCMA, SYND1/CD138, CD229, CD47, Her2/Neu, рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, мезотелин, ЕрСАМ, MUC1, MUC16, антиген Tn, NEU5GC, NeuGcGM3, GD2, CLL-1 или HERV-K. Соответственно, раковый специфический антиген включает антиген, специфический для рака крови. Соответственно, антиген, специфический для рака крови, включает CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF17/BCMA, SYND1/CD138, CD229, CD47, CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, или CLL-1. Соответственно, антиген, специфический для рака крови, включает CD38. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 80% идентична указанной в SEQ ID №: 1-6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 1-6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 95% идентична указанной в SEQ ID №: 1-6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 98% идентична указанной в SEQ ID №: 1-6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая идентична указанной в SEQ ID №: 1-6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 1 и 2. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 95% идентична указанной в SEQ ID №: 1 и 2. Соответственно, при этом CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 98% идентична указанной в SEQ ID №: 1 и 2. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая идентична указанной в SEQ ID №: 1 и 2. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 3 и 4. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 95% идентична указанной в SEQ ID №: 3 и 4. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 98% идентична указанной в SEQ ID №: 3 и 4. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая идентична указанной в SEQ ID №: 3 и 4. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 5 и 6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 95% идентична указанной в SEQ ID №: 5 и 6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая как минимум на 98% идентична указанной в SEQ ID №: 5 и 6. Соответственно, CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно действующего домена, которая идентична указанной в SEQ ID №: 5 и 6. Соответственно, CAR включает полипептид CD8-альфа человека. Соответственно, CAR включает DAP10, DAP12, 2В4 (CD244) или полипептид человека 4-1 ВВ. Соответственно, CAR включает полипептид человека 4-1ВВ. Соответственно, CAR включает полипептид человека CD3-дзета. Соответственно, CAR включает в себя целенаправленно воздействующий домен, который получается из антитела, демонстрирующего более низкую аффинность к CD38, чем Даратумумаб. В дополнительном аспекте выведенная клетка-естественный киллер включает второй химерный антигенный рецептор, представляющий собой CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF17/ВСМА, SYND1/CD138, CD229, CD47, Her2/Neu, рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, мезотелин, ЕрСАМ, MUC1, MUC16, антиген Tn, NEU5GC, NeuGcGM3, GD2, CLL-1 или HERV-K.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

[0018] На ФИГУРЕ 1А представлено неограничивающее схематическое изображение химерного антигенного рецептора по настоящему изобретению. Данная фигура выполнена не в масштабе.

[0019] На ФИГУРЕ 1В представлено неограничивающее схематическое изображение целенаправленно воздействующего домена химерного антигенного рецептора по настоящему изобретению. Данная фигура выполнена не в масштабе.

[0020] На ФИГУРАХ 2А-В показано связывание антитела НЕСА-452 с клетками KHYG-1 (А) и NK-92 (В) в соответствии с анализом посредством проточной цитометрии.

[0021] На ФИГУРЕ 3 показана миграция клеток KHYG-1 по градиенту SDF-1 в сравнении с клетками NK-92.

[0022] На ФИГУРАХ 4А-В приведено изображение отдельного кадра из видеозаписи наблюдения за миграцией клеток KHYG-1 (А) и NK-92 (В) в проточной ячейке. Клетки без движения или мигрирующие клетки отмечены звездочкой.

[0023] На ФИГУРЕ 5 представлена структура «руководящей» РНК (экспрессирующий вектор), используемая для выявления делеции CTLA4.

[0024] На ФИГУРЕ 6 показаны полосы после электрофореза в геле для первичной и мутировавшей ДНК LIR2 перед и после трансфекции с «руководящей» ДНК CPJSPR/Cas9;

[0025] На ФИГУРЕ 7 показаны полосы после электрофореза в геле для первичной и мутировавшей ДНК CTLA4 перед и после трансфекции с «руководящей» ДНК CRISPR/Cas9;

[0026] На ФИГУРАХ 8А-В показан нокдаун CD96 в клетках KHYG-1 с использованием малой интерферирующей РНК в соответствии с анализом посредством проточной цитометрии. Показаны два независимых эксперимента (А и В).

[0027] На ФИГУРЕ 9 представлено повышенное уничтожения клетками KHYG-1 с уменьшением CD96 на различных соотношениях эффектора с мишенью.

[0028] На ФИГУРЕ 10 показан нокдаун CD328 в клетках KHYG-1 с использованием малой интерферирующей РНК в соответствии с анализом посредством проточной цитометрии.

[0029] На ФИГУРЕ 11 представлено повышенное уничтожение клетками KHYG-1 с уменьшением CD328 на различных соотношениях эффектора с мишенью.

[0030] На ФИГУРЕ 12 показано, что клетки KHYG-1 демонстрируют низкую экспрессию или отсутствие экспрессии TRAIL в соответствии с анализом посредством проточной цитометрии.

[0031] На ФИГУРЕ 13 представлена повышенная экспрессия TRAIL на клеточной поверхности в клетках, трансфицированных с помощью TRAIL дикого типа в соответствии с анализом посредством проточной цитометрии.

[0032] На ФИГУРЕ 14 представлена повышенная экспрессия 107а на клеточной поверхности в клетках, трансфицированных с помощью TRAIL дикого типа в соответствии с анализом посредством проточной цитометрии.

[0033] На ФИГУРЕ 15 представлена жизнеспособность клеток KHYG-1, трансфицированных с помощью TRAIL дикого типа.

[0034] На ФИГУРЕ 16 представлена экспрессия рецепторов TRAIL на различных линиях NK-клеток; KHYG1 (четыре верхние) и NK-92 (четыре нижние).

[0035] На ФИГУРЕ 17 представлено воздействие, которое оказывают клетки KHYG-1 с экспрессией TRAIL дикого типа или варианта TRAIL на апоптоз клеток K56.

[0036] На ФИГУРЕ 18 представлено воздействие, которое оказывают клетки KHYG-1 с экспрессией TRAIL дикого типа или варианта TRAIL на апоптоз клеток RPMI8226.

[0037] На ФИГУРЕ 19 представлено воздействие, которое оказывают клетки KHYG-1 с экспрессией TRAIL дикого типа или варианта TRAIL на апоптоз клеток MM1.S.

[0038] На ФИГУРЕ 20 показано два графика FACS экспрессии DR5 в клетках RPMI8226 и клетках MM1.S, соответственно; кроме того, показано воздействие обработки препаратом Бортезомиб на экспрессию DR5.

[0039] На ФИГУРЕ 21 показаны два графика FACS апоптоза в клетках MM1.S, прошедших предварительную обработку/непрошедших обработку препаратом Бортезомиб, культивированных с клетками KHYG-1, с вариантом (две нижние)/без (две средние) варианта TRAIL.

[0040] На ФИГУРЕ 22 показано воздействие лечения линии множественной миеломы UM9 различными CAR NK CD38 с низкой аффинностью.

[0041] На ФИГУРАХ 23 и 24 показано воздействие лечения первичных клеток множественной миеломы различными CAR NK CD38 с низкой аффинностью.

[0042] На ФИГУРАХ 25 и 26 показаны разновидности клеток в диапазоне отображения FACS в соответствии с их экспрессией CD38 и CD138 с указанием того, что CAR CD38 с низкой аффинностью эффективно выявляют раковые клетки, однако не выявляют клетки, не являющиеся раковыми.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

Некоторые определения

[0043] Если не указано иное, все технические термины, используемые в настоящем документе, имеют общеупотребительное значение среди специалистов в данной области техники, к которым относится настоящее изобретение. Если по контексту явно не обозначено иное, под формой единственного числа, используемой в настоящем описании и прилагаемых пунктах, подразумеваются ссылки на множественное число. Если не указано иное, под «или» подразумевается «и/или».

[0044] Термин «примерно», используемый в настоящем документе, означает объем, близкий к указанному, например, на 10%, 5% или 1%.

[0045] Термины «лицо», «субъект» и «пациент», используемые в настоящем документе, являются взаимозаменяемыми и означают людей с диагнозом или подозрением на заболевание раком или другое новообразование.

[0046] В настоящем документе, если не указано иное, упоминания о NK-клетке или NK-клетках относится также к линиям NK-клеток и первичным NK-клеткам.

[0047] Термин «линия NK-клеток», используемый в настоящем документе, относится к любой трансформированной или имортализованной линии клеток, сохраняющей одно или несколько свойств клеток-естественных киллеров. Например, в определенных вариантах осуществления одним или несколькими сохраненными свойствами клеток-естественных киллеров являются экспрессия CD 56, экспрессия иммуноглобулиноподобного рецептора клетки-киллера (KIR) или антиген-независимая цитотоксичность в отношении линии клеток-мишеней, таких как клетки K562. Стандартными линиями NK-клеток являются, например, линии клеток NK-92 или KHYG-1.

Естественные клетки-киллеры

[0048] Для выведенных естественных клеток-киллеров требуется всего одна или несколько манипуляций, отличающих их от невыведенных естественных клеток-киллеров. Соответственно, вывод клетки-естественного киллера производится таким образом, что она включает полинуклеотид, кодирующий один или несколько химерных антигенных рецепторов, вариант TRAIL, белок FUT6 или FUT 7, а также имеет сниженную экспрессию ингибитора контрольных точек, или вовсе не имеет ее. Выведенные клетки-естественные киллеры (NK-клетки) по настоящему изобретению могут быть получены от любой популяции NK-клеток, включая первичные клетки или устойчивые линии клеток. Соответственно, NK-клетка представляет собой человеческую NK-клетку. Первичные клетки-естественные киллеры у людей экспрессируют маркер клеточной поверхности CD56, и в определенных вариантах осуществления выведенные клетки-естественные киллеры можно получить из CD56-положительных клеток, в соответствии с определением, в качестве неограничивающего примера, путем проточной цитометрии. Соответственно, клетку-естественного киллера можно получить из аутологичного источника (аналогичный генетический фон исходной клетки и реципиента) или из гетерологичного источника (отличный генетический фон исходной клетки и реципиента). Соответственно, NK-клетка изолируется от периферической крови донора или лица, подлежащего лечению, методом, например, сортировки клеток или магнитных микроносителей. NK-клетки, изолированные от донора, могут быть расширены ex vivo путем выращивания в интерлейкине-2 и интерлейкине-15 в течение более 7 дней. NK-клетки также могут быть отличены от стволовых клеток или клеток-предшественников в культуре in vitro методами, хорошо известными на существующем уровне техники. Соответственно, NK-клетка отличается от стволовой клетки, полученной из костного мозга. Соответственно, NK-клетка отличается от зрелой плюрипотенциальной клетки. Соответственно, NK-клетка отличается от эмбрионной стволовой клетки.

[0049] Выведенные NK-клетки также можно получить из трансформированной линии NK-клеток. Соответственно, трансформированная линия NK-клеток представляет собой линию клеток человека. Стандартными линиями NK-клеток, подходящими для использования, являются линия клеток NK-92 (может быть получена из АТСС; CRL-2497) или линия клеток KHYG-1. Соответственно, выведенная линия NK-клеток получается из линии клеток KHYG-1. См. Ягита и соавт., «Новая линия клеток-естественных киллеров (KHYG-1), полученная у пациента с агрессивной формой NK-клеточного лейкоза с мутацией р53». «Лейкоз» 14(5):922-30. Несмотря на общие черты между стандартными линиями NK-клеток, такими, как экспрессия CD56, разные линии клеток обладают разными фенотипическими и генотипическими характеристиками, благодаря чему конкретная линия NK-клеток может подходить больше в сравнении с другими линиями NK-клеток для разработки клеточной терапии (например, NK-клетки CAR или NK-клетки с экспрессией белков варианта TRAIL). Соответственно, выведенная линия NK-клеток не включает в себя линию клеток NK-92 или производную.

[0050] В определенном варианте осуществления, описанном в настоящем документе, выведенные NK-клетки могут использоваться для лечения гемастологической злокачественной опухоли. Для того, чтобы облегчить такое лечение, в клетках повышается уровень возврата в костный мозг. Соответственно, выведенные NK-клетки демонстрируют высокий уровень экспрессии лиганда для Е-селектина. Е-селектин также известен как: CD62-антигенподобный член семейства Е (CD62E), эндотелиальная молекула адгезии лейкоцитов 1 (ELAM-1) или молекула адгезии лейкоцитарно-эндотелиальных клеток 2 (LECAM2). Е-селектин связывается с лигандами для Е-селектина на поверхности клеток, представляющих собой гликопротеины и/или гликолипиды с экспрессией сиалированного антигена Lex (SLe^x). SLe^x синтезируется совместным действием α-фукозилтрансфераз, α2-3-сиалилтрансфераз, β-галактозилтрансфераз и N-ацетил-β-глюкозаменилтрансфераз. Антитело НЕСА-452 распознает лиганды для Е-селектина. Соответственно, выведенные NK-клетки включают популяцию выведенных NK-клеток, из которых не менее 25%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95% или более тех, у которых наблюдается положительное окрашивание при взаимодействии с антителом НЕСА-452. Соответственно, выведенные NK-клетки включают популяцию NK-клеток, из которых не менее 50% или более тех, у которых наблюдается положительное окрашивание при взаимодействии с антителом НЕСА-452. Соответственно, выведенные NK-клетки включают популяцию NK-клеток, из которых не менее 75% или более тех, у которых наблюдается положительное окрашивание при взаимодействии с антителом НЕСА-452. Соответственно, выведенные NK-клетки включают популяцию NK-клеток, из которых не менее 80% или более тех, у которых наблюдается положительное окрашивание при взаимодействии с антителом НЕСА-452. Соответственно, выведенные NK-клетки включают популяцию NK-клеток, из которых не менее 90% или более тех, у которых наблюдается положительное окрашивание при взаимодействии с антителом НЕСА-452. Положительную реакцию можно оценить, например, путем окрашивания клеток in vitro во флуоресцентно конъюгированное антитело НЕСА-452 и анализа проточной цитометрией, сравнивая клетки, окрашенные в НЕСА-452, с клетками, окрашенными для изотипичного контроля. Соответственно, популяция выведенных NK-клеток, демонстрирующих положительную реакцию на НЕСА-452, были химически обработаны для увеличения фукозилирования белков клеточной поверхности. Соответственно, во время химической обработки используются субстрат GDP-фукозы и фермент альфа-1,3-фукозилтрансферазы-VI.

[0051] Соответственно, выведенная NK-клетка является гликовыведенной. Соответственно, выведенная NK-клетка демонстрирует высокий уровень лиганда для Е селектина. Соответственно, высокий уровень лиганда для Е-селектина проявляется в 6-ти кратном значении в связывании антитела НЕСА-452 по сравнению со связыванием антитела изотипического контроля. Соответственно, высокий уровень лиганда для Е-селектина проявляется в 7-ти кратном значении в связывании антитела НЕСА-452 по сравнению со связыванием антитела изотипического контроля. Соответственно, высокий уровень лиганда для Е-селектина проявляется в 8-ти кратном значении в связывании антитела НЕСА-452 по сравнению со связыванием антитела изотипического контроля. Соответственно, высокий уровень лиганда для Е-селектина проявляется в 9-ти кратном значении в связывании антитела НЕСА-452 по сравнению со связыванием антитела изотипического контроля. Соответственно, высокий уровень лиганда для Е-селектина проявляется в 10-ти кратном значении в связывании антитела НЕСА-452 по сравнению со связыванием антитела изотипического контроля. Соответственно, высокий уровень лиганда для Е-селектина проявляется в 20-ти кратном значении в связывании антитела НЕСА-452 по сравнению со связыванием антитела изотипического контроля. Соответственно, высокий уровень лиганда для Е-селектина проявляется в 50-ти кратном значении в связывании антитела НЕСА-452 по сравнению со связыванием антитела изотипического контроля. Соответственно, высокий уровень лиганда для Е-селектина проявляется в 100-ти кратном значении в связывании антитела НЕСА-452 по сравнению со связыванием антитела изотипического контроля. Данное увеличение в связывании может быть проанализировано, например, путем сравнения средней интенсивности флуоресценции связывания антитела НЕСА-452 с таковой у антитела изотипического контроля путем проточной цитометрии. Соответственно, NK-клетка, которая демонстрирует высокий уровень связывания антитела НЕСА-452, представляет собой линию клеток KHYG-1. Соответственно, популяция выведенных NK-клеток, демонстрирующих высокие уровни связывания НЕСА-452, были химически обработаны для увеличения фукозилирования или сиалирования белков клеточной поверхности. Соответственно, во время химической обработки используются субстрат GDP-фукозы и фермент альфа-1,3-фукозилтрансферазы-VI. Соответственно, NK-клетка была выведена для демонстрирования высокого уровня связывания антитела НЕСА-452 путем экспрессии FUT6, FUT7 или их обоих. Соответственно, экспрессия FUT6 или FUT7 достигается путем введения мРНК, плазмиды ДНК или вирусного вектора в NK-клетку, демонстрирующую низкий уровень связывания антитела НЕСА-452, например, клетку NK-92. Соответственно, иммортализованная линия NK-клеток, таких, как клетки NK-92, может стабильно трансфицироваться нуклеиновой кислотой, кодирующей FUT6, FUT7 или их обоих. Соответственно, высокий уровень экспрессии FUT6 или FUT7 имеет как минимум 2, 5 или 10-кратное увеличение в активности или экспрессии FUT6 или FUT7, что контролируется с помощью мРНК, вестерн-блоттинга или ферментативным анализом. Соответственно, выведенная NK-клетка экспрессирует CD65. Соответственно, выведенная NK-клетка экспрессирует несколько CD65.

[0052] Соответственно, выведенная NK-клетка имеет низкий уровень экспрессии рецептора TRAIL на клеточной поверхности. Соответственно, рецепторами TRAIL являются DR4 или DR5. Соответственно, низкий уровень экспрессии рецептора TRAIL на клеточной поверхности приводит к отсутствию обнаруживаемой активности рецептора TRAIL. Соответственно, под низким уровнем экспрессии рецептора TRAIL подразумевается уровень, отмеченный по реакционности анти-TRAIL антитела, сопоставимый с соответствующим значением по изотопическому контролю. Соответственно, под низким уровнем экспрессии рецептора TRAIL подразумевается уровень, отмеченный по реакционности анти-TRAIL антитела со значением не более чем в 5 раз больше такового по изотопическому контролю. Соответственно, под низким уровнем рецептора TRAIL подразумевается уровень, отмеченный по реакционности анти-TRAIL антитела со значением не более чем в 2 раза больше такового по изотопическому контролю. Экспрессия рецептора TRAIL на клеточной поверхности может быть определена количественно, например, путем проточной цитометрии, как подробно описано в примерах.

Химерные антигенные рецепторы

[0053] Химерный антигенный рецептор (CAR) представляет собой рецептор рекомбинирующего антигена, предназначенный для ввода определенной специфичности антигена в иммунную эффекторную клетку. CAR включает определенную полипептидную последовательность, полученную из экзогенного полинуклеотида, введенного в иммунную эффекторную клетку, временно введенную или интегрированную в геном. Схема типичного CAR представлена на фиг. 1А. Химерные антигенные рецепторы включают лидерную последовательность 101, целенаправленно воздействующий домен 102, трансмембранный домен 103 и один или несколько внутриклеточных сигнальных доменов (104 и 105). Соответственно, целенаправленно воздействующий домен выводится из молекулы антитела и включает один или несколько гипервариабельных участков (CDR) от молекулы антитела, которые придают CAR специфичность антигена. Соответственно, целенаправленно воздействующий домен CAR для использования в выведенных NK-клетках по настоящему изобретению представляют собой одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv), как представлено на фиг. 1B. scFv включает различные части легкой цепи иммуноглобулина 106 и тяжелой цепи иммуноглобулина 108, которые разделены посредством гибкого полипептидного линкера 107. Порядок легких и тяжелых цепей не является ограниченным и может меняться. Гибкий полипептидный линкер позволяет обеспечить взаимосвязь тяжелых и легких цепей и восстановление антигенсвязывающего домена иммуноглобулина. Соответственно, вариабельная область легкой цепи и вариабельная область тяжелой цепи имеют по три CDR. Соответственно, CDR для использования в целенаправленно воздействующем домене получаются из молекулы антитела любого вида (например, человека, мыши, крысы, кролика, козы, овцы), а каркасные области между CDR являются гуманизированными или содержат последовательность, идентичную как минимум на 85%, 90%, 95 или 99% каркасной области человека.

[0054] Если целенаправленно воздействующий домен CAR содержит scFv, легкая цепь иммуноглобулина и тяжелая цепь иммуноглобулина соединяются полипептидными линкерами различной длины. Соответственно, полипептидный линкер имеет длину, большую или равную 10 аминокислотам. Соответственно, полипептидный линкер имеет длину, большую чем 10, 15, 20 или 25 аминокислот. Соответственно, полипептидный линкер имеет длину, меньшую или равную 30 аминокислотам. Соответственно, полипептидный линкер имеет длину, меньшую чем 15, 20, 25 или 30 аминокислот. Соответственно, полипептидный линкер имеет длину от 10 до 30 аминокислот. Соответственно, полипептидный линкер имеет длину от 10 до 25 аминокислот. Соответственно, полипептидный линкер имеет длину от 10 до 20 аминокислот. Соответственно, полипептидный линкер имеет длину от 10 до 15 аминокислот. Соответственно, полипептидный линкер имеет длину от 15 до 30 аминокислот. Соответственно, полипептидный линкер имеет длину от 20 до 30 аминокислот. Соответственно, полипептидный линкер имеет длину от 25 до 30 аминокислот. Соответственно, полипептидный линкер включает в себя гидрофильные аминокислоты. Соответственно, полипептидный линкер состоит из гидрофильных аминокислот. Соответственно, полипептидный линкер включает в себя последовательность аминокислот GSTSGSGKPGSGEGSTKG. Соответственно, полипептидный линкер включает в себя последовательность G₄S (GGGGS). Линкер G₄S обеспечивает гибкость и устойчивость к действию протеазы линкера. Соответственно, линкер G4S последовательно повторяется в полипептидном линкере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 раз.

[0055] CAR по настоящему изобретению также включает NH₂-терминальную лидерную последовательность 101. Лидерная последовательность (также известная как сигнальный пептид) обеспечивает возможность ввода для экспрессируемой структуры CAR в эндоплазматический ретикулум (ER) и выявления клеточной поверхности. Лидерная последовательность расщепляется в ER, а CAR поверхности зрелой клетки не обладает лидерной последовательностью. В целом длина лидерной последовательности будет в диапазоне от 5 до 30 аминокислот и включит отрезок гидрофобных аминокислот. Соответственно, лидерная последовательность имеет длину более 5, 10, 15, 20 или 25 аминокислот. Соответственно, лидерная последовательность имеет длину менее 10, 15, 20, 25 или 30 аминокислот. Соответственно, лидерная последовательность включает в себя последовательность, получаемую из любого секреторного белка. Соответственно, лидерная последовательность включает в себя последовательность, получаемую из любой лидерной последовательности CDS-альфа.

[0056] CAR по настоящему изобретению также включают трансмембранный домен. См. фиг. 1А, отличительный признак 103. Трансмембранный домен включает в себя остатки гидрофобных аминокислот и обеспечивает возможность закрепления CAR в оболочке выведенной NK-клетки. Соответственно, трансмембранный домен включает в себя последовательность аминокислот, получаемую из трансмембранного белка. Соответственно, трансмембранный домен включает в себя последовательность аминокислот, получаемую из трансмембранного домена альфа-, бета- или дзета-цепи рецептора Т-клеток, CD27, CD28, CD3-эпсилона, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137 и CD154. Соответственно, CAR включает в себя трансмембрану с последовательностью аминокислот, получаемой из трансмембранного домена CD8. Соответственно, CAR включает в себя трансмембранный домен с последовательностью аминокислот, получаемой из трансмембранного домена CDS-альфа человека.

[0057] CAR по настоящему изобретению также включает один или несколько внутриклеточных сигнальных доменов. См. фиг. 1А, отличительный признак 104 и 105. Внутриклеточный сигнальный домен увеличивает эффективность CAR и включает в себя внутриклеточный сигнальный домен, получаемый из белка, задействованного в сигнальной трансдукции иммунной клетки. Соответственно, один или несколько внутриклеточных сигнальных доменов включают в себя внутриклеточный сигнальный домен, получаемый из CD-3-дзета CD28, ОХ-40, 4-1ВВ, DAP10, DAP12, 2В4 (CD244) или любого их сочетания. Соответственно, один или несколько внутриклеточных сигнальных доменов включают в себя внутриклеточный сигнальный домен, получаемый из любых двух единиц CD3-дзета CD28, ОХ-40, 4-1ВВ, DAP10, DAP12, 2В4 (CD244) или любого их сочетания. Соответственно, CAR включает в себя как минимум два внутриклеточных сигнальных домена, получаемых из CD3-дзета и 4-1ВВ.

[0058] CAR по настоящему изобретению также может включать в себя шарнирную область, располагающуюся между целенаправленно воздействующим доменом и трансмембранным доменом. Шарнирная область включает в себя гидрофильные аминокислоты и обеспечивает гибкость целенаправленно воздействующего домена по отношению к клеточной поверхности. Соответственно, шарнирная область включает в себя более 5, 10, 15, 20, 25 или 30 аминокислот. Соответственно, шарнирная область включает в себя менее 10, 15, 20, 25, 30 или 35 аминокислот.

[0059] Предпочтительно, чтобы CAR CD38 по настоящему изобретению имел связывающий домен, включающий в себя вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID №: 1. Дополнительно вариабельная область тяжелой цепи включает в себя SEQ ID №: 7. Предпочтительно, чтобы связывающий домен CAR CD38 включал в себя вариабельную область легкой цепи с SEQ ID №: 23 или SEQ ID №: 28.

[0060] Предпочтительный вариант CAR CD38 в примерах имеет связывающий домен, включающий в себя вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID №: 1 и вариабельная область легкой цепи с SEQ ID №: 23.

[0061] Предпочтительно, чтобы связывающий домен CAR CD38 включал в себя один, несколько или все CDR тяжелой цепи из SEQ ID №: 29, SEQ ID №: 30 и SEQ ID №: 31. Дополнительно, CAR включает в себя один, несколько или все CDR тяжелой цепи из SEQ ID №: 32, SEQ ID №: 33 и SEQ ID №: 34.

[0062] Предпочтительно, чтобы связывающий домен CAR CD38 включал в себя один, несколько или все CDR легкой цепи из SEQ ID №: 35, SEQ ID №: 36 и SEQ ID №: 37 или SEQ ID №: 38, SEQ ID №: 39 и SEQ ID №: 40.

[0063] Предпочтительно, чтобы фрагменты и варианты вышеуказанных тяжелых и легких цепей имели связывающие домены CAR с главным образом аналогичной связывающей активностью CD38, при этом предпочтительно, чтобы фрагменты включали в себя пептиды, которые были усечены и/или имели аминокислоты, которые были удалены и/или изменены. Предпочтительно, чтобы любой фрагмент/вариант согласно настоящему изобретению сохранял как минимум 50%, как минимум 60%, как минимум 70%, и наиболее предпочтительно как минимум 90% связывающей активности предпочтительного варианта CAR в примерах. Кроме того, предпочтительно, чтобы любой фрагмент/вариант согласно настоящему изобретению имел связывающую активность, не превышающую связывающую активность предпочтительного CAR более чем на 10%, более чем на 20%, более чем на 50%, и наиболее предпочтительно - более чем на 100%.

[0064] Предпочтительно, чтобы связывающий домен CAR CD38 включал вариабельную область тяжелой цепи с гомологией последовательности как минимум 50%, как минимум 60%, как минимум 70%, как минимум 80%, и наиболее предпочтительно - как минимум 90% с SEQ ID №: 1. Дополнительно, CAR CD38 включает вариабельную область тяжелой цепи с гомологией последовательности как минимум 50%, как минимум 60%, как минимум 70%, как минимум 80%, и наиболее предпочтительно - как минимум 90% с SEQ ID №: 7.

[0065] Предпочтительно, чтобы связывающий домен CAR CD38 включал вариабельную область легкой цепи с гомологией последовательности как минимум 50%, как минимум 60%, как минимум 70%, как минимум 80%, и наиболее предпочтительно как минимум 90% с SEQ ID №: 23 или SEQ ID №: 28.

[0066] Предпочтительно, чтобы связывающий домен CAR CD38 включал один, несколько или все CDR тяжелой цепи с гомологией последовательности как минимум 70%, как минимум 80%, и наиболее предпочтительно - как минимум 90% с SEQ ID №: 29, SEQ ID №: 30 и SEQ ID №: 31. Дополнительно CAR CD38 включает один, несколько или все CDR тяжелой цепи с гомологией последовательности как минимум 70%, как минимум 80%, и наиболее предпочтительно - как минимум 90% с SEQ ID №: 32, SEQ ID №: 33 и SEQ ID №: 34.

[0067] Предпочтительно, чтобы связывающий домен CAR CD38 включал один, несколько или все CDR легкой цепи с гомологией последовательности как минимум 70%, как минимум 80%, и наиболее предпочтительно - как минимум 90% с SEQ ID №: 35, SEQ ID №: 36 и SEQ ID №: 37 или SEQ ID №: 38, SEQ ID №: 39 и SEQ ID №: 40.

[0068] Предпочтительно, чтобы CAR CD38 включал в себя один или несколько костимулирующих доменов из SEQ ID №: 41, SEQ ID №: 42 и SEQ ID №: 43. Предпочтительно, чтобы CAR включал костимулирующий домен с гомологией последовательности как минимум 50%, как минимум 60%, как минимум 70%, как минимум 80%, и наиболее предпочтительно - как минимум 90% с SEQ ID №: 41, SEQ ID №: 42 или SEQ ID №: 43.

[0069] Предпочтительно, чтобы связывающий домен CAR CD38 включал в себя вариабельную область тяжелой цепи с последовательностью, представляющей собой фрагмент SEQ ID №: 1 длиной в как минимум 60 аминокислот, как минимум 70 аминокислот, как минимум 80 аминокислот, как минимум 90 аминокислот, как минимум 100 аминокислот, как минимум 110 аминокислот, и более предпочтительно - как минимум 120 аминокислот. Дополнительно CAR CD38 включает в себя вариабельную область тяжелой цепи с последовательностью, представляющей собой фрагмент SEQ ID №: 7 длиной в как минимум 60 аминокислот, как минимум 70 аминокислот, как минимум 80 аминокислот, как минимум 90 аминокислот, как минимум 100 аминокислот, как минимум 110 аминокислот, и более предпочтительно - как минимум 120 аминокислот.

[0070] Предпочтительно, чтобы связывающий домен CAR CD38 включал в себя вариабельную область легкой цепи с последовательностью, представляющей собой фрагмент SEQ ID №: 23 или SEQ ID №: 28 длиной в как минимум 50 аминокислот, как минимум 60 аминокислот, как минимум 70 аминокислот, как минимум 80 аминокислот, как минимум 90 аминокислот, и более предпочтительно - как минимум 100 аминокислот.

Целенаправленно воздействующие домены CAR

[0071] Соответственно, согласно настоящему документу, «раковый специфический антиген» означает молекулярный маркер рака, экспрессируемый раковой клеткой в большей степени, чем нормальной. Раковые специфические антигены, как правило, представляют собой белки или полипептиды, полученные из них, но могут представлять собой гликаны, липиды или другие небольшие органические молекулы. Кроме того, раковый специфический антиген может возникать в результате увеличения или уменьшения посттрансляционного процессинга, проявляемого раковой клеткой по сравнению с нормальной клеткой, например, гликозелирования белка, липидизация белка, фосфорилирование белка или ацетилирование белка. К неограничивающим примерам ракового специфического антигена относятся CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF17/BCMA, SYND1/CD138, CD229, CD47, Her2/Neu, рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, мезотелин, ЕрСАМ, MUC1, MUC16, антиген Tn, NEU5GC, NeuGcGM3, GD2, CLL-1 или HERV-K.

[0072] Соответственно, согласно настоящему документу, «антиген, специфический для рака крови» означает молекулярный маркер рака, экспрессируемый лейкозом, лимфомой, миеломой в большей степени, чем гематологическая клетка. Антигены, специфические для рака крови, как правило, представляют собой белки или полипептиды, полученные из них, но могут представлять собой гликаны, липиды или другие небольшие органические молекулы. Кроме того, антиген, специфический для рака крови, может возникать в результате увеличения или уменьшения посттрансляционного процессинга, проявляемого клеткой лейкоза, лимфомы или миеломы, по сравнению с нормальной клеткой, например, во время гликозелирования белка, липидизации белка, фосфорилирования белка или ацетилирования белка. К неограничивающим примерам антигена, специфического для рака крови, относятся CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF17/BCMA, SYND1/CD138, CD229, CD47, CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, GD2, CLL-1, HERV-K. К неограничивающим примерам рака крови относятся острый лимфоцитарный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, диффузная В-крупноклеточная лимфома, фолликулярная лимфома, мантийноклеточная лимфома, острый миелогенный лейкоз, хронический миелолейкоз, лейкоз ворсистых клеток, Т-клеточный пролимфоцитарный лейкоз, множественная миелома, вялотекущая множественная миелома, миелома легкой цепи или лейкоз из больших зернистых лимфоцитов.

[0073] Соответственно, выведенная NK-клетка включает в себя CAR с целенаправленно воздействующим доменом, который специфически связывает белок клеточной поверхности. Соответственно, выведенная NK-клетка включает два или несколько CAR с целенаправленно воздействующими доменами, которые специфически связывают два или несколько явно выраженных белков клеточной поверхности. Соответственно, целенаправленно воздействующий домен CAR специфически связывает раковый специфический антиген на клеточной поверхности раковой клетки. Соответственно, CAR специфически связывает CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF17/BCMA, SYND1/CD138, CD229, CD47, Her2/Neu, рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, мезотелин, ЕрСАМ, MUC1, MUC16, антиген Tn, NEU5GC, NeuGcGM3, GD2, CLL-1 или HERV-K.

[0074] CD38, или также известная гидролаза циклической аденозиндифосфорибозы, представляет собой гликобелок клеточной поверхности, который преимущественно находится на иммунных клетках. CD38 используется в регулировании кальция внутри клеток и сверхэкспрессируется во многих различных типах рака, включая лейкоз, миелому и многие другие солидные опухоли. Соответственно, выведенные NK-клетки по настоящему изобретению экспрессируют CAR с использованием целенаправленно воздействующего домена 102, специфического для CD38. Соответственно, CAR CD38 включает в себя последовательность аминокислот, как минимум на 80% идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:1-6. Соответственно, CAR CD38 включает в себя последовательность аминокислот, как минимум на 90% идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:1-6. Соответственно, CAR CD38 включает в себя последовательность аминокислот, как минимум на 95% идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:1-6. Соответственно, CAR CD38 включает в себя последовательность аминокислот, как минимум на 98% идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:1-6. Соответственно, CAR CD38 включает в себя последовательность аминокислот, как минимум на 99% идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:1-6. Соответственно, CAR CD38 включает в себя последовательность, идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:1-6.

[0075] Соответственно, выведенная NK-клетка экспрессирует CAR с целенаправленно воздействующим доменом, включающим в себя последовательность аминокислот, изложенную в SEQ ID №:1 и последовательность аминокислот, изложенную в SEQ ID №: 2. Соответственно, CAR включает в себя последовательность аминокислот, на 80% идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:1 и последовательность аминокислот, идентичную на 80% той, которая изложена в SEQ ID №:2. Соответственно, CAR включает в себя последовательность аминокислот, на 90% идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:1 и последовательность аминокислот, идентичную на 90% той, которая изложена в SEQ ID №:2. Соответственно, CAR включает в себя последовательность аминокислот, на 95% идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:1 и последовательность аминокислот, идентичную на 95% той, которая изложена в SEQ ID №:2. Соответственно, CAR включает в себя последовательность аминокислот, на 98% идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:1 и последовательность аминокислот, идентичную на 98% той, которая изложена в SEQ ID №:2. Соответственно, CAR включает в себя последовательность аминокислот, на 99% идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:1 и последовательность аминокислот, идентичную на 99% той, которая изложена в SEQ ID №:2. Соответственно, SEQ ID №:1 и SEQ ID №:2 соединены гибким полипептидным линкером. Соответственно, гибкий полипептидный линкер соединяет конец СООН полипептида в SEQ ID №:1 до конца NEh полипептида в SEQ ID №:2. Соответственно, гибкий полипептидный линкер соединяет конец СООН полипептида в SEQ ID №:2 до конца NEh полипептида в SEQ ID №:1.

[0076] Соответственно, выведенная NK-клетка экспрессирует CAR с целенаправленно воздействующим доменом, включающим в себя последовательность аминокислот, изложенную в SEQ ID №:3 и последовательность аминокислот, изложенную в SEQ ID №:4. Соответственно, CAR включает в себя последовательность аминокислот, на 80% идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:3 и последовательность аминокислот, идентичную на 80% той, которая изложена в SEQ ID №:4. Соответственно, CAR включает в себя последовательность аминокислот, на 90% идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:3 и последовательность аминокислот, идентичную на 90% той, которая изложена в SEQ ID №:4. Соответственно, CAR включает в себя последовательность аминокислот, на 95% идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:3 и последовательность аминокислот, идентичную на 95% той, которая изложена в SEQ ID №:4. Соответственно, CAR включает в себя последовательность аминокислот, на 98% идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:3 и последовательность аминокислот, идентичную на 98% той, которая изложена в SEQ ID №:4. Соответственно, CAR включает в себя последовательность аминокислот, на 99% идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:3 и последовательность аминокислот, идентичную на 99% той, которая изложена в SEQ ID №:4. Соответственно, SEQ ID №:3 и SEQ ID №:4 соединены гибким полипептидным линкером. Соответственно, гибкий полипептидный линкер соединяет конец СООН полипептида в SEQ ID №:3 до конца NEh полипептида в SEQ ID №:4. Соответственно, гибкий полипептидный линкер соединяет конец СООН полипептида в SEQ ID №:4 до конца NH2 полипептида в SEQ ID №:3.

[0077] Соответственно, выведенная NK-клетка экспрессирует CAR с целенаправленно воздействующим доменом, включающим в себя последовательность аминокислот, изложенную в SEQ ID №:5 и последовательность аминокислот, изложенную в SEQ ID №:6. Соответственно, CAR включает в себя последовательность аминокислот, на 80% идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:5 и последовательность аминокислот, идентичную на 80% той, которая изложена в SEQ ID №:6. Соответственно, CAR включает в себя последовательность аминокислот, на 90% идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:5 и последовательность аминокислот, идентичную на 90% той, которая изложена в SEQ ID №:6. Соответственно, CAR включает в себя последовательность аминокислот, на 95% идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:5 и последовательность аминокислот, идентичную на 95% той, которая изложена в SEQ ID №:6. Соответственно, CAR включает в себя последовательность аминокислот, на 98% идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:5 и последовательность аминокислот, идентичную на 98% той, которая изложена в SEQ ID №:6. Соответственно, CAR включает в себя последовательность аминокислот, на 99% идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:5 и последовательность аминокислот, идентичную на 99% той, которая изложена в SEQ ID №:6. Соответственно, SEQ ID №:5 и SEQ ID №:6 соединены гибким полипептидным линкером. Соответственно, гибкий полипептидный линкер соединяет конец СООН полипептида в SEQ ID №:5 до конца NEh полипептида в SEQ ID №:6. Соответственно, гибкий полипептидный линкер соединяет конец СООН полипептида в SEQ ID №:6 до конца NEh полипептида в SEQ ID №:5.

[0078] Выведенная NK-клетка по настоящему изобретению, может включать CAR, специфический для CD38, демонстрирующий аффинность, приспособленную для оптимальной реакции на рак, а также максимального ограничения реактивности по отношению к CD38 с экспрессией на клетках, не являющихся раковыми или опухолевыми. Даратумумаб это моноклональное антитело, проявляющее высокую аффинность к рецептору CD38. Соответственно, CAR включает в себя целенаправленно воздействующий домен, который получается из антитела, демонстрирующего более низкую аффинность к CD38, чем Даратумумаб. Соответственно, CAR включает в себя целенаправленно воздействующий домен, который получается из антитела, демонстрирующего на 25% более низкую аффинность к CD38, чем Даратумумаб. Соответственно, CAR включает в себя целенаправленно воздействующий домен, который получается из антитела, демонстрирующего на 50% более низкую аффинность к CD38, чем Даратумумаб. Соответственно, CAR включает в себя целенаправленно воздействующий домен, который получается из антитела, демонстрирующего в 2 раза более низкую аффинность к CD38, чем Даратумумаб. Аффинность антитела можно измерить, например, с помощью поверхностного плазменного резонанса (например, Biacore).

Биспецифичный CAR

[0079] Выведенные NK-клетки могут быть биспецифичными, то есть, экспрессировать биспецифичные CAR или несколько различных CAR, при этом они будут иметь аффинность к двум явно выраженным лигандам / антигенам. Биспецифичные CAR-NK могут использоваться либо для увеличения количества потенциальных участков связывания на раковых клетках, либо, в качестве альтернативного варианта, для локализации раковых клеток для других иммунных эффекторных клеток, которые экспрессируют лиганды специально для NK-CAR. Для использования в терапии рака биспецифичный CAR может связываться с опухолевой клеткой-мишенью и эффекторной клеткой, например, Т-клеткой, NK-клеткой или макрофагоцитом. Так, например, в случае множественной миеломы биспецифичный CAR может сзываться с антигеном Т-клетки (например, CD3 и т.д.) и маркером опухолевой клетки (например, CD38 и т.д.). В качестве альтернативного варианта биспецифичный CAR может связываться с двумя отдельными маркерами опухолевых клеток, повышая аффинность связывания NK-клетки для опухолевых клеток мишеней. Это может снизить риск раковых клеток, развивая сопротивление с помощью одного или нескольких антигенов-мишеней. В качестве примера в данном случае (случае множественной меиломы) можно привести привязку CAR к CD38 и CS-1/SLAMF7. Другой маркер опухолевой клетки, на который нацелен CAR, является маркером типа «не ешь меня» на опухолях, примером которого является CD47.

[0080] Выведенные NK-клетки по настоящему изобретению могут включать биспецифичный CAR или несколько CAR, экспрессируемых аналогичной NK-клеткой. Это обеспечивает для NK-клеток возможность выявления двух различных антигенов одновременно. Соответственно, биспецифичный CAR имеет специфичность для двух любых из следующих антигенов: CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF17/BCMA, CD123/IL3-RA, SYND1/CD138, CD229, CD47, Her2/Neu, рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), CD19, CD20, CD22, мезотелин, ЕрСАМ, MUC1, MUC16, антиген Tn, NEU5GC, NeuGcGM3, GD2, CLL-1, CD123, HERV-K. Соответственно, бисецефичный характер NK-клетки CAR может обеспечить возможность связывания с опухолевым антигеном и другой иммунной клеткой, например, Т-клеткой или дендритной клеткой. Соответственно, биспецифичный характер NK-клетки CAR может обеспечить возможность для связывания с ингибитором контрольных точек, например, PDL-1 или CD47. Соответственно, первый CAR обладает специфичностью для CD38, а второй CAR обладает специфичностью для любого из SLAMF-7, ВСМА, CD138, CD229, PDL-1 или CD47. Соответственно, первый CAR обладает специфичностью для CD38, а второй CAR обладает специфичностью для SLAMF-7, ВСМА, CD 138, CD229. Соответственно, первый CAR обладает специфичностью для CD38, а второй CAR обладает специфичностью для SLAMF-7. Соответственно, первый CAR обладает специфичностью для CD38, а второй CAR обладает специфичностью для ВСМА. Соответственно, первый CAR обладает специфичностью для CD38, а второй CAR обладает специфичностью для CD 138. Соответственно, первый CAR обладает специфичностью для CD38, а второй CAR обладает специфичностью для CD229.

TNF-связанный апоптоз-индунирующий лиганд

[0081] TNF-связанный апоптоз-индуцирующего лиганд (TRAIL), также известный как элемент 10 семейства факторов некроза опухоли (лиганд) - это лиганд белка, вызывающий гибель клеток путем инициирования апоптоза. Апоптоз инициируется путем связывания TRAIL с рецепторами, экспрессируемыми на клеточной поверхности множества различных типов клеток, в том числе раковых клеток. Выведенные NK-клетки по настоящему изобретению могут экспрессировать полипептид варианта TRAIL, модифицированный из последовательности белка TRAIL дикого типа с использованием как минимум одного аминокислотного остатка для того, чтобы увеличить аффинность связывания к гибели, в том числе рецепторов DR4, DR5 или их обоих, при этом снижая аффинность связывания к рецепторам-приманкам, таким, как DcR1 или DcR2. Соответственно, выведенные NK-клетки экспрессируют CAR и полипептид варианта TRAIL. Соответственно, вариант TRAIL отражает увеличенную аффинность связывания к одному или нескольким рецепторам TRAIL. Соответственно, вариант TRAIL отражает увеличенную аффинность связывания к рецептору TRAIL DR4. Соответственно, вариант TRAIL отражает увеличенную аффинность связывания к рецептору TRAIL DR5. Соответственно, вариант TRAIL отражает увеличенную аффинность связывания к рецепторам TRAIL DR4 и DR5. TRAIL дикого типа обычно содержит KD>2 нМ для DR4, >5 нМ для DR5 и >20 нМ для рецептора-приманки DcRl (WO 2009/077857; измерено с помощью поверхностного плазмонного резонанса), или примерно 50-100 нМ для DR4, 1-10 нМ для DR5 и 175-225 нМ для DcR1 (Трунех, А. и соавт. 2000; измерено с помощью изотермической титрационной калориметрии и ELISA). Таким образом, повышенная аффинность к DR4 надлежащим образом определяется как KD<2 нМ или <50 нМ, соответственно, в то время как повышенная аффинность к DR5 надлежащим образом определяется как KD<5 нМ или <1 нМ, соответственно. Пониженная аффинность к рецептору-приманке DcRl надлежащим образом определяется как KD>50 нМ или >225 нМ, соответственно. В любом случае повышение или понижение аффинности, которая проявляется посредством варианта/мутации TRAIL, относится к базовой аффинности, которая проявляется посредством TRAIL дикого типа. Соответственно, аффинность варианта TRAIL для рецептора TRAIL увеличивается как минимум на 10%, 15%, 20%, 25% или 50% в сравнении со значением, которое наблюдается у TRAIL дикого типа. В определенном варианте осуществления вариант TRAIL увеличивает апоптоз по сравнению со значением, наблюдаемым у TRAIL дикого типа, согласно измерениям, выполненным путем активации каспазы 8 в клетке-мишени. Соответственно, вариант TRAIL способствует увеличению уровня активации каспазы 8 по сравнению со значением, наблюдаемым у TRAIL дикого типа, в клетке-мишени как минимум в 2 раза. Соответственно, вариант рецептора TRAIL имеет мутацию аминокислот TRAIL человека, включая D269H, S159R, E195R, G131R, N199R, К201Н или любое их сочетание. Соответственно, вариант рецептора TRAIL имеет две мутации аминокислот человека TRAIL, D269H и E195R. Соответственно, вариант рецептора TRAIL имеет мутацию D269H. Соответственно, вариант рецептора TRAIL имеет мутацию E195R. Соответственно, вариант рецептора TRAIL имеет три мутации аминокислот человека TRAIL, G131R, N199R и K201H. Соответственно, мутировавший рецептор TRAIL экспрессируется на первичной Т-клетке или линии первичных клеток. Соответственно, рецептор TRAIL кодируется полинуклеотидом, трансфицированным в линию Т-клеток.

Ингибирующие рецепторы контрольной точки.

[0082] Ингибирующие рецепторы контрольной точки экспрессируются на поверхности иммунных эффекторных клеток, таких, как Т-клетки и NK-клетки, и отрицательно регулируют цитотоксичность данных клеток. К примерам ингибирующих рецепторов контрольной точки относятся PD-1, CTLA-4 и CD96, каждый из которых экспрессируется на NK-клетках. Соответственно, выведенные NK-клетки имеют пониженную функцию ингибирующих рецепторов контрольной точки или не имеют ее вовсе. Соответственно, ингибирующие рецепторы контрольной точки с замененной или отсутствующей функцией включают в себя один или несколько CD96 (TACTILE), CD152 (CTLA4), CD223 (LAG-3), CD279 (PD-1), CD328 (SIGLEC7), SIGLEC9, TIGIT и/или TIM-3. Соответственно, ингибирующий рецептор контрольной точки включает в себя один или несколько CD96 (TACTILE), CD152 (CTLA4) или CD328 (SIGLEC7). Соответственно, NK-клетки имеют пониженную функцию ингибирующих рецепторов контрольной точки или не имеют ее вовсе по отношению к двум или нескольким ингибирующим рецепторам контрольной точки. Соответственно, два или несколько ингибирующих рецепторов контрольной точки включают в себя CD96 (TACTILE), CD152 (CTLA4) или CD328 (SIGLEC7). Соответственно, NK-клетки имеют пониженную функцию ингибирующих рецепторов контрольной точки или не имеют ее вовсе по отношению к трем ингибирующим рецепторам контрольной точки. Соответственно, три ингибирующих рецептора контрольной точки включают в себя CD96 (TACTILE), CD152 (CTLA4) или CD328 (SIGLEC7). Соответственно, выведенная NK-клетка включает в себя CAR CD38, а также делецию или уменьшение ингибирующего рецептора контрольной точки. Соответственно, выведенная NK-клетка включает в себя CAR CD38, белок варианта TRAIL, а также делецию или уменьшение ингибирующего рецептора контрольной точки.

[0083] Соответственно, выведенные NK-клетки были изменены для того, чтобы уменьшить ингибирующие рецепторы контрольной точки путем генетический делеции через механизм TALEN или Cas9/CRISPR. Соответственно, выведенная NK-клетка включает в себя генетическую делецию CD96 (TACTILE). Соответственно, выведенная NK-клетка включает в себя генетическую делецию CD328 (SIGLEC7). Соответственно, выведенная NK-клетка включает в себя генетическую делецию CD152 (CTLA4). Соответственно, выведенная NK-клетка включает в себя генетическую делецию CD279 (PD-1). Соответственно, выведенная NK-клетка включает в себя генетическую делецию любых двух или нескольких D96 (TACTILE), CD328 (SIGLEC7), CD152 (CTLA4) или CD279 (PD-1). Соответственно, выведенная NK-клетка включает в себя генетическую делецию любых трех или нескольких D96 (TACTILE), CD328 (SIGLEC7), CD152 (CTLA4) или CD279 (PD-1). Соответственно, выведенные NK-клетки были изменены для того, чтобы уменьшить экспрессию ингибиторующего рецептора контрольной точки при помощи малой интерферирующей РНК, короткой шпилечной РНК или антисмысловой РНК. Соответственно, выведенная NK-клетка имеет уменьшенную экспрессию CD96 (TACTILE). Соответственно, выведенная NK-клетка имеет уменьшенную экспрессию CD328 (SIGLEC7). Соответственно, выведенная NK-клетка имеет уменьшенную экспрессию CD 152 (CTLA4). Соответственно, выведенная NK-клетка имеет уменьшенную экспрессию CD279 (PD-1). Соответственно, выведенная NK-клетка имеет уменьшенную экспрессию любых двух или нескольких D96 (TACTILE), CD328 (SIGLEC7), CD152 (CTLA4) или CD279 (PD-1). Соответственно, выведенная NK-клетка имеет уменьшенную экспрессию любых трех или нескольких D96 (TACTILE), CD328 (SIGLEC7), CD 152 (CTLA4) или CD279 (PD-1).

[0084] Соответственно, выведенные NK-клетки, экспрессирующие высокий уровень лиганда для Е-селектина, что подтверждается связыванием с антителом НЕСА-452, как описывается выше, включают в себя CAR CD38, полипептид варианта TRAIL, делецию или уменьшение ингибирующего рецептора контрольной точки. Соответственно, выведенные NK-клетки, экспрессирующие высокий уровень лиганда для Е-селектина, включают в себя CAR CD38 и полипептид варианта TRAIL. Соответственно, выведенные NK-клетки, экспрессирующие высокий уровень лиганда для Е-селектина, включают в себя CAR CD38 и делецию или уменьшение ингибирующего рецептора контрольной точки. Соответственно, выведенные NK-клетки, экспрессирующие высокий уровень лиганда для Е-селектина, включают в себя CAR CD38, полипептид варианта TRAIL и делецию или уменьшение одного или нескольких ингибирующих рецепторов контрольной точки. Соответственно, CAR CD38 включает в себя последовательность целенаправленно воздействующего домена, как минимум на 80% идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:1-6. Соответственно, CAR CD38 включает в себя последовательность целенаправленно воздействующего домена, как минимум на 90% идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:1-6. Соответственно, CAR CD38 включает в себя последовательность, как минимум на 95% идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:1-6. Соответственно, CAR CD38 включает в себя последовательность, как минимум на 98% идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:1-6. Соответственно, CAR CD38 включает в себя последовательность, как минимум на 99% идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:1-6. Соответственно, CAR CD38 включает в себя последовательность, идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:1-6. Соответственно, вариант рецептора TRAIL имеет две мутации аминокислот человека TRAIL, D269H и E195R. Соответственно, вариант рецептора TRAIL имеет три мутации аминокислот человека TRAIL, G131R, N199R и К201Н. Соответственно, вариант рецептора TRAIL имеет мутацию D269H. Соответственно, вариант рецептора TRAIL имеет мутацию E195R. Соответственно один, несколько или все из ингибирующих рецепторов контрольной точки принадлежали к CD96 (TACTILE), CD152 (CTLA4), CD223 (LAG-3), CD279 (PD-1), CD328 (SIGLEC7), SIGLEC9, TIGIT и/или TIM-3.

[0085] Соответственно, выведенные NK-клетки, экспрессирующие высокий уровень лиганда для Е-селектина, что подтверждается связыванием антитела НЕСА-452, представляет собой клетку KHYG-1. Соответственно, клетка KHYG-1 включает в себя CAR CD38, полипептид варианта TRAIL, делецию или уменьшение в функции ингибирующего рецептора контрольной точки. Соответственно, клетка KHYG-1 включает в себя CAR CD38 и полипептид варианта TRAIL. Соответственно, клетка KHYG-1 включает в себя CAR CD38, делецию или уменьшение в функции ингибирующего рецептора контрольной точки. Соответственно, клетка KHYG-1 включает в себя CAR CD38, полипептид варианта TRAIL, делецию или уменьшение в функции ингибирующего рецептора контрольной точки. Соответственно, CAR CD38 включает в себя последовательность целенаправленно воздействующего домена, как минимум на 80% идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:1-6. Соответственно, CAR CD38 включает в себя последовательность целенаправленно воздействующего домена, как минимум на 90% идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:1-6. Соответственно, CAR CD38 включает в себя последовательность, как минимум на 95% идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:1-6. Соответственно, CAR CD38 включает в себя последовательность, как минимум на 98% идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:1-6. Соответственно, CAR CD38 включает в себя последовательность, как минимум на 99% идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:1-6. Соответственно, CAR CD38 включает в себя последовательность, идентичную той, которая изложена в SEQ ID №:1-6. Соответственно, вариант рецептора TRAIL имеет две мутации аминокислот человека TRAIL, D269H и E195R. Соответственно, вариант рецептора TRAIL имеет три мутации аминокислот человека TRAIL, G131R, N199R и K201H. Соответственно, вариант рецептора TRAIL имеет мутацию D269H. Соответственно, вариант рецептора TRAIL имеет мутацию E195R. Соответственно один, несколько или все из ингибирующих рецепторов контрольной точки принадлежали к CD96 (TACTILE), CD 152 (CTLA4), CD223 (LAG-3), CD279 (PD-1), CD328 (SIGLEC7), SIGLEC9, TIGIT и/или TIM-3.

Метод получения выведенных клеток-естественных киллеров

[0086] Выведенные клетки-естественные киллеры можно получить с помощью нескольких разных методик, известных на существующем уровне техники. Соответственно, CAR CD38 или протеин варианта TRAIL, кодируются полинуклеотидом, вставленным в вирусный вектор. Соответственно, вирусный вектор включает аденовирус, адено-ассоциированный вирус, лентивирус или ретровирус. Соответственно, вирусный вектор включает лентивирус или ретровирус. Соответственно, вирусный вектор включает лентивирус. Соответственно, вирусный вектор включает ретровирус. Вирусный вектор может использоваться для трансдуцирования первичных NK-клеток или линии NK-клеток. Соответственно, вирусный вектор может использоваться для трансдуцирования первичных NK-клеток. Соответственно, вирусный вектор может использоваться для трансдуцирования линии NK-клеток. Соответственно, вирусный вектор может использоваться для трансдуцирования NK-92-клеток. Соответственно, вирусный вектор может использоваться для трансдуцирования KHYG-1-клеток. Соответственно, клетки могут временно трансфицироваться с помощью любого из описанных методов, например, эле ктро импульсного открытия клеточных пор, вирусного вектора или трансфекционного реагента на основе липидов, предназначенных для использования in vivo.

[0087] Соответственно, CAR CD38 или протеин варианта TRAIL, кодируются полинуклеотидом. Соответственно, полинуклеотид представляет собой плазмиду ДНК или линеаризованный полинуклеотид ДНК. Соответственно, полинуклеотид представляет собой молекулу мРНК. Любой из этих полинуклеотидов может вводиться в популяцию первичных NK-клеток или линию NK-клетки посредством эле ктро импульсного открытия клеточных пор. Например, допускается использование платформы MaxCyte Flow Electroporation для генерации выведенных NK-клеток.

[0088] Выеденные клетки-естественные киллеры, включающие делецию или пониженную экспрессию ингибирующего рецептора контрольной точки, можно получить с помощью нескольких разных методик, известных на существующем уровне техники. Рецепторы могут подвергаться делеции или уменьшению с помощью целенаправленно действующего механизма CRISPR/Cas9 (с помощью целенаправленно действующего полинуклеотида). «Руководящая» РНК может трансфицироваться в первичные NK-клетки или линии клеток. Соответственно, «руководящая» РНК трансфицируется в первичные NK-клетки или популяцию первичных клеток, что приводит к понижению экспрессии ингибирующих рецепторов контрольной точки в популяции. Соответственно, «руководящая» РНК трансфицируется в линии NK-клеток. Соответственно, «руководящая» РНК трансфицируется в линию клеток KHYG-1 и выбираются клоны, включающие гомозиготную делецию ингибирующего рецептора контрольной точки.

Метод введения клеток-естественных киллеров

[0089] В настоящем изобретении предусматриваются фармацевтические композиции, включающие составы выведенных NK-клеток, подходящих для внутривенного введения пациенту. Фармацевтические композиции по настоящему изобретению включают NK-клетку или множество NK-клеток, экспрессирующих CAR; дополнительно NK-клетка может включать вариант TRAIL или делецию ингибитора контрольных точек. Соответственно, NK-клетка с экспрессией CAR формулируется с приемлемым носителем, дилюентом или эксципиентом для введения. Такие композиции могут включать буферы, такие как нейтральный забуференный физиологический раствор, нормальный физиологический раствор или забуференный фосфатом физиологический раствор. Соответственно, фармацевтическая композиция может включать углевод, например, глюкозу, декстрозу, лактозу, галактозу, маннозу, сахарозу или маннитол. Соответственно, фармацевтические композиции включают протеин, полипептиды или аминокислоты, такие как глицин. Соответственно, фармацевтические композиции включают дополнительные стабилизаторы и консерванты, такие как антиоксиданты; хелатирующие агенты, такие как EDTA или EGTA или глутатион. Соответственно, NK-клетки могут размножаться из замороженного продукта, сохраняемого в глицероле при низкой температуре, например, ниже -70°С. Соответственно, NK-клетки размножаются с помощью цитокинов, таких как интерлейкин-2 и интерлейкин-15, с культивацией в течение недели или более.

[0090] Соответственно, вводимые NK-клетки и клеточные линии подвергаются гамма-облучению перед введением соответствующему лицу. Соответственно, клетки облучаются, чтобы предотвратить их рост и деление in vivo. Соответственно, клетки облучаются при дозе как минимум 5 Ер, 10 Ер, 20 Ер, 30 Ер, 40 Тр, 50 Ер или более. Соответственно, клетки облучаются при дозе максимум 20 Ер, 30 Гр, 40 Ер, 50 Гр, 60 Ер. Соответственно, клетки обрабатываются таким образом, чтобы их период полувыведения in vivo составлял менее 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 дня. Соответственно, клетки и клеточные линии включают «суицидальный» ген, экспрессирующий протеин, который предотвращает деление клеток или является токсичным для клеток, что позволяет сократить период полувыведения или обеспечивает возможность уничтожения клеток при введении соединения. Примеры общих «суицидальных» генов, включая тимидинкиназу вируса герпеса и индуцируемую каспазу 9. Клетки, включающие тимидинкиназу вируса герпеса могут уничтожаться с помощью соответствующих антивирусных препаратов, например, Ацикловира или Ганцикловира.

[0091] Выведенные NK-клетки, которые являются объектом настоящего изобретения, могут вводиться в количестве, достаточном для предотвращения перемещения или вызвать ремиссию определенного ракового заболевания или новообразования. Соответственно, полученные NK-клетки вводятся в количестве, примерно превышающем 1×10⁶ клеток/м², 1×10⁷ клеток/м², 1×10⁸ клеток/м², 1×10⁹ клеток/м² и 1×10¹⁰ клеток/м². Соответственно, NK-клетки вводятся в количестве примерно от 1×10⁶ до 1×10¹⁰ клеток/м². Соответственно, NK-клетки вводятся в количестве примерно от 1×10⁷ до 1×10¹⁰ клеток/м². Соответственно, NK-клетки вводятся в количестве примерно от 1×10⁸ до 1×10¹⁰ клеток/м². Соответственно, NK-клетки вводятся в количестве примерно от 1×10⁹ до 1×10¹⁰ клеток/м². Соответственно, NK-клетки вводятся в количестве примерно от 1×9⁷ до 1×10¹⁰ клеток/м². Соответственно, NK-клетки вводятся в количестве примерно от 1×8⁷ до 1×10¹⁰ клеток/м². Соответственно, NK-клетки вводятся в количестве примерно от 1×9⁸ до 1×10¹⁰ клеток/м². Выведенные NK-клетки могут вводиться ежедневно, еженедельно или ежемесячно. Соответственно, на еженедельной основе клетки вводятся в течение двух, трех, четырех, пяти, шести, семи, восьми, девяти, десяти, одиннадцати, двенадцати и более недель. Соответственно, после еженедельного введения выведенные NK-клетки могут вводиться ежемесячно для поддержания достаточного уровня. Клетки могут вводиться способом, подходящим для определенного ракового заболевания. Например, в случае гематологической злокачественной опухоли клетки могут вводиться внутривенно. Например, в случае солидной опухоли тканей для введения клеток может применяться внутриопухолевый или внутрибрюшинный способ.

Вспомогательные лекарственные средства при лечении

[0092] Введение вспомогательного лекарственного средства при лечении перед, в процессе или после введения выведенной NK-клетки может увеличить эффективность лечения. Соответственно, вспомогательное лекарственное средство включает интерлейкин-2 (IL-2), интерлейкин-8 (IL-8), интерлейкин-12 (IL-12), интерлейкин-15 (IL-15) или ингибитор протеасом. Соответственно, ингибиторы протесаом представляют собой Бортезомиб, Карфилзомиб, Иксазомиб или их комбинацию. Соответственно, любой из IL-2, IL-8, IL-12, IL-15 или ингибитор протеасом можно вводить пациенту перед введением выведенной NK-клетки. Соответственно, любой из IL-2, IL-8, IL-12, IL-15 или ингибитор протеасом можно вводить пациенту в процессе введения выведенной NK-клетки. Соответственно, любой из IL-2, IL-8, IL-12, IL-15 или ингибитор протеасом можно вводить пациенту после введения выведенной NK-клетки. Соответственно, активность IL-2, IL-8, IL-12, IL-15 может обеспечиваться с помощью неинтерлейкинового агониста, для рецепторов L-2, IL8, IL-12 и IL-15. Например, агонист интерлейкина-12 может быть ALT-803 или ALT-801; агонист интерлейкина-15 может быть NIZ985.

[0093] Соответственно, выведенная NK-клетка может выдерживаться с интерлейкином-12, интерлейкином-15 или ингибитором протеасом перед введением выведенной NK-клетки. Соответственно, NK-клетка CAR CD38 может выдерживаться с интерлейкином-12, интерлейкином-15 или Бортезомибом перед введением. Соответственно, NK-клетка с вариантом TRAIL может выдерживаться с IL-2, IL-8, IL-12, IL-15 или ингибитором протеасом перед введением. Соответственно, выдержка длится как минимум 4, 6, 8, 12 или 24 часа.

[0094] Методы лечения по настоящему изобретению предусматривают введения малой дозы циклофосфамида в качестве вспомогательного лекарственного средства для улучшения лечения посредством выведенных NK-клеток. Циклофосфамид может вводиться перорально и внутривенно. Соответственно, ввод циклофосфамида осуществляется периодически, например, последовательными небольшими дозами. Соответственно, циклофосфамид вводится перорально при дозе примерно от 100 мг до 250 мг в день или через день в течение одной, двух, трех, четырех или более недель. Соответственно, циклофосфамид вводится перорально при дозе примерно 50 мг в день в течение одной, двух, трех, четырех или более недель. Соответственно, циклофосфамид вводится внутривенно при дозе примерно от 1000 мг до 250 мг в неделю в течение одной, двух, трех, четырех или более недель. Соответственно, циклофосфамид вводится внутривенно при дозе примерно 750 мг, 500 мг и 250 мг или менее в неделю в течение одной, двух, трех, четырех или более недель. Соответственно, циклофосфамид вводится перед введением выведенных NK-клеток и прекращается сразу после введения NK-клеток. Соответственно, циклофосфамид вводится для взаимодействия с введением выведенных NK-клеток на один, два, три, четыре, пять или шесть месяцев. Соответственно, циклофосфамид вводится одновременно с введением выведенных NK-клеток.

[0095] Методы лечения по настоящему изобретению предусматривают введение ингибитора металлопротеиназы в качестве вспомогательного лекарственного средства для улучшения лечения посредством выведенных NK-клеток. Соответственно, ингибитор металлопротеиназы представляет собой тетрациклиновый антибиотик, такой как Доксициклин, Миноциклин, Тайгециклин, Демеклоциклин, Метациклин, Хлортетрациклин, Окситетрациклин, Лимециклин, Меклоциклин или Ролитетрациклин. Соответственно, тетрациклиновый антибиотик представляет собой Доксициклин. Соответственно, лица, проходящие лечение с применением выведенных NK-клеток по настоящему изобретению, предварительно или параллельно проходят лечение с применением Доксициклина при концентрации примерно от 50 мг до 300 мг в день или при концентрации примерно от 100 мг до 200 мг в день. Доксициклин может вводиться перорально и внутривенно. Соответственно, лица могут проходить лечение с применением Доксициклина одновременно с применением выведенных NK-клеток.

[0096] Методы лечения по настоящему изобретению предусматривают дополнительные вспомогательные лекарственные средства, которые сенсибилизируют клетки для уничтожения NK-клетками и могут вводиться пациенту вместе с выведенными NK-клетками или отдельно. Например, раковая клетка может быть устойчивой к апоптозу, вызванному TRAIL. Соответственно, вспомогательное лекарственное средство представляет собой малую молекулу, которая восстанавливает восприимчивость к апоптозу, вызванному TRAIL. Соответственно, соединение представляет собой миметик SMAC, например, TL32711, LCL161, GDC-0917, HGS1029; ингибитор NF-кВ, например, (-)-DHMEQ, PBS-1086, IT-603 или IT-901; гистонде ацетил азу, например, MLN4924; ингибитор гистондеацетилазы (HDAC), например, Панобиностат, Вориностат, Ромидепсин, Хидамид, Белиностат, Вальпроевая кислота, Моцетиностат, Абексиностат, Энтиностат, SB939, Гивиностат, Квизиностат, Ресминостат. Также предусматривается вспомогательное лекарственное средство, которое представляет собой ингибитор апоптоза, ингибирующий протеин, например: ингибитор BCL-2, например, Венетоклакс (АВТ-199) или Обатоклакс (GX15-070); ингибитор сурвивина, например, YM15 или шефердин. Соответственно, вспомогательное лекарственное средство вводится перед введением выведенной NK-клетки. Соответственно, вспомогательное лекарственное средство вводится одновременно с введением выведенных NK-клеток.

Терапевтические показания

[0097] Выведенные клетки-естественные киллеры, экспрессирующие CAR CD38, по настоящему изобретению полезны для терапевтического воздействия на рак. Соответственно, раковое заболевание включает гематологическиую злокачественную опухоль (системы крови). Соответственно, гематологическая злокачественная опухоль включает множественную миелому, вялотекущую множественную миелому или миелому легкой цепи. Соответственно, гематологическая злокачественная опухоль относится к лейкозу. Соответственно, лейкоз включает острый лимфоцитарный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, острый миелогенный лейкоз, хронический миелолейкоз, лейкоз ворсистых клеток, Т-клеточный пролимфоцитарный лейкоз или лейкоз из больших зернистых лимфоцитов.

[0098] Соответственно, раковое заболевание, подлежащее лечению солидная опухоль тканей. Соответственно, солидная опухоль тканей представляет собой опухоль печени, включая гепатоцеллюлярную карциному; опухоль легкого; немелкоклеточный рак легкого; опухоль поджелудочной железы, включая аденокарциному или ацинозно-клеточную карциному поджелудочной железы; рак кишечника; рак желудка; рак почки, включая почечноклеточный рак (RCC) и переходно-клеточный рак (ТСС, также известен как карциома уротелиальной клетки); рак яичников; рак предстательной железы; рак молочной железы; или рак шейки матки.

Общая информация о химерных антигенных рецепторах

[0099] Соответственно, в настоящем документе описываются NK-клетки. Соответственно, выведенная NK-клетка демонстрирует высокий уровень лиганда для Е-селектина. Соответственно, выведенные NK-клетки, демонстрирующие высокий уровень связывания лиганда для Е-селектина, показывают уровень связывания НЕСА-452, превышающий уровень клетки NK-92. Соответственно, выведенная NK-клетка включает химерный антигенный рецептор. Соответственно, выведенная NK-клетка, которая включает химерный антигенный рецептор, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека. Соответственно, выведенная NK-клетка, которая включает химерный антигенный рецептор, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека; при этом вариантная молекула TRAIL человека включает три мутации аминокислот: G131R, N199R и К201Н. Соответственно, выведенная NK-клетка, которая включает химерный антигенный рецептор, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека; при этом вариантная молекула TRAIL человека включает две мутации аминокислот: D269H и E195R. Соответственно, выведенная NK-клетка, которая включает химерный антигенный рецептор и вариантную молекулу TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии молекулы ингибитора контрольных точек. Соответственно, выведенная NK-клетка, которая включает химерный антигенный рецептор и вариантную молекулу TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD96 (TACTILE). Соответственно, выведенная NK-клетка, которая включает химерный антигенный рецептор и вариантную молекулу TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD328 (SIGLEC7). Соответственно, выведенная NK-клетка, которая включает химерный антигенный рецептор и вариантную молекулу TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CTLA-4. Соответственно, выведенная NK-клетка, которая включает химерный антигенный рецептор и вариантную молекулу TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD279 (PD-1). Соответственно, выведенная NK-клетка, которая включает химерный антигенный рецептор и вариантную молекулу TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии как минимум двух ингибиторов контрольных точек, выбранных из CD96 (TACTILE), CD328 (SIGLEC7), CTLA-4 и CD279 (PD-1).

Раковые специфические антигены

[00100] Соответственно, в настоящем документе описываются NK-клетки. Соответственно, выведенная NK-клетка демонстрирует высокий уровень лиганда для Е-селектина. Соответственно, выведенные NK-клетки, демонстрирующие высокий уровень лиганда для Е-селектина, показывают уровень связывания НЕСА-452, превышающий уровень клетки NK-92. Соответственно, выведенная NK-клетка включает химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с раковым специфическим антигеном. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с раковым специфическим антигеном, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с раковым специфическим антигеном, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека; при этом вариантная молекула TRAIL человека включает три мутации аминокислот: G131R, N199R и К201Н. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с раковым специфическим антигеном, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека; при этом вариантная молекула TRAIL человека включает две мутации аминокислот: D269H и E195R. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с раковым специфическим антигеном и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии молекулы ингибитора контрольных точек. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с раковым специфическим антигеном и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD96 (TACTILE). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с раковым специфическим антигеном и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD328 (SIGLEC7). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с раковым специфическим антигеном и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CTLA-4. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с раковым специфическим антигеном и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD279 (PD-1). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с раковым специфическим антигеном и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии как минимум двух ингибиторов контрольных точек, выбранных из CD96 (TACTILE), CD328 (SIGLEC7), CTLA-4 и CD279 (PD-1).

Антигены, специфические для рака крови

[00101] Соответственно, в настоящем документе описываются NK-клетки. Соответственно, выведенная NK-клетка демонстрирует высокий уровень лиганда для Е-селектина. Соответственно, выведенные NK-клетки, демонстрирующие высокий уровень связывания лиганда для Е-селектина, показывают уровень связывания НЕСА-452, превышающий уровень клетки NK-92. Соответственно, выведенная NK-клетка включает химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с антигеном, специфическим для рака крови. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с антигеном, специфическим для рака крови, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с антигеном, специфическим для рака крови, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека; при этом вариантная молекула TRAIL человека включает три мутации аминокислот: G131R, N199R и K201H. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с антигеном, специфическим для рака крови, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека; при этом вариантная молекула TRAIL человека включает две мутации аминокислот: D269H и E195R. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с антигеном, специфическим для рака крови, и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии молекулы ингибитора контрольных точек. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с антигеном, специфическим для рака крови, и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD96 (TACTILE). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с антигеном, специфическим для рака крови, и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD328 (SIGLEC7). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с антигеном, специфическим для рака крови, и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CTLA-4. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с антигеном, специфическим для рака крови, и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD279 (PD-1). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с антигеном, специфическим для рака крови, и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии как минимум двух ингибиторов контрольных точек, выбранных из CD96 (TACTILE), CD328 (SIGLEC7), CTLA-4 и CD279 (PD-1).

CD319

[00102] Соответственно, в настоящем документе описываются NK-клетки. Соответственно, выведенная NK-клетка демонстрирует высокий уровень лиганда для Е-селектина. Соответственно, выведенные NK-клетки, демонстрирующие высокий уровень лиганда для Е-селектина, показывают уровень связывания НЕСА-452, превышающий уровень клетки NK-92. Соответственно, выведенная NK-клетка включает химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD319/SLAMF-7. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD319/SLAMF-7, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD319/SLAMF-7, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека; при этом вариантная молекула TRAIL человека включает три мутации аминокислот: G131R, N199R и K201H. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD319/SLAMF-7, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека; при этом вариантная молекула TRAIL человека включает две мутации аминокислот: D269H и E195R. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD319/SLAMF-7 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии молекулы ингибитора контрольных точек. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD319/SLAMF-7 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD96 (TACTILE). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD319/SLAMF-7 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD328 (SIGLEC7). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD319/SLAMF-7 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CTLA-4. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD319/SLAMF-7 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD279 (PD-1). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD319/SLAMF-7 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии как минимум двух ингибиторов контрольных точек, выбранных из CD96 (TACTILE), CD328 (SIGLEC7), CTLA-4 и CD279 (PD-1).

TNFRSF17

[00103] Соответственно, в настоящем документе описываются NK-клетки. Соответственно, выведенная NK-клетка демонстрирует высокий уровень лиганда для Е-селектина. Соответственно, выведенные NK-клетки, демонстрирующие высокий уровень лиганда для Е-селектина НЕСА, показывают уровень связывания НЕСА-452, превышающий уровень клетки NK-92. Соответственно, выведенная NK-клетка включает химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с TNFRSF17/BCMA. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с TNFRSF17/BCMA, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с TNFRSF17/BCMA, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека; при этом вариантная молекула TRAIL человека включает три мутации аминокислот: G131R, N199R и K201H. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с TNFRSF17/BCMA, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека; при этом вариантная молекула TRAIL человека включает две мутации аминокислот: D269H и E195R. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с TNFRSF17/BCMA и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии молекулы ингибитора контрольных точек. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с TNFRSF17/BCMA и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD96 (TACTILE). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с TNFRSF17/BCMA и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD328 (SIGLEC7). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с TNFRSF17/BCMA и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CTLA-4. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с TNFRSF17/BCMA и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD279 (PD-1). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с TNFRSF17/BCMA и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии как минимум двух ингибиторов контрольных точек, выбранных из CD96 (TACTILE), CD328 (SIGLEC7), CTLA-4 и CD279 (PD-1).

CD123

[00104] Соответственно, в настоящем документе описываются NK-клетки. Соответственно, выведенная NK-клетка демонстрирует высокий уровень лиганда для Е-селектина. Соответственно, выведенные NK-клетки, демонстрирующие высокий уровень лиганда для Е-селектина, показывают уровень связывания НЕСА-452, превышающий уровень клетки NK-92. Соответственно, выведенная NK-клетка включает химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD123/IL3-RA. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD123/IL3-RA, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD123/IL3-RA, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека; при этом вариантная молекула TRAIL человека включает три мутации аминокислот: G131R, N199R и К201Н. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD123/IL3-RA, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека; при этом вариантная молекула TRAIL человека включает две мутации аминокислот: D269H и E195R. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD123/IL3-RA и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии молекулы ингибитора контрольных точек. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD123/IL3-RA и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD96 (TACTILE). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD123/IL3-RA и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD328 (SIGLEC7). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD123/IL3-RA и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CTLA-4. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD123/IL3-RA и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD279 (PD-1). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD123/IL3-RA и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии как минимум двух ингибиторов контрольных точек, выбранных из CD96 (TACTILE), CD328 (SIGLEC7), CTLA-4 и CD279 (PD-1).

CD138

[00105] Соответственно, в настоящем документе описываются NK-клетки. Соответственно, выведенная NK-клетка демонстрирует высокий уровень лиганда для Е-селектина. Соответственно, выведенные NK-клетки, демонстрирующие высокий уровень лиганда для Е-селектина, показывают уровень связывания НЕСА-452, превышающий уровень клетки NK-92. Соответственно, выведенная NK-клетка включает химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с SYND1/CD138. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с SYND1/CD138, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с SYND1/CD138, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека; при этом вариантная молекула TRAIL человека включает три мутации аминокислот: G131R, N199R и K201H. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с SYND1/CD138, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека; при этом вариантная молекула TRAIL человека включает две мутации аминокислот: D269H и E195R. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с SYND1/CD138 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии молекулы ингибитора контрольных точек. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с SYND1/CD138 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD96 (TACTILE). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с SYND1/CD138 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD328 (SIGLEC7). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с SYND1/CD138 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CTLA-4. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с SYND1/CD138 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD279 (PD-1). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с SYND1/CD138 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии как минимум двух ингибиторов контрольных точек, выбранных из CD96 (TACTILE), CD328 (SIGLEC7), CTLA-4 и CD279 (PD-1).

CD229

[00106] Соответственно, в настоящем документе описываются NK-клетки. Соответственно, выведенная NK-клетка демонстрирует высокий уровень лиганда для Е-селектина. Соответственно, выведенные NK-клетки, демонстрирующие высокий уровень лиганда для Е-селектина, показывают уровень связывания НЕСА-452, превышающий уровень клетки NK-92. Соответственно, выведенная NK-клетка включает химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD229. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD229, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD229, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека; при этом вариантная молекула TRAIL человека включает три мутации аминокислот: G131R, N199R и K201H. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD229, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека; при этом вариантная молекула TRAIL человека включает две мутации аминокислот: D269H и E195R. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD229 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии молекулы ингибитора контрольных точек. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD229 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD96 (TACTILE). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD229 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD328 (SIGLEC7). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD229 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CTLA-4. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD229 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD279 (PD-1). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD229 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии как минимум двух ингибиторов контрольных точек, выбранных из CD96 (TACTILE), CD328 (SIGLEC7), CTLA-4 и CD279 (PD-1).

CD47

[00107] Соответственно, в настоящем документе описываются NK-клетки. Соответственно, выведенная NK-клетка демонстрирует высокий уровень лиганда для Е-селектина. Соответственно, выведенные NK-клетки, демонстрирующие высокий уровень лиганда для Е-селектина, показывают уровень связывания НЕСА-452, превышающий уровень клетки NK-92. Соответственно, выведенная NK-клетка включает химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD47. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD47, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD47, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека; при этом вариантная молекула TRAIL человека включает три мутации аминокислот: G131R, N199R и K201H. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD47, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека; при этом вариантная молекула TRAIL человека включает две мутации аминокислот: D269H и E195R. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD47 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии молекулы ингибитора контрольных точек. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD47 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD96 (TACTILE). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD47 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD328 (SIGLEC7). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD47 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CTLA-4. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD47 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD279 (PD-1). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD47 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии как минимум двух ингибиторов контрольных точек, выбранных из CD96 (TACTILE), CD328 (SIGLEC7), CTLA-4 и CD279 (PD-1).

CD20

[00108] Соответственно, в настоящем документе описываются NK-клетки. Соответственно, выведенная NK-клетка демонстрирует высокий уровень связывания лиганда для Е-селектина. Соответственно, выведенные NK-клетки, демонстрирующие высокий уровень лиганда для Е-селектина, показывают уровень связывания НЕСА-452, превышающий уровень клетки NK-92. Соответственно, выведенная NK-клетка включает химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD20. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD20, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD20, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека; при этом вариантная молекула TRAIL человека включает три мутации аминокислот: G131R, N199R и K201H. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD20, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека; при этом вариантная молекула TRAIL человека включает две мутации аминокислот: D269H и E195R. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD20 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии молекулы ингибитора контрольных точек. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD20 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD96 (TACTILE). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD20 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD328 (SIGLEC7). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD20 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CTLA-4. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD20 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD279 (PD-1). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD20 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии как минимум двух ингибиторов контрольных точек, выбранных из CD96 (TACTILE), CD328 (SIGLEC7), CTLA-4 и CD279 (PD-1).

CD19

[00109] Соответственно, в настоящем документе описываются NK-клетки. Соответственно, выведенная NK-клетка демонстрирует высокий уровень лиганда для Е-селектина. Соответственно, выведенные NK-клетки, демонстрирующие высокий уровень лиганда для Е-селектина, показывают уровень связывания НЕСА-452, превышающий уровень клетки NK-92. Соответственно, выведенная NK-клетка включает химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD19. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD 19, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD19, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека; при этом вариантная молекула TRAIL человека включает три мутации аминокислот: G131R, N199R и K201H. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD19, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека; при этом вариантная молекула TRAIL человека включает две мутации аминокислот: D269H и E195R. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD19 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии молекулы ингибитора контрольных точек. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD19 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD96 (TACTILE). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD19 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD328 (SIGLEC7). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD 19 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CTLA-4. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD19 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD279 (PD-1). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD19 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии как минимум двух ингибиторов контрольных точек, выбранных из CD96 (TACTILE), CD328 (SIGLEC7), CTLA-4 и CD279 (PD-1).

CD22

[00110] Соответственно, в настоящем документе описываются NK-клетки. Соответственно, выведенная NK-клетка демонстрирует высокий уровень лиганда для Е-селектина. Соответственно, выведенные NK-клетки, демонстрирующие высокий уровень лиганда для Е-селектина, показывают уровень связывания НЕСА-452, превышающий уровень клетки NK-92. Соответственно, выведенная NK-клетка включает химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD22. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD22, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD22, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека; при этом вариантная молекула TRAIL человека включает три мутации аминокислот: G131R, N199R и K201H. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD22, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека; при этом вариантная молекула TRAIL человека включает две мутации аминокислот: D269H и E195R. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD22 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии молекулы ингибитора контрольных точек. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD22 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD96 (TACTILE). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD22 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD328 (SIGLEC7). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD22 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CTLA-4. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD22 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD279 (PD-1). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD22 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии как минимум двух ингибиторов контрольных точек, выбранных из CD96 (TACTILE), CD328 (SIGLEC7), CTLA-4 и CD279 (PD-1).

MUC1

[00111] Соответственно, в настоящем документе описываются NK-клетки. Соответственно, выведенная NK-клетка демонстрирует высокий уровень лиганда для Е-селектина. Соответственно, выведенные NK-клетки, демонстрирующие высокий уровень лиганда для Е-селектина, показывают уровень связывания НЕСА-452, превышающий уровень клетки NK-92. Соответственно, выведенная NK-клетка включает химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с MUC1. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с MUC1, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с MUC1, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека; при этом вариантная молекула TRAIL человека включает три мутации аминокислот: G131R, N199R и K201H. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с MUC1, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека; при этом вариантная молекула TRAIL человека включает две мутации аминокислот: D269H и E195R. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с MUC1 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии молекулы ингибитора контрольных точек. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с MUC1 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD96 (TACTILE). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с MUC1 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD328 (SIGLEC7). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с MUC1 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CTLA-4. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с MUC1 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD279 (PD-1). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с MUC1 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии как минимум двух ингибиторов контрольных точек, выбранных из CD96 (TACTILE), CD328 (SIGLEC7), CTLA-4 и CD279 (PD-1).

MUC16

Соответственно, в настоящем документе описываются NK-клетки. Соответственно, выведенная NK-клетка демонстрирует высокий уровень лиганда для Е-селектина. Соответственно, выведенные NK-клетки, демонстрирующие высокий уровень лиганда для Е-селектина, показывают уровень связывания НЕСА-452, превышающий уровень клетки NK-92. Соответственно, выведенная NK-клетка включает химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с MUC16. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с MUC16, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с MUC16, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека; при этом вариантная молекула TRAIL человека включает три мутации аминокислот: G131R, N199R и K201H. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с MUC16, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека; при этом вариантная молекула TRAIL человека включает две мутации аминокислот: D269H и E195R. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с MUC16 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии молекулы ингибитора контрольных точек. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с MUC16 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD96 (TACTILE). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с MUC16 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD328 (SIGLEC7). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с MUC16 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CTLA-4. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с MUC16 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD279 (PD-1). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с MUC16 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии как минимум двух ингибиторов контрольных точек, выбранных из CD96 (TACTILE), CD328 (SIGLEC7), CTLA-4 и CD279 (PD-1).

Her2/Neu

[00112] Соответственно, в настоящем документе описываются NK-клетки. Соответственно, выведенная NK-клетка демонстрирует высокий уровень лиганда для Е-селектина. Соответственно, выведенные NK-клетки, демонстрирующие высокий уровень лиганда для Е-селектина, показывают уровень связывания НЕСА-452, превышающий уровень клетки NK-92. Соответственно, выведенная NK-клетка включает химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с Her2/Neu. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с Her2/Neu, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с Her2/Neu, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека; при этом вариантная молекула TRAIL человека включает три мутации аминокислот: G131R, N199R и К201Н. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с Her2/Neu, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека; при этом вариантная молекула TRAIL человека включает две мутации аминокислот: D269H и E195R. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с Her2/Neu и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии молекулы ингибитора контрольных точек. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с Her2/Neu и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD96 (TACTILE). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с Her2/Neu и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD328 (SIGLEC7). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с Her2/Neu и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CTLA-4. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с Her2/Neu и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD279 (PD-1). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с Her2/Neu и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии как минимум двух ингибиторов контрольных точек, выбранных из CD96 (TACTILE), CD328 (SIGLEC7), CTLA-4 и CD279 (PD-1).

Рецептор эпидермального фактора роста (EGFR)

[00113] Соответственно, в настоящем документе описываются NK-клетки. Соответственно, выведенная NK-клетка демонстрирует высокий уровень лиганда для Е-селектина. Соответственно, выведенные NK-клетки, демонстрирующие высокий уровень лиганда для Е-селектина, показывают уровень связывания НЕСА-452, превышающий уровень клетки NK-92. Соответственно, выведенная NK-клетка включает химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с EGFR. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с EGFR, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с EGFR, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека, при этом вариантная молекула TRAIL человека включает три мутации аминокислот: G131R, N199R и K201H. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с EGFR, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека, при этом вариантная молекула TRAIL человека включает две мутации аминокислот: D269H и E195R. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с EGFR и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии молекулы ингибитора контрольных точек. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с EGFR и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD96 (TACTILE). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с EGFR и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD328 (SIGLEC7). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с EGFR и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CTLA-4. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с EGFR и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD279 (PD-1). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с EGFR и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии как минимум двух ингибиторов контрольных точек, выбранных из CD96 (TACTILE), CD328 (SIGLEC7), CTLA-4 и CD279 (PD-1).

Мезотелин

[00114] Соответственно, в настоящем документе описываются NK-клетки. Соответственно, выведенная NK-клетка демонстрирует высокий уровень лиганда для Е-селектина. Соответственно, выведенные NK-клетки, демонстрирующие высокий уровень лиганда для Е-селектина, показывают уровень связывания НЕСА-452, превышающий уровень клетки NK-92. Соответственно, выведенная NK-клетка включает химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с мезотелином. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с мезотелином, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с мезотелином, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека, при этом вариантная молекула TRAIL человека включает три мутации аминокислот: G131R, N199R и K201H. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с мезотелином, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека, при этом вариантная молекула TRAIL человека включает две мутации аминокислот: D269H и E195R. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с мезотелином и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии молекулы ингибитора контрольных точек. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с мезотелином и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD96 (TACTILE). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с мезотелином и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD328 (SIGLEC7). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с мезотелином и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CTLA-4. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с мезотелином и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD279 (PD-1). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с мезотелином и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии как минимум двух ингибиторов контрольных точек, выбранных из CD96 (TACTILE), CD328 (SIGLEC7), CTLA-4 и CD279 (PD-1).

CLL-1

[00115] Соответственно, в настоящем документе описываются NK-клетки. Соответственно, выведенная NK-клетка демонстрирует высокий уровень лиганда для Е-селектина. Соответственно, выведенные NK-клетки, демонстрирующие высокий уровень лиганда для Е-селектина, показывают уровень связывания НЕСА-452, превышающий уровень клетки NK-92. Соответственно, выведенная NK-клетка включает химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CLL-1. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CLL-1, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CLL-1, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека, при этом вариантная молекула TRAIL человека включает три мутации аминокислот: G131R, N199R и К201Н. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CLL-1, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека, при этом вариантная молекула TRAIL человека включает две мутации аминокислот: D269H и E195R. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CLL-1 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии молекулы ингибитора контрольных точек. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CLL-1 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD96 (TACTILE). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CLL-1 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD328 (SIGLEC7). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CLL-1 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CTLA-4. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CLL-1 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD279 (PD-1). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CLL-1 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии как минимум двух ингибиторов контрольных точек, выбранных из CD96 (TACTILE), CD328 (SIGLEC7), CTLA-4 и CD279 (PD-1).

CD38

[00116] Соответственно, в настоящем документе описываются NK-клетки. Соответственно, выведенная NK-клетка демонстрирует высокий уровень лиганда для Е-селектина. Соответственно, выведенные NK-клетки, демонстрирующие высокий уровень лиганда для Е-селектина, показывают уровень связывания НЕСА-452, превышающий уровень клетки NK-92. Соответственно, выведенная NK-клетка включает химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека, при этом вариантная молекула TRAIL человека включает три мутации аминокислот: G131R, N199R и K201H. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека, при этом вариантная молекула TRAIL человека включает две мутации аминокислот: D269H и E195R. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии молекулы ингибитора контрольных точек. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD96 (TACTILE). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD328 (SIGLEC7). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CTLA-4. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD279 (PD-1). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии как минимум двух ингибиторов контрольных точек, выбранных из CD96 (TACTILE), CD328 (SIGLEC7), CTLA-4 и CD279 (PD-1).

CD38 (SEQ ID №: 1 и 2)

[00117] Соответственно, в настоящем документе описываются NK-клетки. Соответственно, выведенная NK-клетка демонстрирует высокий уровень лиганда для Е-селектина. Соответственно, выведенные NK-клетки, демонстрирующие высокий уровень лиганда для Е-селектина, показывают уровень связывания НЕСА-452, превышающий уровень клетки NK-92. Соответственно, выведенная NK-клетка включает химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38, включает целенаправленно воздействующий домен CAR, содержащий последовательность аминокислот, которая как минимум на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 1, и последовательность аминокислот, которая как минимум на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 2. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38, включает целенаправленно воздействующий домен CAR, содержащий последовательность аминокислот, которая как минимум на 95% идентична указанной в SEQ ID №: 1, и последовательность аминокислот, которая как минимум на 95% идентична указанной в SEQ ID №: 2. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38, включает целенаправленно воздействующий домен CAR, содержащий последовательность аминокислот, которая как минимум на 98% идентична указанной в SEQ ID №: 1, и последовательность аминокислот, которая как минимум на 98% идентична указанной в SEQ ID №: 2. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38, включает целенаправленно воздействующий домен CAR, содержащий последовательность аминокислот, которая на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 1, и последовательность аминокислот, идентичную изложенной в SEQ ID №:2. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38, включает целенаправленно воздействующий домен CAR, содержащий последовательность аминокислот, которая на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 1, и последовательность аминокислот, идентичную изложенной в SEQ ID №: 2. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека, при этом вариантная молекула TRAIL человека включает три мутации аминокислот: G131R, N199R и K201H. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека, при этом вариантная молекула TRAIL человека включает две мутации аминокислот: D269H и E195R. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии молекулы ингибитора контрольных точек. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD96 (TACTILE). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD328 (SIGLEC7). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CTLA-4. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD279 (PD-1). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии как минимум двух ингибиторов контрольных точек, выбранных из CD96 (TACTILE), CD328 (SIGLEC7), CTLA-4 и CD279 (PD-1).

CD38 (SEQ ID №: 3 и 4)

[00118] Соответственно, в настоящем документе описываются NK-клетки. Соответственно, выведенная NK-клетка демонстрирует высокий уровень лиганда для Е-селектина. Соответственно, выведенные NK-клетки, демонстрирующие высокий уровень лиганда для Е-селектина, показывают уровень связывания НЕСА-452, превышающий уровень клетки NK-92. Соответственно, выведенная NK-клетка включает химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38, включает целенаправленно воздействующий домен CAR, содержащий последовательность аминокислот, которая как минимум на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 3, и последовательность аминокислот, которая как минимум на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 4. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38, включает целенаправленно воздействующий домен CAR, содержащий последовательность аминокислот, которая как минимум на 95% идентична указанной в SEQ ID №: 3, и последовательность аминокислот, которая как минимум на 95% идентична указанной в SEQ ID №: 4. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38, включает целенаправленно воздействующий домен CAR, содержащий последовательность аминокислот, которая как минимум на 98% идентична указанной в SEQ ID №: 3, и последовательность аминокислот, которая как минимум на 98% идентична указанной в SEQ ID №: 4. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38, включает целенаправленно воздействующий домен CAR, содержащий последовательность аминокислот, которая на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 3, и последовательность аминокислот, идентичную изложенной в SEQ ID №: 4. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38, включает целенаправленно воздействующий домен CAR, содержащий последовательность аминокислот, которая на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 3, и последовательность аминокислот, идентичную изложенной в SEQ ID №: 4. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека, при этом вариантная молекула TRAIL человека включает три мутации аминокислот: G131R, N199R и K201H. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека, при этом вариантная молекула TRAIL человека включает две мутации аминокислот: D269H и E195R. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии молекулы ингибитора контрольных точек. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD96 (TACTILE). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD328 (SIGLEC7). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CTLA-4. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD279 (PD-1). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии как минимум двух ингибиторов контрольных точек, выбранных из CD96 (TACTILE), CD328 (SIGLEC7), CTLA-4 и CD279 (PD-1).

CD38 (SEQ ID №: 5 и 6)

[00119] Соответственно, в настоящем документе описываются NK-клетки. Соответственно, выведенная NK-клетка демонстрирует высокий уровень лиганда для Е-селектина. Соответственно, выведенные NK-клетки, демонстрирующие высокий уровень лиганда для Е-селектина, показывают уровень связывания НЕСА-452, превышающий уровень клетки NK-92. Соответственно, выведенная NK-клетка включает химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38, включает целенаправленно воздействующий домен CAR, содержащий последовательность аминокислот, которая как минимум на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 5, и последовательность аминокислот, которая как минимум на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 6. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38, включает целенаправленно воздействующий домен CAR, содержащий последовательность аминокислот, которая как минимум на 95% идентична указанной в SEQ ID №: 5, и последовательность аминокислот, которая как минимум на 95% идентична указанной в SEQ ID №: 6. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38, включает целенаправленно воздействующий домен CAR, содержащий последовательность аминокислот, которая как минимум на 98% идентична указанной в SEQ ID №: 5, и последовательность аминокислот, которая как минимум на 98% идентична указанной в SEQ ID №: 6. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38, включает целенаправленно воздействующий домен CAR, содержащий последовательность аминокислот, которая на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 5, и последовательность аминокислот, идентичную изложенной в SEQ ID №: 6. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38, включает целенаправленно воздействующий домен CAR, содержащий последовательность аминокислот, которая на 90% идентична указанной в SEQ ID №: 5, и последовательность аминокислот, идентичную изложенной в SEQ ID №: 6. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека, при этом вариантная молекула TRAIL человека включает три мутации аминокислот: G131R, N199R и K201H. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38, дополнительно включает вариантную молекулу TRAIL человека, при этом вариантная молекула TRAIL человека включает две мутации аминокислот: D269H и E195R. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии молекулы ингибитора контрольных точек. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD96 (TACTILE). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD328 (SIGLEC7). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CTLA-4. Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии CD279 (PD-1). Соответственно, выведенная NK-клетка, включающая химерный антигенный рецептор, который специфически связывается с CD38 и вариантной молекулой TRAIL человека, дополнительно включает делецию или снижение экспрессии как минимум двух ингибиторов контрольных точек, выбранных из CD96 (TACTILE), CD328 (SIGLEC7), CTLA-4 и CD279 (PD-1).

[00120] Настоящее изобретение обеспечивает, в частности, следующие варианты осуществления:

Фармацевтическая композиция, включающая выведенную естественную клетку-киллера, при этом выведенная естественная клетка-киллер преимущественно демонстрирует высокий уровень экспрессии лиганда для Е-селектина на клеточной поверхности, при этом выведенная естественная клетка-киллер включает химерный антигенный рецептор (CAR).

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что выведенная естественная клетка-киллер включает множество выведенных естественных клеток-киллеров, более 25% которых демонстрируют положительную реакцию на связь с антигеном посредством антитела НЕСА-452.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что выведенная естественная клетка-киллер демонстрирует низкий уровень экспрессии рецептора TRAIL на клеточной поверхности, при этом рецептор TRAIL включает TNFRSF10A (DR4) или TNFRSF10B (DR5).

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что выведенная естественная клетка-киллер включает первичную выведенную естественную клетку-киллера.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что выведенная естественная клетка-киллер включает трансформированную линию первичной естественной клетки-киллера.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что трансформированная линия естественных клеток-киллеров представляет собой линии клеток NK-92 или KHYG-1.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что трансформированная линия естественных клеток-киллеров представляет собой линию клеток KHYG-1.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что CAR специфически связывается с раковым антигеном.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что раковый специфический антиген включает CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF17/ВСМА, SYND1/CD138, CD229, CD47, Her2/Neu, рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, мезотелин, ЕрСАМ, MUC1, MUC16, антиген Tn, NEU5GC, NeuGcGM3, GD2, CLL-1 или HERV-K.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что раковый специфический антиген включает антиген, специфический для рака крови.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что антиген, специфический для рака крови, включает CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF17/ВСМА, SYND1/CD138, CD229, CD47, CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, или CLL-1.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что антиген, специфический для рака крови, включает CD38.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно воздействующего домена, которая как минимум на 80% идентична указанной в любой из композиций SEQ ID №: 1-6.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно воздействующего домена, которая как минимум на 90% идентична указанной в любой из композиций SEQ ID №: 1-6.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно воздействующего домена, которая как минимум на 95% идентична указанной в любой из композиций SEQ ID №: 1-6.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно воздействующего домена, которая как минимум на 98% идентична указанной в любой из композиций SEQ ID №: 1-6.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно воздействующего домена, которая по крайней мере идентична указанной в любой из композиций SEQ ID №: 1-6.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно воздействующего домена, которая как минимум на 90% идентична указанной в композициях SEQ ID №: 1 и 2.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно воздействующего домена, которая как минимум на 95% идентична указанной в композициях SEQ ID №: 1 и 2.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно воздействующего домена, которая как минимум на 98% идентична указанной в композициях SEQ ID №: 1 и 2.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно воздействующего домена, которая идентична указанной в композициях SEQ ID №: 1 и 2.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно воздействующего домена, которая как минимум на 90% идентична указанной в композициях SEQ ID №: 3 и 4.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно воздействующего домена, которая как минимум на 95% идентична указанной в композициях SEQ ID №: 3 и 4.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно воздействующего домена, которая как минимум на 98% идентична указанной в композициях SEQ ID №: 3 и 4.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно воздействующего домена, которая идентична указанной в композициях SEQ ID №: 3 и 4.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно воздействующего домена, которая как минимум на 90% идентична указанной в композициях SEQ ID №: 5 и 6.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно воздействующего домена, которая как минимум на 95% идентична указанной в композициях SEQ ID №: 5 и 6.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно воздействующего домена, которая как минимум на 98% идентична указанной в композициях SEQ ID №: 5 и 6.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно воздействующего домена, которая идентична указанной в композициях SEQ ID №: 5 и 6.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что CAR включает в себя трансмембранный домен, получаемый из альфа-белка CD8 человека. Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что CAR включает DAP 10, DAP12, 2В4 (CD244), или человеческий белок 4-1ВВ.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что CAR включает человеческий белок 4-1ВВ.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что CAR включает человеческий дзета-белок CD3.

Вариант осуществления фармацевтической композиции отличающийся тем, что CAR включает в себя целенаправленно воздействующий домен, полученный из антитела, которое демонстрирует более низкую аффинность к CD38, чем Даратумумаб.

Вариант осуществления фармацевтической композиции дополнительно включает второй химерный антигенный рецептор, представляющий собой CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF17/BCMA, SYND1/CD138, CD229, CD47, Her2/Neu, рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, мезотелин, ЕрСАМ, MUC1, MUC16, антиген Tn, NEU5GC, NeuGcGM3, GD2, CLL-1 или HERV-K.

36. Вариант осуществления фармацевтической композиции по п.п. 1-35 дополнительно включает мутантный полипетид TNF-связанного апоптоз-индуцирующего лиганда (TRAIL), при этом мутантный полипептид TRAIL приводит к более интенсивной сигнализации или обладает увеличенной аффинностью связывания с лигандом TRAIL.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что лиганд TRAIL включает TNFRSF10A (DR4) или TNFRSF10B (DR5).

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что мутантный полипептид TRAIL включает мутацию D269H/E195R человеческого TRAIL. Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что мутантный полипептид TRAIL включает мутацию G131R/N199R/K201H человеческого TRAIL.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что CAR или мутантный полипептид TRAIL встраивается в геном выведенной естественной клетки-киллера.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что выведенная естественная клетка-киллер дополнительно включает делецию или уменьшение активности ингибирующего рецептора контрольной точки.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что ингибирующий рецептор контрольной точки включает в себя CD85d, CD85j, CD96, CD152, CD159a, CD223, CD279, CD328, SIGLEC9, TIGIT или TIM-3.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что ингибирующий рецептор контрольной точки включает в себя CD96, CD152, или CD328.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что ингибирующий рецептор контрольной точки включает в себя CD96.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что ингибирующий рецептор контрольной точки включает в себя CD152.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что ингибирующий рецептор контрольной точки включает в себя CD328.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что выполняется полная или частичная делеция ингибирующего рецептора контрольной точки из генома выведенной естественной клетки-киллера или его разрыв посредством вставки или делеции одного или нескольких нуклеотидов на хромосомном уровне.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что выведенная естественная клетка-киллер дополнительно включает малую интерферирующую РНК, которая выявляет ингибирующий рецептор контрольной точки.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, дополнительно включает в себя фармацевтически приемлемый носитель, стабилизирующий агент или эксципиент.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что фармацевтическая композиция формулируется для интраперитонеального введения. Вариант осуществления фармацевтической композиции, где она формулируется для внутривенного введения.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, где она применяется в лечении раковых заболеваний.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что к раковым заболеваниям относятся лейкемия, лимфома или миелома.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что к раковым заболеваниям относится множественная миелома.

Настоящее изобретение обеспечивает, в частности, также способ лечения рака, включающий введение пациенту фармацевтической композиции, включающей в себя выведенную естественную клетку-киллера, при этом выведенная естественная клетка-киллер демонстрирует высокий уровень экспрессии лиганда для Е-селектина на клеточной поверхности, при этом выведенная естественная клетка-киллер включает химерный антигенный рецептор (CAR).

Способ в варианте осуществления, отличающийся тем, что выведенная естественная клетка-киллер включает множество выведенных естественных клеток-киллеров, более 25% которых демонстрируют положительную реакцию на связь с антигеном посредством антитела НЕСА-452.

Способ в варианте осуществления, отличающийся тем, что выведенная естественная клетка-киллер демонстрирует низкий уровень экспрессии рецептора TRAIL на клеточной поверхности, при этом рецептор TRAIL включает TNFRSF10A (DR4) или TNFRSF10B (DR5).

Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что выведенная естественная клетка-киллер включает первичную выведенную естественную клетку-киллера.

Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что выведенная естественная клетка-киллер включает трансформированную линию первичной естественной клетки-киллера.

Способ в варианте осуществления, отличающийся тем, что трансформированная линия естественных клеток-киллеров представляет собой линии клеток NK-92 или KHYG-1.

Способ в варианте осуществления, отличающийся тем, что трансформированная линия клеток - естественных киллеров представляет собой линию клеток KHYG-1.

Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что CAR специфически связывается с раковым антигеном.

Способ в варианте осуществления, отличающийся тем, что раковый специфический антиген включает CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF17/ВСМА, SYND1/CD138, CD229, CD47, Her2/Neu, рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, мезотелин, ЕрСАМ, MUC1, MUC16, антиген Tn, NEU5GC, NeuGcGM3, GD2, CLL-1 или HERV-K.

Способ в варианте осуществления, отличающийся тем, что раковый специфический антиген включает антиген, специфический для рака крови.

Способ в варианте осуществления, отличающийся тем, что антиген, специфический для рака крови, включает CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF17/ВСМА, SYND1/CD138, CD229, CD47, CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, или CLL-1.

Способ в варианте осуществления, отличающийся тем, что антиген, специфический для рака крови, включает CD38.

Способ в варианте осуществления, отличающийся тем, что CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно воздействующего домена, которая как минимум на 80% идентична указанной в любой из композиций SEQ ID №: 1-6.

Способ в варианте осуществления, отличающийся тем, что CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно воздействующего домена, которая как минимум на 90% идентична указанной в любой из композиций SEQ ID №: 1-6.

Способ в варианте осуществления, отличающийся тем, что CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно воздействующего домена, которая как минимум на 95% идентична указанной в любой из композиций SEQ ID №: 1-6.

Способ в варианте осуществления, отличающийся тем, что CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно воздействующего домена, которая как минимум на 98% идентична указанной в любой из композиций SEQ ID №: 1-6.

Способ в варианте осуществления, отличающийся тем, что CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно воздействующего домена, которая идентична указанной в любой из композиций SEQ ID №: 1-6.

Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что CAR включает в себя трансмембранный домен, получаемый из человеческого белка CD8.

Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что CAR включает в себя DAP 10, DAP12, В4 (CD244) или человеческий белок 4-1ВВ.

Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что CAR включает человеческий белок 4-1ВВ.

Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что CAR включает человеческий дзета-белок CD3.

Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что выведенная клетка-естественный киллер включает второй химерный антигенный рецептор, представляющий собой CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF17/BCMA, SYND1/CD138, CD229, CD47, Her2/Neu, рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, мезотелин, ЕрСАМ, MUC1, MUC16, антиген Tn, NEU5GC, NeuGcGM3, GD2, CLL-1 или HERV-K.

Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что выведенная клетка-естественный киллер включает мутантный полипетид TNF-связанного апоптоз-индуцирующего лиганда (TRAIL), при этом мутантный полипептид TRAIL приводит к более интенсивной сигнализации или обладает увеличенной аффинностью связывания с лигандом TRAIL.

Способ в варианте осуществления, отличающийся тем, что лиганд TRAIL включает TNFRSF10A (DR4) или TNFRSF10B (DR5).

Способ в варианте осуществления, отличающийся тем, что мутантный полипептид TRAIL включает мутацию D269H/E195R человеческого TRAIL.

Способ в варианте осуществления, отличающийся тем, что мутантный полипептид TRAIL включает мутацию G131R/N199R/K201H человеческого TRAIL.

Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что CAR или мутантный полипептид TRAIL встраивается в геном выведенной клетки-естественного киллера.

Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что выведенная клетка - естественный киллер дополнительно включает делецию или уменьшение активности ингибирующего рецептора контрольной точки.

Способ в варианте осуществления, отличающийся тем, что ингибирующий рецептор контрольной точки включает в себя CD85d, CD85j, CD96, CD152, CD159a, CD223, CD279, CD328, SIGLEC9, TIGIT или TIM-3.

Способ в варианте осуществления, отличающийся тем, что ингибирующий рецептор контрольной точки включает в себя CD96, CD152, или CD328.

Способ в варианте осуществления, отличающийся тем, что ингибирующий рецептор контрольной точки включает в себя CD96.

Способ в варианте осуществления, отличающийся тем, что ингибирующий рецептор контрольной точки включает в себя CD152.

Способ в варианте осуществления, отличающийся тем, что ингибирующий рецептор контрольной точки включает в себя CD328.

Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что выполняется полная или частичная делеция ингибирующего рецептора контрольной точки из генома выведенной естественной клетки-киллера или его разрыв посредством вставки или делеции одного или нескольких нуклеотидов на хромосомном уровне.

Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что выведенная естественная клетка-киллер дополнительно включает малую интерферирующую РНК, которая выявляет ингибирующий рецептор контрольной точки.

Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что ингибирующий рецептор контрольной точки подвергается делеции из генома выведенных естественных клеток-киллеров.

Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что фармацевтическая композиция включает в себя фармацевтически приемлемый носитель, стабилизирующий агент или эксципиент.

Способ в варианте осуществления, отличающийся тем, что фармацевтическая композиция формулируется для внутривенного введения.

Способ в варианте осуществления, отличающийся тем, что фармацевтическая композиция формулируется для интраперитонеального введения.

Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что к раковым заболеваниям относятся лейкемия, лимфома или миелома.

Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что к раковым заболеваниям относится множественная миелома.

Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что фармацевтическая композиция вводится до, во время или после введения ингибитора протеасом.

Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что фармацевтическая композиция вводится до, во время или после курса лечения с периодическим приемом циклофосфамида в малых дозах.

Настоящее изобретение обеспечивает, в частности, также способ получения фармацевтической композиции, включающей в себя выведенную естественную клетку-киллера, при этом выведенная естественная клетка-киллер демонстрирует высокий уровень экспрессии лиганда для Е-селектина на клеточной поверхности, при этом выведенная естественная клетка-киллер включает химерный антигенный рецептор (CAR), при этом способ включает выдерживание естественной клетки-киллера с полинуклеотидом, кодирующим CAR.

Способ в варианте осуществления, отличающийся тем, что выведенная клетка-естественный киллер включает множество выведенных клеток-естественных киллеров, более 25% которых демонстрируют положительную реакцию на связь с антигеном посредством антитела НЕСА-452.

Способ в варианте, отличающийся тем, что выведенная клетка - естественный киллер демонстрирует низкий уровень экспрессии рецептора TRAIL на клеточной поверхности, при этом рецептор TRAIL включает TNFRSF10A (DR4) или TNFRSF10B (DR5). Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что выведенная клетка - естественный киллер включает первичную выведенную клетку - естественного киллера. Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что выведенная клетка - естественный киллер включает трансформированную линию первичной клетки - естественного киллера.

Способ в варианте осуществления, отличающийся тем, что трансформированная линия клеток - естественных киллеров представляет собой линии клеток NK-92 или KHYG-1.

Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что CAR специфически связывается с раковым антигеном.

Способ в варианте осуществления, отличающийся тем, что раковый специфический антиген включает CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF17/BCMA, SYND1/CD138, CD229, CD47, Her2/Neu, рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, мезотелин, ЕрСАМ, MUC1, MUC16, антиген Tn, NEU5GC, NeuGcGM3, GD2, CLL-1 или HERV-K.

Способ в варианте осуществления, отличающийся тем, что антиген, специфический для рака крови, включает CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF17/BCMA, SYND1/CD138, CD229, CD47, CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, или CLL-1.

Способ в варианте осуществления, отличающийся тем, что антиген, специфический для рака крови, включает CD38.

Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что CAR включает в себя трансмембранный домен, получаемый из полипептида человека CDS-альфа. Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что CAR включает внутриклеточный домен, включающий DAP10, DAP12, 2В4 (CD244), или человеческий белок 4-1ВВ.

Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что CAR включает полипептид человека 4-1ВВ.

Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что CAR включает полипептид человека CD3-дзета.

Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что CAR включает в себя целенаправленно воздействующий домен, который получается из антитела, демонстрирующего более низкую аффинность к CD38, чем Даратумумаб. Способ в вариантах осуществления дополнительно включает выдерживание выведенной естественной клетки-киллера с полинуклеотидом, кодирующим второй химерный антигенный рецептор, представляющий собой CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF17/BCMA, SYND1/CD138, CD229, CD47, Her2/Neu, рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, мезотелин, ЕрСАМ, MUC1, MUC16, антиген Tn, NEU5GC, NeuGcGM3, GD2, CLL-1 или HERV-K.

Способ в вариантах осуществления дополнительно включает выдерживание выведенной клетки - естественного киллера с полинуклеотидом, кодирующим мутантный полипетид TNF-связанного апоптоз-индуцирующего лиганда (TRAIL), при этом мутантный полипептид TRAIL приводит к более интенсивной сигнализации или обладает увеличенной аффинностью связывания с лигандом TRAIL.

Способ в варианте осуществления, отличающийся тем, что лиганд TRAIL включает TNFRSF10A (DR4) или TNFRSF10B (DR5).

Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что CAR или мутантный полинуклеотид TRAIL встраивается в геном выведенной естественной клетки-киллера.

Способ в вариантах осуществления дополнительно включает выдерживание выведенной клетки-естественного киллера с полинуклеотидом, обеспечивающим делецию или снижение активности ингибирующего рецептора контрольной точки.

Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что полинуклеотид включает вирусный вектор.

Способ в варианте осуществления, отличающийся тем, что вирусный вектор представляет собой лентивирус.

Способ в варианте осуществления, отличающийся тем, что вирусный вектор представляет собой ретровирус.

Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что полинуклеотид включает мРНК.

Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что полинуклеотид встраивается в геном выведенной клетки - естественного киллера.

Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что клетка подвергается химической обработке для увеличения ее фукозилирования.

Способ в вариантах осуществления, отличающийся тем, что дополнительно включает смешивание выведенных естественных клеток-киллеров с фармацевтически приемлемым носителем, стабилизирующим агентом или эксципиентом.

Настоящее изобретение обеспечивает, в частности, также фармацевтическую композицию, включающую выведенную естественную клетку-киллера, при этом выведенная естественная клетка-киллер демонстрирует экспрессию протеина FUT6 или FUT7, при этом выведенная клетка - естественный киллер включает химерный антигенный рецептор (CAR).

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что выведенная естественный клетка-киллер включает экзогенный полинуклеотид, кодирующий протеин FUT6 или FUT7.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что антиген, специфический для рака крови, включает CD38, CD319/SLAMF-7, TNFRSF 17/ВСМА, SYND1/CD138, CD229, CD47, CD123/IL3-RA, CD19, CD20, CD22, или CLL-1.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно воздействующего домена, которая как минимум на 90% идентична указанной в любой из композиций SEQ ID №: 1-6.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно воздействующего домена, которая как минимум на 95% идентична указанной в любой из композиций SEQ ID №: 1-6.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно воздействующего домена, которая как минимум на 98% идентична указанной в любой из композиций SEQ ID №: 1-6.

Вариант осуществления фармацевтической композиции, отличающийся тем, что CAR включает последовательность аминокислот целенаправленно воздействующего домена, которая идентична указанной в любой из композиций SEQ ID №: 1-6.