Антитела к pac1 и варианты их применения



C07K2317/52 - Пептиды (пептиды в пищевых составах A23, например получение белковых композиций для пищевых составов A23J, препараты для медицинских целей A61K; пептиды, содержащие бета-лактамовые кольца, C07D; циклические дипептиды, не содержащие в молекуле любого другого пептидного звена, кроме образующего их кольцо, например пиперазин-2,5-дионы, C07D; алкалоиды спорыньи циклического пептидного типа C07D519/02; высокомолекулярные соединения, содержащие статистически распределенные аминокислотные единицы в молекулах, т.е. при получении предусматривается не специфическая, а случайная последовательность аминокислотных единиц, гомополиамиды и блоксополиамиды, полученные из аминокислот, C08G 69/00; высокомолекулярные продукты, полученные из протеинов, C08H 1/00; получение

Владельцы патента RU 2781553:

ЭМДЖЕН ИНК. (US)

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложены нейтрализующие антитела к рецептору I типа гипофизарного полипептида человека, активирующего аденилатциклазу (PAC1), а также фармацевтические композиции, содержащие такие антитела. Также предложены полинуклеотиды, векторы экспрессии и клетки-хозяева для получения антител. Кроме того, описаны способы лечения или предупреждения состояний, связанных с головной болью, таких как мигрень и кластерная головная боль, с применением указанных нейтрализующих антител. Изобретение обеспечивает повышенную ингибирующую активность против PAC1 человека. 9 н. и 35 з.п. ф-лы, 20 ил., 24 табл., 7 пр.

 

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

Данная заявка испрашивает приоритет согласно предварительной заявке на патент США № 62/617157, поданной 12 января 2018 года, которая настоящим включена посредством ссылки во всей своей полноте.

ОПИСАНИЕ ТЕКСТОВОГО ФАЙЛА, ПОДАННОГО В ЭЛЕКТРОННОМ ВИДЕ

Настоящая заявка содержит перечень последовательностей, который был подан в электронном виде в формате ASCII и настоящим включен посредством ссылки во всей своей полноте. Копия перечня последовательностей в машиночитаемой форме, которая была создана 20 декабря 2018 года, называется A-2189-WO-PCT_SeqList_ST25 и имеет размер 490 килобайт.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к области биофармацевтических препаратов. В частности, настоящее изобретение относится к антителам, которые специфически связываются с рецептором I типа гипофизарного полипептида человека, активирующего аденилатциклазу (PAC1), и эффективно ингибируют его биологическую активность. Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим антитела, а также к способам получения и применения таких антител.

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Мигрени представляют собой эпизодические головные боли, которые могут включать значительную боль, часто сопровождаются тошнотой, рвотой и чрезвычайной чувствительностью к свету (фотофобией) и звуку (фонофобией), и иногда им предшествуют сенсорные предупреждающие симптомы или признаки (ауры). Мигрень представляет собой широко распространенное во всем мире заболевание: примерно 12% европейской популяции и 18% женщин, 6% мужчин в Соединенных Штатах страдают от приступов мигрени (Lipton et al, Neurology, Vol. 68:343-349, 2007; Lipton et al., Headache, Vol. 41:646-657, 2001). Исследование по оценке распространенности мигрени в Соединенных Штатах показало, что почти у половины популяции пациентов с мигренью было три или более мигреней в месяц (Lipton et al, Neurology, Vol. 68:343-349, 2007). Кроме того, мигрени связаны с рядом психиатрических и медицинских сопутствующих заболеваний, таких как депрессия и сосудистые нарушения (Buse et al., J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry, Vol. 81:428-432, 2010; Bigal et al., Neurology, Vol. 72:1864-1871, 2009). Большинство современных способов терапии мигрени либо плохо переносятся, либо являются неэффективными (Loder et al., Headache, Vol. 52:930-945, 2012; Lipton et al, 2001); таким образом, мигрень остается неудовлетворенной медицинской потребностью.

Основной компонент патогенеза мигрени включает активацию тригеминоваскулярной системы. Высвобождение тригеминального и парасимпатического нейротрансмиттеров из периваскулярных нервных волокон (Sánchez-del-Rio and Reuter, Curr. Opin. Neurol., Vol. 17(3):289-93, 2004) приводит к вазодилатации черепных кровеносных сосудов и, как предполагается, это связано с возникновением мигренозных головных болей (Edvinsson, Cephalagia, Vol. 33(13): 1070-1072, 2013; Goadsby et al., New Engl J Med., Vol. 346(4):257-270, 2002).

Гипофизарные активирующие аденилатциклазу полипептиды (PACAP) представляют собой пептиды из 38 аминокислот (PACAP38) или 27 аминокислот (PACAP27), которые впервые были выделены из овечьего гипоталамического экстракта на основании их способности стимулировать образование циклического AMP (cAMP) в клетках передней доли гипофиза (Miyata et al., Biochem Biophys Res Commun., Vol. 164:567-574, 1989; Miyata et al., Biochem Biophys Res Commun., Vol.170:643-648, 1990). PACAP принадлежит к суперсемейству VIP/секретин/глюкагон. Последовательность PACAP27 соответствует 27 N-концевым аминокислотам PACAP38 и характеризуется 68% идентичностью с вазоактивным интестинальным полипептидом (VIP) (Pantaloni et al., J. Biol. Chem., Vol. 271: 22146-22151, 1996; Pisegna and Wank, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 90: 6345-49, 1993; Campbell and Scanes, Growth Regul., Vol. 2:175-191, 1992). Основной формой пептида PACAP в организме человека является PACAP38, и фармакология PACAP38, как было показано, не отличается от фармакологии PACAP27. Сообщалось о трех рецепторах PACAP: один рецептор, который связывает PACAP с высокой аффинностью и характеризуется гораздо более низкой аффинностью к VIP (рецептор PAC1), и два рецептора, которые одинаково хорошо распознают PACAP и VIP (рецепторы VPAC1 и VPAC2) (Vaudry et al., Pharmacol Rev., Vol. 61:283-357, 2009).

Экспериментальные модели мигрени человека, применяющие PACAP в качестве провокационного вещества для индукции мигренеподобных головных болей, поддерживают подход к антагонизму сигнального пути PACAP/PAC1 в качестве лечения для профилактики мигрени. Уровень PACAP38 повышается в плазме крови во время спонтанных приступов мигрени у пациентов с мигренью, и эти повышенные уровни PACAP38 могут быть нормализованы с помощью суматриптана, терапевтического средства при острой мигрени (Tuka et al., Cephalalgia, Vol. 33: 1085-1095, 2013; Zagami et al., Ann. Clin. Transl. Neurol., Vol.1: 1036-1040, 2014). Инфузия PACAP38 вызывает головные боли у здоровых субъектов и мигренеподобные головные боли у пациентов с мигренью (Schytz et al., Brain, Vol. 132:16-25, 2009; Amin et al., Brain, Vol. 137: 779-794, 2014; Guo et al., Cephalalgia, Vol. 37:125-135, 2017). Однако в той же модели VIP не вызывает мигренеподобных головных болей у пациентов с мигренью (Rahmann et al., Cephalalgia, Vol. 28:226-236, 2008). Отсутствие индукции мигренеподобной головной боли от инфузии VIP предполагает, что влияние пептида PACAP38 опосредовано рецептором PAC1, а не рецепторами VPAC1 или VPAC2, так как VIP характеризуется гораздо более высокой аффинностью к последним двум рецепторам. Это мнение также подтверждается исследованиями на животных, в которых антагонисты рецептора PAC1 ингибируют ноцицептивную активность нейронов в тригеминоцервикальном комплексе в модели мигрени in vivo (Akerman et al., Sci. Transl. Med., Vol. 7: 308ra157, 2015; Hoffmann et al., Cephalalgia, Vol. 37 (1S): 3, Abstract OC-BA-004, 2017). Взятые вместе, эти данные предполагают, что фармакологические средства, которые ингибируют PACAP-активацию рецептора PAC1, обладают потенциалом к лечению мигрени.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение частично основано на разработке и получении антител с высокой аффинностью, которые специфически связываются с PAC1 человека и эффективно ингибируют его. Антитела по настоящему изобретению обладают повышенной ингибирующей активностью против PAC1 человека по сравнению с ранее описанными антителами к PAC1 при значениях IC50 в пикомолярном диапазоне. Выделенные антитела и их антигенсвязывающие фрагменты можно применять для ингибирования, подавления или модулирования биологической активности PAC1 человека, включая ингибирование или снижение индуцированной PACAP активации PAC1, подавление или снижение вазодилатации, а также снижение выраженности или лечение симптомов мигрени и других сосудистых головных болей.

В некоторых вариантах осуществления выделенные антитела и их антигенсвязывающие фрагменты специфически связываются с PAC1 человека по эпитопу, который содержит одну или несколько аминокислот, выбранных из Asp59, Asn60, Ile61, Arg116, Asn117, Thr119, Glu120, Asp121, Gly122, Trp123, Ser124, Glu125, Pro126, Phe127, Pro128, His129, Tyr130, Phe131, Asp132, и Gly135 под SEQ ID NO: 1. В определенных вариантах осуществления эпитоп содержит по меньшей мере аминокислоты Asn60, Ile61, Glu120 и Asp121 PAC1 человека. В этих и других вариантах осуществления антитела и антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат специфические аминокислоты в конкретных положениях в пределах вариабельных областей легкой цепи и тяжелой цепи, которые взаимодействуют с этими остатками эпитопа. Например, в одном варианте осуществления антитела или антигенсвязывающие фрагменты содержат вариабельную область легкой цепи, в которой аминокислота в положении 29 в соответствии с нумерацией AHo представляет собой основную аминокислоту (например, аргинин или лизин), которая взаимодействует с аминокислотами Glu120 или Asp121 PAC1 человека. В другом варианте осуществления антитела или антигенсвязывающие фрагменты содержат вариабельную область тяжелой цепи, в которой аминокислота в положении 61 в соответствии с нумерацией AHo представляет собой гидрофобную, основную или нейтральную гидрофильную аминокислоту (например, изолейцин, валин, лейцин, глутамин, аспарагин, аргинин или лизин), которая взаимодействует с аминокислотами Asn60 или Ile61 PAC1 человека. В еще одном варианте осуществления антитела или антигенсвязывающие фрагменты содержат вариабельную область тяжелой цепи, в которой аминокислота в положении 66 в соответствии с нумерацией AHo представляет собой основную или нейтральную гидрофильную аминокислоту (например, глутамин, аспарагин, аргинин или лизин), которая взаимодействует с аминокислотами Asn60 или Ile61 PAC1 человека.

Антитела к PAC1 и антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению способны ингибировать индуцированную лигандом активацию рецептора PAC1. Например, в некоторых вариантах осуществления антитела к PAC1 и антигенсвязывающие фрагменты ингибируют индуцированную PACAP активацию PAC1 человека при IC50, составляющей менее 500 пМ, как измерено с помощью клеточного анализа cAMP. В других вариантах осуществления антитела к PAC1 и антигенсвязывающие фрагменты ингибируют индуцированную PACAP активацию PAC1 человека при IC50, составляющей менее 300 пМ, как измерено с помощью клеточного анализа cAMP. В определенных вариантах осуществления антитела к PAC1 и антигенсвязывающие фрагменты ингибируют индуцированную PACAP активацию рецептора PAC1 человека при IC50, составляющей от приблизительно 50 пМ до приблизительно 500 пМ, как измерено с помощью клеточного анализа cAMP.

В некоторых вариантах осуществления антитела к PAC1 и антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению перекрестно реагируют с рецепторами PAC1 из других видов. В одном варианте осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты специфически связываются с рецептором PAC1 яванского макака и ингибируют его индуцированную PACAP активацию. В таком варианте осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты способны ингибировать индуцированную PACAP активацию рецептора PAC1 яванского макака при IC50, составляющей от приблизительно 0,1 нМ до приблизительно 1 нМ или от приблизительно 50 пМ до приблизительно 500 пМ, как измерено с помощью клеточного анализа cAMP. В другом варианте осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты специфически связываются с рецептором PAC1 крысы и ингибируют его индуцированную PACAP активацию. Антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты способны ингибировать индуцированную PACAP активацию рецептора PAC1 крысы при IC50, составляющей менее 10 нМ, например, при IC50, составляющей от приблизительно 0,1 нМ до приблизительно 10 нМ или от приблизительно 100 пМ до приблизительно 2 нМ, как измерено с помощью клеточного анализа cAMP.

В определенных вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую определяющие комплементарность области CDRL1, CDRL2 и CDRL3, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую определяющие комплементарность области CDRH1, CDRH2 и CDRH3. Вариабельные области легкой цепи и тяжелой цепи или CDR могут происходить из любого из антител к PAC1, описанных в данном документе. Например, в некоторых вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты содержат CDRL1, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 5-16; CDRL2, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 26; CDRL3, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 36-38; CDRH1, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 88-96; CDRH2, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 106-166; и CDRH3, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 171-177. В других вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты содержат CDRL1, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 17-25; CDRL2, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 27-35; CDRL3, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 39-51; CDRH1, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 97-105; CDRH2, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 167-170; CDRH3, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 178-190.

В некоторых вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность, которая на по меньшей мере 90% идентична или на по меньшей мере 95% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 54-66 и SEQ ID NO: 68-87. В этих и других вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность, которая на по меньшей мере 90% идентична или на по меньшей мере 95% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 191-312. В одном варианте осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 54-66 и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 191-295. В другом варианте осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 68-87 и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 296-312.

В любом из вариантов осуществления, описанных в данном документе, включая варианты осуществления, описанные выше, антитело к PAC1 или антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению представляет собой моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент. В некоторых вариантах осуществления моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляют собой химерное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент. В других вариантах осуществления моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляют собой гуманизированное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент. В еще одних вариантах осуществления моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляют собой полностью человеческое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент. Моноклональное антитело может быть любого изотипа, такого как IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 человека. В одном конкретном варианте осуществления моноклональное антитело представляет собой антитело IgG1 человека. В другом конкретном варианте осуществления моноклональное антитело представляет собой антитело IgG2 человека. Моноклональное антитело может содержать легкую цепь, которая содержит константную область каппа-цепи человека. В некоторых вариантах осуществления константная область каппа-цепи человека содержит последовательность под SEQ ID NO: 318 или под SEQ ID NO: 319. Таким образом, антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению могут содержать легкую цепь, которая содержит любую из последовательностей вариабельных областей легкой цепи, перечисленных в таблице 1A, слитую с константной областью каппа-цепи человека, содержащей последовательность под SEQ ID NO: 318 или SEQ ID NO: 319. В других вариантах осуществления моноклональное антитело может содержать легкую цепь, которая содержит константную область лямбда-цепи человека. В определенных вариантах осуществления константная область лямбда-цепи человека содержит последовательность под SEQ ID NO: 315. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению могут содержать легкую цепь, которая содержит любую из последовательностей вариабельных областей легкой цепи, перечисленных в таблице 1A, слитую с константной областью лямбда-цепи человека, содержащей последовательность под SEQ ID NO: 315.

В определенных вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению могут содержать одну или несколько модификаций, которые влияют на гликозилирование антитела или антигенсвязывающего фрагмента. В некоторых вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент содержит одну или несколько мутаций для снижения или устранения гликозилирования. В таких вариантах осуществления агликозилированное антитело может содержать в своей тяжелой цепи мутацию по аминокислотному положению N297 (согласно схеме нумерации EU), такую как мутация N297G. Агликозилированное антитело может содержать дополнительные мутации для стабилизации структуры антитела. Такие мутации могут включать пары замен цистеина, такие как A287C и L306C, V259C и L306C, R292C и V302C, а также V323C и I332C (аминокислотные положения согласно схеме нумерации EU). В одном варианте осуществления агликозилированное антитело содержит мутации R292C и V302C (согласно схеме нумерации EU) в своей тяжелой цепи. В определенных вариантах осуществления агликозилированное антитело к PAC1 содержит константную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 324 или SEQ ID NO: 325.

Настоящее изобретение также включает выделенные полинуклеотиды и векторы экспрессии, кодирующие антитела к PAC1 и антигенсвязывающие фрагменты, описанные в данном документе, а также клетки-хозяева, такие как клетки CHO, содержащие кодирующие полинуклеотиды и векторы экспрессии. В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение включает способы получения антител к PAC1 и антигенсвязывающих фрагментов, описанных в данном документе. В одном варианте осуществления способ включает культивирование клетки-хозяина, содержащей вектор экспрессии, кодирующий антитело к PAC1 или антигенсвязывающий фрагмент, в условиях, которые обеспечивают экспрессию антитела или антигенсвязывающего фрагмента, и выделение антитела или антигенсвязывающего фрагмента из культуральной среды или клетки-хозяина.

Антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты, описанные в данном документе, можно применять для производства фармацевтической композиции или лекарственного препарата для лечения или предупреждения состояний, связанных с биологической активностью PAC1, таких как головная боль, мигрень, кластерная головная боль и вазомоторные симптомы. Таким образом, в настоящем изобретении также предусмотрена фармацевтическая композиция, содержащая антитело к PAC1 или антигенсвязывающий фрагмент, описанный в данном документе, и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество. Фармацевтические композиции можно применять в любом из способов, описанных в данном документе.

В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрены способы лечения или предупреждения состояния, связанного с головной болью, у пациента, нуждающегося в этом, включающие введение пациенту эффективного количества антитела к PAC1 или антигенсвязывающего фрагмента, описанного в данном документе. В некоторых вариантах осуществления состояние, связанное с головной болью, подлежащее лечению или предупреждению с помощью способов по настоящему изобретению, представляет собой мигрень. Мигрень может представлять собой эпизодическую мигрень или хроническую мигрень. В других вариантах осуществления состояние, связанное с головной болью, подлежащее лечению или предупреждению с помощью способов по настоящему изобретению, представляет собой кластерную головную боль. В определенных вариантах осуществления в способах предусмотрено профилактическое лечение этих состояний.

В некоторых вариантах осуществления способов по настоящему изобретению способы включают введение пациенту второго терапевтического средства от головной боли в комбинации с антителом к PAC1 или антигенсвязывающим фрагментом по настоящему изобретению. Второе терапевтическое средство от головной боли может представлять собой терапевтическое средство от острой головной боли, такое как агонист рецепторов серотонина (например, агонист рецептора серотонина 5HT1B, 5HT1D и/или 5HT1F). В некоторых вариантах осуществления терапевтическое средство от острой головной боли представляет собой триптан, эрготамин, нестероидное противовоспалительное лекарственное средство или опиоид. В других вариантах осуществления второе терапевтическое средство от головной боли, подлежащее введению в комбинации с антителом к PAC1 или антигенсвязывающим фрагментом по настоящему изобретению, представляет собой профилактическое терапевтическое средство от головной боли, такое как противоэпилептическое средство, бета-блокатор, антидепрессант или онаботулотоксин А. Второе терапевтическое средство от головной боли можно вводить пациенту до, после или одновременно с антителом к PAC1 или антигенсвязывающим фрагментом по настоящему изобретению.

В определенных вариантах осуществления способов по настоящему изобретению способы включают введение пациенту антагониста пути CGRP в комбинации с антителом к PAC1 или антигенсвязывающим фрагментом по настоящему изобретению. Антагонист пути CGRP может являться антагонистом рецептора CGRP человека, таким как антитело, которое специфически связывается с рецептором CGRP человека. В одном варианте осуществления антагонист пути CGRP, вводимый в комбинации с антителом к PAC1 или антигенсвязывающим фрагментом по настоящему изобретению, представляет собой эренумаб. В других вариантах осуществления антагонист пути CGRP может являться антагонистом лиганда CGRP, таким как антитело, которое специфически связывается с α-CGRP и/или β-CGRP человека. В одном таком варианте осуществления антагонист пути CGRP, вводимый в комбинации с антителом к PAC1 или антигенсвязывающим фрагментом по настоящему изобретению, представляет собой фреманезумаб. В другом таком варианте осуществления антагонист пути CGRP, вводимый в комбинации с антителом к PAC1 или антигенсвязывающим фрагментом по настоящему изобретению, представляет собой галканезумаб. В еще одном таком варианте осуществления антагонист пути CGRP, вводимый в комбинации с антителом к PAC1 или антигенсвязывающим фрагментом по настоящему изобретению, представляет собой эптинезумаб.

Настоящее изобретение также включает способы подавления вазодилатации у пациента, нуждающегося в этом. В одном варианте осуществления способ включает введение пациенту эффективного количества любого из антител к PAC1 или антигенсвязывающих фрагментов, описанных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления пациент, нуждающийся в лечении, характеризуется состоянием, связанным с головной болью, таким как мигрень или кластерная головная боль. В других вариантах осуществления пациент, нуждающийся в лечении, характеризуется вазомоторными симптомами (например, приливами, покраснением лица, потливостью и ночными потливостями), такими как симптомы, связанные с менопаузой.

Конкретно предусмотрено применение антител к PAC1 или антигенсвязывающих фрагментов в любом из способов, раскрытых в данном документе, или для получения лекарственных препаратов для введения в соответствии с любым из способов, раскрытых в данном документе. Например, настоящее изобретение включает антитело к PAC1 или антигенсвязывающий фрагмент для применения в способе лечения или предупреждения состояния, связанного с головной болью, у пациента, нуждающегося в этом. Состояние, связанное с головной болью, включает мигрень (например, эпизодическую и хроническую мигрень) и кластерную головную боль. В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрено антитело к PAC1 или антигенсвязывающий фрагмент для применения в способе подавления вазодилатации у пациента, нуждающегося в этом. В таких вариантах осуществления у пациента может быть диагностировано состояние, связанное с головной болью, или он может характеризоваться состоянием, связанным с головной болью. В других вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрено антитело к PAC1 или антигенсвязывающий фрагмент для применения в способе подавления активации рецептора PAC1 человека у пациента, характеризующегося состоянием, связанным с головной болью. Состояние, связанное с головной болью, может представлять собой мигрень (например, эпизодическую или хроническую мигрень) или кластерную головную боль.

Настоящее изобретение также включает применение антитела к PAC1 или антигенсвязывающего фрагмента для получения лекарственного препарата для лечения или предупреждения состояния, связанного с головной болью, у пациента, нуждающегося в этом. Состояние, связанное с головной болью, включает мигрень (например, эпизодическую и хроническую мигрень) и кластерную головную боль. В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение охватывает применение антитела к PAC1 или антигенсвязывающего фрагмента для получения лекарственного препарата для подавления вазодилатации у пациента, нуждающегося в этом. В таких вариантах осуществления у пациента может быть диагностировано состояние, связанное с головной болью, или он может характеризоваться состоянием, связанным с головной болью. В других вариантах осуществления настоящее изобретение включает применение антитела к PAC1 или антигенсвязывающего фрагмента для получения лекарственного препарата для подавления активации рецептора PAC1 человека у пациента, характеризующегося состоянием, связанным с головной болью. Состояние, связанное с головной болью, может представлять собой мигрень (например, эпизодическую или хроническую мигрень) или кластерную головную боль.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

Фигура 1A представляет собой вид спереди кристаллической структуры комплекса между внеклеточным доменом (ECD) PAC1 человека и Fab-фрагментом антитела 29G4v9. VL=вариабельная область легкой цепи; CL=константная область легкой цепи; VH=вариабельная область тяжелой цепи; и CH1=константная область тяжелой цепи CH1.

Фигура 1B представляет собой вид сбоку кристаллической структуры комплекса между ECD PAC1 человека и Fab-фрагментом антитела 29G4v9. Вид отображает структуру, показанную на фиг. 1А, повернутую на 90° влево. Данный вид демонстрирует, что вариабельная область легкой цепи (VL) расположена позади вариабельной области тяжелой цепи (VH), а константная область легкой цепи (CL) расположена позади константной области тяжелой цепи CH1.

Фигура 2A представляет собой расширенный вид участка контакта между ECD PAC1 человека и CDR1 легкой цепи (аминокислоты 24-34 из SEQ ID NO: 3) Fab 29G4v9. Зона 1 содержит остатки Glu120 и Asp121 ECD PAC1 человека (SEQ ID NO: 1), тогда как зона 3 содержит остаток Phe127 ECD PAC1 человека.

Фигура 2B представляет собой расширенный вид участка контакта между ECD PAC1 человека и остатком Arg93 в CDR3 легкой цепи из Fab 29G4v9.

Фигура 3A представляет собой расширенный вид участка контакта между ECD PAC1 человека и аминокислотами Arg31 и Phe32 CDR1 тяжелой цепи из Fab 29G4v9. Две аминокислоты CDR1 тяжелой цепи лежат по обе стороны от остатка Phe131 ECD PAC1 человека.

Фигура 3B представляет собой расширенный вид участка контакта между областью ECD PAC1 человека, содержащей аминокислотные остатки Asn60 и Ile61 (относительно SEQ ID NO: 1), и аминокислотами Tyr53, Asp54 и Gly56 CDR2 тяжелой цепи из Fab 29G4v9.

Фигура 3C представляет собой расширенный вид участка контакта между ECD PAC1 человека и аминокислотами Val102, Leu103 и Thr104 CDR3 тяжелой цепи из Fab 29G4v9.

Фигура 4 представляет собой схему процесса отбора мутантных вариантов с улучшенным связыванием из библиотеки мутантных вариантов Fab антител на основе дрожжевого дисплея.

Фигура 5 представляет собой схему основывающегося на скорости диссоциации процесса отбора мутантных вариантов с высокой аффинностью связывания из библиотеки на основе дрожжевого дисплея.

На Фигуре 6 показан ингибирующий эффект антител к PAC1 при индуцированном максадиланом увеличении притока крови к коже у крыс. Одно из семи антител (420653, 420845, 420943, 421873, 420889 (PL-50347), 421091 (PL-50350) и 421051 (PL-50351)) вводили крысам внутривенно в дозе 0,1 мг/кг или 0,3 мг/кг за двадцать четыре часа до стимуляции 10 нг максадилана (внутрикожная инъекция). Приток крови к коже оценивали через 30 минут после стимуляции максадиланом посредством лазерной доплеровской визуализации. *p<0,05, **p<0,01 по сравнению с группой, получавшей носитель, с помощью однофакторного ANOVA с последующим MCT Даннетта.

На фигуре 7A показан дозозависимый эффект антитела 420653 к PAC1 при индуцированном максадиланом увеличении притока крови к коже у крыс. Антитело вводили крысам внутривенно в одной из семи доз, находящихся в диапазоне 0,01-3 мг/кг, за двадцать четыре часа до стимуляции 10 нг максадилана (внутрикожная инъекция). Приток крови к коже оценивали через 30 минут после стимуляции максадиланом посредством лазерной доплеровской визуализации. *p<0,05, ****p<0,0001 по сравнению с группой, получавшей носитель, с помощью однофакторного ANOVA с последующим MCT Даннетта.

На фигуре 7B показан дозозависимый эффект антитела 420845 к PAC1 при индуцированном максадиланом увеличении притока крови к коже у крыс. Антитело вводили крысам внутривенно в одной из пяти доз, находящихся в диапазоне 0,01-3 мг/кг, за двадцать четыре часа до стимуляции 10 нг максадилана (внутрикожная инъекция). Приток крови к коже оценивали через 30 минут после стимуляции максадиланом посредством лазерной доплеровской визуализации. ****p<0,0001 по сравнению с группой, получавшей носитель, с помощью однофакторного ANOVA с последующим MCT Даннетта.

На фигуре 7C показан дозозависимый эффект антитела 420943 к PAC1 при индуцированном максадиланом увеличении притока крови к коже у крыс. Антитело вводили крысам внутривенно в одной из шести доз, находящихся в диапазоне 0,1-30 мг/кг, за двадцать четыре часа до стимуляции 10 нг максадилана (внутрикожная инъекция). Приток крови к коже оценивали через 30 минут после стимуляции максадиланом посредством лазерной доплеровской визуализации. ****p<0,0001 по сравнению с группой, получавшей носитель, с помощью однофакторного ANOVA с последующим MCT Даннетта.

На фигуре 7D показан дозозависимый эффект антитела 421873 к PAC1 при индуцированном максадиланом увеличении притока крови к коже у крыс. Антитело вводили крысам внутривенно в одной из пяти доз, находящихся в диапазоне 0,3-30 мг/кг, за двадцать четыре часа до стимуляции 10 нг максадилана (внутрикожная инъекция). Приток крови к коже оценивали через 30 минут после стимуляции максадиланом посредством лазерной доплеровской визуализации. *p<0,05, ****p<0,0001 по сравнению с группой, получавшей носитель, с помощью однофакторного ANOVA с последующим MCT Даннетта.

Фигура 8A представляет собой профиль зависимости концентрации в сыворотке крови от времени для антител 420653, 420845, 420943 и 421873 к PAC1 после введения однократной внутривенной дозы 1 мг/кг у крыс.

Фигура 8B представляет собой профиль зависимости концентрации в сыворотке крови от времени для антител 420653, 420845, 420943 и 421873 к PAC1 после введения однократной внутривенной дозы 5 мг/кг у крыс.

Фигура 8C представляет собой профиль зависимости концентрации в сыворотке крови от времени для антител 420653, 420845, 420943 и 421873 к PAC1 после введения однократной внутривенной дозы 25 мг/кг у крыс.

Фигура 9 представляет собой профиль зависимости концентрации в сыворотке крови от времени для антител 420653, 420845, 420943, 421873 и 29G4v22 к PAC1 после введения однократной внутривенной дозы 10 мг/кг у яванских макаков.

На фигурах 10A и 10B во временной динамике показаны ингибирующие эффекты антител 420653 и 29G4v22 к PAC1 на индуцированное максадиланом увеличение притока крови к коже у яванских макаков. Двадцать четыре яванских макака получили однократную внутривенную болюсную инъекцию антитела 420653 в дозе 0,1 мг/кг или 3 мг/кг или антитела 29G4v22 в дозе 10 мг/кг в день 0. В дни 2, 4, 7, 10, 14, 21, 28 и 36 после введения доз антител измеряли ответы после введения максадилана. В каждом случае приток крови к коже измеряли посредством лазерной доплеровской визуализации через 30 минут после внутрикожной инъекции 1 нг максадилана. Все данные выражены в виде среднего значения ± стандартная ошибка среднего значения. На фигуре 10A показано изменение в % от исходного уровня притока крови к коже, индуцированное внутрикожной инъекцией максадилана в указанные дни после обработки антителами. *p<0,05, **p<0,01, ***p<0,001 по сравнению с днем 0 в той же группе обработки с помощью однофакторного ANOVA с последующим применением критерия множественных сравнений Бонферрони. Восемь животных в группе за исключением дня 36, когда четыре животных тестировали с применением антитела 420653 в дозе 3 мг/кг, как обозначено символом "^". На фигуре 10B показан ингибирующий эффект обработки антителами на индуцированное максадиланом увеличение притока крови к коже, выраженный в виде ингибирования в %. #p<0,05, ##p<0,01, ###p<0,001 сравнение между антителом 420653 при 3 мг/кг и антителом 29G4v22 при 10 мг/кг в каждый момент времени с помощью двухвыборочного непарного t-теста.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к выделенным антителам и их антигенсвязывающим фрагментам, которые специфически связываются с рецептором I типа гипофизарного полипептида, активирующего аденилатциклазу (PAC1), в частности PAC1 человека. Антитела по настоящему изобретению обладают повышенной ингибирующей активностью против PAC1 человека по сравнению с ранее описанными антагонистическими антителами к PAC1. Антитела по настоящему изобретению также перекрестно реагируют с рецептором PAC1 крысы и рецептором PAC1 яванского макака, что позволяет проводить доклиническую оценку in vivo антител у этих видов.

PAC1 человека представляет собой белок из 468 аминокислот (эталонная последовательность NCBI NP_001109.2), кодируемый геном ADCYAP1R1 на хромосоме 7. Рецептор PAC1 человека представляет собой сопряженный с G-белком рецептор, который положительно связан с аденилатциклазой. Активация рецептора PAC1 человека его эндогенными лигандами (например, PACAP38 или PACAP27) приводит к повышению уровня внутриклеточного циклического AMP (cAMP). Аминокислотная последовательность PAC1 человека представлена ниже под SEQ ID NO: 1.

1 MAGVVHVSLA ALLLLPMAPA MHSDCIFKKE QAMCLEKIQR ANELMGFNDS SPGCPGMWDN

61 ITCWKPAHVG EMVLVSCPEL FRIFNPDQVW ETETIGESDF GDSNSLDLSD MGVVSRNCTE

121 DGWSEPFPHY FDACGFDEYE SETGDQDYYY LSVKALYTVG YSTSLVTLTT AMVILCRFRK

181 LHCTRNFIHM NLFVSFMLRA ISVFIKDWIL YAEQDSNHCF ISTVECKAVM VFFHYCVVSN

241 YFWLFIEGLY LFTLLVETFF PERRYFYWYT IIGWGTPTVC VTVWATLRLY FDDTGCWDMN

301 DSTALWWVIK GPVVGSIMVN FVLFIGIIVI LVQKLQSPDM GGNESSIYLR LARSTLLLIP

361 LFGIHYTVFA FSPENVSKRE RLVFELGLGS FQGFVVAVLY CFLNGEVQAE IKRKWRSWKV

421 NRYFAVDFKH RHPSLASSGV NGGTQLSILS KSSSQIRMSG LPADNLAT

Аминокислоты 1-23 белка PAC1 человека (SEQ ID NO: 1) составляют сигнальный пептид, который обычно удален из зрелого белка. Зрелый белок PAC1 человека имеет основную структуру сопряженного с G-белком рецептора, состоящего из семи трансмембранных доменов, внеклеточного домена, состоящего из N-концевой области и трех внеклеточных петель, трех внутриклеточных петель и С-концевого цитоплазматического домена. N-концевой внеклеточный домен примерно находится в области, состоящей из аминокислот 24-153 из SEQ ID NO: 1, и первый из семи трансмембранных доменов начинается с аминокислоты 154 из SEQ ID NO: 1. С-концевой цитоплазматический домен примерно расположен в области, состоящей из аминокислот 397-468 из SEQ ID NO: 1. См. Blechman and Levkowitz, Front. Endocrinol., Vol. 4 (55): 1-19, 2013 для определения расположения доменов в пределах аминокислотной последовательности. Термины "PAC1 человека", "рецептор PAC1 человека", "hPAC1" и "рецептор hPAC1" применяются взаимозаменяемо и могут относиться к полипептиду под SEQ ID NO: 1, полипептиду под SEQ ID NO: 1 минус сигнальный пептид (аминокислоты 1-23), аллельным вариантам PAC1 человека или сплайс-вариантам PAC1 человека.

В настоящем изобретении предусмотрены антитела, которые специфически связываются с PAC1 человека. "Антитело" представляет собой белок, который содержит антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с антигеном, и остов или часть каркаса, что позволяет антигенсвязывающему фрагменту принимать конформацию, которая способствует связыванию антитела с антигеном. Применяемый в данном документе термин "антитело" обычно относится к тетрамерному белку-иммуноглобулину, содержащему два полипептида легкой цепи (приблизительно 25 кДа каждый) и два полипептида тяжелой цепи (приблизительно 50-70 кДа каждый). Термин "легкая цепь" или "легкая цепь иммуноглобулина" относится к полипептиду, содержащему от аминоконца к карбоксильному концу одну вариабельную область легкой цепи (VL) иммуноглобулина и один константный домен легкой цепи (CL) иммуноглобулина. Константный домен легкой цепи (CL) иммуноглобулина может представлять собой константный домен каппа-цепи (κ) человека или константный домен лямбда-цепи (λ) человека. Термин "тяжелая цепь" или "тяжелая цепь иммуноглобулина" относится к полипептиду, содержащему от аминоконца к карбоксильному концу одну вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина (VH), константный домен 1 тяжелой цепи иммуноглобулина (CH1), шарнирную область иммуноглобулина, константный домен 2 тяжелой цепи иммуноглобулина (CH2), константный домен 3 тяжелой цепи иммуноглобулина (CH3) и необязательно константный домен 4 тяжелой цепи иммуноглобулина (CH4). Тяжелые цепи классифицируют как мю- (μ), дельта- (Δ), гамма- (γ), альфа- (α) и эпсилон-(ε) цепи, и они определяют изотип антитела как IgM, IgD, IgG, IgA и IgE соответственно. Классы антител IgG и IgA дополнительно делят на подклассы, а именно IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4, а также IgA1 и IgA2 соответственно. Тяжелые цепи в антителах IgG, IgA и IgD содержат три константных домена (СН1, СН2 и СН3), тогда как тяжелые цепи в антителах IgM и IgE содержат четыре константных домена (СН1, СН2, СН3 и СН4). Константные домены тяжелой цепи иммуноглобулина могут происходить из иммуноглобулина любого изотипа, включая подтипы. Цепи антитела связаны друг с другом посредством межполипептидных дисульфидных связей между CL-доменом и CH1-доменом (т. е. между легкой и тяжелой цепями) и между шарнирными областями двух тяжелых цепей антитела.

Настоящее изобретение также включает антигенсвязывающие фрагменты антител к PAC1, описанных в данном документе. "Антигенсвязывающий фрагмент", применяемый в данном документе взаимозаменяемо со "связывающим фрагментом" или "фрагментом", представляет собой часть антитела, в которой отсутствуют по меньшей мере некоторые аминокислоты, присутствующие в полноразмерной тяжелой цепи и/или легкой цепи, но которая все еще способна специфически связываться с антигеном. Антигенсвязывающий фрагмент включает без ограничения одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv), нанотело (например, VH-домен тяжелой цепи верблюжьих антител; VHH-фрагмент , см. Cortez-Retamozo et al., Cancer Research, Vol. 64:2853-57, 2004), Fab-фрагмент, Fab'-фрагмент, F(ab')2-фрагмент, Fv-фрагмент, Fd-фрагмент и фрагмент определяющей комплементарность области (CDR), и может быть получен из любого источника, представляющего собой млекопитающее, такое как человек, мышь, крыса, кролик или верблюд. Антигенсвязывающие фрагменты могут конкурировать за связывание целевого антигена с интактным антителом, и фрагменты могут быть получены посредством модификации интактных антител (например, посредством ферментативного или химического расщепления) или синтеза de novo с применением технологий рекомбинантной ДНК или синтеза пептидов. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент содержит по меньшей мере одну CDR из антитела, которое связывается с антигеном, например, CDR3 тяжелой цепи из антитела, которое связывается с антигеном. В других вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент содержит все три CDR из тяжелой цепи антитела, которое связывается с антигеном, или все три CDR из легкой цепи антитела, которое связывается с антигеном. В еще других вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент содержит все шесть CDR из антитела, которое связывается с антигеном (три из тяжелой цепи и три из легкой цепи).

Термин "выделенная молекула" (где молекула представляет собой, например, полипептид, полинуклеотид, антитело или антигенсвязывающий фрагмент) означает молекулу, которая в силу своего происхождения или источника получения (1) не связана со связанными естественным путем компонентами, которые сопровождают ее в ее природном состоянии, (2) практически не содержит других молекул того же вида, (3) экспрессируется клеткой другого вида или (4) не встречается в природе. Таким образом, молекула, которая синтезирована химическим путем или экспрессируется в клеточной системе, отличной от клетки, из которой она происходит естественным путем, будет считаться "выделенной" из ее связанных естественным путем компонентов. Молекулу также можно сделать практически свободной от связанных естественным путем компонентов посредством выделения с применением методик очистки, хорошо известных из уровня техники. Чистоту или гомогенность молекулы можно оценивать с помощью ряда средств, хорошо известных из уровня техники. Например, чистоту образца полипептида можно оценивать с помощью электрофореза в полиакриламидном геле и окрашивания геля для визуализации полипептида с применением методик, хорошо известных из уровня техники. Для определенных целей более высокую разрешающую способность можно обеспечивать посредством применения HPLC или других средств для очистки, хорошо известных из уровня техники.

В определенных вариантах осуществления настоящего изобретения антитела или их антигенсвязывающие фрагменты специфически связываются с PAC1 человека. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент "специфически связывается" с целевым антигеном, если он обладает значительно более высокой аффинностью связывания и, следовательно, способен отличать этот антиген по сравнению с его аффинностью к другим неродственным белкам в аналогичных условиях анализа связывания. Антитела или антигенсвязывающие фрагменты, которые специфически связывают антиген, могут характеризоваться равновесной константой диссоциации (KD), составляющей ≤ 1×10-6 M. Антитело или связывающий фрагмент специфически связывает антиген с "высокой аффинностью", если KD составляет ≤ 1×10-8 M. В одном варианте осуществления антитела или связывающие фрагменты по настоящему изобретению связываются с PAC1 человека с KD, составляющей ≤ 5×10-9 M. В другом варианте осуществления антитела или связывающие фрагменты по настоящему изобретению связываются с PAC1 человека с KD, составляющей ≤ 1×10-9 M. В еще одном варианте осуществления антитела или связывающие фрагменты по настоящему изобретению связываются с PAC1 человека с KD, составляющей ≤ 5×10-10 M. В другом варианте осуществления антитела или связывающие фрагменты по настоящему изобретению связываются с PAC1 человека с KD, составляющей ≤ 1×10-10 M. В определенных вариантах осуществления антитела или связывающие фрагменты по настоящему изобретению связываются с PAC1 человека с KD, составляющей ≤ 5×10-11 M. В других вариантах осуществления антитела или связывающие фрагменты по настоящему изобретению связываются с PAC1 человека с KD, составляющей ≤ 1×10-11 M. В одном конкретном варианте осуществления антитела или связывающие фрагменты по настоящему изобретению связываются с PAC1 человека с KD, составляющей ≤ 5×10-12 M. В другом конкретном варианте осуществления антитела или связывающие фрагменты по настоящему изобретению связываются с PAC1 человека с KD, составляющей ≤ 1×10-12 M.

Аффинность определяют с применением различных методик, примером которых является анализ аффинности ELISA. В различных вариантах осуществления аффинность определяют с помощью анализа поверхностного плазмонного резонанса (например, анализ на основе BIAcore®). С применением этой методологии можно измерить константу скорости ассоциации (ka в M-1с-1) и константу скорости диссоциации (kd в с-1). Равновесную константу диссоциации (KD в M) можно затем рассчитать из отношения кинетических констант скорости (kd/ka). В некоторых вариантах осуществления аффинность определяют посредством кинетического способа, такого как анализ кинетического исключения (KinExA), как описано в Rathanaswami et al. Analytical Biochemistry, Vol. 373:52-60, 2008. С помощью анализа KinExA можно измерять равновесную константу диссоциации (KD в M) и константу скорости ассоциации (ka в M-1с-1). Константа скорости диссоциации (kd в с-1) может быть вычислена из этих значений (KD x ka). В других вариантах осуществления аффинность определяют с помощью способа интерферометрии биослоя, такого как описанный в Kumaraswamy et al., Methods Mol. Biol., Vol. 1278:165-82, 2015 и используемый в системах Octet® (Pall ForteBio). Кинетические константы (ka и kd) и константы аффинности (KD) могут быть рассчитаны в режиме реального времени с помощью способа интерферометрии биослоя. В некоторых вариантах осуществления антитела или связывающие фрагменты, описанные в данном документе, проявляют требуемые характеристики, такие как авидность связывания, измеренную с помощью kd (константы скорости диссоциации) для PAC1 человека, составляющей приблизительно 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6, 10-7, 10-8, 10-9, 10-10 s-1 или ниже (более низкие значения указывают на более высокую авидность связывания) и/или аффинность связывания, измеренную с помощью KD (равновесной константы диссоциации) для PAC1 человека, составляющей приблизительно 10-8, 10-9, 10-10, 10-11, 10-12 M или ниже (более низкие значения указывают на более высокую аффинность связывания).

Предпочтительно, антитела или связывающие фрагменты по настоящему изобретению не связываются в значительной степени или перекрестно не реагируют с другими представителями семейства рецепторов секретина/глюкагона, такими как рецептор VPAC1 человека (эталонная последовательность в NCBI NP_004615.2) и рецептор VPAC2 человека (эталонная последовательность в NCBI NP_003373.2). Как применяется в настоящем документе, антитело или связывающий фрагмент "не связывается в значительной степени" с целевым антигеном, если он обладает аффинностью связывания с этим антигеном, которая сравнима с его аффиностью к другим неродственным белкам в аналогичных условиях анализа связывания. Антитела или связывающие фрагменты, которые не связываются в значительной степени с целевым антигеном, могут также включать такие белки, которые не генерируют статистически отличающийся от отрицательного контроля сигнал при анализе аффинности, такой как описанный в данном документе для целевого антигена. В качестве примера антитело, которое генерирует значение сигнала при анализе на основе ELISA или BIAcore® для определения связывания с VPAC1 человека, которое статистически не отличается от значения сигнала, полученного с отрицательным контролем (например, буферным раствором без антитела), будет считаться не связывающимся в значительной степени с VPAC1 человека. Антитела или связывающие фрагменты, которые не связывают в значительной степени антиген, могут характеризоваться равновесной константой диссоциации (KD) для этого антигена, составляющей более 1×10-6 M, более 1×10-5 M, более 1×10-4 M или более 1×10-3 M. Таким образом, в определенных вариантах осуществления антитела и связывающие фрагменты по настоящему изобретению селективно связываются с PAC1 человека относительно VPAC1 человека и VPAC2 человека. Другими словами, антитела и связывающие фрагменты по настоящему изобретению не связываются в значительной степени с VPAC1 человека или VPAC2 человека.

Антитела и антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению способны ингибировать, подавлять или модулировать один или несколько видов биологической активности рецептора PAC1 человека. Биологические активности рецептора PAC1 человека включают без ограничения индукцию путей передачи сигнала, опосредованной рецептором PACAP, индукцию вазодилатации и подавление вазоконстрикции. В некоторых вариантах осуществления антитела или связывающие фрагменты по настоящему изобретению ингибируют связывание PACAP (например, PACAP38 или PACAP27) с рецептором PAC1 человека. "Ингибирование связывания" происходит, когда избыток антител или связывающих фрагментов уменьшает количество рецептора PAC1 человека, связанного с PACAP, или наоборот, например, на по меньшей мере приблизительно 40%, приблизительно 50%, приблизительно 60%, приблизительно 70% приблизительно 80%, приблизительно 85%, приблизительно 90%, приблизительно 95%, приблизительно 97%, приблизительно 99% или более, например, согласно измерению связывания с помощью анализа конкурентного связывания in vitro. Константы ингибирования (Ki), которые указывают на то, насколько эффективны антитела или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению при предотвращении связывания PACAP с рецептором PAC1 человека, можно рассчитать из таких анализов конкурентного связывания. В качестве примера, радиоактивный изотоп (например, 125I) присоединяют к лиганду рецептора (например, PACAP38) и с помощью анализа измеряют степень связывания помеченного радиоактивной меткой лиганда с рецептором PAC1 человека при увеличивающихся концентрациях антитела к PAC1 или его связывающего фрагмента. Значение Ki можно рассчитать с применением уравнения Ki=IC50/(1+([L]/Kd)), где [L] представляет собой концентрацию применяемого радиолиганда (например, PACAP38, помеченного с помощью 125I), и Kd представляет собой константу диссоциации радиолиганда. См. например, Keen M, MacDermot J (1993) Analysis of receptors by radioligand binding. В: Wharton J, Polak JM (eds) Receptor autoradiography, principles and practice. Oxford University Press, Oxford. Чем ниже значение Ki для антагониста, тем более эффективным является антагонист. В некоторых вариантах осуществления антитела или их антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению конкурируют за связывание с рецептором PAC1 человека с помеченным радиоактивной меткой лигандом PACAP с Ki, составляющей ≤ 1 нМ. В других вариантах осуществления антитела или их антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению конкурируют за связывание с рецептором PAC1 человека с помеченным радиоактивной меткой лигандом PACAP с Ki, составляющей ≤ 500 пМ. В еще одних вариантах осуществления антитела или их антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению конкурируют за связывание с рецептором PAC1 человека с помеченным радиоактивной меткой лигандом PACAP с Ki, составляющей ≤ 200 пМ. В других определенных вариантах осуществления антитела или их антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению конкурируют за связывание с рецептором PAC1 человека с помеченным радиоактивной меткой лигандом PACAP с Ki, составляющей ≤ 100 пМ.

В определенных вариантах осуществления антитела и антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению ингибируют индуцированную лигандом активацию рецептора PAC1 человека. Лиганд может представлять собой эндогенный лиганд рецептора, такой как PACAP38 или PACAP27, или лиганд может являться другом известным агонистом рецептора, таким как максадилан. Максадилан представляет собой пептид из 65 аминокислот, первоначально выделенный из москита, который обладает исключительной селективностью в отношении PAC1 по сравнению с VPAC1 или VPAC2 и, таким образом, может применяться в качестве селективного в отношении PAC1 агониста (Lerner et al., J Biol Chem., Vol. 266(17):11234-11236, 1991; Lerner et al., Peptides, Vol. 28(9): 1651-1654, 2007). Различные анализы для оценки активации рецепторов PAC1 известны из уровня техники и включают анализы на основе клеток, с помощью которых измеряют индуцированные лигандом мобилизацию кальция и образование cAMP. Иллюстративный клеточный анализ cAMP описан в примере 3. Другие подходящие анализы активации рецептора PAC1 описаны в Dickson et al., Ann. N. Y. Acad. Sci., Vol. 1070:239-42, 2006; Bourgault et al., J. Med. Chem., Vol. 52: 3308-3316, 2009; публикации патента США № 2011/0229423, все из которых настоящим включены посредством ссылки во всей своей полноте.

Ингибирующую активность антител или антигенсвязывающих фрагментов в отношении активации рецептора PAC1 можно количественно определить посредством расчета IC50 при любом функциональном анализе рецептора, таком как анализы, описанные выше. "IC50" представляет собой дозу/концентрацию, необходимую для достижения 50% ингибирования биологической или биохимической функции. В случае радиоактивных лигандов IC50 представляет собой концентрацию конкурирующего лиганда, при которой вытесняется 50% специфического связывания радиолиганда. IC50 любого конкретного вещества или антагониста можно определить посредством построения кривой доза-ответ и определения влияния различных концентраций лекарственного средства или антагониста на обратимую активность агониста в конкретном функциональном анализе. Значения IC50 можно вычислить для данного антагониста или лекарственного средства посредством определения концентрации, необходимой для ингибирования половины максимального биологического ответа агониста. Таким образом, значение IC50 для любого антитела к PAC1 или его связывающего фрагмента по настоящему изобретению можно вычислить посредством определения концентрации антитела или связывающего фрагмента, необходимой для ингибирования половины максимального биологического ответа лиганда (например, PACAP27, PACAP38 или максадилана) при активации рецептора PAC1 человека в любом функциональном анализе, таком как анализ cAMP, описанный в примерах. Под антителом к PAC1 или его связывающим фрагментом, который ингибирует индуцированную лигандом (например, индуцированную PACAP) активацию рецептора PAC1, понимается нейтрализующее или антагонистическое антитело или связывающий фрагмент рецептора PAC1.

В определенных вариантах осуществления антитела или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению ингибируют индуцированную PACAP (индуцированную PACAP38 или PACAP27) активацию рецептора PAC1 человека. Например, антитела или антигенсвязывающие фрагменты могут ингибировать индуцированную PACAP активацию рецептора PAC1 человека при IC50, составляющей менее приблизительно 10 нМ, менее приблизительно 8 нМ, менее приблизительно 5 нМ, менее приблизительно 3 нМ, менее приблизительно 1 нМ, менее приблизительно 800 пМ, менее приблизительно 500 пМ, менее приблизительно 400 пМ, менее приблизительно 300 пМ, менее приблизительно 200 пМ или менее приблизительно 100 пМ, как измерено с помощью анализа мобилизации кальция на основе клеток или анализа cAMP. В одном конкретном варианте осуществления антитела или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению ингибируют индуцированную PACAP активацию рецептора PAC1 человека при IC50, составляющей менее приблизительно 5 нМ, как измерено с помощью клеточного анализа cAMP. В другом конкретном варианте осуществления антитела или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению ингибируют индуцированную PACAP активацию рецептора PAC1 человека при IC50, составляющей менее приблизительно 1 нМ, как измерено с помощью клеточного анализа cAMP. В еще одном конкретном варианте осуществления антитела или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению ингибируют индуцированную PACAP активацию рецептора PAC1 человека при IC50, составляющей менее приблизительно 500 пМ, как измерено с помощью клеточного анализа cAMP. В другом варианте осуществления антитела или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению ингибируют индуцированную PACAP активацию рецептора PAC1 человека при IC50, составляющей менее приблизительно 300 пМ, как измерено с помощью клеточного анализа cAMP. В некоторых вариантах осуществления антитела или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению ингибируют индуцированную PACAP активацию рецептора PAC1 человека при IC50, составляющей от приблизительно 0,1 нМ до приблизительно 1 нМ, как измерено с помощью клеточного анализа cAMP. В других вариантах осуществления антитела или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению ингибируют индуцированную PACAP активацию рецептора PAC1 человека при IC50, составляющей от приблизительно 50 пМ до приблизительно 500 пМ, как измерено с помощью клеточного анализа cAMP.

В некоторых вариантах осуществления антитела или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению связываются с рецепторами PAC1 из других видов и ингибируют их. Например, антитела или антигенсвязывающие фрагменты связываются с рецептором PAC1 яванского макака и ингибируют его (эталонная последовательность в NCBI XP_015303041.1). В таких вариантах осуществления антитела или антигенсвязывающие фрагменты ингибируют индуцированную PACAP активацию рецептора PAC1 яванского макака при IC50, составляющей менее приблизительно 10 нМ, менее приблизительно 8 нМ, менее приблизительно 5 нМ, менее приблизительно 3 нМ, менее приблизительно 1 нМ, менее приблизительно 800 пМ, менее приблизительно 500 пМ, менее приблизительно 400 пМ, менее приблизительно 300 пМ, менее приблизительно 200 пМ или менее приблизительно 100 пМ, как измерено с помощью анализа мобилизации кальция на основе клеток или анализа cAMP. В одном варианте осуществления антитела или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению ингибируют индуцированную PACAP активацию рецептора PAC1 яванского макака при IC50, составляющей менее приблизительно 1 нМ, как измерено с помощью клеточного анализа cAMP. В другом варианте осуществления антитела или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению ингибируют индуцированную PACAP активацию рецептора PAC1 яванского макака при IC50, составляющей менее приблизительно 500 пМ, как измерено с помощью клеточного анализа cAMP. В еще одном варианте осуществления антитела или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению ингибируют индуцированную PACAP активацию рецептора PAC1 яванского макака при IC50, составляющей от приблизительно 0,1 нМ до приблизительно 1 нМ, как измерено с помощью клеточного анализа cAMP. В еще одном варианте осуществления антитела или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению ингибируют индуцированную PACAP активацию рецептора PAC1 яванского макака при IC50, составляющей от приблизительно 50 пМ до приблизительно 500 пМ, как измерено с помощью клеточного анализа cAMP.

В определенных вариантах осуществления антитела или антигенсвязывающие фрагменты связываются с рецептором PAC1 крысы и ингибируют его (эталонная последовательность в NCBI NP_598195.1). В этих вариантах осуществления антитела или антигенсвязывающие фрагменты могут ингибировать индуцированную PACAP активацию рецептора PAC1 крысы при IC50, составляющей менее приблизительно 10 нМ, менее приблизительно 8 нМ, менее приблизительно 5 нМ, менее приблизительно 3 нМ, менее приблизительно 1 нМ, менее приблизительно 800 пМ, менее приблизительно 500 пМ, менее приблизительно 400 пМ, менее приблизительно 300 пМ, менее приблизительно 200 пМ или менее приблизительно 100 пМ, как измерено с помощью анализа мобилизации кальция на основе клеток или анализа cAMP. В одном варианте осуществления антитела или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению ингибируют индуцированную PACAP активацию рецептора PAC1 крысы при IC50, составляющей менее приблизительно 10 нМ, как измерено с помощью клеточного анализа cAMP. В другом варианте осуществления антитела или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению ингибируют индуцированную PACAP активацию рецептора PAC1 крысы при IC50, составляющей менее приблизительно 5 нМ, как измерено с помощью клеточного анализа cAMP. В еще одном варианте осуществления антитела или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению ингибируют индуцированную PACAP активацию рецептора PAC1 крысы при IC50, составляющей менее приблизительно 500 пМ, как измерено с помощью клеточного анализа cAMP. В еще одном варианте осуществления антитела или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению ингибируют индуцированную PACAP активацию рецептора PAC1 крысы при IC50, составляющей менее приблизительно 300 пМ, как измерено с помощью клеточного анализа cAMP. В некоторых вариантах осуществления антитела или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению ингибируют индуцированную PACAP активацию рецептора PAC1 крысы при IC50, составляющей от приблизительно 0,1 нМ до приблизительно 10 нМ, как измерено с помощью клеточного анализа cAMP. В еще одном варианте осуществления антитела или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению ингибируют индуцированную PACAP активацию рецептора PAC1 крысы при IC50, составляющей от приблизительно 100 пМ до приблизительно 2 нМ, как измерено с помощью клеточного анализа cAMP. В некоторых вариантах осуществления, в которых антитела или связывающие фрагменты по настоящему изобретению перекрестно реагируют с рецепторами PAC1 из других видов, антитела или связывающие фрагменты способны ингибировать индуцированную PACAP активацию рецептора PAC1 со сравнимыми уровнями эффективности. Например, антитело или связывающий фрагмент по настоящему изобретению способен ингибировать индуцированную PACAP активацию рецептора PAC1 человека при IC50, аналогичной IC50 для антитела или связывающего фрагмента для ингибирования индуцированной PACAP активации рецептора PAC1 яванского макака или крысы. Перекрестная реактивность с рецепторами PAC1 других видов антител или связывающих фрагментов по настоящему изобретению может являться преимущественной, поскольку антитела или связывающие фрагменты можно оценивать на дополнительных доклинических животных моделях в отношении терапевтической эффективности.

Как правило, антитела или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению не ингибируют в значительной степени индуцированную лигандом активацию (например, индуцированную PACAP38, PACAP27 или VIP) рецептора VPAC1 человека или рецептора VPAC2. Как применяется в данном документе, антитело или антигенсвязывающий фрагмент "в значительной степени не будет ингибировать" активацию рецептора или связывание лиганда с его рецептором, если нет статистической разницы между индуцированной лигандом активацией рецептора или связыванием лиганда с рецептором в присутствии или в отсутствие антитела или антигенсвязывающего фрагмента. Например, если количество cAMP, продуцирование которого индуцировано с помощью PACAP или VIP в клетках, экспрессирующих рецептор VPAC1 человека в присутствии антитела или связывающего фрагмента, статистически не отличается от количества, продуцируемого в отсутствие антитела или связывающего фрагмента, тогда будет считаться, что антитело или связывающий фрагмент в значительной степени не ингибирует индуцированную PACAP/VIP активацию рецептора VPAC1 человека. Подобным образом, если количество PACAP или VIP, связанного с рецептором VPAC1 человека в присутствии избытка антитела или связывающего фрагмента, статистически не отличается от количества PACAP или VIP, связанного с рецептором в отсутствие антитела или связывающего фрагмента, то будет считаться, что антитело или связывающий фрагмент в значительной степени не ингибирует связывание PACAP или VIP с рецептором VPAC1 человека. В определенных вариантах осуществления антитела или связывающие фрагменты по настоящему изобретению ингибируют индуцированную PACAP активацию рецептора PAC1 человека, но не ингибируют в значительной степени индуцированную PACAP активацию рецептора VPAC1 человека или рецептора VPAC2 человека. Таким образом, антитела и связывающие фрагменты по настоящему изобретению селективно ингибируют рецептор PAC1 человека по сравнению с рецептором VPAC1 человека и рецептором VPAC2 человека.

Антитела и связывающие фрагменты по настоящему изобретению способны в некоторых вариантах осуществления связываться с конкретной областью или эпитопом PAC1 человека. Применяемый в данном документе термин "эпитоп" относится к любой детерминанте, способной специфически связываться антителом или его фрагментом. Эпитоп представляет собой область антигена, которая связывается антителом или связывающим фрагментом или взаимодействует с антителом или связывающим фрагментом, который нацеливается на этот антиген, и когда антиген представляет собой белок, содержит специфические аминокислоты, которые непосредственно контактируют или взаимодействуют с антителом или связывающим фрагментом. Эпитоп может быть образован как смежными аминокислотами, так и несмежными аминокислотами, расположенными рядом из-за сворачивания белка в третичную структуру. "Линейный эпитоп" представляет собой эпитоп, где первичная аминокислотная последовательность образует распознаваемый эпитоп. Линейный эпитоп обычно содержит по меньшей мере 3 или 4 аминокислоты и более часто по меньшей мере 5, по меньшей мере 6 или по меньшей мере 7 аминокислот, например, от приблизительно 8 до приблизительно 10 аминокислот в уникальной последовательности. "Конформационный эпитоп", в отличие от линейного эпитопа, представляет собой группу аминокислот, которые не являются смежными (например, аминокислотные остатки в полипептиде, которые не являются смежными в первичной последовательности полипептида, но являются таковыми в контексте третичной и четвертичной структуры полипептида, расположены достаточно близко друг к другу, чтобы быть связанными антителом или его связывающим фрагментом). Эпитопные детерминанты могут содержать химически активные поверхностные группы молекул, такие как аминокислоты, боковые цепи сахаров, фосфорильные или сульфонильные группы, и могут иметь специфические характеристики трехмерной структуры и/или специфические характеристики заряда. Как правило, антитела или связывающие фрагменты, специфические в отношении конкретной целевой молекулы, будут предпочтительно распознавать эпитоп на целевой молекуле в сложной смеси из белков и/или макромолекул.

В определенных вариантах осуществления антитела или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению связываются с PAC1 человека по эпитопу в пределах N-концевого внеклеточного домена (ECD) PAC1 человека (SEQ ID NO: 4). В связанных вариантах осуществления антитела или антигенсвязывающие фрагменты связываются с PAC1 человека по эпитопу в пределах аминокислот 24-153 SEQ ID NO: 1. В других связанных вариантах осуществления антитела или антигенсвязывающие фрагменты связываются с PAC1 человека по эпитопу в пределах аминокислот 50-140 SEQ ID NO: 1. Как описано в примере 1, кристаллическая структура комплекса N-концевого ECD PAC1 человека и Fab-области нейтрализующего антитела к PAC1 позволила выявить ключевые аминокислоты в пределах ECD PAC1 человека, которые содержали участок контакта для связывания с Fab к PAC1. Эти аминокислоты основного участка контакта, все из которых содержат по меньшей мере один атом, не представляющий собой водород, на расстоянии 5 Å или меньше от атома, не представляющего собой водород, в Fab включают Asp59, Asn60, Ile61, Arg116, Asn117, Thr119, Asp121, Gly122, Trp123, Ser124, Glu125, Pro126, Phe127, Pro128, His129, Tyr130, Phe131, Asp132 и Gly135 (номера аминокислотных положений относительно SEQ ID NO: 1). Таким образом, в некоторых вариантах осуществления антитела или связывающие фрагменты по настоящему изобретению связываются с PAC1 человека по эпитопу, содержащему одну или несколько аминокислот, выбранных из Asp59, Asn60, Ile61, Arg116, Asn117, Thr119, Glu120, Asp121, Gly122, Trp123, Ser124, Glu125, Pro126, Phe127, Pro128, His129, Tyr130, Phe131, Asp132 и Gly135 из SEQ ID NO: 1. В других вариантах осуществления антитела или связывающие фрагменты связываются с PAC1 человека по эпитопу, содержащему по меньшей мере аминокислоты Asn60, Ile61, Glu120 и Asp121 из SEQ ID NO: 1. В еще одних вариантах осуществления антитела или связывающие фрагменты связываются с PAC1 человека по эпитопу, содержащему по меньшей мере аминокислоты Asn60, Ile61, Glu120, Asp121, Phe127 и Phe131 из SEQ ID NO: 1. В других определенных вариантах осуществления антитела или связывающие фрагменты связываются с PAC1 человека по эпитопу, содержащему все из аминокислот, выбранных из Asp59, Asn60, Ile61, Arg116, Asn117, Thr119, Glu120, Asp121, Gly122, Trp123, Ser124, Glu125, Pro126, Phe127, Pro128, His129, Tyr130, Phe131, Asp132 и Gly135 из SEQ ID NO: 1.

Кристаллическая структура комплекса Fab-ECD PAC1 человека, описанная в примере 1, также позволила выявить важные остатки в CDR тяжелой и легкой цепей Fab, которые взаимодействовали с аминокислотами в ECD PAC1 человека, тем самым позволив идентифицировать ключевые аминокислоты в паратопе антитела. "Паратоп" представляет собой область антитела, которая распознает и связывается с целевым антигеном. Остатки паратопа включают Gln27, Gly30, Arg31 и Ser32 в вариабельной области легкой цепи (SEQ ID NO: 3) и Arg31, Phe32, Tyr53, Asp54, Gly56 в вариабельной области тяжелой цепи (SEQ ID NO: 2). Конкретные мутации нескольких этих остатков в паратопе были разработаны для улучшения взаимодействия с остатками основного участка контакта (т.е. остатками в эпитопе) в ECD PAC1 человека, что приводит к повышению аффинности связывания и ингибирующей активности по сравнению с исходным антителом (см. примеры 1-3). Gln27, Gly30, Arg31 и Ser32 в вариабельной области легкой цепи под SEQ ID NO: 3 или под SEQ ID NO: 52 соответствуют аминокислотным положениям 29, 32, 39 и 40 согласно нумерации AHo соответственно, и Arg31, Phe32, Tyr53, Asp54, Gly56 в вариабельной области тяжелой цепи под SEQ ID NO: 2 или под SEQ ID NO: 191 соответствуют аминокислотным положениям 33, 39, 60, 61 и 66 согласно нумерации AHo соответственно. Схема нумерации AHo представляет собой схему нумерации на основе структуры, которая вводит гэпы в CDR-области для минимизации отклонения от средней структуры выравненных доменов (Honegger and Pluckthun, J. Mol. Biol. 309(3):657-670; 2001). В схеме нумерации AHo структурно эквивалентные положения в различных антителах будут иметь одинаковый номер остатка.

В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрено антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфически связываются с PAC1 человека (SEQ ID NO: 1), где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат: (i) вариабельную область легкой цепи, в которой аминокислота в положении 29 в соответствии с нумерацией AHo представляет собой основную аминокислоту, которая взаимодействует с аминокислотами Glu120 или Asp121 PAC1 человека, и (ii) вариабельную область тяжелой цепи, в которой аминокислота в положении 61 в соответствии с нумерацией AHo представляет собой гидрофобную, основную или нейтральную гидрофильную аминокислоту, которая взаимодействует с аминокислотами Asn60 или Ile61 PAC1 человека. Как применяется в данном документе, указано, что одна аминокислота "взаимодействует" с другой аминокислотой, когда один или несколько атомов в одной аминокислоте образуют нековалентные связи с одним или несколькими атомами в другой аминокислоте, например, посредством ван-дер-ваальсовых, гидрофобных или электростатических сил. Основные аминокислоты включают аргинин, лизин и гистидин, тогда как нейтральные гидрофильные аминокислоты включают аспарагин, глутамин, серин и треонин. Гидрофобные аминокислоты включают фенилаланин, триптофан, тирозин, аланин, изолейцин, лейцин и валин. В некоторых вариантах осуществления аминокислота в положении 29 в соответствии с нумерацией AHo в вариабельной области легкой цепи представляет собой лизин или аргинин. В одном конкретном варианте осуществления аминокислота в положении 29 в соответствии с нумерацией AHo в вариабельной области легкой цепи представляет собой лизин. В связанных вариантах осуществления аминокислота в положении 61 в соответствии с нумерацией AHo в вариабельной области тяжелой цепи представляет собой изолейцин, лейцин, валин, глутамин, аспарагин, аргинин или лизин. В одном варианте осуществления аминокислота в положении 61 в соответствии с нумерацией AHo в вариабельной области тяжелой цепи представляет собой изолейцин. В другом варианте осуществления аминокислота в положении 61 в соответствии с нумерацией AHo в вариабельной области тяжелой цепи представляет собой глутамин или аспарагин. В еще одном варианте осуществления аминокислота в положении 61 в соответствии с нумерацией AHo в вариабельной области тяжелой цепи представляет собой аргинин.

В некоторых вариантах осуществления аминокислота в положении 66 в соответствии с нумерацией AHo в вариабельной области тяжелой цепи антитела или его антигенсвязывающего фрагмента представляет собой основную или нейтральную гидрофильную аминокислоту, которая взаимодействует с аминокислотами Asn60 или Ile61 PAC1 человека (SEQ ID NO: 1). Аминокислота в положении 66 в соответствии с нумерацией AHo в вариабельной области тяжелой цепи может представлять собой глутамин, аспарагин, аргинин или лизин. В одном варианте осуществления аминокислота в положении 66 в соответствии с нумерацией AHo в вариабельной области тяжелой цепи представляет собой аргинин. В другом варианте осуществления аминокислота в положении 66 в соответствии с нумерацией AHo в вариабельной области тяжелой цепи представляет собой аспарагин.

Было обнаружено, что взаимодействия паратопа и эпитопа, описанные выше, коррелируют с улучшениями ингибирующей активности при значениях IC50 в пикомолярном диапазоне. См. пример 3. Таким образом, антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, содержащие вышеуказанные аминокислоты в положениях 29 в вариабельной области легкой цепи и положениях 61 и/или 66 в вариабельной области тяжелой цепи в соответствии с нумерацией AHo, и взаимодействующие с указанными остатками в рецепторе PAC1 человека (Glu120, Asp121, Asn60 и/или Ile61 из SEQ ID NO: 1), как ожидается, будут обладать усиленной ингибирующей активностью, например, ингибируют индуцированную PACAP активацию PAC1 человека при IC50, составляющей менее 500 пМ, как измерено с помощью клеточного анализа cAMP. В некоторых вариантах осуществления такие антитела или антигенсвязывающие фрагменты способны подавлять индуцированную PACAP активацию PAC1 человека при IC50, составляющей менее 300 пМ, как измерено с помощью клеточного анализа cAMP. В этих и других вариантах осуществления антитела или их антигенсвязывающие фрагменты могут содержать вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность, которая на по меньшей мере 90% идентична последовательности под SEQ ID NO: 52, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность, которая на по меньшей мере 90% идентична последовательности под SEQ ID NO: 191.

Антитела или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению могут содержать одну или несколько определяющих комплементарность областей (CDR) из вариабельных областей легкой и тяжелой цепей антител, которые специфически связываются с PAC1 человека, как описано в данном документе. Термин "CDR" относится к определяющей комплементарность области (также называемой "минимальными единицами распознавания" или "гипервариабельной областью") в пределах вариабельных последовательностей антител. Существуют три CDR вариабельной области тяжелой цепи (CDRH1, CDRH2 и CDRH3) и три CDR вариабельной области легкой цепи (CDRL1, CDRL2 и CDRL3). Применяемый в данном документе термин "CDR-область" относится к группе из трех CDR, которые встречаются в одной вариабельной области (т. е. три CDR легкой цепи или три CDR тяжелой цепи). CDR в каждой из двух цепей обычно выравнены по каркасным областям (FR) с образованием структуры, которая специфически связывается с конкретным эпитопом или доменом на целевом белке (например, PAC1 человека). Как правило, от N-конца к С-концу встречающиеся в природе вариабельные области как легкой, так и тяжелой цепей соответствуют следующему порядку этих элементов: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 и FR4. Была разработана система нумерации для присвоения номеров аминокислотам, которые занимают положения в каждом из этих доменов. Эта система нумерации определена в Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest (1987 and 1991, NIH, Bethesda, MD) или Chothia & Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917; Chothia et al., 1989, Nature 342:878-883. С помощью этой системы можно идентифицировать определяющие комплементарность области (CDR) и каркасные области (FR) данного антитела. Другие системы нумерации аминокислот в цепях иммуноглобулина включают IMGT® (Международная информационная система ImMunoGeneTics; Lefranc et al., Dev. Comp. Immunol. 29:185-203; 2005) и AHo (Honegger and Pluckthun, J. Mol. Biol. 309(3):657-670; 2001).

В определенных вариантах осуществления антитела к PAC1 или их антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат по меньшей мере одну вариабельную область легкой цепи, содержащую CDRL1, CDRL2 и CDRL3, и по меньшей мере одну вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDRH1, CDRH2 и CDRH3, из любого из антител к PAC1, описанных в данном документе. Вариабельные области легкой цепи и тяжелой цепи, а также связанные CDR иллюстративных антител к PAC1 человека приведены ниже в таблицах 1A и 1B соответственно.

Таблица 1A. Иллюстративные аминокислотные последовательности вариабельной области легкой цепи антитела к PAC1 человека
ID Ab Группа VL Аминокислотная последовательность VL CDRL1 CDRL2 CDRL3
Варианты 29G4
29G4v10 LV-01 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIKR
(SEQ ID NO: 52)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
29G4v22 LV-02 DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQSIGRSLHWYQQKPGKAPKLLIKYASQSLSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIKR
(SEQ ID NO: 53)
RASQSIGRSLH (SEQ ID NO: 6) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420649 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420653 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420657 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420661 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420665 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420672 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420679 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420686 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420690 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420697 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420704 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420711 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420718 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420725 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420732 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420739 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420746 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420753 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420760 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420767 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420774 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420781 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420788 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420795 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420802 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420809 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420816 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420823 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420830 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420837 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420841 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420845 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420849 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420853 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420857 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420861 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420865 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420869 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420873 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420877 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420881 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420885 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420889 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420893 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420897 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420901 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420908 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420915 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420922 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420929 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420936 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420943 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420950 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420957 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420964 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420971 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420978 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420985 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420992 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:420999 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421006 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421013 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421020 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421027 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421031 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421035 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421039 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421043 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421047 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421051 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421055 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421059 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421063 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421067 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421071 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421075 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421079 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421083 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421087 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421091 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421098 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421105 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421112 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421119 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421126 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421133 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421140 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421147 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421151 LV-05 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVWRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 56)
RASQSVWRSLH (SEQ ID NO: 8) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:391478 LV-06 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRNLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 57)
RASQSVGRNLH (SEQ ID NO: 9) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421157 LV-07 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSMLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 58)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSMLPFT (SEQ ID NO: 37)
iPS:421163 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:391578 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421170 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421176 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421182 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421189 LV-08 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVWRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 59)
RASKSVWRSLH (SEQ ID NO: 10) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421195 LV-09 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRNLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 60)
RASKSVGRNLH (SEQ ID NO: 11) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421201 LV-10 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSMLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 61)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSMLPFT (SEQ ID NO: 37)
iPS:421207 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421211 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421215 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421219 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421223 LV-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 54)
RASKSVGRSLH (SEQ ID NO: 7) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421227 LV-05 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVWRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 56)
RASQSVWRSLH (SEQ ID NO: 8) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421231 LV-06 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRNLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 57)
RASQSVGRNLH (SEQ ID NO: 9) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421235 LV-07 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSMLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 58)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSMLPFT (SEQ ID NO: 37)
iPS:421239 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421246 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421253 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421260 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421267 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421274 LV-05 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVWRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 56)
RASQSVWRSLH (SEQ ID NO: 8) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421278 LV-06 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRNLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 57)
RASQSVGRNLH (SEQ ID NO: 9) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421282 LV-07 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSMLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 58)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSMLPFT (SEQ ID NO: 37)
iPS:421286 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421293 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421300 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421307 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421314 LV-05 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVWRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 56)
RASQSVWRSLH (SEQ ID NO: 8) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421318 LV-06 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRNLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 57)
RASQSVGRNLH (SEQ ID NO: 9) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421322 LV-07 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSMLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 58)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSMLPFT (SEQ ID NO: 37)
iPS:421326 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421333 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421340 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421347 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421354 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421361 LV-05 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVWRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 56)
RASQSVWRSLH (SEQ ID NO: 8) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421365 LV-06 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRNLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 57)
RASQSVGRNLH (SEQ ID NO: 9) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421369 LV-07 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSMLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 58)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSMLPFT (SEQ ID NO: 37)
iPS:421373 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421380 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421387 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421394 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421855 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421861 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421867 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421873 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421879 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421885 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421891 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421897 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421903 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421909 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:421915 LV-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 55)
RASQSVGRSLH (SEQ ID NO: 5) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:480711 LV-11 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGWSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIKR
(SEQ ID NO: 62)
RASKSVGWSLH (SEQ ID NO: 12) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:480706 LV-11 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGWSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIKR
(SEQ ID NO: 62)
RASKSVGWSLH (SEQ ID NO: 12) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:480713 LV-12 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGYSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIKR
(SEQ ID NO: 63)
RASKSVGYSLH (SEQ ID NO: 13) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:480705 LV-11 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGWSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIKR
(SEQ ID NO: 62)
RASKSVGWSLH (SEQ ID NO: 12) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:480707 LV-11 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGWSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIKR
(SEQ ID NO: 62)
RASKSVGWSLH (SEQ ID NO: 12) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:480708 LV-11 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGWSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIKR
(SEQ ID NO: 62)
RASKSVGWSLH (SEQ ID NO: 12) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:480709 LV-13 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKAVGWSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIKR
(SEQ ID NO: 64)
RASKAVGWSLH (SEQ ID NO: 14) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:480712 LV-11 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGWSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIKR
(SEQ ID NO: 62)
RASKSVGWSLH (SEQ ID NO: 12) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:480704 LV-11 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGWSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIKR
(SEQ ID NO: 62)
RASKSVGWSLH (SEQ ID NO: 12) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:480710 LV-11 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGWSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIKR
(SEQ ID NO: 62)
RASKSVGWSLH (SEQ ID NO: 12) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:480716 LV-14 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGQSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIKR
(SEQ ID NO: 65)
RASKSVGQSLH (SEQ ID NO: 15) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:480715 LV-14 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGQSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIKR
(SEQ ID NO: 65)
RASKSVGQSLH (SEQ ID NO: 15) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:480717 LV-14 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGQSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIKR
(SEQ ID NO: 65)
RASKSVGQSLH (SEQ ID NO: 15) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSRLPFT (SEQ ID NO: 36)
iPS:480714 LV-15 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASRSVGLALHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSFLPFTFGPGTKVDIKR
(SEQ ID NO: 66)
RASRSVGLALH (SEQ ID NO: 16) YASQSLS
(SEQ ID NO: 26)
HQSSFLPFT (SEQ ID NO: 38)
Варианты 19H8
19H8 LV-16 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSISRYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQSYSPPFTFGPGTKVDIKR
(SEQ ID NO: 67)
RASQSISRYLN (SEQ ID NO: 17) AASSLQS
(SEQ ID NO: 27)
QQSYSPPFT (SEQ ID NO: 39)
iPS:448202 LV-17 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSISRYLNWYQQKPGKAPKLLIFAGQRLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQAIGMPYTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 68)
RASQSISRYLN (SEQ ID NO: 17) AGQRLQS
(SEQ ID NO: 28)
QQAIGMPYT (SEQ ID NO: 40)
iPS:449375 LV-18 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQYIVRYLNWYQQKPGKAPKLLIYAAHHLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQAIQEPYTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 69)
RASQYIVRYLN (SEQ ID NO: 18) AAHHLQS
(SEQ ID NO: 29)
QQAIQEPYT (SEQ ID NO: 41)
iPS:448083 LV-19 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQTIVRYLNWYQQKPGKAPKLLIFAGQRLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQAIINPYTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 70)
RASQTIVRYLN (SEQ ID NO: 19) AGQRLQS
(SEQ ID NO: 28)
QQAIINPYT (SEQ ID NO: 42)
iPS:452128 LV-20 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQYIVRYLNWYQQKPGKAPKLLIYAANMLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQAINQPYTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 71)
RASQYIVRYLN (SEQ ID NO: 18) AANMLQS
(SEQ ID NO: 30)
QQAINQPYT (SEQ ID NO: 43)
iPS:448195 LV-21 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQKIARYLVWYQQKPGKAPKLLIYAANMLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQSIQQPYTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 72)
RASQKIARYLV (SEQ ID NO: 20) AANMLQS
(SEQ ID NO: 30)
QQSIQQPYT (SEQ ID NO: 44)
iPS:448466 LV-22 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSISRYLNWYQQKPGKAPKLLIFAGQRLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQAIQQPYTFGPGTKVDIKR
(SEQ ID NO: 73)
RASQSISRYLN (SEQ ID NO: 17) AGQRLQS
(SEQ ID NO: 28)
QQAIQQPYT (SEQ ID NO: 45)
iPS:448689 LV-23 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQYIVRYLNWYQQKPGKAPKLLIYASYNLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQAIMAPYTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 74)
RASQYIVRYLN (SEQ ID NO: 18) ASYNLQS
(SEQ ID NO: 31)
QQAIMAPYT (SEQ ID NO: 46)
iPS:449034 LV-24 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQPIAQYLNWYQQKPGKAPKLLIYAGRYLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQAIQNPYTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 75)
RASQPIAQYLN (SEQ ID NO: 21) AGRYLQS
(SEQ ID NO: 32)
QQAIQNPYT (SEQ ID NO: 47)
iPS:448075 LV-25 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSISRYLNWYQQKPGKAPKLLIFAGQRLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQAIVQPYTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 76)
RASQSISRYLN (SEQ ID NO: 17) AGQRLQS
(SEQ ID NO: 28)
QQAIVQPYT (SEQ ID NO: 48)
iPS:448924 LV-26 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQPISRYLSWYQQKPGKAPKLLIFAGQRLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQAISIPYTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 77)
RASQPISRYLS (SEQ ID NO: 22) AGQRLQS
(SEQ ID NO: 28)
QQAISIPYT (SEQ ID NO: 49)
iPS:448752 LV-27 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQQIARYLNWYQQKPGKAPKLLIYASYNLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQAIIQPYTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 78)
RASQQIARYLN (SEQ ID NO: 23) ASYNLQS
(SEQ ID NO: 31)
QQAIIQPYT (SEQ ID NO: 50)
iPS:448772 LV-28 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSISRYLNWYQQKPGKAPKLLIYASYNLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQAIQNPYTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 79)
RASQSISRYLN (SEQ ID NO: 17) ASYNLQS
(SEQ ID NO: 31)
QQAIQNPYT (SEQ ID NO: 47)
iPS:448117 LV-29 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQTIVRYLNWYQQKPGKAPKLLIFAGQRLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQSIQTPYTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 80)
RASQTIVRYLN (SEQ ID NO: 19) AGQRLQS
(SEQ ID NO: 28)
QQSIQTPYT (SEQ ID NO: 51)
iPS:448788 LV-30 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSISRYLNWYQQKPGKAPKLLIYAGRILQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQAIINPYTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 81)
RASQSISRYLN (SEQ ID NO: 17) AGRILQS
(SEQ ID NO: 33)
QQAIINPYT (SEQ ID NO: 42)
iPS:448593 LV-28 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSISRYLNWYQQKPGKAPKLLIYASYNLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQAIQNPYTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 79)
RASQSISRYLN (SEQ ID NO: 17) ASYNLQS
(SEQ ID NO: 31)
QQAIQNPYT (SEQ ID NO: 47)
iPS:448238 LV-31 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQRIARYLNWYQQKPGKAPKLLIFAGSILQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQAIQNPYTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 82)
RASQRIARYLN (SEQ ID NO: 24) AGSILQS
(SEQ ID NO: 34)
QQAIQNPYT (SEQ ID NO: 47)
iPS:448901 LV-32 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSISRYLNWYQQKPGKAPKLLIYASYNLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQSIQQPYTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 83)
RASQSISRYLN (SEQ ID NO: 17) ASYNLQS
(SEQ ID NO: 31)
QQSIQQPYT (SEQ ID NO: 44)
iPS:448655 LV-33 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQYIVRYLNWYQQKPGKAPKLLIYASYNLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQAIQQPYTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 84)
RASQYIVRYLN (SEQ ID NO: 18) ASYNLQS
(SEQ ID NO: 31)
QQAIQQPYT (SEQ ID NO: 45)
iPS:448730 LV-34 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQMIARYLNWYQQKPGKAPKLLIYASYNLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQAIINPYTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 85)
RASQMIARYLN (SEQ ID NO: 25) ASYNLQS
(SEQ ID NO: 31)
QQAIINPYT (SEQ ID NO: 42)
iPS:449027 LV-35 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQYIVRYLNWYQQKPGKAPKLLIYGARNLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQSIQTPYTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 86)
RASQYIVRYLN (SEQ ID NO: 18) GARNLQS
(SEQ ID NO: 35)
QQSIQTPYT (SEQ ID NO: 51)
3574 LV-36 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSISRYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQSYSPPFTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 87)
RASQSISRYLN (SEQ ID NO: 17) AASSLQS
(SEQ ID NO: 27)
QQSYSPPFT (SEQ ID NO: 39)
3575 LV-27 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQQIARYLNWYQQKPGKAPKLLIYASYNLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQAIIQPYTFGPGTKVDIK
(SEQ ID NO: 78)
RASQQIARYLN (SEQ ID NO: 23) ASYNLQS
(SEQ ID NO: 31)
QQAIIQPYT (SEQ ID NO: 50)

Таблица 1B. Иллюстративные аминокислотные последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела к PAC1 человека
ID Ab Группа VH Аминокислотная последовательность VH CDRH1 CDRH2 CDRH3
Варианты 29G4
29G4v10 HV-01 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 191) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 106) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
29G4v22 HV-02 QVQLVESGAEVVKPGASVKVSCKASGFTFSRFAMHWVRQAPGQGLEWMGVISYDGGNKYYAESVKGRVTMTRDTSTSTLYMELSSLRSEDTAVYYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 192) RFAMH
(SEQ ID NO: 88)
VISYDGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 106) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420649 HV-03 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYNGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 193) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYNGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 107) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420653 HV-04 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYIGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 194) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYIGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 108) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420657 HV-05 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYQGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 195) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYQGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 109) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420661 HV-06 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYYGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 196) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYYGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 110) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420665 HV-07 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGRNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 197) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGRNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 111) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420672 HV-08 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGNNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 198) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGNNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 112) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420679 HV-09 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGGNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 199) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGGNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 113) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420686 HV-10 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 200) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 106) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:420690 HV-11 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYNGRNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 201) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYNGRNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 114) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420697 HV-12 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYIGRNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 202) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYIGRNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 115) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420704 HV-13 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYQGRNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 203) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYQGRNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 116) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420711 HV-14 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYYGRNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 204) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYYGRNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 117) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420718 HV-15 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYNGNNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 205) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYNGNNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 118) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420725 HV-16 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYIGNNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 206) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYIGNNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 119) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420732 HV-17 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYQGNNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 207) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYQGNNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 120) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420739 HV-18 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYYGNNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 208) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYYGNNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 121) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420746 HV-19 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYNGGNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 209) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYNGGNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 122) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420753 HV-20 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYIGGNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 210) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYIGGNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 123) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420760 HV-21 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYQGGNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 211) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYQGGNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 124) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420767 HV-22 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYYGGNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 212) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYYGGNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 125) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420774 HV-23 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYNGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 213) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYNGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 107) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:420781 HV-24 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYIGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 214) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYIGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 108) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:420788 HV-25 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYQGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 215) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYQGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 109) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:420795 HV-26 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYYGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 216) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYYGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 110) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:420802 HV-27 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGRNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 217) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGRNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 126) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420809 HV-28 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGNNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 218) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGNNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 127) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420816 HV-29 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGRNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 219) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGRNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 111) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:420823 HV-30 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGNNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 220) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGNNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 112) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:420830 HV-31 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGGNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 221) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGGNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 113) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:420837 HV-11 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYNGRNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 201) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYNGRNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 114) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420841 HV-12 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYIGRNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 202) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYIGRNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 115) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420845 HV-13 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYQGRNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 203) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYQGRNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 116) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420849 HV-14 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYYGRNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 204) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYYGRNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 117) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420853 HV-15 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYNGNNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 205) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYNGNNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 118) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420857 HV-16 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYIGNNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 206) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYIGNNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 119) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420861 HV-17 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYQGNNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 207) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYQGNNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 120) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420865 HV-18 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYYGNNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 208) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYYGNNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 121) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420869 HV-19 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYNGGNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 209) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYNGGNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 122) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420873 HV-20 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYIGGNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 210) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYIGGNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 123) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420877 HV-21 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYQGGNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 211) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYQGGNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 124) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420881 HV-22 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYYGGNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 212) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYYGGNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 125) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420885 HV-23 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYNGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 213) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYNGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 107) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:420889 HV-24 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYIGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 214) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYIGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 108) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:420893 HV-25 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYQGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 215) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYQGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 109) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:420897 HV-26 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYYGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 216) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYYGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 110) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:420901 HV-32 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYNGRNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 222) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYNGRNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 128) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420908 HV-33 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYIGRNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 223) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYIGRNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 129) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420915 HV-34 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYQGRNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 224) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYQGRNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 130) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420922 HV-35 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYYGRNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 225) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYYGRNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 131) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420929 HV-36 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYNGNNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 226) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYNGNNKYYARSVKG
(SEQ ID NO: 132)
GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420936 HV-37 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYIGNNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 227) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYIGNNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 133) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420943 HV-38 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYQGNNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 228) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYQGNNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 134) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420950 HV-39 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYYGNNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 229) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYYGNNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 135) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:420957 HV-40 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYNGRNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 230) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYNGRNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 114) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:420964 HV-41 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYIGRNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 231) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYIGRNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 115) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:420971 HV-42 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYQGRNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 232) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYQGRNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 116) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:420978 HV-43 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYYGRNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 233) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYYGRNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 117) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:420985 HV-44 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYNGNNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 234) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYNGNNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 118) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:420992 HV-45 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYIGNNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 235) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYIGNNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 119) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:420999 HV-46 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYQGNNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 236) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYQGNNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 120) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:421006 HV-47 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYYGNNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 237) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYYGNNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 121) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:421013 HV-48 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGRNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 238) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGRNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 126) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:421020 HV-49 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGNNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 239) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGNNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 127) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:421027 HV-32 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYNGRNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 222) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYNGRNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 128) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421031 HV-33 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYIGRNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 223) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYIGRNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 129) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421035 HV-34 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYQGRNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 224) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYQGRNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 130) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421039 HV-35 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYYGRNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 225) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYYGRNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 131) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421043 HV-36 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYNGNNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 226) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYNGNNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 132) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421047 HV-37 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYIGNNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 227) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYIGNNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 133) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421051 HV-38 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYQGNNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 228) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYQGNNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 134) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421055 HV-39 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYYGNNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 229) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYYGNNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 135) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421059 HV-40 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYNGRNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 230) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYNGRNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 114) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:421063 HV-41 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYIGRNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 231) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYIGRNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 115) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:421067 HV-42 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYQGRNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 232) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYQGRNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 116) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:421071 HV-43 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYYGRNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 233) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYYGRNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 117) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:421075 HV-44 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYNGNNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 234) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYNGNNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 118) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:421079 HV-45 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYIGNNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 235) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYIGNNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 119) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:421083 HV-46 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYQGNNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 236) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYQGNNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 120) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:421087 HV-47 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYYGNNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 237) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYYGNNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 121) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:421091 HV-50 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYNGRNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 240) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYNGRNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 128) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:421098 HV-51 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYIGRNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 241) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYIGRNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 129) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:421105 HV-52 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYQGRNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 242) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYQGRNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 130) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:421112 HV-53 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYYGRNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 243) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYYGRNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 131) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:421119 HV-54 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYNGNNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 244) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYNGNNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 132) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:421126 HV-55 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYIGNNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 245) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYIGNNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 133) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:421133 HV-56 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYQGNNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 246) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYQGNNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 134) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:421140 HV-57 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYYGNNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 247) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYYGNNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 135) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:421147 HV-57 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYYGNNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 247) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYYGNNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 135) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:421151 HV-01 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 191) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 106) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:391478 HV-01 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 191) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 106) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421157 HV-01 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 191) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 106) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421163 HV-58 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 248) HFAMH (SEQ ID NO: 89) VISYDGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 106) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:391578 HV-59 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 249) RYAMH (SEQ ID NO: 90) VISYDGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 106) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421170 HV-60 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISFDGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 250) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISFDGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 136) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421176 HV-61 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGANKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 251) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGANKYYAESVKG (SEQ ID NO: 137) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421182 HV-62 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDFLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 252) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 106) GYDFLTGYPDY (SEQ ID NO: 173)
iPS:421189 HV-01 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 191) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 106) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421195 HV-01 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 191) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 106) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421201 HV-01 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 191) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 106) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421207 HV-58 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 248) HFAMH (SEQ ID NO: 89) VISYDGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 106) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421211 HV-59 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 249) RYAMH (SEQ ID NO: 90) VISYDGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 106) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421215 HV-60 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISFDGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 250) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISFDGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 136) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421219 HV-61 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGANKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 251) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGANKYYAESVKG (SEQ ID NO: 137) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421223 HV-62 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDFLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 252) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 106) GYDFLTGYPDY (SEQ ID NO: 173)
iPS:421227 HV-03 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYNGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 193) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYNGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 107) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421231 HV-03 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYNGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 193) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYNGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 107) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421235 HV-03 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYNGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 193) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYNGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 107) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421239 HV-63 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYNGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 253) HFAMH (SEQ ID NO: 89) VISYNGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 107) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421246 HV-64 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYNGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 254) RYAMH (SEQ ID NO: 90) VISYNGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 107) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421253 HV-65 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISFNGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 255) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISFNGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 138) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421260 HV-66 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYNGANKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 256) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYNGANKYYAESVKG (SEQ ID NO: 139) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421267 HV-67 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYNGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDFLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 257) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYNGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 107) GYDFLTGYPDY (SEQ ID NO: 173)
iPS:421274 HV-07 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGRNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 197) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGRNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 111) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421278 HV-07 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGRNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 197) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGRNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 111) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421282 HV-07 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGRNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 197) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGRNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 111) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421286 HV-68 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGRNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 258) HFAMH (SEQ ID NO: 89) VISYDGRNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 111) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421293 HV-69 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGRNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 259) RYAMH (SEQ ID NO: 90) VISYDGRNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 111) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421300 HV-70 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISFDGRNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 260) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISFDGRNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 140) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421307 HV-71 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGRNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDFLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 261) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGRNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 111) GYDFLTGYPDY (SEQ ID NO: 173)
iPS:421314 HV-09 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGGNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 199) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGGNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 113) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421318 HV-09 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGGNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 199) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGGNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 113) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421322 HV-09 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGGNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 199) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGGNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 113) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421326 HV-72 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGGNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 262) HFAMH (SEQ ID NO: 89) VISYDGGNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 113) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421333 HV-73 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGGNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 263) RYAMH (SEQ ID NO: 90) VISYDGGNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 113) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421340 HV-74 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISFDGGNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 264) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISFDGGNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 141) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421347 HV-75 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGANKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 265) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGANKYYARSVKG (SEQ ID NO: 142) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:421354 HV-76 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGGNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDFLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 266) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGGNKYYARSVKG (SEQ ID NO: 113) GYDFLTGYPDY (SEQ ID NO: 173)
iPS:421361 HV-10 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 200) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 106) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:421365 HV-10 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 200) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 106) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:421369 HV-10 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 200) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 106) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:421373 HV-77 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 267) HFAMH (SEQ ID NO: 89) VISYDGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 106) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:421380 HV-78 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 268) RYAMH (SEQ ID NO: 90) VISYDGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 106) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:421387 HV-79 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISFDGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 269) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISFDGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 136) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:421394 HV-80 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGANKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 270) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYDGANKYYAESVKG (SEQ ID NO: 137) GYDILTGYPDY (SEQ ID NO: 172)
iPS:421855 HV-81 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSKYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISFKGSNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDLLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 271) KYAMH
(SEQ ID NO: 91)
VISFKGSNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 143) GYDLLTGYPDY (SEQ ID NO: 174)
iPS:421861 HV-82 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYQGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDLLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 272) RYAMH (SEQ ID NO: 90) VISYQGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 109) GYDLLTGYPDY (SEQ ID NO: 174)
iPS:421867 HV-83 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISFSGSNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDMLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 273) HFAMH (SEQ ID NO: 89) VISFSGSNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 144) GYDMLTGYPDY (SEQ ID NO: 175)
iPS:421873 HV-84 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSKFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYRGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDLLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 274) KFAMH (SEQ ID NO: 92) VISYRGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 145) GYDLLTGYPDY (SEQ ID NO: 174)
iPS:421879 HV-85 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYSGANKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDLLSGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 275) RYAMH (SEQ ID NO: 90) VISYSGANKYYAESVKG (SEQ ID NO: 146) GYDLLSGYPDY (SEQ ID NO: 176)
iPS:421885 HV-86 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISFKGANKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDLLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 276) HYAMH (SEQ ID NO: 93) VISFKGANKYYAESVKG (SEQ ID NO: 147) GYDLLTGYPDY (SEQ ID NO: 174)
iPS:421891 HV-87 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYRGANKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDLLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 277) HYAMH (SEQ ID NO: 93) VISYRGANKYYAESVKG (SEQ ID NO: 148) GYDLLTGYPDY (SEQ ID NO: 174)
iPS:421897 HV-88 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISFYGSNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDFLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 278) HYAMH (SEQ ID NO: 93) VISFYGSNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 149) GYDFLTGYPDY (SEQ ID NO: 173)
iPS:421903 HV-89 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISFFGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDFLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 279) HFAMH (SEQ ID NO: 89) VISFFGGNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 150) GYDFLTGYPDY (SEQ ID NO: 173)
iPS:421909 HV-90 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISFMGTNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDFLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 280) HYAMH (SEQ ID NO: 93) VISFMGTNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 151) GYDFLTGYPDY (SEQ ID NO: 173)
iPS:421915 HV-91 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSYFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISHRGTNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDLLSGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 281) YFAMH
(SEQ ID NO: 94)
VISHRGTNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 152) GYDLLSGYPDY (SEQ ID NO: 176)
iPS:480711 HV-92 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVGVINYRGHGKYYAESVKGRFTVSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 282) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VINYRGHGKYYAESVKG (SEQ ID NO: 153) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:480706 HV-93 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVGVISFSGGSKYYAESVKGRFTLSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 283) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISFSGGSKYYAESVKG (SEQ ID NO: 154) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:480713 HV-94 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVGVISYTGQFKYYAESVKGRFTVSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 284) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYTGQFKYYAESVKG (SEQ ID NO: 155) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:480705 HV-95 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVGVISYTGAQKYYAESVKGRFTMSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 285) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYTGAQKYYAESVKG (SEQ ID NO: 156) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:480707 HV-96 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVGVISYSGASKYYAESVKGRFTMSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 286) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYSGASKYYAESVKG (SEQ ID NO: 157) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:480708 HV-97 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYSGAFKYYAESVKGRFTVSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 287) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYSGAFKYYAESVKG (SEQ ID NO: 158) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:480709 HV-98 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVGVITYTGGAKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 288) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VITYTGGAKYYAESVKG (SEQ ID NO: 159) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:480712 HV-99 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVGVINFQGTTKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 289) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VINFQGTTKYYAESVKG (SEQ ID NO: 160) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:480704 HV-100 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVGVISYSGDLKYYAESVKGRFTVSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 290) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VISYSGDLKYYAESVKG (SEQ ID NO: 161) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:480710 HV-101 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVGVINYFGDAKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 291) RFAMH (SEQ ID NO: 88) VINYFGDAKYYAESVKG (SEQ ID NO: 162) GYDVLTGYPDY (SEQ ID NO: 171)
iPS:480716 HV-102 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSFYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISSFGSNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDLLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 292) FYAMH (SEQ ID NO: 95) VISSFGSNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 163) GYDLLTGYPDY (SEQ ID NO: 174)
iPS:480715 HV-103 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSYYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYSGSNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDLLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 293) YYAMH (SEQ ID NO: 96) VISYSGSNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 164) GYDLLTGYPDY (SEQ ID NO: 174)
iPS:480717 HV-104 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSYYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISHYGTNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDPLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 294) YYAMH (SEQ ID NO: 96) VISHYGTNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 165) GYDPLTGYPDY (SEQ ID NO: 177)
iPS:480714 HV-105 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYQGSNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDLLTGYPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 295) HYAMH (SEQ ID NO: 93) VISYQGSNKYYAESVKG (SEQ ID NO: 166) GYDLLTGYPDY (SEQ ID NO: 174)
Варианты 19H8
19H8 HV-106 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWSNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGTWKQLWFLDHWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 296) SNSATWN (SEQ ID NO: 97) RTYYRSKWSNHYAVSVKS (SEQ ID NO: 167) GTWKQLWFLDH (SEQ ID NO: 178)
iPS:448202 HV-107 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSNRLATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRGKWKNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGTWNQDWFLDHWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 297) NRLATWN (SEQ ID NO: 98) RTYYRGKWKNHYAVSVKS (SEQ ID NO: 168) GTWNQDWFLDH (SEQ ID NO: 179)
iPS:449375 HV-108 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSNRLATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRGKWKNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGTWDQDWFLDHWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 298) NRLATWN (SEQ ID NO: 98) RTYYRGKWKNHYAVSVKS (SEQ ID NO: 168) GTWDQDWFLDH (SEQ ID NO: 180)
iPS:448083 HV-109 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSRQATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRGKWKNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGTWEQDWFLDHWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 299) SRQATWN (SEQ ID NO: 99) RTYYRGKWKNHYAVSVKS (SEQ ID NO: 168) GTWEQDWFLDH (SEQ ID NO: 181)
iPS:452128 HV-110 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSNKQATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRGKWKNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMWNQNWFLDHWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 300) NKQATWN (SEQ ID NO: 100) RTYYRGKWKNHYAVSVKS (SEQ ID NO: 168) GMWNQNWFLDH (SEQ ID NO: 182)
iPS:448195 HV-110 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSNKQATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRGKWKNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMWNQNWFLDHWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 300) NKQATWN (SEQ ID NO: 100) RTYYRGKWKNHYAVSVKS (SEQ ID NO: 168) GMWNQNWFLDH (SEQ ID NO: 182)
iPS:448466 HV-111 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSNKQATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRGQWKNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGTWIGDWFMDHWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 301) NKQATWN (SEQ ID NO: 100) RTYYRGQWKNHYAVSVKS (SEQ ID NO: 169) GTWIGDWFMDH (SEQ ID NO: 183)
iPS:448689 HV-107 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSNRLATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRGKWKNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGTWNQDWFLDHWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 297) NRLATWN (SEQ ID NO: 98) RTYYRGKWKNHYAVSVKS (SEQ ID NO: 168) GTWNQDWFLDH (SEQ ID NO: 179)
iPS:449034 HV-112 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSNKQATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRGKWKNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGTWIQDWFLDHWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 302) NKQATWN (SEQ ID NO: 100) RTYYRGKWKNHYAVSVKS (SEQ ID NO: 168) GTWIQDWFLDH (SEQ ID NO: 184)
iPS:448075 HV-113 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNHATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRGKWKNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGTWDQDWFLDHWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 303) SNHATWN (SEQ ID NO: 101) RTYYRGKWKNHYAVSVKS (SEQ ID NO: 168) GTWDQDWFLDH (SEQ ID NO: 180)
iPS:448924 HV-114 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSRYATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRGQWKNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMWNQNWFLDHWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 304) SRYATWN (SEQ ID NO: 102) RTYYRGQWKNHYAVSVKS (SEQ ID NO: 169) GMWNQNWFLDH (SEQ ID NO: 182)
iPS:448752 HV-110 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSNKQATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRGKWKNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMWNQNWFLDHWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 300) NKQATWN (SEQ ID NO: 100) RTYYRGKWKNHYAVSVKS (SEQ ID NO: 168) GMWNQNWFLDH (SEQ ID NO: 182)
iPS:448772 HV-115 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSNKQATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRGKWKNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMWSGDWFLDHWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 305) NKQATWN (SEQ ID NO: 100) RTYYRGKWKNHYAVSVKS (SEQ ID NO: 168) GMWSGDWFLDH (SEQ ID NO: 185)
iPS:448117 HV-116 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSHVATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRGKWKNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMWSEDWFLDHWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 306) SHVATWN (SEQ ID NO: 103) RTYYRGKWKNHYAVSVKS (SEQ ID NO: 168) GMWSEDWFLDH (SEQ ID NO: 186)
iPS:448788 HV-117 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSRQATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRGKWKNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMWQGNWFLDHWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 307) SRQATWN (SEQ ID NO: 99) RTYYRGKWKNHYAVSVKS (SEQ ID NO: 168) GMWQGNWFLDH (SEQ ID NO: 187)
iPS:448593 HV-118 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSNHQATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRGKWKNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGTWIQDWFLDHWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 308) NHQATWN (SEQ ID NO: 104) RTYYRGKWKNHYAVSVKS (SEQ ID NO: 168) GTWIQDWFLDH (SEQ ID NO: 184)
iPS:448238 HV-119 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSRDATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRGKWKNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGQWNEDWFLDHWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 309) SRDATWN (SEQ ID NO: 105) RTYYRGKWKNHYAVSVKS (SEQ ID NO: 168) GQWNEDWFLDH (SEQ ID NO: 188)
iPS:448901 HV-120 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSNRLATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRGKWKNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGRWEGDWFFDHWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 310) NRLATWN (SEQ ID NO: 98) RTYYRGKWKNHYAVSVKS (SEQ ID NO: 168) GRWEGDWFFDH (SEQ ID NO: 189)
iPS:448655 HV-121 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSNKQATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYFRRTWKNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMWSEDWFLDHWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 311) NKQATWN (SEQ ID NO: 100) RTYFRRTWKNHYAVSVKS (SEQ ID NO: 170) GMWSEDWFLDH (SEQ ID NO: 186)
iPS:448730 HV-122 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSNRLATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRGKWKNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGVWIGNWFLDHWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 312) NRLATWN (SEQ ID NO: 98) RTYYRGKWKNHYAVSVKS (SEQ ID NO: 168) GVWIGNWFLDH (SEQ ID NO: 190)
iPS:449027 HV-110 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSNKQATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRGKWKNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMWNQNWFLDHWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 300) NKQATWN (SEQ ID NO: 100) RTYYRGKWKNHYAVSVKS (SEQ ID NO: 168) GMWNQNWFLDH (SEQ ID NO: 182)
3574 HV-110 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSNKQATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRGKWKNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMWNQNWFLDHWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 300) NKQATWN (SEQ ID NO: 100) RTYYRGKWKNHYAVSVKS (SEQ ID NO: 168) GMWNQNWFLDH (SEQ ID NO: 182)
3575 HV-106 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWSNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGTWKQLWFLDHWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 296) SNSATWN (SEQ ID NO: 97) RTYYRSKWSNHYAVSVKS (SEQ ID NO: 167) GTWKQLWFLDH (SEQ ID NO: 178)

Антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению могут содержать одну или несколько CDR легкой цепи (т. е. CDRL) и/или CDR тяжелой цепи (т. е. CDRH), представленных в таблицах 1A и 1B соответственно. В некоторых вариантах осуществления антитела к PAC1 или их связывающие фрагменты получают из антитела 29G4v9, 29G4v10 или 29G4v22 (т. е. содержат одну или несколько замен в одной или нескольких CDRL и/или CDRH антитела 29G4v9, 29G4v10 или 29G4v22). Например, в определенных вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты содержат одну или несколько CDR легкой цепи, выбранных из (i) CDRL1, выбранной из SEQ ID NO: 5-16, (ii) CDRL2 под SEQ ID NO: 26 и (iii) CDRL3, выбранной из SEQ ID NO: 36-38, и (iv) CDRL под (i), (ii) и (iii), которая содержит одну или несколько, например, одну, две, три, четыре или более аминокислотных замен (например, консервативных аминокислотных замен), делеций или вставок не более пяти, четырех, трех, двух или одной аминокислоты. В этих и других вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты содержат одну или несколько CDR тяжелой цепи, выбранных из (i) CDRH1, выбранной из SEQ ID NO: 88-96, (ii) CDRH2, выбранной из SEQ ID NO: 106-166 и (iii) CDRH3, выбранной из SEQ ID NO: 171-177, и (iv) CDRH под (i), (ii) и (iii), которая содержит одну или несколько, например, одну, две, три, четыре или более аминокислотных замен (например, консервативных аминокислотных замен), делеций или вставок не более пяти, четырех, трех, двух или одной аминокислоты аминокислоты.

В других вариантах осуществления антитела к PAC1 или их связывающие фрагменты получают из антитела 19H8 (т. е. содержат одну или несколько замен в одной или нескольких CDRL и/или CDRH антитела 19H8). В таких вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты содержат одну или несколько CDR легкой цепи, выбранных из (i) CDRL1, выбранной из SEQ ID NO: 17-25, (ii) CDRL2, выбранной из SEQ ID NO: 27-35 и (iii) CDRL3, выбранной из SEQ ID NO: 39-51, и (iv) CDRL под (i), (ii) и (iii), которая содержит одну или несколько, например, одну, две, три, четыре или более аминокислотных замен (например, консервативных аминокислотных замен), делеций или вставок не более пяти, четырех, трех, двух или одной аминокислоты. В этих и других вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты содержат одну или несколько CDR тяжелой цепи, выбранных из (i) CDRH1, выбранной из SEQ ID NO: 97-105, (ii) CDRH2, выбранной из SEQ ID NO: 167-170, и (iii) CDRH3, выбранной из SEQ ID NO: 178-190, и (iv) CDRH под (i), (ii) и (iii), которая содержит одну или несколько, например, одну, две, три, четыре или более аминокислотных замен (например, консервативных аминокислотных замен), делеций или вставок не более пяти, четырех, трех, двух или одной аминокислоты аминокислоты.

В определенных вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты могут содержать 1, 2, 3, 4, 5 или 6 вариантных форм CDR, перечисленных в таблицах 1A и 1B, причем каждая характеризуется по меньшей мере 80%, 85%, 90% или 95% идентичностью последовательности с последовательностью CDR, перечисленной в таблицах 1A и 1B. В некоторых вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты включают 1, 2, 3, 4, 5 или 6 CDR, перечисленных в таблицах 1A и 1B, каждая из которых отличается не более чем на 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислот из CDR, перечисленных в этих таблицах. В некоторых вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат CDRL1, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 5-16, или ее вариант, содержащий одну, две, три или четыре аминокислотные замены; CDRL2, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 26 или ее вариант, содержащий одну, две, три или четыре аминокислотные замены; CDRL3, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 36-38, или ее вариант, содержащий одну, две, три или четыре аминокислотные замены; CDRH1, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 88-96, или ее вариант, содержащий одну, две, три или четыре аминокислотные замены; CDRH2, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 106-166, или ее вариант, содержащий одну, две, три или четыре аминокислотные замены; и CDRH3, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 171-177, или ее вариант, содержащий одну, две, три или четыре аминокислотные замены. В других вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат CDRL1, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 5-16; CDRL2, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 26; CDRL3, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 36-38; CDRH1, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 88-96; CDRH2, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 106-166; и CDRH3, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 171-177.

В других вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат CDRL1, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 17-25, или ее вариант, содержащий одну, две, три или четыре аминокислотные замены; CDRL2, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 27-35, или ее вариант, содержащий одну, две, три или четыре аминокислотные замены; CDRL3, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 39-51, или ее вариант, содержащий одну, две, три или четыре аминокислотные замены; CDRH1, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 97-105, или ее вариант, содержащий одну, две, три или четыре аминокислотные замены; CDRH2, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 167-170, или ее вариант, содержащий одну, две, три или четыре аминокислотные замены; и CDRH3, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 178-190, или ее вариант, содержащий одну, две, три или четыре аминокислотные замены. В других вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат CDRL1, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 17-25; CDRL2, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 27-35; CDRL3, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 39-51; CDRH1, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 97-105; CDRH2, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 167-170; и CDRH3, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 178-190.

В конкретных вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую CDRL1, CDRL2 и CDRL3, где: (a) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 7, 26 и 36 соответственно; (b) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 5, 26 и 36 соответственно; (c) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 12, 26 и 36 соответственно; или (d) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 13, 26 и 36 соответственно.

В других конкретных вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDRH1, CDRH2 и CDRH3, где: (a) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 88, 108 и 171 соответственно; (b) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 88, 116 и 171 соответственно; (c) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 88, 134 и 171 соответственно; (d) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 92, 145 и 174 соответственно; (e) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 88, 108 и 172 соответственно; (f) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 88, 128 и 172 соответственно; (g) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 88, 153 и 171 соответственно; (i) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 88, 154 и 171 соответственно; или (j) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 88, 155 и 171 соответственно.

В определенных вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую CDRL1, CDRL2 и CDRL3, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDRH1, CDRH2 и CDRH3, где:

(a) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 7, 26 и 36 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 88, 108 и 171 соответственно;

(b) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 7, 26 и 36 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 88, 116 и 171 соответственно;

(c) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 5, 26 и 36 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 88, 134 и 171 соответственно;

(d) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 5, 26 и 36 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 92, 145 и 174 соответственно;

(e) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 7, 26 и 36 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 88, 108 и 172 соответственно;

(f) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 5, 26 и 36 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 88, 128 и 172 соответственно;

(g) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 7, 26 и 36 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 88, 134 и 171 соответственно;

(h) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 12, 26 и 36 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 88, 153 и 171 соответственно;

(i) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 12, 26 и 36 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 88, 154 и 171 соответственно; или

(j) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 13, 26 и 36 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 88, 155 и 171 соответственно.

В одном варианте осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую CDRL1, CDRL2 и CDRL3, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDRH1, CDRH2 и CDRH3, где CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 7, 26 и 36 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 88, 108 и 171 соответственно. В другом варианте осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую CDRL1, CDRL2 и CDRL3, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDRH1, CDRH2 и CDRH3, где CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 7, 26 и 36 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 88, 116 и 171 соответственно. В еще одном варианте осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую CDRL1, CDRL2 и CDRL3, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDRH1, CDRH2 и CDRH3, где CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 5, 26 и 36 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 88, 134 и 171 соответственно. В еще одном варианте осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую CDRL1, CDRL2 и CDRL3, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDRH1, CDRH2 и CDRH3, где CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 5, 26 и 36 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 92, 145 и 174 соответственно. В одном конкретном варианте осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую CDRL1, CDRL2 и CDRL3, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDRH1, CDRH2 и CDRH3, где CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 7, 26 и 36 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 88, 108 и 172 соответственно. В другом конкретном варианте осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую CDRL1, CDRL2 и CDRL3, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDRH1, CDRH2 и CDRH3, где CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 12, 26 и 36 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 88, 153 и 171 соответственно.

В определенных вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую CDRL1, CDRL2 и CDRL3, где: (a) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 25, 31 и 42 соответственно; (b) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 20, 30 и 44 соответственно; (c) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 17, 33 и 42 соответственно; (d) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 23, 31 и 50 соответственно; (e) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 17, 31 и 44 соответственно; (f) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 17, 27 и 39 соответственно; (g) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 18, 31 и 46 соответственно; (h) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 17, 28 и 40 соответственно; (i) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 18, 30 и 43 соответственно; или (j) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 22, 28 и 49 соответственно.

В определенных других вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDRH1, CDRH2 и CDRH3, где: (a) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 98, 168 и 190 соответственно; (b) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 100, 168 и 182 соответственно; (c) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 99, 168 и 187 соответственно; (d) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 97, 167 и 178 соответственно; (e) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 98, 168 и 189 соответственно; (f) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 98, 168 и 179 соответственно; или (g) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 102, 169 и 182 соответственно.

В некоторых вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую CDRL1, CDRL2 и CDRL3, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDRH1, CDRH2 и CDRH3, где:

(a) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 25, 31 и 42 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 98, 168 и 190 соответственно;

(b) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 20, 30 и 44 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 100, 168 и 182 соответственно;

(c) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 17, 33 и 42 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 99, 168 и 187 соответственно;

(d) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 23, 31 и 50 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 97, 167 и 178 соответственно;

(e) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 17, 31 и 44 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 98, 168 и 189 соответственно;

(f) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 17, 27 и 39 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 100, 168 и 182 соответственно;

(g) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 18, 31 и 46 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 98, 168 и 179 соответственно;

(h) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 17, 28 и 40 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 98, 168 и 179 соответственно;

(i) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 18, 30 и 43 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 100, 168 и 182 соответственно; или

(j) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 22, 28 и 49 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 102, 169 и 182 соответственно.

В одном варианте осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую CDRL1, CDRL2 и CDRL3, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDRH1, CDRH2 и CDRH3, где CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 25, 31 и 42 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 98, 168 и 190 соответственно. В другом варианте осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую CDRL1, CDRL2 и CDRL3, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDRH1, CDRH2 и CDRH3, где CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 20, 30 и 44 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 100, 168 и 182 соответственно. В еще одном варианте осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую CDRL1, CDRL2 и CDRL3, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDRH1, CDRH2 и CDRH3, где CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 17, 33 и 42 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 99, 168 и 187 соответственно. В еще одном варианте осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую CDRL1, CDRL2 и CDRL3, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDRH1, CDRH2 и CDRH3, где CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 23, 31 и 50 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 97, 167 и 178 соответственно. В одном конкретном варианте осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую CDRL1, CDRL2 и CDRL3, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDRH1, CDRH2 и CDRH3, где CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 17, 31 и 44 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 98, 168 и 189 соответственно. В другом конкретном варианте осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую CDRL1, CDRL2 и CDRL3, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDRH1, CDRH2 и CDRH3, где CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 17, 27 и 39 соответственно, и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность под SEQ ID NO: 100, 168 и 182 соответственно.

В определенных вариантах осуществления антитела и антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат вариабельную область тяжелой цепи (VH) иммуноглобулина и вариабельную область легкой цепи (VL) иммуноглобулина из антитела, которое специфически связывается с PAC1 человека, такого как антитела, описанные в данном документе. Термин "вариабельная область", применяемый в данном документе взаимозаменяемо с термином "вариабельный домен" (вариабельная область легкой цепи (VL), вариабельная область тяжелой цепи (VH)), относится к области в каждой из легкой и тяжелой цепей иммуноглобулина, которая участвует непосредственно в связывании антитела с антигеном. Как обсуждалось выше, области вариабельной легкой и тяжелой цепей имеют одинаковую общую структуру, и каждая область содержит четыре каркасных (FR) области, последовательности которых являются в значительной степени консервативными, соединенными тремя CDR. Каркасные области принимают конформацию бета-листа, и CDR могут образовывать петли, соединяющие структуру бета-листа. CDR в каждой цепи удерживаются в своей трехмерной структуре каркасными областями и вместе с CDR из другой цепи образуют антигенсвязывающий сайт.

Таким образом, в некоторых вариантах осуществления антитела к PAC1 и антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению могут содержать вариабельную область легкой цепи, выбранную из LV-01 - LV-15, как показано в таблице 1A, и/или вариабельную область тяжелой цепи, выбранную из HV-01 - HV-105, как показано в таблице 1B, и связывающие фрагменты, производные и варианты этих вариабельных областей легкой цепи и тяжелой цепи. В других вариантах осуществления антитела к PAC1 и антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению могут содержать вариабельную область легкой цепи, выбранную из LV-16 - LV-36, как показано в таблице 1A, и/или вариабельную область тяжелой цепи, выбранную из HV-106 - HV-122, как показано в таблице 1B, и связывающие фрагменты, производные и варианты этих вариабельных областей легкой цепи и тяжелой цепи.

Каждая из вариабельных областей легкой цепи, перечисленных в таблице 1A, может быть объединена с любой из вариабельных областей тяжелой цепи, перечисленных в таблице 1B, для образования антитела к PAC1 или его антигенсвязывающего фрагмента по настоящему изобретению. Примеры таких комбинаций включают без ограничения: (i) LV-03 и любую из HV-03 - HV-26, HV-32 - HV-47 и HV-57 - HV-62; (ii) LV-04 и любую из HV-11 - HV-91; (iii) LV-05 и любую из HV-01, HV-03, HV-07, HV-09 и HV-10; (iv) LV-06 и любую из HV-01, HV-03, HV-07, HV-09 и HV-10; (v) LV-07 и любую из HV-01, HV-03, HV-07, HV-09 и HV-10; (vi) LV-08 и HV-01; (vii) LV-09 и HV-01; (viii) LV-10 и HV-01; (ix) LV-11 и любую из HV-92, HV-93, HV-95 - HV-97 и HV-99 - HV-101; (x) LV-12 и HV-94; (xi) LV-13 и HV-98; (xii) LV-14 и любую из HV-102 - HV-104; (xiii) LV-15 и HV-105; (xiv) LV-17 и HV-107; (xv) LV-18 и HV-108; (xvi) LV-19 и HV-109; (xvii) LV-20 и HV-110; (xviii) LV-21 и HV-110; (xix) LV-22 и HV-111; (xx) LV-23 и HV-107; (xxi) LV-24 и HV-112; (xxii) LV-25 и HV-113; (xxiii) LV-26 и HV-114; (xxiv) LV-27 и HV-106 или HV-110; (xxv) LV-28 и HV-115 или HV-118; (xxvi) LV-29 и HV-116; (xxvii) LV-30 и HV-117; (xxviii) LV-31 и HV-119; (xxix) LV-32 и HV-120; (xxx) LV-33 и HV-121; (xxxi) LV-34 и HV-122; (xxxii) LV-35 и HV-110; и (xxxiii) LV-36 и HV-110.

В определенных вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность LV-03 (SEQ ID NO: 54), и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность HV-04 (SEQ ID NO: 194). В некоторых вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность LV-03 (SEQ ID NO: 54), и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность HV-13 (SEQ ID NO: 203). В других вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность LV-04 (SEQ ID NO: 55), и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность HV-38 (SEQ ID NO: 228). В еще других вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность LV-04 (SEQ ID NO: 55), и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность HV-84 (SEQ ID NO: 274). В некоторых вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность LV-03 (SEQ ID NO: 54), и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность HV-24 (SEQ ID NO: 214). В определенных вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность LV-04 (SEQ ID NO: 55), и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность HV-50 (SEQ ID NO: 240). В одном варианте осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность LV-03 (SEQ ID NO: 54), и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность HV-38 (SEQ ID NO: 228). В другом варианте осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность LV-11 (SEQ ID NO: 62), и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность HV-92 (SEQ ID NO: 282). В еще одном варианте осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность LV-11 (SEQ ID NO: 62), и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность HV-93 (SEQ ID NO: 283). В еще одном варианте осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность LV-12 (SEQ ID NO: 63), и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность HV-94 (SEQ ID NO: 284).

В определенных других вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность LV-34 (SEQ ID NO: 85), и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность HV-122 (SEQ ID NO: 312). В некоторых вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность LV-21 (SEQ ID NO: 72), и вариабельную область тяжелой цепи содержащую последовательность HV-110 (SEQ ID NO: 300). В других вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность LV-30 (SEQ ID NO: 81), и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность HV-117 (SEQ ID NO: 307). В еще других вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность LV-27 (SEQ ID NO: 78), и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность HV-106 (SEQ ID NO: 296). В некоторых вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность LV-32 (SEQ ID NO: 83), и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность HV-120 (SEQ ID NO: 310). В определенных вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность LV-36 (SEQ ID NO: 87), и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность HV-110 (SEQ ID NO: 300). В одном варианте осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность LV-23 (SEQ ID NO: 74), и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность HV-107 (SEQ ID NO: 297). В другом варианте осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность LV-17 (SEQ ID NO: 68), и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность HV-107 (SEQ ID NO: 297). В еще одном варианте осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность LV-20 (SEQ ID NO: 71), и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность HV-110 (SEQ ID NO: 300). В еще одном варианте осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность LV-26 (SEQ ID NO: 77), и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность HV-114 (SEQ ID NO: 304).

В некоторых вариантах осуществления антитела к PAC1 или их антигенсвязывающие фрагменты содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность смежных аминокислот, которая отличается от последовательности вариабельной области легкой цепи в таблице 1A, т. е. VL, выбранную из LV-01 - LV-36, только по 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 аминокислотным остаткам, где каждое такое различие последовательностей независимо представляет собой либо делецию, вставку, либо замену одной аминокислоты, причем делеции, вставки и/или замены приводят к изменениям не более 15 аминокислот относительно вышеуказанных последовательностей вариабельного домена. Вариабельная область легкой цепи в некоторых антителах к PAC1 и связывающих фрагментах содержит последовательность аминокислот, которая характеризуется по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 97% или по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с аминокислотными последовательностями под SEQ ID NO: 52-87 (т. е. вариабельными областями легкой цепи в таблице 1A).

В одном варианте осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность, которая на по меньшей мере 90% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 54-66. В другом варианте осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 54-66. В еще одном варианте осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 54-66. В некоторых вариантах осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 54. В других вариантах осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 55. В еще одних вариантах осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 62. В еще других вариантах осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 63.

В другом варианте осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность, которая на по меньшей мере 90% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 68-87. В еще одном варианте осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 68-87. В еще одном варианте осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 68-87. В определенных вариантах осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 68. В некоторых вариантах осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 71. В других вариантах осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 72. В еще одних вариантах осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 74. В еще других вариантах осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 77. В определенных вариантах осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 78. В других вариантах осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 81. В одном варианте осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 83. В другом варианте осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 85. В еще одном варианте осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 87.

В этих и других вариантах осуществления антитела к PAC1 и их антигенсвязывающие фрагменты содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность смежных аминокислот, которая отличается от последовательности вариабельной области тяжелой цепи в таблице 1B, т. е. VH, выбранную из HV-01 - HV-122, только по 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 аминокислотным остаткам, где каждое такое различие последовательностей независимо представляет собой либо делецию, вставку, либо замену одной аминокислоты, причем делеции, вставки и/или замены приводят к изменениям не более 15 аминокислот относительно вышеуказанных последовательностей вариабельного домена. Вариабельная область тяжелой цепи в некоторых антителах к PAC1 и антигенсвязывающих фрагментах содержит последовательность аминокислот, которая характеризуется по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 97% или по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с аминокислотными последовательностями под SEQ ID NO: 191-312 (т. е. вариабельными областями тяжелой цепи в таблице 1B).

В одном варианте осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность, которая на по меньшей мере 90% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 191-295. В другом варианте осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 191-295. В еще одном варианте осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 191-295. В некоторых вариантах осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 194. В других вариантах осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 203. В еще одних вариантах осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 214. В еще других вариантах осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 228. В определенных вариантах осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 240. В других вариантах осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 274. В одном варианте осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 282. В другом варианте осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 283. В еще одном варианте осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 284.

В другом варианте осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность, которая на по меньшей мере 90% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 296-312. В еще одном варианте осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность, которая на по меньшей мере 95% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 296-312. В еще одном варианте осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 296-312. В некоторых вариантах осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 296. В других вариантах осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 297. В еще одних вариантах осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 300. В еще других вариантах осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 304. В определенных вариантах осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 307. В других вариантах осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 310. В одном варианте осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 312.

Применяемый в данном документе термин "идентичность" относится к взаимосвязи между последовательностями двух или более полипептидных молекул или двух или более молекул нуклеиновой кислоты, как определено при выравнивании и сравнении последовательностей. Применяемый в данном документе термин "процент идентичности" означает процент идентичных остатков аминокислот или нуклеотидов в сравниваемых молекулах и рассчитывается на основе размера наименьшей из сравниваемых молекул. Для этих расчетов гэпы в выравниваниях (если таковые имеются) должны быть учтены с помощью определенной математической модели или компьютерной программы (т. е. "алгоритма"). Способы, которые можно применять для расчета идентичности выравниваемых нуклеиновых кислот или полипептидов, включают способы, описанные в Computational Molecular Biology, (Lesk, A. M., ed.), 1988, New York: Oxford University Press; Biocomputing Informatics and Genome Projects, (Smith, D. W., ed.), 1993, New York: Academic Press; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, (Griffin, A. M., and Griffin, H. G., eds.), 1994, New Jersey: Humana Press; von Heinje, G., 1987, Sequence Analysis in Molecular Biology, New York: Academic Press; Sequence Analysis Primer, (Gribskov, M. and Devereux, J., eds.), 1991, New York: M. Stockton Press и Carillo et al., 1988, SIAM J. Applied Math. 48:1073. Например, идентичность последовательности может быть определена с помощью стандартных способов, которые обычно применяют для сравнения сходства в положении аминокислот двух полипептидов. С применением компьютерной программы, такой как BLAST или FASTA, две полипептидные или две полинуклеотидные последовательности выравнивают для оптимального соответствия их соответствующих остатков (либо по всей длине одной или обеих последовательностей, либо по предварительно определенной части одной или обеих последовательностей). В программах предусмотрен штраф за открытие по умолчанию и штраф за гэп по умолчанию, и матрицу оценки, такую как PAM 250 (Dayhoff et al., в Atlas of Protein Sequence and Structure, vol. 5, supp. 3, 1978) или BLOSUM62 (Henikoff et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89:10915-10919), можно применять совместно с компьютерной программой. Например, процент идентичности затем может быть рассчитан как общее количество идентичных совпадений, умноженное на 100, а затем разделенное на сумму длины более длинной последовательности в пределах совпадающего промежутка и количества промежутков, введенных в более длинные последовательности с целью выравнивания двух последовательностей. При расчете процента идентичности сравниваемые последовательности выравнивают способом, который дает наибольшее совпадение между последовательностями.

Программный пакет GCG представляет собой компьютерную программу, которую можно применять для определения процента идентичности, при этом в пакет входит GAP (Devereux et al., 1984, Nucl. Acid Res. 12:387; Genetics Computer Group, Университет штата Висконсин, Мэдисон, WI). Компьютерный алгоритм GAP применяют для выравнивания двух полипептидов или двух полинуклеотидов, для которых должен быть определен процент идентичности последовательностей. Последовательности выравнивают для оптимального совпадения их соответствующих аминокислот или нуклеотидов ("совпадающий промежуток", определяемый алгоритмом). Штраф за открытие гэпа (который рассчитывается как 3x средняя диагональ, где "средняя диагональ" представляет собой среднее значение диагонали применяемой матрицы сравнения; "диагональ" представляет собой балл или число, присвоенное каждому полному аминокислотному совпадению в соответствии с определенной матрицей сравнения) и штраф за продление гэпа (который, как правило, составляет 1/10 долю от штрафа за открытие гэпа), а также матрицу сравнения, такую как PAM 250 или BLOSUM 62, применяют вместе с алгоритмом. В определенных вариантах осуществления в этом алгоритме также применяется стандартная матрица сравнения (см. Dayhoff et al., (1978) Atlas of Protein Sequence and Structure 5:345-352 для матрицы сравнения PAM 250; Henikoff et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89:10915-10919 для матрицы сравнения BLOSUM 62).

Рекомендуемые параметры для определения процента идентичности полипептидов или нуклеотидных последовательностей с применением программы GAP включают следующие:

Алгоритм: Needleman et al. 1970, J. Mol. Biol. 48:443-453;

Матрица сравнения: BLOSUM 62 из Henikoff et al., 1992, см. выше;

Штраф за гэп: 12 (но без штрафа за концевые гэпы)

Штраф за длину гэпа: 4

Пороговое значение степени сходства: 0

Применение определенных схем выравнивания для выравнивания двух аминокислотных последовательностей может приводить к совпадению только короткой области двух последовательностей, и эта небольшая выровненная область может характеризоваться очень высокой степенью идентичности последовательностей, даже если отсутствует значительная взаимосвязь между двумя полноразмерными последовательностями. Соответственно, выбранный способ выравнивания (программа GAP) может быть, если требуется, скорректирован для обеспечения выравнивания, которое охватывает по меньшей мере 50 смежных аминокислот целевого полипептида.

Антитела к PAC1 по настоящему изобретению могут содержать любую константную область иммуноглобулина. Термин "константная область", применяемый в данном документе взаимозаменяемо с термином "константный домен", относится ко всем доменам антитела, отличным от вариабельной области. Константная область не участвует непосредственно в связывании антигена, но проявляет различные эффекторные функции. Как описано выше, антитела делятся на конкретные изотипы (IgA, IgD, IgE, IgG и IgM) и подтипы (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 IgA2) в зависимости от аминокислотной последовательности константной области их тяжелых цепей. Константная область легкой цепи может представлять собой, например, константную область легкой цепи каппа- или лямбда-типа, например, константную область легкой цепи каппа- или лямбда-типа человека, которые обнаружены во всех пяти изотипах антител. Примеры последовательностей константной области легкой цепи иммуноглобулина человека показаны в следующей таблице.

Таблица 2. Иллюстративные константные области легкой цепи иммуноглобулина человека
Обозначение SEQ ID NO: Аминокислотная последовательность CL-домена
Лямбда v1 человека 313 GQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
Лямбда v2 человека 314 GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
Лямбда v3 человека 315 QPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
Лямбда v4 человека 316 GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
Лямбда v5 человека 317 GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLVSDFYPGAVTVAWKADGSPVKVGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCRVTHEGSTVEKTVAPAECS
Каппа v1 человека 318 TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Каппа v2 человека 319 RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

Константная область тяжелой цепи антител к PAC1 по настоящему изобретению может представлять собой, например, константную область тяжелой цепи альфа-, дельта-, эпсилон-, гамма- или мю-типа, например, константную область тяжелой цепи альфа-, дельта-, эпсилон-, гамма- или мю-типа человека. В некоторых вариантах осуществления антитела к PAC1 содержат константную область тяжелой цепи из иммуноглобулина IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4, такого как иммуноглобулин IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 человека. В одном варианте осуществления антитело к PAC1 содержит константную область тяжелой цепи из иммуноглобулина IgG1 человека. В таких вариантах осуществления константная область иммуноглобулина IgG1 человека может содержать одну или несколько мутаций для предотвращения гликозилирования антитела, как описано более подробно в данном документе. В другом варианте осуществления антитело к PAC1 содержит константную область тяжелой цепи из иммуноглобулина IgG2 человека. В еще одном варианте осуществления антитело к PAC1 содержит константную область тяжелой цепи из иммуноглобулина IgG4 человека. Примеры последовательностей константной области тяжелой цепи IgG1, IgG2 и IgG4 человека показаны ниже в таблице 3.

Таблица 3. Иллюстративные константные области тяжелой цепи иммуноглобулина человека
Изотип Ig SEQ ID NO: Аминокислотная последовательность константной области тяжелой цепи
IgG1z человека 320 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
IgG1za человека 321 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
IgG1f человека 322 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
IgG1fa человека 323 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
Агликозилированный IgG1z v1 человека 324 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
Агликозилированный IgG1z v2 человека 325 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
IgG2 человека 326 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
IgG4 человека 327 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

Каждая из вариабельных областей легкой цепи, раскрытых в таблице 1A, и каждая из вариабельных областей тяжелой цепи, раскрытых в таблице 1B, могут быть присоединены к вышеуказанным константным областям легкой цепи (таблица 2) и константным областям тяжелой цепи (таблица 3) с образованием полной легкой и тяжелой цепей антитела соответственно. Кроме того, каждая из образованных таким образом последовательностей тяжелых и легких цепей может быть объединена с другой с образованием полной структуры антитела. Следует понимать, что вариабельные области тяжелой цепи и легкой цепи, предусмотренные в данном документе, также могут быть присоединены к другим константным доменам, содержащим последовательности, отличные от иллюстративных последовательностей, перечисленных выше.

Антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению могут представлять собой любые из антител к PAC1 или антигенсвязывающих фрагментов, раскрытых в данном документе. Например, в определенных вариантах осуществления антитело к PAC1 представляет собой антитело к PAC1, выбранное из любых из антител, перечисленных в таблицах 9, 10, 12, 13, 14, 19 и 20. В некоторых вариантах осуществления антитела к PAC1 содержат вариабельную область легкой цепи и/или вариабельную область тяжелой цепи, содержащую одну или несколько аминокислотных замен, указанных в таблицах 9, 10, 12, 13, 19 или 20. Например, в одном варианте осуществления антитело к PAC1 содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 52 с мутацией в одном или нескольких из аминокислотных положений 27, 28, 30, 31, 32 и/или 93. В определенных вариантах осуществления мутация выбрана из Q27K, Q27R, Q27H, S28A, G30M, G30W, R31Q, R31L, R31H, R31W, R31Y, S32A, S32N, S32L, R93F, R93M, R93Y или их комбинаций. В этих и других вариантах осуществления антитело к PAC1 содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 191 с мутацией в одном или нескольких из аминокислотных положений 31, 32, 49, 52, 53, 54, 56, 57, 62, 70, 102, 103 и/или 104. В некоторых вариантах осуществления мутация выбрана из R31F, R31H, R31Y, R31M, R31K, F32Y, A49G, S52N, S52T, Y53F, Y53H, Y53S, D54I, D54L, D54N, D54R, D54Q, D54Y, D54F, D54M, D54S, D54T, G56Q, G56N, G56R, G56H, G56A, G56S, G56T, G56D, N57A, N57F, N57G, N57S, N57Q, N57L, N57T, E62R, I70V, I70L, I70M, V102P, V102L, V102I, V102F, V102M, L103M, T104S или их комбинаций.

В другом варианте осуществления антитело к PAC1 содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 67 с мутацией в одном или нескольких из аминокислотных положений 28, 30, 31, 34, 49, 50, 51, 52, 53, 91, 92, 93, 94 и/или 96. Мутация может быть выбрана из S28Y, S28T, S28K, S28P, S28Q, S28R, S28M, S30A, S30V, R31Q, N34V, N34S, Y49F, A50V, A50G, A51G, A51S, S52Q, S52H, S52N, S52Y, S52R, S52L, S53I, S53Y, S53N, S53M, S53H, S53R, S91A, Y92I, S93G, S93Q, S93I, S93N, S93M, P94E, P94M, P94N, P94Q, P94A, P94T, P94I, F96Y или их комбинаций. В этих и других вариантах осуществления антитело к PAC1 содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 296 с мутацией в одном или нескольких из аминокислотных положений 31, 32, 33, 57, 58, 60, 103, 105, 106, 107 и/или 110. В некоторых вариантах осуществления мутация выбрана из S31N, N32R, N32K, N32H, S33L, S33Q, S33Y, S33V, S33D, S57G, K58Q, S60K, T103M, T103Q, T103R, T103V, K105N, K105E, K105D, K105I, K105A, K105S, K105Q, Q106G, Q106E, L107D, L107N, L110M, L110F или их комбинаций.

В определенных вариантах осуществления антитело к PAC1 или антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению выбран из антител 420653, 420845, 420943, 421873, 420889, 421091, 421051, 480711, 480706, 480713, 448730, 448195, 448788, 448901, 448689, 448202, 452128, 448924, 3574 и 3575 или их антигенсвязывающих фрагментов, вариабельная область и последовательности CDR которых приведены в таблицах 1A и 1B. В некоторых вариантах осуществления антитело к PAC1 представляет собой антитело, выбранное из антител 420653, 420845, 420943, 421873, 420889, 421091, 421051, 480711, 480706 и 480713. В других вариантах осуществления антитело к PAC1 представляет собой антитело, выбранное из антител 448730, 448195, 448788, 448901, 448689, 448202, 452128, 448924, 3574 и 3575. Последовательности полноразмерных легких цепей и полноразмерных тяжелых цепей этих иллюстративных антител к PAC1 человека приведены ниже в таблицах 4A и 4B соответственно.

Таблица 4A. Иллюстративные последовательности легкой цепи антитела к PAC1
ID антитела Группа LC Аминокислотная последовательность легкой цепи Последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи
Варианты 29G4
29G4v10 LC-01 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 504) gagatcgtacttactcagtcacccgccacattgtccctgagcccgggtgaacgggcgaccctcagctgccgagcatcccagtccgtcggacgatcattgcactggtaccaacaaaaaccgggccaggcccccagacttctgatcaagtatgcgtcacagagcttgtcgggtattcccgctcgcttttcggggtcgggatccgggacagatttcacgctcacaatctcctcgctggaacccgaggacttcgcggtctactattgtcatcagtcatcgaggttgcctttcacgtttggaccagggaccaaggtggacattaagcgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgttag (SEQ ID NO: 537)
29G4v22 LC-02 DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQSIGRSLHWYQQKPGKAPKLLIKYASQSLSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 505) GATATCCAGCTCACTCAATCGCCATCATTTCTCTCCGCTTCGGTAGGCGACCGGGTCACGATCACATGCAGGGCGTCGCAAAGCATTGGGAGGTCGTTGCATTGGTATCAGCAGAAACCCGGAAAGGCCCCGAAACTTCTGATCAAATACGCATCACAAAGCTTGAGCGGTGTGCCGTCGCGCTTCTCCGGTTCCGGAAGCGGAACGGAATTCACGCTTACAATCTCCTCACTGCAGCCCGAGGATTTCGCGACCTATTACTGTCACCAGTCATCCAGACTCCCGTTTACTTTTGGCCCTGGGACCAAGGTGGACATTAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT (SEQ ID NO: 538)
iPS:420653 LC-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 506) GAGATCGTACTTACTCAGTCACCCGCCACATTGTCCCTGAGCCCGGGTGAACGGGCGACCCTCAGCTGCCGAGCATCCAAGTCCGTCGGACGATCATTGCACTGGTACCAACAAAAACCGGGCCAGGCCCCCAGACTTCTGATCAAGTATGCGTCACAGAGCTTGTCGGGTATTCCCGCTCGCTTTTCGGGGTCGGGATCCGGGACAGATTTCACGCTCACAATCTCCTCGCTGGAACCCGAGGACTTCGCGGTCTACTATTGTCATCAGTCATCGAGGTTGCCTTTCACGTTTGGACCAGGGACCAAGGTGGACATTAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT (SEQ ID NO: 539)
iPS:420845 LC-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 506) GAGATCGTACTTACTCAGTCACCCGCCACATTGTCCCTGAGCCCGGGTGAACGGGCGACCCTCAGCTGCCGAGCATCCAAGTCCGTCGGACGATCATTGCACTGGTACCAACAAAAACCGGGCCAGGCCCCCAGACTTCTGATCAAGTATGCGTCACAGAGCTTGTCGGGTATTCCCGCTCGCTTTTCGGGGTCGGGATCCGGGACAGATTTCACGCTCACAATCTCCTCGCTGGAACCCGAGGACTTCGCGGTCTACTATTGTCATCAGTCATCGAGGTTGCCTTTCACGTTTGGACCAGGGACCAAGGTGGACATTAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT (SEQ ID NO: 539)
iPS:420943 LC-01 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 504) GAGATCGTACTTACTCAGTCACCCGCCACATTGTCCCTGAGCCCGGGTGAACGGGCGACCCTCAGCTGCCGAGCATCCCAGTCCGTCGGACGATCATTGCACTGGTACCAACAAAAACCGGGCCAGGCCCCCAGACTTCTGATCAAGTATGCGTCACAGAGCTTGTCGGGTATTCCCGCTCGCTTTTCGGGGTCGGGATCCGGGACAGATTTCACGCTCACAATCTCCTCGCTGGAACCCGAGGACTTCGCGGTCTACTATTGTCATCAGTCATCGAGGTTGCCTTTCACGTTTGGACCAGGGACCAAGGTGGACATTAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT (SEQ ID NO: 537)
iPS:421873 LC-01 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 504) GAGATCGTACTTACTCAGTCACCCGCCACATTGTCCCTGAGCCCGGGTGAACGGGCGACCCTCAGCTGCCGAGCATCCCAGTCCGTCGGACGATCATTGCACTGGTACCAACAAAAACCGGGCCAGGCCCCCAGACTTCTGATCAAGTATGCGTCACAGAGCTTGTCGGGTATTCCCGCTCGCTTTTCGGGGTCGGGATCCGGGACAGATTTCACGCTCACAATCTCCTCGCTGGAACCCGAGGACTTCGCGGTCTACTATTGTCATCAGTCATCGAGGTTGCCTTTCACGTTTGGACCAGGGACCAAGGTGGACATTAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT (SEQ ID NO: 537)
iPS:420889 LC-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 506) GAGATCGTACTTACTCAGTCACCCGCCACATTGTCCCTGAGCCCGGGTGAACGGGCGACCCTCAGCTGCCGAGCATCCAAGTCCGTCGGACGATCATTGCACTGGTACCAACAAAAACCGGGCCAGGCCCCCAGACTTCTGATCAAGTATGCGTCACAGAGCTTGTCGGGTATTCCCGCTCGCTTTTCGGGGTCGGGATCCGGGACAGATTTCACGCTCACAATCTCCTCGCTGGAACCCGAGGACTTCGCGGTCTACTATTGTCATCAGTCATCGAGGTTGCCTTTCACGTTTGGACCAGGGACCAAGGTGGACATTAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT (SEQ ID NO: 539)
iPS:421091 LC-01 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 504) GAGATCGTACTTACTCAGTCACCCGCCACATTGTCCCTGAGCCCGGGTGAACGGGCGACCCTCAGCTGCCGAGCATCCCAGTCCGTCGGACGATCATTGCACTGGTACCAACAAAAACCGGGCCAGGCCCCCAGACTTCTGATCAAGTATGCGTCACAGAGCTTGTCGGGTATTCCCGCTCGCTTTTCGGGGTCGGGATCCGGGACAGATTTCACGCTCACAATCTCCTCGCTGGAACCCGAGGACTTCGCGGTCTACTATTGTCATCAGTCATCGAGGTTGCCTTTCACGTTTGGACCAGGGACCAAGGTGGACATTAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT (SEQ ID NO: 537)
iPS:421051 LC-03 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGRSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 506) GAGATCGTACTTACTCAGTCACCCGCCACATTGTCCCTGAGCCCGGGTGAACGGGCGACCCTCAGCTGCCGAGCATCCAAGTCCGTCGGACGATCATTGCACTGGTACCAACAAAAACCGGGCCAGGCCCCCAGACTTCTGATCAAGTATGCGTCACAGAGCTTGTCGGGTATTCCCGCTCGCTTTTCGGGGTCGGGATCCGGGACAGATTTCACGCTCACAATCTCCTCGCTGGAACCCGAGGACTTCGCGGTCTACTATTGTCATCAGTCATCGAGGTTGCCTTTCACGTTTGGACCAGGGACCAAGGTGGACATTAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT (SEQ ID NO: 539)
iPS:480711 LC-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGWSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 507) GAGATCGTACTTACTCAGTCACCCGCCACATTGTCCCTGAGCCCGGGTGAACGGGCGACCCTCAGCTGCCGAGCATCCAAATCCGTCGGGTGGAGCTTGCACTGGTACCAACAAAAACCGGGCCAGGCCCCCAGACTTCTGATCAAGTATGCGTCACAGAGCTTGTCGGGTATTCCCGCTCGCTTTTCGGGGTCGGGATCCGGGACAGATTTCACGCTCACAATCTCCTCGCTGGAACCCGAGGACTTCGCGGTCTACTATTGTCATCAGTCATCGAGGTTGCCTTTCACGTTTGGACCAGGGACCAAGGTGGACATTAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT (SEQ ID NO: 540)
iPS:480706 LC-04 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGWSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 507) GAGATCGTACTTACTCAGTCACCCGCCACATTGTCCCTGAGCCCGGGTGAACGGGCGACCCTCAGCTGCCGAGCATCCAAATCCGTCGGGTGGAGCTTGCACTGGTACCAACAAAAACCGGGCCAGGCCCCCAGACTTCTGATCAAGTATGCGTCACAGAGCTTGTCGGGTATTCCCGCTCGCTTTTCGGGGTCGGGATCCGGGACAGATTTCACGCTCACAATCTCCTCGCTGGAACCCGAGGACTTCGCGGTCTACTATTGTCATCAGTCATCGAGGTTGCCTTTCACGTTTGGACCAGGGACCAAGGTGGACATTAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT (SEQ ID NO: 540)
iPS:480713 LC-05 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVGYSLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSLSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQSSRLPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 508) GAGATCGTACTTACTCAGTCACCCGCCACATTGTCCCTGAGCCCGGGTGAACGGGCGACCCTCAGCTGCCGAGCATCCAAATCCGTCGGGTACAGCTTGCACTGGTACCAACAAAAACCGGGCCAGGCCCCCAGACTTCTGATCAAGTATGCGTCACAGAGCTTGTCGGGTATTCCCGCTCGCTTTTCGGGGTCGGGATCCGGGACAGATTTCACGCTCACAATCTCCTCGCTGGAACCCGAGGACTTCGCGGTCTACTATTGTCATCAGTCATCGAGGTTGCCTTTCACGTTTGGACCAGGGACCAAGGTGGACATTAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT (SEQ ID NO: 541)
Варианты 19H8
19H8 LC-06 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSISRYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQSYSPPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 509) gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagaatcaccatcacttgccgggcaagtcagagcattagcaggtatttaaattggtatcaacagaaaccagggaaagcccctaaactcctgatctatgctgcatccagtttgcaaagtgggatcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcaacagtctgcaacctgaagattttgcaacttacttctgtcaacagagttacagtcccccattcactttcggccctgggaccaaagtggatatcaaacgtacggtggctg
caccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (SEQ ID NO: 542)
iPS:448730 LC-07 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQMIARYLNWYQQKPGKAPKLLIYASYNLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQAIINPYTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 510) gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagaatcaccatcacttgccgggcaagtcagatgattgctcgttacttaaactggtatcaacagaaaccagggaaagcccctaaactcctgatctacgcttcttacaacttgcaaagtgggatcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcaacagtctgcaacctgaagattttgcaacttacttctgtcaacaggctatcatcaacccatacactttcggccctgggaccaaagtggatatcaaacgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (SEQ ID NO: 543)
iPS:448195 LC-08 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQKIARYLVWYQQKPGKAPKLLIYAANMLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQSIQQPYTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 511) gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagaatcaccatcacttgccgggcaagtcagaaaattgctcgttacttagtttggtatcaacagaaaccagggaaagcccctaaactcctgatctacgctgctaacatgttgcaaagtgggatcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcaacagtctgcaacctgaagattttgcaacttacttctgtcaacagtctatccagcagccatacactttcggccctgggaccaaagtggatatcaaacgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (SEQ ID NO: 544)
iPS:448788 LC-09 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSISRYLNWYQQKPGKAPKLLIYAGRILQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQAIINPYTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 512) gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagaatcaccatcacttgccgggcaagtcagagcattagcaggtatttaaattggtatcaacagaaaccagggaaagcccctaaactcctgatctacgctggtcgtatcttgcaaagtgggatcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcaacagtctgcaacctgaagattttgcaacttacttctgtcaacaggctatcatcaacccatacactttcggccctgggaccaaagtggatatcaaacgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (SEQ ID NO: 545)
iPS:448901 LC-10 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSISRYLNWYQQKPGKAPKLLIYASYNLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQSIQQPYTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 513) gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagaatcaccatcacttgccgggcaagtcagagcattagcaggtatttaaattggtatcaacagaaaccagggaaagcccctaaactcctgatctacgcttcttacaacttgcaaagtgggatcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcaacagtctgcaacctgaagattttgcaacttacttctgtcaacagtctatccagcagccatacactttcggccctgggaccaaagtggatatcaaacgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (SEQ ID NO: 546)
iPS:448689 LC-11 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQYIVRYLNWYQQKPGKAPKLLIYASYNLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQAIMAPYTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 514) gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagaatcaccatcacttgccgggcaagtcagtacattgttcgttacttaaactggtatcaacagaaaccagggaaagcccctaaactcctgatctacgcttcttacaacttgcaaagtgggatcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcaacagtctgcaacctgaagattttgcaacttacttctgtcaacaggctatcatggctccatacactttcggccctgggaccaaagtggatatcaaacgtacggtggctg
caccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (SEQ ID NO: 547)
iPS:448202 LC-12 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSISRYLNWYQQKPGKAPKLLIFAGQRLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQAIGMPYTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 515) gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagaatcaccatcacttgccgggcaagtcagagcattagcaggtatttaaattggtatcaacagaaaccagggaaagcccctaaactcctgatcttcgctggtcagcgtttgcaaagtgggatcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcaacagtctgcaacctgaagattttgcaacttacttctgtcaacaggctatcggtatgccatacactttcggccctgggaccaaagtggatatcaaacgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (SEQ ID NO: 548)
iPS:452128 LC-13 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQYIVRYLNWYQQKPGKAPKLLIYAANMLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQAINQPYTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 516) gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagaatcaccatcacttgccgggcaagtcagtacattgttcgttacttaaactggtatcaacagaaaccagggaaagcccctaaactcctgatctacgctgctaacatgttgcaaagtgggatcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcaacagtctgcaacctgaagattttgcaacttacttctgtcaacaggctatcaaccagccatacactttcggccctgggaccaaagtggatatcaaacgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (SEQ ID NO: 549)
iPS:448924 LC-14 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQPISRYLSWYQQKPGKAPKLLIFAGQRLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQAISIPYTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 517) gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagaatcaccatcacttgccgggcaagtcagccgatttctcgttacttatcttggtatcaacagaaaccagggaaagcccctaaactcctgatcttcgctggtcagcgtttgcaaagtgggatcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcaacagtctgcaacctgaagattttgcaacttacttctgtcaacaggctatctctatcccatacactttcggccctgggaccaaagtggatatcaaacgtacggtggctg
caccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (SEQ ID NO: 550)
3574 LC-06 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQSISRYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQSYSPPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 509) gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagaatcaccatcacttgccgggcaagtcagagcattagcaggtatttaaattggtatcaacagaaaccagggaaagcccctaaactcctgatctatgctgcatccagtttgcaaagtgggatcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcaacagtctgcaacctgaagattttgcaacttacttctgtcaacagagttacagtcccccattcactttcggccctgggaccaaagtggatatcaaacgtacggtggctg
caccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (SEQ ID NO: 542)
3575 LC-15 DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCRASQQIARYLNWYQQKPGKAPKLLIYASYNLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYFCQQAIIQPYTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 518) gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagaatcaccatcacttgccgggcaagtcagcagattgctcgttacttaaactggtatcaacagaaaccagggaaagcccctaaactcctgatctacgcttcttacaacttgcaaagtgggatcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcaacagtctgcaacctgaagattttgcaacttacttctgtcaacaggctatcatccagccatacactttcggccctgggaccaaagtggatatcaaacgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt (SEQ ID NO: 551)

Таблица 4B. Иллюстративные последовательности тяжелой цепи антитела к PAC1
ID антитела Группа HC Аминокислотная последовательность тяжелой цепи Последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи
Варианты 29G4
29G4v10 HC-01 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 519) CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGG
TCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAGGAAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA (SEQ ID NO: 552)
29G4v22 HC-02 QVQLVESGAEVVKPGASVKVSCKASGFTFSRFAMHWVRQAPGQGLEWMGVISYDGGNKYYAESVKGRVTMTRDTSTSTLYMELSSLRSEDTAVYYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 520) CAAGTTCAGTTGGTGGAGTCTGGAGCCGAAGTAGTAAAGCCAGGAGCTTCAGTGAAAGTCTCTTGTAAAGCAAGTGGATTCACGTTTAGCCGCTTTGCCATGCATTGGGTGCGGCAAGCTCCCGGTCAGGGGTTGGAGTGGATGGGAGTTATTAGCTATGACGGGGGCAATAAGTACTACGCCGAGTCTGTTAAGGGTCGGGTCACAATGACACGGGACACCTCAACCAGTACACTCTATATGGAACTGTCTAGCCTGAGATCCGAGGACACCGCTGTGTATTATTGCGCTAGGGGGTACGATGTATTGACGGGTTATCCTGATTACTGGGGGCAGGGGACACTCGTAACCGTCTCTAGTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA (SEQ ID NO: 553)
iPS:420653 HC-03 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYIGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 521) CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATATCGGAGGAAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA (SEQ ID NO: 554)
iPS:420845 HC-04 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYQGRNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 522) CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATCAGGGACGCAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA (SEQ ID NO: 555)
iPS:420943 HC-05 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYQGNNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 523) CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATCAGGGAAACAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA (SEQ ID NO: 556)
iPS:421873 HC-06 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSKFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYRGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDLLTGYPDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 524) CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAAGTTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATCGCGGAGGAAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATCTGTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA (SEQ ID NO: 557)
iPS:420889 HC-07 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYIGGNKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 525) CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATATCGGAGGAAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA (SEQ ID NO: 558)
iPS:421091 HC-08 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYNGRNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDILTGYPDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 526) CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATAACGGACGCAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA (SEQ ID NO: 559)
iPS:421051 HC-05 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYQGNNKYYARSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 523) CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATCAGGGAAACAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA (SEQ ID NO: 556)
iPS:480711 HC-09 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVGVINYRGHGKYYAESVKGRFTVSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 527) CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGG
TCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGGTGTTATCAACTATCGTGGACATGGTAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCGTGTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCTAGTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGC
GACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA (SEQ ID NO: 560)
iPS:480706 HC-10 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVGVISFSGGSKYYAESVKGRFTLSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 528) CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGGTGTTATATCTTTTTCTGGAGGTTCTAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCTTGTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCTAGTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA (SEQ ID NO: 561)
iPS:480713 HC-11 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRFAMHWVRQAPGKGLEWVGVISYTGQFKYYAESVKGRFTVSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALFYCARGYDVLTGYPDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 529) CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGGTGTTATCTCTTATACTGGACAGTTCAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCGTGTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCTAGTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA (SEQ ID NO: 562)
Варианты 19H8
19H8 HC-12 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWSNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGTWKQLWFLDHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 530) CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATCTCCGGGGACAGTGTCTCTAGCAACAGTGCTACTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATATTACAGGTCCAAGTGGTCTAATCATTATGCAGTATCTGTGAAAAGTCGAATCACCATCAACCCCGACACGTCCAAGAGCCAGTTCTCCCTGCAGCTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGGAACGTGGAAACAGCTATGGTTCCTTGACCACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCTAGTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGCAAA (SEQ ID NO: 563)
iPS:448730 HC-13 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSNRLATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRGKWKNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGVWIGNWFLDHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 531) caggtacagctgcagcagtcaggtccaggactggtgaagccctcgcagaccctctcactcacctgtgccatctccggggacagtgtctctaaccgtctggctacttggaactggatcaggcagtccccatcgagaggccttgagtggctgggaaggacatactacaggggtaaatggaaaaatcattatgcagtatctgtgaaaagtcgaataaccatcaaccccgacacgtccaagagccagttctccctgcagctgaactctgtgactcccgaggacacggctgtgtattactgtgcaagaggagtttggatcggtaactggttcctggaccactggggccagggaaccctggtcaccgtgtcctcagcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgtgcgaggagcagtacggcagcacgtaccgttgcgtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtgtccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (SEQ ID NO: 564)
iPS:448195 HC-14 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSNKQATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRGKWKNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMWNQNWFLDHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 532) caggtacagctgcagcagtcaggtccaggactggtgaagccctcgcagaccctctcactcacctgtgccatctccggggacagtgtctctaacaaacaggctacttggaactggatcaggcagtccccatcgagaggccttgagtggctgggaaggacatactacaggggtaaatggaaaaatcattatgcagtatctgtgaaaagtcgaataaccatcaaccccgacacgtccaagagccagttctccctgcagctgaactctgtgactcccgaggacacggctgtgtattactgtgcaagaggaatgtggaaccagaactggttcctggaccactggggccagggaaccctggtcaccgtgtcctcagcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgtgcgaggagcagtacggcagcacgtaccgttgcgtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtgtccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (SEQ ID NO: 565)
iPS:448788 HC-15 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSRQATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRGKWKNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMWQGNWFLDHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 533) caggtacagctgcagcagtcaggtccaggactggtgaagccctcgcagaccctctcactcacctgtgccatctccggggacagtgtctcttctcgtcaggctacttggaactggatcaggcagtccccatcgagaggccttgagtggctgggaaggacatactacaggggtaaatggaaaaatcattatgcagtatctgtgaaaagtcgaataaccatcaaccccgacacgtccaagagccagttctccctgcagctgaactctgtgactcccgaggacacggctgtgtattactgtgcaagaggaatgtggcagggtaactggttcctggaccactggggccagggaaccctggtcaccgtgtcctcagcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgtgcgaggagcagtacggcagcacgtaccgttgcgtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtgtccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (SEQ ID NO: 566)
iPS:448901 HC-16 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSNRLATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRGKWKNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGRWEGDWFFDHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 534) caggtacagctgcagcagtcaggtccaggactggtgaagccctcgcagaccctctcactcacctgtgccatctccggggacagtgtctctaaccgtctggctacttggaactggatcaggcagtccccatcgagaggccttgagtggctgggaaggacatactacaggggtaaatggaaaaatcattatgcagtatctgtgaaaagtcgaataaccatcaaccccgacacgtccaagagccagttctccctgcagctgaactctgtgactcccgaggacacggctgtgtattactgtgcaagaggacgttgggaaggtgactggttcttcgaccactggggccagggaaccctggtcaccgtgtcctcagcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgtgcgaggagcagtacggcagcacgtaccgttgcgtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtgtccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (SEQ ID NO: 567)
iPS:448689 HC-17 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSNRLATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRGKWKNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGTWNQDWFLDHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 535) caggtacagctgcagcagtcaggtccaggactggtgaagccctcgcagaccctctcactcacctgtgccatctccggggacagtgtctctaaccgtctggctacttggaactggatcaggcagtccccatcgagaggccttgagtggctgggaaggacatactacaggggtaaatggaaaaatcattatgcagtatctgtgaaaagtcgaataaccatcaaccccgacacgtccaagagccagttctccctgcagctgaactctgtgactcccgaggacacggctgtgtattactgtgcaagaggaacttggaaccaggactggttcctggaccactggggccagggaaccctggtcaccgtgtcctcagcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgtgcgaggagcagtacggcagcacgtaccgttgcgtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtgtccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (SEQ ID NO: 568)
iPS:448202 HC-17 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSNRLATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRGKWKNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGTWNQDWFLDHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 535) caggtacagctgcagcagtcaggtccaggactggtgaagccctcgcagaccctctcactcacctgtgccatctccggggacagtgtctctaaccgtctggctacttggaactggatcaggcagtccccatcgagaggccttgagtggctgggaaggacatactacaggggtaaatggaaaaatcattatgcagtatctgtgaaaagtcgaataaccatcaaccccgacacgtccaagagccagttctccctgcagctgaactctgtgactcccgaggacacggctgtgtattactgtgcaagaggaacttggaaccaggactggttcctggaccactggggccagggaaccctggtcaccgtgtcctcagcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgtgcgaggagcagtacggcagcacgtaccgttgcgtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtgtccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (SEQ ID NO: 568)
iPS:452128 HC-14 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSNKQATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRGKWKNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMWNQNWFLDHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 532) caggtacagctgcagcagtcaggtccaggactggtgaagccctcgcagaccctctcactcacctgtgccatctccggggacagtgtctctaacaaacaggctacttggaactggatcaggcagtccccatcgagaggccttgagtggctgggaaggacatactacaggggtaaatggaaaaatcattatgcagtatctgtgaaaagtcgaataaccatcaaccccgacacgtccaagagccagttctccctgcagctgaactctgtgactcccgaggacacggctgtgtattactgtgcaagaggaatgtggaaccagaactggttcctggaccactggggccagggaaccctggtcaccgtgtcctcagcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgtgcgaggagcagtacggcagcacgtaccgttgcgtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtgtccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (SEQ ID NO: 565)
iPS:448924 HC-18 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSRYATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRGQWKNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCA
RGMWNQNWFLDHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 536)
caggtacagctgcagcagtcaggtccaggactggtgaagccctcgcagaccctctcactcacctgtgccatctccggggacagtgtctcttctcgttacgctacttggaactggatcaggcagtccccatcgagaggccttgagtggctgggaaggacatactacaggggtcagtggaaaaatcattatgcagtatctgtgaaaagtcgaataaccatcaaccccgacacgtccaagagccagttctccctgcagctgaactctgtgactcccgaggacacggctgtgtattactgtgcaagaggaatgtggaaccagaactggttcctggaccactggggccagggaaccctggtcaccgtgtcctcagcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgtgcgaggagcagtacggcagcacgtaccgttgcgtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtgtccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (SEQ ID NO: 569)
3574 HC-14 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSNKQATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRGKWKNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMWNQNWFLDHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 532) caggtacagctgcagcagtcaggtccaggactggtgaagccctcgcagaccctctcactcacctgtgccatctccggggacagtgtctctaacaaacaggctacttggaactggatcaggcagtccccatcgagaggccttgagtggctgggaaggacatactacaggggtaaatggaaaaatcattatgcagtatctgtgaaaagtcgaataaccatcaaccccgacacgtccaagagccagttctccctgcagctgaactctgtgactcccgaggacacggctgtgtattactgtgcaagaggaatgtggaaccagaactggttcctggaccactggggccagggaaccctggtcaccgtgtcctcagcctccaccaagggc
ccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgtgcgaggagcagtacggcagcacgtaccgttgcgtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtgtccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (SEQ ID NO: 565)
3575 HC-12 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWSNHYAVSVKSRITINPDTSKSQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGTWKQLWFLDHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 530) CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATCTCCGGGGACAGTGTCTCTAGCAACAGTGCTACTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATATTACAGGTCCAAGTGGTCTAATCATTATGCAGTATCTGTGAAAAGTCGAATCACCATCAACCCCGACACGTCCAAGAGCCAGTTCTCCCTGCAGCTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGGAACGTGGAAACAGCTATGGTTCCTTGACCACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCTAGTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGTGCGAGGAGCAGTACGGCAGCACGTACCGTTGCGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGCAAA (SEQ ID NO: 563)

В определенных вариантах осуществления антитела к PAC1 по настоящему изобретению могут содержать легкую цепь, выбранную из LC-01 - LC-05, как показано в таблице 4A, и/или тяжелую цепь, выбранную из HC-01 - HC-11, как показано в таблице 4B, и связывающие фрагменты, производные и варианты этих легких цепей и тяжелых цепей. В других вариантах осуществления антитела к PAC1 по настоящему изобретению могут содержать легкую цепь, выбранную из LC-06 - LC-15, как показано в таблице 4A, и/или тяжелую цепь, выбранную из HC-12 - HC-18, как показано в таблице 4B, и связывающие фрагменты, производные и варианты этих легких цепей и тяжелых цепей.

Каждая из легких цепей, перечисленных в таблице 4A, может быть объединена с любой из тяжелых цепей, перечисленных в таблице 4B, с образованием антитела к PAC1 или его антигенсвязывающего фрагмента по настоящему изобретению. Например, в определенных вариантах осуществления антитела к PAC1 по настоящему изобретению содержат легкую цепь, содержащую последовательность LC-03 (SEQ ID NO: 506), и тяжелую цепь, содержащую последовательность HC-03 (SEQ ID NO: 521). В некоторых вариантах осуществления антитела к PAC1 по настоящему изобретению содержат легкую цепь, содержащую последовательность LC-03 (SEQ ID NO: 506), и тяжелую цепь, содержащую последовательность HC-04 (SEQ ID NO: 522). В других вариантах осуществления антитела к PAC1 по настоящему изобретению содержат легкую цепь, содержащую последовательность LC-01 (SEQ ID NO: 504), и тяжелую цепь, содержащую последовательность HC-05 (SEQ ID NO: 523). В еще других вариантах осуществления антитела к PAC1 по настоящему изобретению содержат легкую цепь, содержащую последовательность LC-01 (SEQ ID NO: 504), и тяжелую цепь, содержащую последовательность HC-06 (SEQ ID NO: 524). В некоторых вариантах осуществления антитела к PAC1 по настоящему изобретению содержат легкую цепь, содержащую последовательность LC-03 (SEQ ID NO: 506), и тяжелую цепь, содержащую последовательность HC-07 (SEQ ID NO: 525). В определенных вариантах осуществления антитела к PAC1 по настоящему изобретению содержат легкую цепь, содержащую последовательность LC-01 (SEQ ID NO: 504), и тяжелую цепь, содержащую последовательность HC-08 (SEQ ID NO: 526). В одном варианте осуществления антитела к PAC1 по настоящему изобретению содержат легкую цепь, содержащую последовательность LC-03 (SEQ ID NO: 506), и тяжелую цепь, содержащую последовательность HC-05 (SEQ ID NO: 523). В другом варианте осуществления антитела к PAC1 по настоящему изобретению содержат легкую цепь, содержащую последовательность LC-04 (SEQ ID NO: 507), и тяжелую цепь, содержащую последовательность HC-09 (SEQ ID NO: 527). В еще одном варианте осуществления антитела к PAC1 по настоящему изобретению содержат легкую цепь, содержащую последовательность LC-04 (SEQ ID NO: 507), и тяжелую цепь, содержащую последовательность HC-10 (SEQ ID NO: 528). В еще одном варианте осуществления антитела к PAC1 по настоящему изобретению содержат легкую цепь, содержащую последовательность LC-05 (SEQ ID NO: 508), и тяжелую цепь, содержащую последовательность HC-11 (SEQ ID NO: 529).

В определенных других вариантах осуществления антитела к PAC1 по настоящему изобретению содержат легкую цепь, содержащую последовательность LC-07 (SEQ ID NO: 510), и тяжелую цепь, содержащую последовательность HC-13 (SEQ ID NO: 531). В некоторых вариантах осуществления антитела к PAC1 по настоящему изобретению содержат легкую цепь, содержащую последовательность LC-08 (SEQ ID NO: 511), и тяжелую цепь, содержащую последовательность HC-14 (SEQ ID NO: 532). В других вариантах осуществления антитела к PAC1 по настоящему изобретению содержат легкую цепь, содержащую последовательность LC-09 (SEQ ID NO: 512), и тяжелую цепь, содержащую последовательность HC-15 (SEQ ID NO: 533). В еще других вариантах осуществления антитела к PAC1 по настоящему изобретению содержат легкую цепь, содержащую последовательность LC-10 (SEQ ID NO: 513), и тяжелую цепь, содержащую последовательность HC-16 (SEQ ID NO: 534). В некоторых вариантах осуществления антитела к PAC1 по настоящему изобретению содержат легкую цепь, содержащую последовательность LC-11 (SEQ ID NO: 514), и тяжелую цепь, содержащую последовательность HC-17 (SEQ ID NO: 535). В определенных вариантах осуществления антитела к PAC1 по настоящему изобретению содержат легкую цепь, содержащую последовательность LC-12 (SEQ ID NO: 515), и тяжелую цепь, содержащую последовательность HC-17 (SEQ ID NO: 535). В одном варианте осуществления антитела к PAC1 по настоящему изобретению содержат легкую цепь, содержащую последовательность LC-13 (SEQ ID NO: 516), и тяжелую цепь, содержащую последовательность HC-14 (SEQ ID NO: 532). В другом варианте осуществления антитела к PAC1 по настоящему изобретению содержат легкую цепь, содержащую последовательность LC-14 (SEQ ID NO: 517), и тяжелую цепь, содержащую последовательность HC-18 (SEQ ID NO: 536). В еще одном варианте осуществления антитела к PAC1 по настоящему изобретению содержат легкую цепь, содержащую последовательность LC-06 (SEQ ID NO: 509), и тяжелую цепь, содержащую последовательность HC-14 (SEQ ID NO: 532). В еще одном варианте осуществления антитела к PAC1 по настоящему изобретению содержат легкую цепь, содержащую последовательность LC-15 (SEQ ID NO: 518), и тяжелую цепь, содержащую последовательность HC-12 (SEQ ID NO: 530).

В некоторых вариантах осуществления антитела к PAC1 содержат легкую цепь, содержащую последовательность смежных аминокислот, которая отличается от последовательности легкой цепи в таблице 4A, т. е. легкую цепь, выбранную из LC-01 - LC-15, только по 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 аминокислотным остаткам, где каждое такое различие последовательностей независимо представляет собой либо делецию, вставку, либо замену одной аминокислоты, причем делеции, вставки и/или замены приводят к изменениям не более чем 15 аминокислот относительно вышеуказанных последовательностей легкой цепи. Легкая цепь в некоторых антителах к PAC1 содержит последовательность аминокислот, которая характеризуется по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 97% или по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с аминокислотными последовательностями под SEQ ID NO: 504-518 (т. е. легкими цепями в таблице 4A).

В этих и других вариантах осуществления антитела к PAC1 содержат тяжелую цепь, содержащую последовательность смежных аминокислот, которая отличается от последовательности тяжелой цепи в таблице 4B, т. е. тяжелую цепь, выбранную из HC-01 - HC-18, только по 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 аминокислотным остаткам, где каждое такое различие последовательностей независимо представляет собой либо делецию, вставку, либо замену одной аминокислоты, причем делеции, вставки и/или замены приводят к изменениям не более чем 15 аминокислот относительно вышеуказанных последовательностей тяжелой цепи. Тяжелая цепь в некоторых антителах к PAC1 содержит последовательность аминокислот, которая характеризуется по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 97% или по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с аминокислотными последовательностями под SEQ ID NO: 519-536 (т. е. тяжелыми цепями в таблице 4B).

Антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению могут представлять собой моноклональные антитела, поликлональные антитела, рекомбинантные антитела, антитела человека, гуманизированные антитела, химерные антитела, или мультиспецифические антитела, или их антигенсвязывающие фрагменты. В определенных вариантах осуществления антитело к PAC1 представляет собой моноклональное антитело. В таких вариантах осуществления антитело к PAC1 может представлять собой химерное антитело, гуманизированное антитело или полностью человеческое антитело, содержащее константный домен иммуноглобулина человека. В этих и других вариантах осуществления антитело к PAC1 представляет собой антитело IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 человека. Таким образом, антитело к PAC1 может в некоторых вариантах осуществления содержать константный домен IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 человека. В одном варианте осуществления антитело к PAC1 представляет собой моноклональное антитело IgG1 человека. В другом варианте осуществления антитело к PAC1 представляет собой моноклональное антитело IgG2 человека. В еще одном варианте осуществления антитело к PAC1 представляет собой моноклональное антитело IgG4 человека.

Применяемый в данном документе термин "моноклональное антитело" (или "mAb") относится к антителу, полученному из популяции практически гомогенных антител, то есть отдельные антитела, составляющие популяцию, являются идентичными за исключением возможно встречающихся в природе мутаций, которые могут присутствовать в незначительных количествах. Моноклональные антитела являются высокоспецифическими и направлены против отдельного антигенного сайта или эпитопа, в отличие от препаратов на основе поликлональных антител, которые обычно включают различные антитела, направленные против различных эпитопов. Моноклональные антитела можно получать с применением любой методики, известной из уровня техники, например, посредством иммортализации клеток селезенки, собранных у животного после завершения схемы иммунизации. Клетки селезенки могут быть иммортализованы с применением любой методики, известной из уровня техники, например, посредством их слияния с клетками миеломы с получением гибридом. См. например, Antibodies; Harlow and Lane, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1-е издание, например, от 1988 года, или 2-е издание, например, от 2014 года. Клетки миеломы для применения в процедурах слияния для получения гибридом предпочтительно представляют собой клетки, которые не продуцируют антитела, обладают высокой эффективностью слияния и характеризуются дефицитами ферментов, что делает их неспособными к росту в определенных селективных средах, которые поддерживают рост только требуемых слитых клеток (гибридом). Примеры подходящих линий клеток для применения для слияний с клетками мыши включают без ограничения Sp-20, P3-X63/Ag8, P3-X63-Ag8.653, NS1/1.Ag 4 1, Sp210-Ag14, FO, NSO/U, MPC-11, MPC11-X45-GTG 1.7 и S194/5XXO Bul. Примеры подходящих линий клеток, применяемых для слияний с клетками крысы, включают без ограничения R210.RCY3, Y3-Ag 1.2.3, IR983F и 4B210. Другие линии клеток, применяемые для слияний клеток, представляют собой U-266, GM1500-GRG2, LICR-LON-HMy2 и UC729-6.

В некоторых случаях линию клеток гибридомы получают посредством иммунизации животного (например, кролика, крысы, мыши или трансгенного животного, имеющего последовательности иммуноглобулина человека) иммуногеном PAC1 (см. например, WO 2014/144632); сбора клеток селезенки у иммунизированного животного; слияния собранных клеток селезенки с линией клеток миеломы с получением тем самым клеток гибридомы; получения линий клеток гибридомы из клеток гибридомы и идентификации линии клеток гибридомы, которая продуцирует антитело, которое связывается с PAC1. Другим применяемым способом получения моноклональных антител является способ SLAM, описанный в Babcook et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 93: 7843-7848, 1996.

Моноклональные антитела, секретируемые линией клеток гибридомы, могут быть очищены с применением любой методики, известной из уровня техники, такой как протеин А-сефароза, гидроксиапатитная хроматография, гель-электрофорез, диализ или аффинная хроматография. Супернатанты гибридом или mAb можно дополнительно подвергать скринингу для идентификации mAb с определенными свойствами, такими как способность связывать PAC1 (например, PAC1 человека, PAC1 яванского макака или PAC1 крысы); перекрестная реактивность с другими представителями семейства PAC1 (например, VPAC1 человека или VPAC2 человека); способность блокировать или препятствовать связыванию лиганда PACAP с PAC1 или способность функционально блокировать индуцированную PACAP активацию рецептора PAC1, например, с применением анализа cAMP, как описано в данном документе.

В некоторых вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению представляют собой химерные или гуманизированные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты на основе последовательностей CDR и вариабельных областей антител, описанных в данном документе. Химерное антитело представляет собой антитело, состоящее из сегментов белка из различных антител, которые ковалентно соединены с образованием функциональных легких или тяжелых цепей иммуноглобулина или их связывающих фрагментов. Как правило, часть тяжелой цепи и/или легкой цепи идентична или гомологична соответствующей последовательности в антителах, полученных из определенного вида или принадлежащих к определенному классу или подклассу антител, тогда как остальная(остальные) часть(части) цепи(цепей) идентична(идентичны) или гомологична(гомологичны) соответствующей последовательности в антителах, полученных из другого вида или принадлежащих к другому классу или подклассу антител. Для способов, относящихся к химерным антителам, см. например, патент США № 4816567 и Morrison et al., 1985, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855, каждый из которых настоящим включен посредством ссылки во всей своей полноте.

Как правило, целью получения химерного антитела является создание химеры, в которой количество аминокислот из предполагаемых видов является максимальным. Одним из примеров является "CDR-привитое" антитело, в котором антитело содержит одну или несколько CDR из конкретного вида или принадлежащих определенному классу или подклассу антител, тогда как остальная(остальные) часть(части) цепи(цепей) антитела идентична(идентичны) или гомологична(гомологичны) соответствующей последовательности в антителах, полученных из другого вида или принадлежащих другому классу или подклассу антител. Прививание CDR описано, например, в патенте США № 6180370, № 5693762, № 5693761, № 5585089 и № 5530101. Для применения на людях вариабельную область или отобранные CDR из антитела грызуна или кролика зачастую прививают на антитело человека, заменяя встречающиеся в природе вариабельные области или CDR антитела человека.

Одним из применимых типов химерного антитела является "гуманизированное" антитело. Как правило, гуманизированное антитело получают из моноклонального антитела, первоначально происходящего из животного, отличного от человека, такого как грызун или кролик. Определенные аминокислотные остатки в этом моноклональном антителе, как правило, из частей антитела, которые не распознают антиген, модифицируют таким образом, чтобы они были гомологичными соответствующим остаткам в антителе человека соответствующего изотипа. Гуманизацию можно осуществлять, например, с применением различных способов посредством замены по меньшей мере части вариабельной области грызуна или кролика на соответствующие области антитела человека (см. например, патент США № 5585089 и № 5693762; Jones et al., 1986, Nature 321:522-525; Riechmann et al., 1988, Nature 332:323-27 и Verhoeyen et al., 1988, Science 239:1534-1536).

В одном аспекте CDR вариабельных областей легкой и тяжелой цепей антител, предусмотренных в данном документе (см. таблицы 1A и 1B), прививают на каркасные области (FR) из антител из одного и того же или различных филогенетических видов. Например, CDR вариабельных областей тяжелой и легкой цепей, перечисленных в таблицах 1A и 1B, могут быть привиты к консенсусным FR человека. Для создания консенсусных FR человека FR из нескольких аминокислотных последовательностей тяжелой цепи или легкой цепи человека могут быть выровнены для идентификации консенсусной аминокислотной последовательности. В качестве альтернативы, привитые вариабельные области из одной тяжелой или легкой цепи можно применять с константной областью, которая отличается от константной области этой конкретной тяжелой или легкой цепи, раскрытой в данном документе. В других вариантах осуществления привитые вариабельные области являются частью одноцепочечного Fv-антитела.

В определенных вариантах осуществления антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению представляют собой полностью человеческие антитела или их антигенсвязывающие фрагменты. Полностью человеческие антитела, которые специфически связываются с PAC1 человека, можно получать с применением иммуногенов или их фрагментов, описанных в WO 2014/144632, таких как полипептиды, состоящие из последовательности под SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 4. "Полностью человеческое антитело" представляет собой антитело, которое содержит вариабельные и константные области, полученные из последовательностей иммуноглобулинов зародышевой линии человека или указывающие на них. Одним конкретным способом, предусмотренным для осуществления получения полностью человеческих антител, является "гуманизация" гуморальной иммунной системы мыши. Введение локусов иммуноглобулинов (Ig) человека в геном мышей, у которых были инактивированы эндогенные гены Ig, является одним из способов получения полностью человеческих моноклональных антител (mAb) у мыши - животного, которое можно иммунизировать любым требуемым антигеном. Применение полностью человеческих антител может минимизировать иммуногенные и аллергические ответы, которые иногда могут быть вызваны введением мышиных или полученных из мыши mAb людям в качестве терапевтических средств.

Полностью человеческие антитела можно получать посредством иммунизации трансгенных животных (обычно мышей), которые способны продуцировать репертуар антител человека в отсутствие продуцирования эндогенных иммуноглобулинов. Применяемые для этой цели антигены, как правило, содержат шесть или более смежных аминокислот и необязательно конъюгированы с носителем, таким как гаптен. См. например, Jakobovits et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:2551-2555; Jakobovits et al., 1993, Nature 362:255-258 и Bruggermann et al., 1993, Year in Immunol. 7:33. В одном примере такого способа трансгенных животных получают посредством инактивации эндогенных локусов иммуноглобулина мыши, кодирующих тяжелые и легкие цепи иммуноглобулина мыши, и вставки в геном мыши больших фрагментов геномной ДНК человека, содержащей локусы, которые кодируют белки тяжелых и легких цепей человека. Частично модифицированных животных, которые имеют неполный набор локусов иммуноглобулинов человека, подвергают кроссбридингу с получением животного, обладающего всеми требуемыми модификациями иммунной системы. В случае введения иммуногена эти трансгенные животные продуцируют антитела, которые являются иммуноспецифическими в отношении иммуногена, однако имеют скорее человеческие, а не мышиные аминокислотные последовательности, в том числе вариабельные области. Для дополнительной информации по таким способам см. например, WO96/33735 и WO94/02602. Дополнительные способы, относящиеся к применению трансгенных мышей для получения антител человека, описаны в патенте США № 5545807; № 6713610; № 6673986; № 6162963; № 5939598; № 5545807; № 6300129; № 6255458; № 5877397; № 5874299 и № 5545806; в публикациях согласно PCT WO 91/10741, WO 90/04036, WO 94/02602, WO 96/30498, WO 98/24893, а также в EP 546073B1 и EP 546073A1.

Описанные выше трансгенные мыши, обозначенные как мыши "HuMab", содержат минилокус гена иммуноглобулина человека, который кодирует нереаранжированные последовательности тяжелых (мю- и гамма-) цепей и легкой каппа-цепи иммуноглобулина человека вместе с целевыми мутациями, которые инактивируют локусы эндогенных мю- и каппа-цепей (Lonberg et al., 1994, Nature 368:856-859). Соответственно, мыши проявляют сниженную экспрессию IgM или каппа-белков мыши, и в ответ на иммунизацию введенные трансгены тяжелой и легкой цепей человека претерпевают переключение класса и соматическую мутацию с образованием высокоаффинных моноклональных антител IgG-каппа человека (Lonberg and Huszar, 1995, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93; Harding and Lonberg, 1995, Ann. N.Y Acad. Sci. 764:536-546). Получение мышей HuMab подробно описано в Taylor et al., 1992, Nucleic Acids Research 20:6287-6295; Chen et al., 1993, International Immunology 5:647-656; Tuaillon et al., 1994, J. Immunol. 152:2912-2920; Lonberg et al., 1994, Nature 368:856-859; Lonberg, 1994, Handbook of Exp. Pharmacology 113:49-101; Taylor et al., 1994, International Immunology 6:579-591; Lonberg and Huszar, 1995, Intern. Rev. Immunol. 13:65-93; Harding and Lonberg, 1995, Ann. N.Y Acad. Sci. 764:536-546; Fishwild et al., 1996, Nature Biotechnology 14:845-851; указанные выше ссылки настоящим включены посредством ссылки во всей своей полноте. См. дополнительно патент США № 5545806; № 5569825; № 5625126; № 5633425; № 5789650; № 5877397; № 5661016; № 5814318; № 5874299; и № 5770429; а также патент США № 5545807; международную публикацию №№ WO 93/1227; WO 92/22646; и WO 92/03918, раскрытия всех из которых настоящим включены посредством ссылки во всей своей полноте. Технологии, применяемые для получения антител человека в этих трансгенных мышах, раскрыты также в WO 98/24893 и Mendez et al., 1997, Nature Genetics 15:146-156, которые настоящим включены посредством ссылки. Например, линии трансгенных мышей HCo7 и HCo12 можно применять для получения полностью человеческих антител к PAC1. Одной конкретной линией трансгенных мышей, подходящей для получения полностью человеческих антител к PAC1, является линия трансгенных мышей XenoMouse®, описанная в патентах США №№ 6114598; 6162963; 6833268; 7049426; 7064244; Green et al., 1994, Nature Genetics 7:13-21; Mendez et al., 1997, Nature Genetics 15:146-156; Green and Jakobovitis, 1998, J. Ex. Med, 188:483-495; Green, 1999, Journal of Immunological Methods 231:11-23; Kellerman and Green, 2002, Current Opinion in Biotechnology 13, 593-597, все из которых настоящим включены посредством ссылки во всей своей полноте.

Антитела человеческого происхождения также можно получать с применением методик фагового дисплея. Фаговый дисплей описан, например, в Dower et al., WO 91/17271, McCafferty et al., WO 92/01047 и Caton and Koprowski, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:6450-6454 (1990), каждый из которых включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Антитела, полученные с помощью технологии с применением фагов, как правило, получают в виде антигенсвязывающих фрагментов, например, Fv- или Fab-фрагментов у бактерий и, таким образом, они лишены эффекторных функций. Эффекторные функции можно вводить посредством одной из двух стратегий: Фрагменты можно конструировать либо в виде полных антител для экспрессии в клетках млекопитающих, либо в виде фрагментов биспецифических антител со вторым сайтом связывания, способным запускать эффекторную функцию, если это требуется. Как правило, Fd-фрагмент (VH-CH1) и легкую цепь (VL-CL) антител отдельно клонируют с помощью ПЦР и случайным образом рекомбинируют в комбинаторных библиотеках для фагового дисплея, которые затем могут быть отобраны для связывания с конкретным антигеном. Фрагменты антител экспрессируются на поверхности фага, и отбор Fv или Fab (а следовательно фага, содержащего ДНК, кодирующую фрагмент антитела) посредством связывания антигена осуществляется посредством нескольких раундов связывания антигена и повторной амплификации, - процедуры, называемой пэннингом. Фрагменты антител, специфические в отношении антигена, обогащаются и, наконец, выделяются. Методики фагового дисплея также можно применять в подходе для гуманизации моноклональных антител грызунов, называемом "управляемым отбором" (см. Jespers, L. S. et al., 1994, Bio/Technology 12, 899-903). Для этого Fd-фрагмент моноклонального антитела мыши может быть отображен в комбинации с библиотекой легких цепей человека, и полученная в результате библиотека гибридных Fab может быть затем отобрана с помощью антигена. Таким образом, Fd-фрагмент мыши обеспечивает шаблон для управления отбором. Затем отобранные легкие цепи человека объединяют с библиотекой Fd-фрагментов человека. Отбор полученной библиотеки приводит к получению полностью человеческого Fab.

Как только клетки, продуцирующие антитела к PAC1 в соответствии с настоящим изобретением, были получены с применением любой из описанных выше иммунизации и других методик, гены специфических антител могут быть клонированы посредством выделения и амплификации с них ДНК или mRNA в соответствии со стандартными процедурами, описанными в данном документе. Полученные из них антитела можно секвенировать, и идентифицированными CDR и ДНК, кодирующей CDR, можно манипулировать, как описано в данном документе, для получения других антител к PAC1 или антигенсвязывающих фрагментов в соответствии с настоящим изобретением.

В определенных вариантах осуществления антитела к PAC1 и антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению могут содержать одну или несколько мутаций или модификаций в константной области. Например, константные области тяжелой цепи или Fc-области антител к PAC1 могут содержать одну или несколько аминокислотных замен, которые оказывают влияние на гликозилирование, эффекторную функцию и/или связывание антитела Fcγ-рецептором. Термин "Fc-область" относится к С-концевой области тяжелой цепи иммуноглобулина, которая может быть получена посредством расщепления интактного антитела с помощью папаина. Fc-область иммуноглобулина обычно содержит два константных домена, домен CH2 и домен CH3, и необязательно содержит домен CH4. В определенных вариантах осуществления Fc-область представляет собой Fc-область из иммуноглобулина IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4. В некоторых вариантах осуществления Fc-область содержит домены CH2 и CH3 из иммуноглобулина IgG1 человека или IgG2 человека. Fc-область может сохранять эффекторную функцию, такую как связывание C1q, комплементзависимая цитотоксичность (CDC), связывание с рецептором Fc, антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность (ADCC) и фагоцитоз. В других вариантах осуществления Fc-область может быть модифицирована для снижения или устранения эффекторной функции, как описано более подробно ниже.

Если не указано иное посредством ссылки на конкретную последовательность, то в настоящей заявке и формуле изобретения нумерация аминокислотных остатков в тяжелой цепи или легкой цепи иммуноглобулина соответствует нумерации AHo, как описано в Honegger and Pluckthun, J. Mol. Biol. 309(3):657-670; 2001, или нумерации EU, как описано в Edelman et al., Proc. Natl. Acad. USA, Vol. 63: 78-85 (1969). Применяемая в данном документе схема нумерации AHo обычно применяется при ссылке на положение аминокислоты в вариабельных областях, тогда как схема нумерации EU обычно применяется при ссылке на положение аминокислоты в константной области иммуноглобулина.

Замена аминокислоты в аминокислотной последовательности в данном документе, как правило, обозначается однобуквенным сокращением аминокислотного остатка в конкретном положении, за которым следует числовое положение аминокислоты относительно исходной представляющей интерес последовательности, за которой следует однобуквенное сокращение для замененного аминокислотного остатка. Например, "T30D" означает замену остатка треонина на остаток аспарагиновой кислоты по аминокислотному положению 30 относительно исходной представляющей интерес последовательности. В другом примере "S218G" означает замену остатка серина на остаток глицина по аминокислотному положению 218 относительно исходной представляющей интерес аминокислотной последовательности.

Одна из функций Fc-области иммуноглобулина заключается в том, чтобы сообщать иммунной системе в случае, если иммуноглобулин связывается со своей мишенью. Это обычно называют "эффекторной функцией". Взаимодействие приводит к антителозависимой клеточной цитотоксичности (ADCC), антителозависимому клеточному фагоцитозу (ADCP) и/или комплементзависимой цитотоксичности (CDC). ADCC и ADCP опосредуются связыванием Fc-области с рецепторами Fc на поверхности клеток иммунной системы. CDC опосредуется связыванием Fc-области с белками системы комплемента, например, C1q. В некоторых вариантах осуществления антитела к PAC1 по настоящему изобретению содержат одну или несколько аминокислотных замен в Fc-области для усиления эффекторной функции, в том числе активности ADCC, активности CDC, активности ADCP и/или клиренса или увеличения периода полужизни антитела. Иллюстративные аминокислотные замены (в соответствии со схемой нумерации EU), которые могут усиливать эффекторную функцию, включают без ограничения E233L, L234I, L234Y, L235S, G236A, S239D, F243L, F243V, P247I, D280H, K290S, K290E, K290N, K290Y, R292P, E294L, Y296W, S298A, S298D, S298V, S298G, S298T, T299A, Y300L, V305I, Q311M, K326A, K326E, K326W, A330S, A330L, A330M, A330F, I332E, D333A, E333S, E333A, K334A, K334V, A339D, A339Q, P396L или комбинации любых из вышеперечисленных.

В других вариантах осуществления антитела к PAC1 по настоящему изобретению содержат одну или несколько аминокислотных замен в Fc-области для снижения эффекторной функции. Иллюстративные аминокислотные замены (в соответствии со схемой нумерации EU), которые могут снижать эффекторную функцию, включают без ограничения C220S, C226S, C229S, E233P, L234A, L234V, V234A, L234F, L235A, L235E, G237A, P238S, S267E, H268Q, N297A, N297G, V309L, E318A, L328F, A330S, A331S, P331S или комбинации любых из вышеперечисленных.

Гликозилирование может способствовать эффекторной функции антител, в частности антител IgG1. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления антитела к PAC1 по настоящему изобретению могут содержать одну или несколько аминокислотных замен, которые влияют на уровень или тип гликозилирования антител. Гликозилирование полипептидов обычно является либо N-связанным, либо O-связанным. N-связанное относится к присоединению углеводного фрагмента к боковой цепи остатка аспарагина. Трипептидные последовательности аспарагин-Х-серин и аспарагин-Х-треонин, где Х представляет собой любую аминокислоту за исключением пролина, представляют собой последовательности распознавания для ферментативного присоединения углеводного фрагмента к боковой цепи аспарагина. Таким образом, присутствие любой из этих трипептидных последовательностей в полипептиде создает потенциальный сайт гликозилирования. O-связанное гликозилирование относится к присоединению одного из сахаров, представляющих собой N-ацетилгалактозамин, галактозу или ксилозу, к гидроксиаминокислоте, наиболее часто серину или треонину, хотя также можно применять 5-гидроксипролин или 5-гидроксилизин.

В определенных вариантах осуществления гликозилирование описанных в данном документе антител к PAC1 усиливается посредством добавления одного или нескольких сайтов гликозилирования, например, к Fc-области антитела. Добавление сайтов гликозилирования к антителу можно удобно осуществлять посредством изменения аминокислотной последовательности таким образом, чтобы она содержала одну или несколько описанных выше трипептидных последовательностей (для сайтов N-связанного гликозилирования). Изменение также можно осуществлять посредством замены или добавления одного или нескольких остатков серина или треонина к исходной последовательности (для сайтов O-связанного гликозилирования). Для удобства аминокислотная последовательность антитела может быть изменена посредством изменений на уровне ДНК, в частности, посредством мутации ДНК, кодирующей целевой полипептид, в предварительно выбранных основаниях таким образом, что образуются кодоны, которые будут транслироваться в требуемые аминокислоты.

Настоящее изобретение также охватывает получение молекул антител с измененной структурой углеводов, что приводит к изменению эффекторной активности, включая антитела с отсутствующим или сниженным уровнем фукозилирования, которые проявляют улучшенную активность ADCC. Из уровня техники известны различные способы снижения или устранения фукозилирования. Например, эффекторная активность ADCC опосредуется связыванием молекулы антитела с рецептором FcγRIII, который, как было показано, зависит от углеводной структуры N-связанного гликозилирования остатка N297 домена CH2. Нефукозилированные антитела связывают этот рецептор с повышенной аффинностью и запускают эффекторные функции, опосредованные FcγRIII, более эффективно, чем нативные фукозилированные антитела. Например, рекомбинантное получение нефукозилированного антитела в клетках линии СНО, в которых фермент альфа-1,6-фукозилтрансфераза был нокаутирован, приводит к получению антитела со 100-кратно повышенной активностью ADCC (см. Yamane-Ohnuki et al., Biotechnol Bioeng. 87(5):614-22, 2004). Подобные эффекты могут быть достигнуты посредством снижения активности фермента альфа-1,6-фукозилтрансферазы или других ферментов в пути фукозилирования, например, посредством обработки с помощью siRNA или антисмысловой РНК, конструирования линий клеток для нокаута фермента(ов) или культивирования с селективными ингибиторами гликозилирования (см. Rothman et al., Mol Immunol. 26 (12): 1113-23, 1989). Некоторые штаммы клеток-хозяев, например, Lec13 или линия клеток гибридомы YB2/0 крысы, естественным путем продуцируют антитела с более низкими уровнями фукозилирования (см. Shields et al., J Biol Chem. 277(30):26733-40, 2002 и Shinkawa et al., J Biol Chem. 278(5):3466-73, 2003). Также было установлено, что повышение уровня разветвленного углевода, например, посредством рекомбинантного продуцирования антитела в клетках, которые сверхэкспрессируют фермент GnTIII, также повышает активность ADCC (см. Umana et al., Nat Biotechnol. 17(2):176-80, 1999).

В других вариантах осуществления гликозилирование описанных в данном документе антител к PAC1 снижается или устраняется посредством удаления одного или нескольких сайтов гликозилирования, например, из Fc-области антитела. В некоторых вариантах осуществления антитело к PAC1 представляет собой агликозилированное моноклональное антитело человека, например, агликозилированное моноклональное антитело IgG1 человека. Аминокислотные замены, которые устраняют или модифицируют сайты N-связанного гликозилирования, могут снижать или устранять N-связанное гликозилирование антитела. В определенных вариантах осуществления антитела к PAC1, описанные в данном документе, содержат в своей тяжелой цепи мутацию в положении N297 (в соответствии со схемой нумерации EU), такую как N297Q, N297A или N297G. В некоторых вариантах осуществления антитела к PAC1 по настоящему изобретению содержат Fc-область из антитела IgG1 человека с мутацией в положении N297. В одном конкретном варианте осуществления антитела к PAC1 по настоящему изобретению содержат Fc-область из антитела IgG1 человека с мутацией N297G. Например, в некоторых вариантах осуществления антитела к PAC1 по настоящему изобретению содержат константную область тяжелой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 324.

Для улучшения стабильности молекул, содержащих мутацию N297, Fc-область антител к PAC1 может быть дополнительно сконструирована. Например, в некоторых вариантах осуществления одна или несколько аминокислот в Fc-области заменены на цистеин для содействия образованию дисульфидной связи в димерном состоянии. Таким образом, остатки, соответствующие V259, A287, R292, V302, L306, V323 или I332 (в соответствии со схемой нумерации EU) Fc-области IgG1, могут быть заменены на цистеин. Предпочтительно, конкретные пары остатков заменены на цистеин таким образом, что они предпочтительно образуют дисульфидную связь друг с другом, таким образом ограничивая или предотвращая скремблирование дисульфидных связей. Предпочтительные пары включают без ограничения A287C и L306C, V259C и L306C, R292C и V302C, а также V323C и I332C. В определенных вариантах осуществления антитела к PAC1,описанные в данном документе, содержат Fc-область из антитела IgG1 человека с мутациями R292C и V302C. В таких вариантах осуществления Fc-область также может содержать мутацию N297, такую как мутация N297G. В некоторых вариантах осуществления антитела к PAC1 по настоящему изобретению содержат константную область тяжелой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 325.

Также могут быть желательны модификации антител к PAC1 по настоящему изобретению для увеличения периода полужизни в сыворотке крови, например, посредством включения или добавления эпитопа, связывающего рецептор реутилизации (например, посредством мутации в соответствующей области или посредством включения эпитопа в пептидную метку, которая затем сливается с антителом на любом конце или в середине, например, посредством синтеза ДНК или пептида; см., например WO96/32478), или добавления молекул, таких как PEG или другие водорастворимые полимеры, включая полисахаридные полимеры. Эпитоп, связывающий рецептор реутилизации, предпочтительно состоит из области, где любые один или несколько аминокислотных остатков из одной или двух петель Fc-области переносятся в аналогичное положение антитела. Еще более предпочтительно, переносятся три или более остатков из одной или двух петель Fc-области. Еще более предпочтительно, эпитоп взят из домена СН2 Fc-области (например, Fc-области IgG) и перенесен в область СН1, СН3 или VH или в более чем одну такую область антитела. В качестве альтернативы, эпитоп взят из домена СН2 Fc-области и перенесен в область CL или область VL, либо в обе эти области антитела. См. международные заявки WO 97/34631 и WO 96/32478 для описания вариантов Fc и их взаимодействия с рецептором реутилизации.

Настоящее изобретение включает один или несколько выделенных полинуклеотидов или выделенных нуклеиновых кислот, кодирующих антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты, описанные в данном документе. Кроме того, настоящее изобретение охватывает векторы, содержащие нуклеиновые кислоты, клетки-хозяева или линии клеток, содержащие нуклеиновые кислоты, и способы получения антител к PAC1 и антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению. Нуклеиновые кислоты содержат, например, полинуклеотиды, которые кодируют все или часть антитела или антигенсвязывающего фрагмента, например, одну или обе цепи антитела по настоящему изобретению, или его фрагмент, производное или вариант, полинуклеотиды, достаточные для применения в качестве гибридизационных зондов, ПЦР-праймеры или праймеры для секвенирования для идентификации, анализа, мутации или амплификации полинуклеотида, кодирующего полипептид, антисмысловые олигонуклеотиды для ингибирования экспрессии полинуклеотида и последовательности, комплементарные вышеуказанным последовательностям. Нуклеиновые кислоты могут быть любой длины, подходящей для требуемого применения или функции, и могут содержать одну или несколько дополнительных последовательностей, например, регуляторных последовательностей, и/или быть частью большей нуклеиновой кислоты, например, вектора. Молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению включают ДНК и РНК как в одноцепочечной, так и в двухцепочечной форме, а также соответствующие комплементарные последовательности. ДНК включает, например, cDNA, геномную ДНК, химически синтезированную ДНК, ДНК, амплифицированную с помощью ПЦР, и их комбинации. Молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению включают полноразмерные гены или молекулы cDNA, а также комбинацию их фрагментов. Нуклеиновые кислоты по настоящему изобретению можно получать из человеческих источников, а также видов, отличных от человека.

Соответствующие аминокислотные последовательности из иммуноглобулина или его области (например, вариабельной области, Fc-области и т. д.) или представляющего интерес полипептида могут быть определены посредством прямого секвенирования белка, и подходящие кодирующие нуклеотидные последовательности могут быть сконструированы в соответствии с универсальной таблицей кодонов. В качестве альтернативы, геномную ДНК или cDNA, кодирующую моноклональные антитела или их связывающие фрагменты по настоящему изобретению, можно выделять и секвенировать из клеток, продуцирующих такие антитела, с помощью общепринятых процедур (например, с помощью олигонуклеотидных зондов, которые способны специфически связываться с генами, кодирующими тяжелую и легкую цепи моноклональных антител).

Термин "выделенная нуклеиновая кислота", который применяется в данном документе взаимозаменяемо с термином "выделенный полинуклеотид", представляет собой нуклеиновую кислоту, которая была отделена от смежных генетических последовательностей, присутствующих в геноме организма, из которого нуклеиновая кислота была выделена, в случае нуклеиновых кислот, выделенных из встречающихся в природе источников. В случае нуклеиновых кислот, синтезированных ферментативно с матрицы или химически, таких как ПЦР-продукты, молекулы cDNA или, например, олигонуклеотиды, понятно, что нуклеиновые кислоты, образующиеся в результате таких процессов, представляют собой выделенные нуклеиновые кислоты. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты относится к молекуле нуклеиновой кислоты в виде отдельного фрагмента или в качестве компонента более крупной конструкции на основе нуклеиновой кислоты. В одном предпочтительном варианте осуществления нуклеиновые кислоты практически свободны от загрязняющего эндогенного материала. Молекулу нуклеиновой кислоты предпочтительно получают из ДНК или РНК, выделенной по меньшей мере один раз, в практически чистой форме и в количестве или концентрации, позволяющих идентифицировать, манипулировать и восстанавливать составляющие ее нуклеотидные последовательности с помощью стандартных биохимических способов (таких как способы, описанные в Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY (1989)). Такие последовательности предпочтительно предусмотрены и/или сконструированы в виде открытой рамки считывания, не прерываемой внутренними нетранслируемыми последовательностями или интронами, которые обычно присутствуют в эукариотических генах. Последовательности нетранслируемой ДНК могут быть представлены 5'- или 3'-концами открытой рамки считывания, где то же самое не мешает манипуляции или экспрессии кодирующей области. Если не указано иное, то левый конец любой обсуждаемой в данном документе одноцепочечной полинуклеотидной последовательности является 5'-концом; левое направление двухцепочечных полинуклеотидных последовательностей называется 5'-направлением. Направление от 5'- к 3'-концу, в котором происходит наращивание образующихся РНК-транскриптов, называется направлением транскрипции; области последовательности цепи ДНК, содержащие такую же последовательность, что и РНК-транскрипт, которые расположены в 5'-направлении относительно 5'-конца РНК-транскрипта, называются "вышележащими последовательностями"; области последовательности цепи ДНК, содержащие такую же последовательность, что и РНК-транскрипт, которые расположены в 3'-направлении относительно 3'-конца РНК-транскрипта, называются "нижележащими последовательностями".

Настоящее изобретение также включает нуклеиновые кислоты, которые гибридизуются в умеренно жестких условиях и, более предпочтительно, в очень жестких условиях с нуклеиновыми кислотами, кодирующими полипептиды, описанные в данном документе. Основные параметры, влияющие на выбор условий гибридизации, и руководство для разработки подходящих условий приведены в Sambrook, Fritsch, and Maniatis (1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., главы 9 и 11, и Current Protocols in Molecular Biology, 1995, Ausubel et al., eds., John Wiley & Sons, Inc., разделы 2.10 и 6.3-6.4), и могут быть легко определены специалистами в данной области техники исходя, например, из длины и/или нуклеотидного состава ДНК. Один из способов достижения умеренно жестких условий включает применение раствора для предварительной промывки, содержащего 5 x SSC, 0,5% SDS, 1,0 мМ EDTA (pH 8,0), буфер для гибридизации с приблизительно 50% формамида, 6 x SSC и температуры гибридизации, составляющей приблизительно 55°C (или других подобных растворов для гибридизации, таких как раствор, содержащий приблизительно 50% формамида, с температурой гибридизации, составляющей приблизительно 42°C), и условиями промывки, составляющими приблизительно 60°C, в 0,5 x SSC, 0,1% SDS. Как правило, очень жесткие условия определяются как условия гибридизации, указанные выше, но с промывкой при примерно 68°С, 0,2 x SSC, 0,1% SDS. SSPE (1 x SSPE представляет собой 0,15 М NaCl, 10 мМ NaH2PO4 и 1,25 мМ EDTA, рН 7,4) можно заменить на SSC (1 x SSC представляет собой 0,15 М NaCl и 15 мМ цитрата натрия) в буферах для гибридизации и промывки; промывки осуществляют в течение 15 минут после завершения гибридизации. Следует понимать, что температуру промывки и концентрацию промывочной соли можно корректировать по мере необходимости для достижения требуемой степени жесткости с применением основных принципов, с помощью которых регулируют условия реакции гибридизации и стабильность дуплекса, как известно специалистам в данной области техники и дополнительно описано ниже (см. например, Sambrook et al., 1989).

При гибридизации нуклеиновой кислоты с целевой нуклеиновой кислотой с неизвестной последовательностью предполагают, что длина гибрида равна длине гибридизующейся нуклеиновой кислоты. При гибридизации нуклеиновых кислот с известной последовательностью длину гибрида можно определить посредством выравнивания последовательностей нуклеиновых кислот и идентификации области или областей оптимальной комплементарности последовательностей. Температура гибридизации для гибридов, предполагаемая длина которых составляет меньше чем 50 пар оснований, должна быть на 5-10°C ниже температуры плавления (Tm) гибрида, где Tm определяют в соответствии со следующими уравнениями. Для гибридов длиной меньше чем 18 пар оснований Tm (°C) = 2 (количество оснований A+T) + 4(количество оснований G+C). Для гибридов длиной более 18 пар оснований Tm (°C) = 81,5+16,6 (log10 [Na+]) + 0,41 (% G+C) - (600/N), где N представляет собой количество оснований в гибриде, и [Na+] представляет собой концентрацию ионов натрия в буфере для гибридизации ([Na+] для 1 x SSC=0,165M). Предпочтительно, каждая такая гибридизующаяся нуклеиновая кислота имеет длину, которая составляет по меньшей мере 15 нуклеотидов (или более предпочтительно по меньшей мере 18 нуклеотидов, или по меньшей мере 20 нуклеотидов, или по меньшей мере 25 нуклеотидов, или по меньшей мере 30 нуклеотидов, или по меньшей мере 40 нуклеотидов, или наиболее предпочтительно по меньшей мере 50 нуклеотидов) или по меньшей мере 25% (более предпочтительно по меньшей мере 50%, или по меньшей мере 60%, или по меньшей мере 70% и наиболее предпочтительно по меньшей мере 80%) длины нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению, с которой она гибридизуется, и характеризуется по меньшей мере 60% идентичностью последовательности (более предпочтительно по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 81%, по меньшей мере 82%, по меньшей мере 83%, по меньшей мере 84%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 86%, по меньшей мере 87%, по меньшей мере 88%, по меньшей мере 89%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, и наиболее предпочтительно по меньшей мере 99,5%) с нуклеиновой кислотой по настоящему изобретению, с которой она гибридизуется, где идентичность последовательности определяют посредством сравнения последовательностей гибридизующихся нуклеиновых кислот, если они выровнены, чтобы максимизировать перекрывание и идентичность при минимизации гэпов в последовательности, как более подробно описано выше.

Варианты антител к PAC1 и антигенсвязывающих фрагментов, описанных в данном документе, можно получать посредством сайт-специфического мутагенеза нуклеотидов в ДНК, кодирующей полипептид, с применением кассетного или ПЦР-мутагенеза или других методик, хорошо известных из уровня техники, таких как методики, описанные в примере 3, для получения ДНК, кодирующей вариант, и последующей экспрессии рекомбинантной ДНК в клеточной культуре, как описано в данном документе. Однако антитела или антигенсвязывающие фрагменты, содержащие вариантные CDR, имеющие не более приблизительно 100-150 остатков, можно получать посредством синтеза in vitro с применением известных методик. Варианты обычно проявляют ту же качественную биологическую активность, что и встречающийся в природе аналог, например, связывание с антигеном. Такие варианты включают, например, делеции и/или вставки, и/или замены остатков в пределах аминокислотных последовательностей антител. Для получения конечной конструкции выполняют любую комбинацию из делеции, вставки и замены при условии, что конечная конструкция обладает требуемыми характеристиками. Изменения аминокислот также могут изменять посттрансляционные процессы, которым подвергается антитело, такие как изменение количества или положения сайтов гликозилирования. В определенных вариантах осуществления варианты антитела получают с целью модификации тех аминокислотных остатков, которые непосредственно участвуют в связывании эпитопа. В других вариантах осуществления модификация остатков, которые непосредственно не участвуют в связывании эпитопа, или остатков, не участвующих каким-либо образом в связывании эпитопа, является желательной для целей, обсуждаемых в данном документе. Предполагается мутагенез в пределах любой из CDR-областей и/или каркасных областей. Специалист в данной области техники может применять методики ковариационного анализа для конструирования полезных модификаций в аминокислотной последовательности антитела. См. например, Choulier, et al., Proteins 41:475-484, 2000; Demarest et al., J. Mol. Biol. 335:41-48, 2004; Hugo et al., Protein Engineering 16(5):381-86, 2003; Aurora et al., публикацию патента США № 2008/0318207 A1; Glaser et al., публикацию патента США № 2009/0048122 A1; Urech et al., WO 2008/110348 A1; Borras et al., WO 2009/000099 A2. Такие модификации, определенные с помощью ковариационного анализа, могут улучшать характеристики эффективности, фармакокинетики, фармакодинамики и/или технологичности антитела.

В таблицах 4A и 4B показаны иллюстративные последовательности нуклеиновых кислот, кодирующие соответственно полные легкую и тяжелую цепи антител к PAC1, описанных в данном документе. В таблицах 5A и 5B показаны иллюстративные последовательности нуклеиновых кислот, кодирующие соответственно вариабельные области легкой и тяжелой цепей антител к PAC1, описанных в данном документе. Полинуклеотиды, кодирующие вариабельные области антител к PAC1, можно применять, необязательно с нуклеиновыми кислотами, кодирующими константные области легкой и тяжелой цепей, перечисленные в таблицах 2 и 3 соответственно, для конструирования антител и антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению.

Таблица 5A. Иллюстративные последовательности нуклеиновых кислот, кодирующие вариабельную область легкой цепи антитела к PAC1
ID Ab Группа VL Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая VL SEQ ID NO:
Варианты 29G4
29G4v10 LV-01 GAGATCGTACTTACTCAGTCACCCGCCACATTGTCCCTGAGCCCGGGTGAACGGGCGACCCTCAGCTGCCGAGCATCCCAGTCCGTCGGACGATCATTGCACTGGTACCAACAAAAACCGGGCCAGGCCCCCAGACTTCTGATCAAGTATGCGTCACAGAGCTTGTCGGGTATTCCCGCTCGCTTTTCGGGGTCGGGATCCGGGACAGATTTCACGCTCACAATCTCCTCGCTGGAACCCGAGGACTTCGCGGTCTACTATTGTCATCAGTCATCGAGGTTGCCTTTCACGTTTGGACCAGGGACCAAGGTGGACATTAAGCGTAC 328
29G4v22 LV-02 GATATCCAGCTCACTCAATCGCCATCATTTCTCTCCGCTTCGGTAGGCGACCGGGTCACGATCACATGCAGGGCGTCGCAAAGCATTGGGAGGTCGTTGCATTGGTATCAGCAGAAACCCGGAAAGGCCCCGAAACTTCTGATCAAATACGCATCACAAAGCTTGAGCGGTGTGCCGTCGCGCTTCTCCGGTTCCGGAAGCGGAACGGAATTCACGCTTACAATCTCCTCACTGCAGCCCGAGGATTTCGCGACCTATTACTGTCACCAGTCATCCAGACTCCCGTTTACTTTTGGCCCTGGGACCAAGGTGGACATTAAGCGTAC 329
iPS:420649; iPS:420653; iPS:420657; iPS:420661;
iPS:420665; iPS:420672;
iPS:420679; iPS:420686; iPS:420837; iPS:420841;
iPS:420845; iPS:420849;
iPS:420853; iPS:420857;
iPS:420861; iPS:420865;
iPS:420869; iPS:420873;
iPS:420877; iPS:420881;
iPS:420885; iPS:420889;
iPS:420893; iPS:420897; iPS:421027; iPS:421031;
iPS:421035; iPS:421039;
iPS:421043; iPS:421047;
iPS:421051; iPS:421055;
iPS:421059; iPS:421063;
iPS:421067; iPS:421071;
iPS:421075; iPS:421079;
iPS:421083; iPS:421087; iPS:421147; iPS:421207;
iPS:421211; iPS:421215;
iPS:421219; iPS:421223
LV-03 GAGATCGTACTTACTCAGTCACCCGCCACATTGTCCCTGAGCCCGGGTGAACGGGCGACCCTCAGCTGCCGAGCATCCAAGTCCGTCGGACGATCATTGCACTGGTACCAACAAAAACCGGGCCAGGCCCCCAGACTTCTGATCAAGTATGCGTCACAGAGCTTGTCGGGTATTCCCGCTCGCTTTTCGGGGTCGGGATCCGGGACAGATTTCACGCTCACAATCTCCTCGCTGGAACCCGAGGACTTCGCGGTCTACTATTGTCATCAGTCATCGAGGTTGCCTTTCACGTTTGGACCAGGGACCAAGGTGGACATTAAG 330
iPS:420690; iPS:420697;
iPS:420704; iPS:420711;
iPS:420718; iPS:420725;
iPS:420732; iPS:420739;
iPS:420746; iPS:420753;
iPS:420760; iPS:420767;
iPS:420774; iPS:420781;
iPS:420788; iPS:420795; iPS:420802; iPS:420809;
iPS:420816; iPS:420823;
iPS:420830; iPS:420901;
iPS:420908; iPS:420915;
iPS:420922; iPS:420929;
iPS:420936; iPS:420943;
iPS:420950; iPS:420957;
iPS:420964; iPS:420971;
iPS:420978; iPS:420985;
iPS:420992; iPS:420999;
iPS:421006; iPS:421013; iPS:421020; iPS:421091;
iPS:421098; iPS:421105;
iPS:421112; iPS:421119;
iPS:421126; iPS:421133;
iPS:421140; iPS:421163;
iPS:391578; iPS:421170;
iPS:421176; iPS:421182; iPS:421239; iPS:421246;
iPS:421253; iPS:421260;
iPS:421267; iPS:421286;
iPS:421293; iPS:421300;
iPS:421307; iPS:421326;
iPS:421333; iPS:421340;
iPS:421347; iPS:421354; iPS:421373; iPS:421380;
iPS:421387; iPS:421394;
iPS:421855; iPS:421861;
iPS:421867; iPS:421873;
iPS:421879; iPS:421885;
iPS:421891; iPS:421897;
iPS:421903; iPS:421909;
iPS:421915
LV-04 GAGATCGTACTTACTCAGTCACCCGCCACATTGTCCCTGAGCCCGGGTGAACGGGCGACCCTCAGCTGCCGAGCATCCCAGTCCGTCGGACGATCATTGCACTGGTACCAACAAAAACCGGGCCAGGCCCCCAGACTTCTGATCAAGTATGCGTCACAGAGCTTGTCGGGTATTCCCGCTCGCTTTTCGGGGTCGGGATCCGGGACAGATTTCACGCTCACAATCTCCTCGCTGGAACCCGAGGACTTCGCGGTCTACTATTGTCATCAGTCATCGAGGTTGCCTTTCACGTTTGGACCAGGGACCAAGGTGGACATTAAG 331
iPS:421151; iPS:421227; iPS:421274; iPS:421314; iPS:421361 LV-05 GAGATCGTACTTACTCAGTCACCCGCCACATTGTCCCTGAGCCCGGGTGAACGGGCGACCCTCAGCTGCCGAGCATCCCAGTCCGTCTGGCGATCATTGCACTGGTACCAACAAAAACCGGGCCAGGCCCCCAGACTTCTGATCAAGTATGCGTCACAGAGCTTGTCGGGTATTCCCGCTCGCTTTTCGGGGTCGGGATCCGGGACAGATTTCACGCTCACAATCTCCTCGCTGGAACCCGAGGACTTCGCGGTCTACTATTGTCATCAGTCATCGAGGTTGCCTTTCACGTTTGGACCAGGGACCAAGGTGGACATTAAG 332
iPS:391478; iPS:421231; iPS:421278; iPS:421318; iPS:421365 LV-06 GAGATCGTACTTACTCAGTCACCCGCCACATTGTCCCTGAGCCCGGGTGAACGGGCGACCCTCAGCTGCCGAGCATCCCAGTCCGTCGGACGAAACTTGCACTGGTACCAACAAAAACCGGGCCAGGCCCCCAGACTTCTGATCAAGTATGCGTCACAGAGCTTGTCGGGTATTCCCGCTCGCTTTTCGGGGTCGGGATCCGGGACAGATTTCACGCTCACAATCTCCTCGCTGGAACCCGAGGACTTCGCGGTCTACTATTGTCATCAGTCATCGAGGTTGCCTTTCACGTTTGGACCAGGGACCAAGGTGGACATTAAG 333
iPS:421157; iPS:421235;
iPS:421282; iPS:421322;
iPS:421369
LV-07 GAGATCGTACTTACTCAGTCACCCGCCACATTGTCCCTGAGCCCGGGTGAACGGGCGACCCTCAGCTGCCGAGCATCCCAGTCCGTCGGACGATCATTGCACTGGTACCAACAAAAACCGGGCCAGGCCCCCAGACTTCTGATCAAGTATGCGTCACAGAGCTTGTCGGGTATTCCCGCTCGCTTTTCGGGGTCGGGATCCGGGACAGATTTCACGCTCACAATCTCCTCGCTGGAACCCGAGGACTTCGCGGTCTACTATTGTCATCAGTCATCGATGTTGCCTTTCACGTTTGGACCAGGGACCAAGGTGGACATTAAG 334
iPS:421189 LV-08 GAGATCGTACTTACTCAGTCACCCGCCACATTGTCCCTGAGCCCGGGTGAACGGGCGACCCTCAGCTGCCGAGCATCCAAGTCCGTCTGGCGATCATTGCACTGGTACCAACAAAAACCGGGCCAGGCCCCCAGACTTCTGATCAAGTATGCGTCACAGAGCTTGTCGGGTATTCCCGCTCGCTTTTCGGGGTCGGGATCCGGGACAGATTTCACGCTCACAATCTCCTCGCTGGAACCCGAGGACTTCGCGGTCTACTATTGTCATCAGTCATCGAGGTTGCCTTTCACGTTTGGACCAGGGACCAAGGTGGACATTAAG 335
iPS:421195 LV-09 GAGATCGTACTTACTCAGTCACCCGCCACATTGTCCCTGAGCCCGGGTGAACGGGCGACCCTCAGCTGCCGAGCATCCAAGTCCGTCGGACGAAACTTGCACTGGTACCAACAAAAACCGGGCCAGGCCCCCAGACTTCTGATCAAGTATGCGTCACAGAGCTTGTCGGGTATTCCCGCTCGCTTTTCGGGGTCGGGATCCGGGACAGATTTCACGCTCACAATCTCCTCGCTGGAACCCGAGGACTTCGCGGTCTACTATTGTCATCAGTCATCGAGGTTGCCTTTCACGTTTGGACCAGGGACCAAGGTGGACATTAAG 336
iPS:421201 LV-10 GAGATCGTACTTACTCAGTCACCCGCCACATTGTCCCTGAGCCCGGGTGAACGGGCGACCCTCAGCTGCCGAGCATCCAAGTCCGTCGGACGATCATTGCACTGGTACCAACAAAAACCGGGCCAGGCCCCCAGACTTCTGATCAAGTATGCGTCACAGAGCTTGTCGGGTATTCCCGCTCGCTTTTCGGGGTCGGGATCCGGGACAGATTTCACGCTCACAATCTCCTCGCTGGAACCCGAGGACTTCGCGGTCTACTATTGTCATCAGTCATCGATGTTGCCTTTCACGTTTGGACCAGGGACCAAGGTGGACATTAAG 337
iPS:480711; iPS:480706; iPS:480705; iPS:480707; iPS:480708; iPS:480712;
iPS:480704; iPS:480710
LV-11 GAGATCGTACTTACTCAGTCACCCGCCACATTGTCCCTGAGCCCGGGTGAACGGGCGACCCTCAGCTGCCGAGCATCCAAATCCGTCGGGTGGAGCTTGCACTGGTACCAACAAAAACCGGGCCAGGCCCCCAGACTTCTGATCAAGTATGCGTCACAGAGCTTGTCGGGTATTCCCGCTCGCTTTTCGGGGTCGGGATCCGGGACAGATTTCACGCTCACAATCTCCTCGCTGGAACCCGAGGACTTCGCGGTCTACTATTGTCATCAGTCATCGAGGTTGCCTTTCACGTTTGGACCAGGGACCAAGGTGGACATTAAGCGTA 338
iPS:480713 LV-12 GAGATCGTACTTACTCAGTCACCCGCCACATTGTCCCTGAGCCCGGGTGAACGGGCGACCCTCAGCTGCCGAGCATCCAAATCCGTCGGGTACAGCTTGCACTGGTACCAACAAAAACCGGGCCAGGCCCCCAGACTTCTGATCAAGTATGCGTCACAGAGCTTGTCGGGTATTCCCGCTCGCTTTTCGGGGTCGGGATCCGGGACAGATTTCACGCTCACAATCTCCTCGCTGGAACCCGAGGACTTCGCGGTCTACTATTGTCATCAGTCATCGAGGTTGCCTTTCACGTTTGGACCAGGGACCAAGGTGGACATTAAGCGTA 339
iPS:480709 LV-13 GAGATCGTACTTACTCAGTCACCCGCCACATTGTCCCTGAGCCCGGGTGAACGGGCGACCCTCAGCTGCCGAGCATCCAAAGCCGTCGGGTGGAGCTTGCACTGGTACCAACAAAAACCGGGCCAGGCCCCCAGACTTCTGATCAAGTATGCGTCACAGAGCTTGTCGGGTATTCCCGCTCGCTTTTCGGGGTCGGGATCCGGGACAGATTTCACGCTCACAATCTCCTCGCTGGAACCCGAGGACTTCGCGGTCTACTATTGTCATCAGTCATCGAGGTTGCCTTTCACGTTTGGACCAGGGACCAAGGTGGACATTAAGCGTA 340
iPS:480716; iPS:480715
iPS:480717
LV-14 GAGATCGTACTTACTCAGTCACCCGCCACATTGTCCCTGAGCCCGGGTGAACGGGCGACCCTCAGCTGCCGAGCATCCAAATCAGTCGGTCAGTCTTTGCACTGGTACCAACAAAAACCGGGCCAGGCCCCCAGACTTCTGATCAAGTATGCGTCACAGAGCTTGTCGGGTATTCCCGCTCGCTTTTCGGGGTCGGGATCCGGGACAGATTTCACGCTCACAATCTCCTCGCTGGAACCCGAGGACTTCGCGGTCTACTATTGTCATCAGTCATCGCGTTTGCCTTTCACGTTTGGACCAGGGACCAAGGTGGACATTAAGCGTA 341
iPS:480714 LV-15 GAGATCGTACTTACTCAGTCACCCGCCACATTGTCCCTGAGCCCGGGTGAACGGGCGACCCTCAGCTGCCGAGCATCCCGTTCAGTCGGTCTGGCTTTGCACTGGTACCAACAAAAACCGGGCCAGGCCCCCAGACTTCTGATCAAGTATGCGTCACAGAGCTTGTCGGGTATTCCCGCTCGCTTTTCGGGGTCGGGATCCGGGACAGATTTCACGCTCACAATCTCCTCGCTGGAACCCGAGGACTTCGCGGTCTACTATTGTCATCAGTCATCGTTCTTGCCTTTCACGTTTGGACCAGGGACCAAGGTGGACATTAAGCGTA 342
Варианты 19H8
19H8 LV-16 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAATCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGGTATTTAAATTGGTATCAACAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGATCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAACAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTTCTGTCAACAGAGTTACAGTCCCCCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAACGTAC 343
iPS:448202 LV-17 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAATCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGGTATTTAAATTGGTATCAACAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTTCGCTGGTCAGCGTTTGCAAAGTGGGATCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAACAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTTCTGTCAACAGGCTATCGGTATGCCATACACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 344
iPS:449375 LV-18 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAATCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGTACATTGTTCGTTACTTAAACTGGTATCAACAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTACGCTGCTCATCATTTGCAAAGTGGGATCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAACAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTTCTGTCAACAGGCTATCCAGGAACCATACACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 345
iPS:448083 LV-19 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAATCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGACTATTGTTCGTTACTTAAACTGGTATCAACAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTTCGCTGGTCAGCGTTTGCAAAGTGGGATCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAACAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTTCTGTCAACAGGCTATCATCAACCCATACACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 346
iPS:452128 LV-20 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAATCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGTACATTGTTCGTTACTTAAACTGGTATCAACAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTACGCTGCTAACATGTTGCAAAGTGGGATCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAACAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTTCTGTCAACAGGCTATCAACCAGCCATACACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 347
iPS:448195 LV-21 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAATCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAAAATTGCTCGTTACTTAGTTTGGTATCAACAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTACGCTGCTAACATGTTGCAAAGTGGGATCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAACAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTTCTGTCAACAGTCTATCCAGCAGCCATACACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 348
iPS:448466 LV-22 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAATCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGGTATTTAAATTGGTATCAACAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTTCGCTGGTCAGCGTTTGCAAAGTGGGATCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAACAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTTCTGTCAACAGGCTATCCAGCAGCCATACACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAACGT 349
iPS:448689 LV-23 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAATCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGTACATTGTTCGTTACTTAAACTGGTATCAACAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTACGCTTCTTACAACTTGCAAAGTGGGATCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAACAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTTCTGTCAACAGGCTATCATGGCTCCATACACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 350
iPS:449034 LV-24 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAATCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGCCTATTGCTCAGTACTTAAACTGGTATCAACAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTACGCTGGTCGTTACTTGCAAAGTGGGATCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAACAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTTCTGTCAACAGGCTATCCAGAACCCATACACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 351
iPS:448075 LV-25 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAATCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGGTATTTAAATTGGTATCAACAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTTCGCTGGTCAGCGTTTGCAAAGTGGGATCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAACAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTTCTGTCAACAGGCTATCGTTCAGCCATACACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 352
iPS:448924 LV-26 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAATCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGCCGATTTCTCGTTACTTATCTTGGTATCAACAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTTCGCTGGTCAGCGTTTGCAAAGTGGGATCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAACAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTTCTGTCAACAGGCTATCTCTATCCCATACACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 353
iPS:448752; 3575 LV-27 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAATCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGCAGATTGCTCGTTACTTAAACTGGTATCAACAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTACGCTTCTTACAACTTGCAAAGTGGGATCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAACAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTTCTGTCAACAGGCTATCATCCAGCCATACACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 354
iPS:448772; iPS:448593 LV-28 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAATCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGGTATTTAAATTGGTATCAACAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTACGCTTCTTACAACTTGCAAAGTGGGATCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAACAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTTCTGTCAACAGGCTATCCAGAACCCATACACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 355
iPS:448117 LV-29 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAATCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGACTATTGTTCGTTACTTAAACTGGTATCAACAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTTCGCTGGTCAGCGTTTGCAAAGTGGGATCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAACAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTTCTGTCAACAGTCTATCCAGACTCCATACACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 356
iPS:448788 LV-30 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAATCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGGTATTTAAATTGGTATCAACAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTACGCTGGTCGTATCTTGCAAAGTGGGATCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAACAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTTCTGTCAACAGGCTATCATCAACCCATACACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 357
iPS:448238 LV-31 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAATCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGCGTATTGCTCGTTACTTAAACTGGTATCAACAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTTCGCTGGTTCTATCTTGCAAAGTGGGATCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAACAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTTCTGTCAACAGGCTATCCAGAACCCATACACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 358
iPS:448901 LV-32 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAATCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGGTATTTAAATTGGTATCAACAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTACGCTTCTTACAACTTGCAAAGTGGGATCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAACAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTTCTGTCAACAGTCTATCCAGCAGCCATACACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 359
iPS:448655 LV-33 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAATCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGTACATTGTTCGTTACTTAAACTGGTATCAACAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTACGCTTCTTACAACTTGCAAAGTGGGATCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAACAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTTCTGTCAACAGGCTATCCAGCAGCCATACACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 360
iPS:448730 LV-34 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAATCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGATGATTGCTCGTTACTTAAACTGGTATCAACAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTACGCTTCTTACAACTTGCAAAGTGGGATCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAACAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTTCTGTCAACAGGCTATCATCAACCCATACACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 361
iPS:449027 LV-35 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAATCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGTACATTGTTCGTTACTTAAACTGGTATCAACAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTACGGTGCTCGTAACTTGCAAAGTGGGATCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAACAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTTCTGTCAACAGTCTATCCAGACTCCATACACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 362
3574 LV-36 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAATCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGGTATTTAAATTGGTATCAACAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGATCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAACAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTTCTGTCAACAGAGTTACAGTCCCCCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 363

Таблица 5B. Иллюстративные последовательности нуклеиновых кислот, кодирующие вариабельную область тяжелой цепи антитела к PAC1
ID Ab Группа VH Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая VH SEQ ID NO:
Варианты 29G4
29G4v10; iPS:421151;
iPS:391478; iPS:421157; iPS:421189; iPS:421195;
iPS:421201
HV-01 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAGGAAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGC 364
29G4v22 HV-02 CAAGTTCAGTTGGTGGAGTCTGGAGCCGAAGTAGTAAAGCCAGGAGCTTCAGTGAAAGTCTCTTGTAAAGCAAGTGGATTCACGTTTAGCCGCTTTGCCATGCATTGGGTGCGGCAAGCTCCCGGTCAGGGGTTGGAGTGGATGGGAGTTATTAGCTATGACGGGGGCAATAAGTACTACGCCGAGTCTGTTAAGGGTCGGGTCACAATGACACGGGACACCTCAACCAGTACACTCTATATGGAACTGTCTAGCCTGAGATCCGAGGACACCGCTGTGTATTATTGCGCTAGGGGGTACGATGTATTGACGGGTTATCCTGATTACTGGGGGCAGGGGACACTCGTAACCGTCTCTAGT 365
iPS:420649; iPS:421227;
iPS:421231; iPS:421235
HV-03 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATAACGGAGGAAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 366
iPS:420653 HV-04 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATATCGGAGGAAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 367
iPS:420657 HV-05 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATCAGGGAGGAAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 368
iPS:420661 HV-06 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATTACGGAGGAAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 369
iPS:420665; iPS:421274;
iPS:421278; iPS:421282
HV-07 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGACGCAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 370
iPS:420672 HV-08 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAAACAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 371
iPS:420679; iPS:421314;
iPS:421318; iPS:421322
HV-09 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAGGAAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 372
iPS:420686; iPS:421361;
iPS:421365; iPS:421369
HV-10 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAGGAAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 373
iPS:420690; iPS:420837 HV-11 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATAACGGACGCAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 374
iPS:420697; iPS:420841 HV-12 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATATCGGACGCAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 375
iPS:420704; iPS:420845 HV-13 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATCAGGGACGCAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 376
iPS:420711; iPS:420849 HV-14 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATTACGGACGCAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 377
iPS:420718; iPS:420853 HV-15 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATAACGGAAACAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 378
iPS:420725; iPS:420857 HV-16 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATATCGGAAACAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 379
iPS:420732; iPS:420861 HV-17 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATCAGGGAAACAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 380
iPS:420739; iPS:420865 HV-18 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATTACGGAAACAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 381
iPS:420746; iPS:420869 HV-19 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATAACGGAGGAAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 382
iPS:420753; iPS:420873 HV-20 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATATCGGAGGAAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 383
iPS:420760; iPS:420877 HV-21 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATCAGGGAGGAAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 384
iPS:420767; iPS:420881 HV-22 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATTACGGAGGAAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 385
iPS:420774; iPS:420885 HV-23 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATAACGGAGGAAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 386
iPS:420781; iPS:420889 HV-24 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATATCGGAGGAAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 387
iPS:420788; iPS:420893 HV-25 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATCAGGGAGGAAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 388
iPS:420795; iPS:420897 HV-26 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATTACGGAGGAAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 389
iPS:420802 HV-27 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGACGCAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 390
iPS:420809 HV-28 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAAACAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 391
iPS:420816 HV-29 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGACGCAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 392
iPS:420823 HV-30 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAAACAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 393
iPS:420830 HV-31 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAGGAAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 394
iPS:420901; iPS:421027 HV-32 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATAACGGACGCAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 395
iPS:420908; iPS:421031 HV-33 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATATCGGACGCAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 396
iPS:420915; iPS:421035 HV-34 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATCAGGGACGCAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 397
iPS:420922; iPS:421039 HV-35 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATTACGGACGCAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 398
iPS:420929; iPS:421043 HV-36 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATAACGGAAACAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 399
iPS:420936; iPS:421047 HV-37 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATATCGGAAACAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 400
iPS:420943; iPS:421051 HV-38 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATCAGGGAAACAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 401
iPS:420950; iPS:421055 HV-39 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATTACGGAAACAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 402
iPS:420957; iPS:421059 HV-40 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATAACGGACGCAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 403
iPS:420964; iPS:421063 HV-41 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATATCGGACGCAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 404
iPS:420971; iPS:421067 HV-42 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATCAGGGACGCAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 405
iPS:420978; iPS:421071 HV-43 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATTACGGACGCAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 406
iPS:420985; iPS:421075 HV-44 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATAACGGAAACAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 407
iPS:420992; iPS:421079 HV-45 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATATCGGAAACAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 408
iPS:420999; iPS:421083 HV-46 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATCAGGGAAACAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 409
iPS:421006; iPS:421087 HV-47 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATTACGGAAACAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 410
iPS:421013 HV-48 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGACGCAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 411
iPS:421020 HV-49 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAAACAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 412
iPS:421091 HV-50 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATAACGGACGCAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 413
iPS:421098 HV-51 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATATCGGACGCAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 414
iPS:421105 HV-52 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATCAGGGACGCAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 415
iPS:421112 HV-53 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATTACGGACGCAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 416
iPS:421119 HV-54 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATAACGGAAACAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 417
iPS:421126 HV-55 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATATCGGAAACAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 418
iPS:421133 HV-56 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATCAGGGAAACAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 419
iPS:421140; iPS:421147 HV-57 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATTACGGAAACAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 420
iPS:421163; iPS:421207 HV-58 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTCACTTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAGGAAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 421
iPS:391578; iPS:421211 HV-59 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATACGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAGGAAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 422
iPS:421170; iPS:421215 HV-60 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATTCGATGGAGGAAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 423
iPS:421176; iPS:421219 HV-61 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAGCCAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 424
iPS:421182; iPS:421223 HV-62 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAGGAAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATTTCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 425
iPS:421239 HV-63 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTCACTTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATAACGGAGGAAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 426
iPS:421246 HV-64 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATACGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATAACGGAGGAAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 427
iPS:421253 HV-65 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATTCAACGGAGGAAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 428
iPS:421260 HV-66 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATAACGGAGCCAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 429
iPS:421267 HV-67 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATAACGGAGGAAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATTTCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 430
iPS:421286 HV-68 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTCACTTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGACGCAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 431
iPS:421293 HV-69 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATACGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGACGCAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 432
iPS:421300 HV-70 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATTCGATGGACGCAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 433
iPS:421307 HV-71 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGACGCAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATTTCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 434
iPS:421326 HV-72 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTCACTTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAGGAAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 435
iPS:421333 HV-73 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATACGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAGGAAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 436
iPS:421340 HV-74 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATTCGATGGAGGAAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 437
iPS:421347 HV-75 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAGCCAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 438
iPS:421354 HV-76 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAGGAAATAAATACTATGCACGCTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATTTCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 439
iPS:421373 HV-77 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTCACTTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAGGAAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 440
iPS:421380 HV-78 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATACGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAGGAAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 441
iPS:421387 HV-79 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATTCGATGGAGGAAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 442
iPS:421394 HV-80 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAGCCAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 443
iPS:421855 HV-81 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAAGTACGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATTCAAGGGAAGCAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATCTGTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 444
iPS:421861 HV-82 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATACGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATCAGGGAGGAAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATCTGTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 445
iPS:421867 HV-83 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTCACTTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATTCAGCGGAAGCAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATATGTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 446
iPS:421873 HV-84 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAAGTTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATCGCGGAGGAAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATCTGTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 447
iPS:421879 HV-85 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATACGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATAGCGGAGCCAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATCTGTTGAGCGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 448
iPS:421885 HV-86 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTCACTACGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATTCAAGGGAGCCAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATCTGTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 449
iPS:421891 HV-87 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTCACTACGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATCGCGGAGCCAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATCTGTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 450
iPS:421897 HV-88 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTCACTACGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATTCTACGGAAGCAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATTTCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 451
iPS:421903 HV-89 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTCACTTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATTCTTCGGAGGAAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATTTCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 452
iPS:421909 HV-90 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTCACTACGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATTCATGGGAACCAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATTTCTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 453
iPS:421915 HV-91 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTTACTTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCACACCGCGGAACCAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATCTGTTGAGCGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 454
iPS:480711 HV-92 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGGTGTTATCAACTATCGTGGACATGGTAAATACTATGCAG
AGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCGTGTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCTAGT
455
iPS:480706 HV-93 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGGTGTTATATCTTTTTCTGGAGGTTCTAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCTTGTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCTAGT 456
iPS:480713 HV-94 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGGTGTTATCTCTTATACTGGACAGTTCAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCGTGTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCTAGT 457
iPS:480705 HV-95 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGGTGTTATATCTTATACTGGAGCTCAGAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATGTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCTAGT 458
iPS:480707 HV-96 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGGTGTTATATCTTATTCTGGAGCTTCTAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATGTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCTAGT 459
iPS:480708 HV-97 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCTGTTATATCTTATTCTGGAGCTTTCAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCGTGTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCTAGT 460
iPS:480709 HV-98 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGGTGTTATAACTTATACTGGAGGTGCTAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCTAGT 461
iPS:480712 HV-99 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGGTGTTATCAACTTTCAGGGAACTACTAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCTAGT 462
iPS:480704 HV-100 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGGTGTTATATCTTATTCTGGAGATCTGAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCGTGTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCTAGT 463
iPS:480710 HV-101 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATTTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGGTGTTATCAACTATTTCGGAGACGCTAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATGTTTTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCTAGT 464
iPS:480716 HV-102 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTTTCTACGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATCTCATCTTTCGGAAGTAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATCTGCTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCTAGT 465
iPS:480715 HV-103 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTTACTACGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATCTCATACTCTGGAAGTAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATCTGCTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCTAGT 466
iPS:480717 HV-104 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTTACTACGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATCTCACATTACGGAACTAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATCCTCTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCTAGT 467
iPS:480714 HV-105 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTCATTACGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATCTCATACCAGGGAAGTAATAAATACTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTCTGTTTTACTGTGCGAGAGGATACGATCTGCTGACTGGTTACCCCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCTAGT 468
Варианты 19H8
19H8; 3575 HV-106 CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATCTCCGGGGACAGTGTCTCTAGCAACAGTGCTACTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATATTACAGGTCCAAGTGGTCTAATCATTATGCAGTATCTGTGAAAAGTCGAATAACCATCAACCCCGACACGTCCAAGAGCCAGTTCTCCCTGCAGCTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGGAACGTGGAAACAGCTATGGTTCCTTGACCACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGTG 469
iPS:448202; iPS:448689 HV-107 CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATCTCCGGGGACAGTGTCTCTAACCGTCTGGCTACTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGGGTAAATGGAAAAATCATTATGCAGTATCTGTGAAAAGTCGAATAACCATCAACCCCGACACGTCCAAGAGCCAGTTCTCCCTGCAGCTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGGAACTTGGAACCAGGACTGGTTCCTGGACCACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 470
iPS:449375 HV-108 CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATCTCCGGGGACAGTGTCTCTAACCGTCTGGCTACTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGGGTAAATGGAAAAATCATTATGCAGTATCTGTGAAAAGTCGAATAACCATCAACCCCGACACGTCCAAGAGCCAGTTCTCCCTGCAGCTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGGAACTTGGGACCAGGACTGGTTCCTGGACCACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 471
iPS:448083 HV-109 CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATCTCCGGGGACAGTGTCTCTTCTCGTCAGGCTACTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGGGTAAATGGAAAAATCATTATGCAGTATCTGTGAAAAGTCGAATAACCATCAACCCCGACACGTCCAAGAGCCAGTTCTCCCTGCAGCTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGGAACTTGGGAACAGGACTGGTTCCTGGACCACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 472
iPS:452128; iPS:448195; iPS:448752; iPS:449027; 3574 HV-110 CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATCTCCGGGGACAGTGTCTCTAACAAACAGGCTACTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGGGTAAATGGAAAAATCATTATGCAGTATCTGTGAAAAGTCGAATAACCATCAACCCCGACACGTCCAAGAGCCAGTTCTCCCTGCAGCTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGGAATGTGGAACCAGAACTGGTTCCTGGACCACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 473
iPS:448466 HV-111 CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATCTCCGGGGACAGTGTCTCTAACAAACAGGCTACTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGGGTCAGTGGAAAAATCATTATGCAGTATCTGTGAAAAGTCGAATAACCATCAACCCCGACACGTCCAAGAGCCAGTTCTCCCTGCAGCTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGGAACTTGGATCGGTGACTGGTTCATGGACCACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 474
iPS:449034 HV-112 CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATCTCCGGGGACAGTGTCTCTAACAAACAGGCTACTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGGGTAAATGGAAAAATCATTATGCAGTATCTGTGAAAAGTCGAATAACCATCAACCCCGACACGTCCAAGAGCCAGTTCTCCCTGCAGCTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGGAACTTGGATCCAGGACTGGTTCCTGGACCACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 475
iPS:448075 HV-113 CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATCTCCGGGGACAGTGTCTCTTCTAACCATGCTACTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGGGTAAATGGAAAAATCATTATGCAGTATCTGTGAAAAGTCGAATAACCATCAACCCCGACACGTCCAAGAGCCAGTTCTCCCTGCAGCTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGGAACTTGGGACCAGGACTGGTTCCTGGACCACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 476
iPS:448924 HV-114 CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATCTCCGGGGACAGTGTCTCTTCTCGTTACGCTACTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGGGTCAGTGGAAAAATCATTATGCAGTATCTGTGAAAAGTCGAATAACCATCAACCCCGACACGTCCAAGAGCCAGTTCTCCCTGCAGCTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGGAATGTGGAACCAGAACTGGTTCCTGGACCACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 477
iPS:448772 HV-115 CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATCTCCGGGGACAGTGTCTCTAACAAACAGGCTACTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGGGTAAATGGAAAAATCATTATGCAGTATCTGTGAAAAGTCGAATAACCATCAACCCCGACACGTCCAAGAGCCAGTTCTCCCTGCAGCTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGGAATGTGGTCTGGTGACTGGTTCCTGGACCACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 478
iPS:448117 HV-116 CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATCTCCGGGGACAGTGTCTCTTCTCATGTTGCTACTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGGGTAAATGGAAAAATCATTATGCAGTATCTGTGAAAAGTCGAATAACCATCAACCCCGACACGTCCAAGAGCCAGTTCTCCCTGCAGCTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGGAATGTGGTCTGAAGACTGGTTCCTGGACCACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 479
iPS:448788 HV-117 CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATCTCCGGGGACAGTGTCTCTTCTCGTCAGGCTACTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGGGTAAATGGAAAAATCATTATGCAGTATCTGTGAAAAGTCGAATAACCATCAACCCCGACACGTCCAAGAGCCAGTTCTCCCTGCAGCTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGGAATGTGGCAGGGTAACTGGTTCCTGGACCACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 480
iPS:448593 HV-118 CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATCTCCGGGGACAGTGTCTCTAACCATCAGGCTACTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGGGTAAATGGAAAAATCATTATGCAGTATCTGTGAAAAGTCGAATAACCATCAACCCCGACACGTCCAAGAGCCAGTTCTCCCTGCAGCTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGGAACTTGGATCCAGGACTGGTTCCTGGACCACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 481
iPS:448238 HV-119 CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATCTCCGGGGACAGTGTCTCTTCTCGTGACGCTACTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGGGTAAATGGAAAAATCATTATGCAGTATCTGTGAAAAGTCGAATAACCATCAACCCCGACACGTCCAAGAGCCAGTTCTCCCTGCAGCTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGGACAGTGGAACGAAGACTGGTTCCTGGACCACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 482
iPS:448901 HV-120 CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATCTCCGGGGACAGTGTCTCTAACCGTCTGGCTACTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGGGTAAATGGAAAAATCATTATGCAGTATCTGTGAAAAGTCGAATAACCATCAACCCCGACACGTCCAAGAGCCAGTTCTCCCTGCAGCTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGGACGTTGGGAAGGTGACTGGTTCTTCGACCACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 483
iPS:448655 HV-121 CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATCTCCGGGGACAGTGTCTCTAACAAACAGGCTACTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTTCAGGCGTACTTGGAAAAATCATTATGCAGTATCTGTGAAAAGTCGAATAACCATCAACCCCGACACGTCCAAGAGCCAGTTCTCCCTGCAGCTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGGAATGTGGTCTGAAGACTGGTTCCTGGACCACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 484
iPS:448730 HV-122 CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATCTCCGGGGACAGTGTCTCTAACCGTCTGGCTACTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGGGTAAATGGAAAAATCATTATGCAGTATCTGTGAAAAGTCGAATAACCATCAACCCCGACACGTCCAAGAGCCAGTTCTCCCTGCAGCTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGGAGTTTGGATCGGTAACTGGTTCCTGGACCACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCTAGT 485

Выделенные нуклеиновые кислоты, кодирующие антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению, могут содержать нуклеотидную последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична, на по меньшей мере 90% идентична, на по меньшей мере 95% идентична или на по меньшей мере 98% идентична любой из нуклеотидных последовательностей, перечисленных в таблицах 4A, 4B, 5A и 5B. В некоторых вариантах осуществления выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая вариабельную область легкой цепи антитела к PAC1, содержит последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична, на по меньшей мере 90% идентична, на по меньшей мере 95% идентична или на по меньшей мере 98% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 328-342. В других вариантах осуществления выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая вариабельную область легкой цепи антитела к PAC1, содержит последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична, на по меньшей мере 90% идентична, на по меньшей мере 95% идентична или на по меньшей мере 98% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 343-363. В определенных вариантах осуществления выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая вариабельную область легкой цепи антитела к PAC1, содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 328-342. В определенных других вариантах осуществления выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая вариабельную область легкой цепи антитела к PAC1, содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 343-363. В связанных вариантах осуществления выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи антитела к PAC1, содержит последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична, на по меньшей мере 90% идентична, на по меньшей мере 95% идентична или на по меньшей мере 98% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 364-468. В других связанных вариантах осуществления выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи антитела к PAC1, содержит последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична, на по меньшей мере 90% идентична, на по меньшей мере 95% идентична или на по меньшей мере 98% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 469-485. В некоторых вариантах осуществления выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи антитела к PAC1, содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 364-468. В других вариантах осуществления выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи антитела к PAC1, содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 469-485.

В некоторых вариантах осуществления выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая легкую цепь антитела к PAC1, содержит последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична, на по меньшей мере 90% идентична, на по меньшей мере 95% идентична или на по меньшей мере 98% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 537-541. В других вариантах осуществления выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая легкую цепь антитела к PAC1, содержит последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична, на по меньшей мере 90% идентична, на по меньшей мере 95% идентична или на по меньшей мере 98% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 542-551. В определенных вариантах осуществления выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая легкую цепь антитела к PAC1, содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 537-541. В определенных других вариантах осуществления выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая легкую цепь антитела к PAC1, содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 542-551. В связанных вариантах осуществления выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая тяжелую цепь антитела к PAC1, содержит последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична, на по меньшей мере 90% идентична, на по меньшей мере 95% идентична или на по меньшей мере 98% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 552-562. В других связанных вариантах осуществления выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая тяжелую цепь антитела к PAC1, содержит последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична, на по меньшей мере 90% идентична, на по меньшей мере 95% идентична или на по меньшей мере 98% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 563-569. В некоторых вариантах осуществления выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая тяжелую цепь антитела к PAC1, содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 552-562. В других вариантах осуществления выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая тяжелую цепь антитела к PAC1, содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 563-569.

Последовательности нуклеиновых кислот, предусмотренные в таблицах 4A, 4B, 5A и 5B, являются только иллюстративными. Как будет понятно специалистам в данной области техники, из-за вырожденности генетического кода может быть получено чрезвычайно большое количество нуклеиновых кислот, все из которых кодируют CDR, вариабельные области и тяжелые и легкие цепи или другие компоненты антител и антигенсвязывающих фрагментов, описанных в данном документе. Таким образом, идентифицировав конкретную аминокислотную последовательность, специалисты в данной области техники могут получить любое количество различных нуклеиновых кислот с помощью простой модификации последовательности одного или нескольких кодонов таким путем, который не приводит к изменению аминокислотной последовательности кодируемого белка.

Настоящее изобретение также включает векторы, содержащие одну или несколько нуклеиновых кислот, кодирующих один или несколько компонентов антител или антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению (например, вариабельные области, легкие цепи и тяжелые цепи). Термин "вектор" означает любую молекулу или единицу (например, нуклеиновую кислоту, плазмиду, бактериофаг или вирус), применяемую для переноса кодирующей белок информации в клетку-хозяина. Примеры векторов включают без ограничения плазмиды, вирусные векторы, неэписомные векторы млекопитающих и векторы экспрессии, например, рекомбинантные векторы экспрессии. Применяемый в данном документе термин "вектор экспрессии" или "конструкция для экспрессии" относится к рекомбинантной молекуле ДНК, содержащей требуемую кодирующую последовательность и соответствующие регуляторные последовательности нуклеиновой кислоты, необходимые для экспрессии функционально связанной кодирующей последовательности в конкретной клетке-хозяине. Вектор экспрессии может включать без ограничения последовательности, которые оказывают влияние на транскрипцию, трансляцию или регулируют их и при наличии интронов оказывают влияние на сплайсинг РНК кодирующей области, функционально связанной с ними. Последовательности нуклеиновых кислот, необходимые для экспрессии в прокариотах, включают промотор, необязательно последовательность оператора, сайт связывания рибосомы и, возможно, другие последовательности. Известно, что эукариотические клетки используют промоторы, энхансеры и сигналы терминации и полиаденилирования.

Если требуется, секреторная сигнальная пептидная последовательность также может необязательно кодироваться вектором экспрессии, функционально связанным с представляющей интерес кодирующей последовательностью таким образом, что экспрессируемый полипептид может секретироваться рекомбинантной клеткой-хозяином для более легкого выделения представляющего интерес полипептида из клетки. Например, в некоторых вариантах осуществления сигнальные пептидные последовательности могут быть присоединены к аминоконцу/слиты с аминоконцом любой из полипептидных последовательностей вариабельных областей, перечисленных в таблицах 1A и 1B, или любой из полных полипептидных последовательностей цепей, перечисленных в таблицах 4A и 4B. В определенных вариантах осуществления сигнальный пептид, имеющий аминокислотную последовательность MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARC (SEQ ID NO: 486), слит с аминоконцом любой из полипептидных последовательностей вариабельных областей из таблиц 1A и 1B или полных полипептидных последовательностей цепей из таблиц 4A и 4B. В других вариантах осуществления сигнальный пептид, имеющий аминокислотную последовательность MAWALLLLTLLTQGTGSWA (SEQ ID NO: 487), слит с аминоконцом любой из полипептидных последовательностей вариабельных областей из таблиц 1A и 1B или полных полипептидных последовательностей цепей из таблиц 4A и 4B. В еще других вариантах осуществления сигнальный пептид, имеющий аминокислотную последовательность MTCSPLLLTLLIHCTGSWA (SEQ ID NO: 488), слит с аминоконцом любой из полипептидных последовательностей вариабельных областей из таблиц 1A и 1B или полных полипептидных последовательностей цепей из таблиц 4A и 4B. Другие подходящие сигнальные пептидные последовательности, которые могут быть слиты с аминоконцом полипептидных последовательностей вариабельных областей или полных полипептидных последовательностей цепей, описанных в данном документе, включают: MEAPAQLLFLLLLWLPDTTG (SEQ ID NO: 489), MEWTWRVLFLVAAATGAHS (SEQ ID NO: 490), METPAQLLFLLLLWLPDTTG (SEQ ID NO: 491), METPAQLLFLLLLWLPDTTG (SEQ ID NO: 492), MKHLWFFLLLVAAPRWVLS (SEQ ID NO: 493), MEWSWVFLFFLSVTTGVHS (SEQ ID NO: 494), MDIRAPTQLLGLLLLWLPGAKC (SEQ ID NO: 495), MDIRAPTQLLGLLLLWLPGARC (SEQ ID NO: 496), MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATF (SEQ ID NO: 497), MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARC (SEQ ID NO: 498), METGLRWLLLVAVLKGVQC (SEQ ID NO: 499), METGLRWLLLVAVLKGVQCQE (SEQ ID NO: 500) и MDMRAPTQLLGLLLLWLPGARC (SEQ ID NO: 501). Другие сигнальные или секреторные пептиды известны специалистам в данной области техники и могут быть слиты с любой из полипептидных цепей вариабельных областей, перечисленных в таблицах 1A и 1B, или полных полипептидных последовательностей цепей из таблиц 4A и 4B, например, для облегчения или оптимизации экспрессии в конкретных в клетках-хозяевах.

Как правило, векторы экспрессии, применяемые в клетках-хозяевах для получения антител к PAC1 и антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению, будут содержать последовательности для поддержания плазмиды и для клонирования и экспрессии экзогенных нуклеотидных последовательностей, кодирующих компоненты антител и антигенсвязывающих фрагментов. Такие последовательности, обобщенно называемые "фланкирующими последовательностями", в определенных вариантах осуществления, как правило, будут содержать одну или несколько из следующих нуклеотидных последовательностей: промотор, одну или несколько энхансерных последовательностей, точку начала репликации, последовательность терминации транскрипции, полную последовательность интрона, содержащую донорный и акцепторный сайты сплайсинга, последовательность, кодирующую лидерную последовательность для секреции полипептида, сайт связывания рибосомы, последовательность полиаденилирования, полилинкерную область для вставки нуклеиновой кислоты, кодирующей подлежащий экспрессии полипептид, и элемент селектируемого маркера. Каждая из этих последовательностей рассматривается ниже.

Необязательно, вектор может содержать последовательность, кодирующую "метку", т. е., молекулу олигонуклеотида, расположенную на 5′- или 3′-конце последовательности, кодирующей полипептид; олигонуклеотидную последовательность метки, кодирующую polyHis (например, hexaHis), FLAG®, HA (гемагглютинин вируса гриппа), myc или другую молекулу метки, для которой существуют коммерчески доступные антитела. Как правило, эта метка слита с полипептидом при экспрессии полипептида, и она может служить в качестве средства для аффинной очистки или выявления полипептида из клетки-хозяина. Аффинную очистку можно осуществлять, например, с помощью колоночной хроматографии с применением антител к метке в качестве аффинной матрицы. Необязательно, впоследствии метка может быть удалена из очищенного полипептида с помощью различных способов, таких как применение определенных пептидаз для расщепления.

Фланкирующие последовательности могут быть гомологичными (т. е. из того же вида и/или штамма, что и клетка-хозяин), гетерологичными (т. е. из вида, отличного от вида или штамма клетки-хозяина), гибридными (т. е. комбинацией фланкирующих последовательностей из более чем одного источника), синтетическими или нативными. Таким образом, источником фланкирующей последовательности может быть любой прокариотический или эукариотический организм, любой позвоночный или беспозвоночный организм или любое растение при условии, что фланкирующая последовательность является функциональной и может быть активирована посредством механизма клетки-хозяина.

Фланкирующие последовательности, применяемые в векторах по настоящему изобретению, можно получать любым из нескольких способов, хорошо известных из уровня техники. Как правило, применяемые в данном документе фланкирующие последовательности будут предварительно идентифицированы с помощью картирования и/или расщепления рестрикционными эндонуклеазами и, следовательно, могут быть выделены из соответствующего источника, представляющего собой ткань, с применением подходящих рестрикционных эндонуклеаз. В некоторых случаях может быть известна полная нуклеотидная последовательность фланкирующей последовательности. В данном случае фланкирующая последовательность может быть синтезирована с помощью рутинных способов синтеза или клонирования нуклеиновых кислот.

Вне зависимости от того, известна вся или только часть фланкирующей последовательности, ее можно получить с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) и/или посредством скрининга геномной библиотеки с подходящим зондом, таким как олигонуклеотид и/или фрагмент фланкирующей последовательности из того же или другого вида. Если фланкирующая последовательность неизвестна, то фрагмент ДНК, содержащий фланкирующую последовательность, можно выделить из более крупного участка ДНК, который может содержать, например, кодирующую последовательность и даже другой ген или гены. Выделение можно осуществлять посредством расщепления рестрикционными эндонуклеазами для получения соответствующего фрагмента ДНК с последующим выделением с помощью очистки в агарозном геле, колоночной хроматографии Qiagen® (Чатсворт, Калифорния) или других способов, известных специалисту в данной области техники. Выбор подходящих ферментов для осуществления этой цели будет совершенно очевиден для специалиста в данной области техники.

Как правило, точка начала репликации является частью коммерчески приобретенных прокариотических векторов экспрессии, и точка начала репликации способствует амплификации вектора в клетке-хозяине. Если выбранный вектор не содержит точку начала репликации, то ее можно химически синтезировать на основе известной последовательности и лигировать с вектором. Например, точка начала репликации из плазмиды pBR322 (New England Biolabs, Беверли, Массачусетс) подходит для большинства грамотрицательных бактерий, и различные источники вирусного происхождения (например, SV40, вирус полиомы, аденовирус, вирус везикулярного стоматита (VSV) или папилломавирусы, такие как HPV или BPV) подходят для клонирования векторов в клетках млекопитающих. В целом, компонент точки начала репликации не требуется для векторов экспрессии млекопитающих (например, точка начала репликации SV40 часто используется только потому, что она также содержит промотор ранних генов вируса).

Как правило, последовательность терминации транскрипции расположена в 3'-направлении относительно конца кодирующей полипептид области и служит для терминации транскрипции. Обычно последовательность терминации транскрипции в прокариотических клетках представляет собой G-C-богатый фрагмент, за которым следует последовательность поли-Т. Хотя последовательность легко клонировать из библиотеки или даже коммерчески приобрести в качестве части вектора, ее также можно легко синтезировать с применением известных способов синтеза нуклеиновых кислот.

Ген селектируемого маркера кодирует белок, необходимый для выживания и роста клетки-хозяина, растущей в селективной культуральной среде. Типичные гены селективных маркеров кодируют белки, которые (a) придают устойчивость к антибиотикам или другим токсинам, например, ампициллину, тетрациклину или канамицину в случае прокариотических клеток-хозяев; (b) восполняют ауксотрофные дефициты в клетке; или (c) обеспечивают необходимые питательные вещества, недоступные из комплексной или определенной среды. Конкретные селектируемые маркеры представляют собой ген устойчивости к канамицину, ген устойчивости к ампициллину и ген устойчивости к тетрациклину. Преимущественно, можно также применять ген устойчивости к неомицину для отбора как в прокариотических, так и в эукариотических клетках-хозяевах.

Для амплификации гена, который будет экспрессироваться, можно применять другие селектируемые гены. Амплификация представляет собой процесс, при котором гены, необходимые для продуцирования белка, необходимого для роста или выживания клеток, повторяются в тандеме в пределах хромосом последующих поколений рекомбинантных клеток. Примеры подходящих селектируемых маркеров для клеток млекопитающих включают дигидрофолатредуктазу (DHFR) и гены тимидинкиназы, не содержащие промоторов. Трансформанты клеток млекопитающих помещают в условия давления отбора, в которых только лишь трансформанты адаптированы для выживания вследствие присутствия в векторе селектируемого гена. Давление отбора устанавливают посредством культивирования трансформированных клеток в условиях, при которых концентрация средства для отбора в среде последовательно увеличивается, приводя тем самым к амплификации как селектируемого гена, так и ДНК, которая кодирует другой ген, такой как один или несколько компонентов антител или антигенсвязывающих фрагментов, описанных в данном документе. В результате с амплифицированной ДНК синтезируются повышенные количества полипептида.

Сайт связывания рибосомы обычно необходим для инициации трансляции mRNA и характеризуется наличием последовательности Шайна-Дальгарно (прокариоты) или последовательности Козак (эукариоты). Как правило, этот элемент расположен в направлении 3'-конца относительно промотора и в направлении 5'-конца относительно кодирующей последовательности полипептида, подлежащего экспрессии. В определенных вариантах осуществления одна или несколько кодирующих областей могут быть функционально связаны с внутренним сайтом связывания рибосомы (IRES), что позволяет осуществлять трансляцию двух открытых рамок считывания с одного РНК-транскрипта.

В некоторых случаях, например, если в системе экспрессии эукариотической клетки-хозяина требуется гликозилирование, можно манипулировать с различными пре- или пропоследовательностями для улучшения гликозилирования или выхода. Например, можно изменять сайт расщепления пептидазой конкретного сигнального пептида или добавлять пропоследовательности, которые также могут оказывать влияние на гликозилирование. Конечный белковый продукт может содержать в положении -1 (по отношению к первой аминокислоте зрелого белка) одну или несколько дополнительных аминокислот, связанных с экспрессией, которые могли быть не полностью удалены. Например, конечный белковый продукт может содержать один или несколько аминокислотных остатков, находящихся в сайте расщепления пептидазой, присоединенных к аминоконцу. В качестве альтернативы, применение некоторых сайтов расщепления ферментами может приводить к получению слегка усеченной формы требуемого полипептида, если фермент осуществляет разрезание в такой области в пределах зрелого полипептида.

Векторы экспрессии и векторы для клонирования по настоящему изобретению будут, как правило, содержать промотор, который распознается организмом-хозяином и функционально связан с молекулой, кодирующей полипептид. Применяемый в данном документе термин "функционально связанный" относится к связыванию двух или более последовательностей нуклеиновых кислот таким образом, что образуется молекула нуклеиновой кислоты, способная направлять транскрипцию данного гена и/или синтез требуемой молекулы белка. Например, регуляторная последовательность в векторе, которая "функционально связана" с кодирующей белок последовательностью, лигируется с ней таким образом, что экспрессия кодирующей белок последовательности достигается в условиях, совместимых с транскрипционной активностью регуляторных последовательностей. Более конкретно, последовательность промотора и/или энхансера, включая любую комбинацию цис-действующих элементов регуляции транскрипции, функционально связана с кодирующей последовательностью, если она стимулирует или модулирует транскрипцию кодирующей последовательности в соответствующей клетке-хозяине или другой системе экспрессии.

Промоторы представляют собой нетранскрибируемые последовательности, расположенные выше (т. е. в 5'-направлении) стартового кодона структурного гена (как правило, в пределах приблизительно 100-1000 п. о.), которые регулируют транскрипцию структурного гена. Обычно промоторы группируют в один из двух классов: индуцибельные промоторы и конститутивные промоторы. Индуцибельные промоторы инициируют повышенные уровни транскрипции с ДНК, находящейся под их контролем, в ответ на некоторое изменение в условиях культивирования, такое как наличие или отсутствие питательного вещества или изменение температуры. С другой стороны, конститутивные промоторы приводят к постоянной транскрипции гена, с которым они функционально связаны, то есть они осуществляют незначительную регуляцию экспрессии гена или такая регуляция отсутствует. Хорошо известно большое количество промоторов, распознаваемых различными потенциальными клетками-хозяевами. Подходящий промотор функционально связан с ДНК, кодирующей, например, тяжелую цепь, легкую цепь или другой компонент антител и антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению с помощью удаления промотора из исходной ДНК посредством расщепления рестрикционным ферментом и вставки требуемой последовательности промотора в вектор.

Также из уровня техники хорошо известны промоторы, подходящие для применения с дрожжевыми клетками-хозяевами. Дрожжевые энхансеры предпочтительно применяют с дрожжевыми промоторами. Подходящие промоторы для применения с клетками-хозяевами млекопитающих хорошо известны и включают без ограничения промоторы, полученные из геномов вирусов, таких как вирус полиомы, вирус оспы кур, аденовирус (например, серотипы 2, 8 или 9 аденовируса), вирус папилломы крупного рогатого скота, вирус саркомы птиц, цитомегаловирус, ретровирусы, вирус гепатита В и вирус обезьян 40 (SV40). Другие подходящие промоторы млекопитающих включают гетерологичные промоторы млекопитающих, например, промоторы генов, кодирующих белки теплового шока, и промотор актина.

Дополнительные промоторы, которые могут представлять интерес, включают без ограничения: промотор ранних генов SV40 (Benoist and Chambon, 1981, Nature 290:304-310); промотор CMV (Thornsen et al., 1984, Proc. Natl. Acad. U.S.A. 81:659-663); промотор, содержащийся в 3'-концевом длинном повторе вируса саркомы Рауса (Yamamoto et al., 1980, Cell 22:787-797); промотор тимидинкиназы вируса герпеса (Wagner et al., 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 78: 1444-1445); промоторные и регуляторные последовательности из гена металлотионина (Prinster et al., 1982, Nature 296:39-42); и прокариотические промоторы, такие как промотор бета-лактамазы (Villa-Kamaroff et al., 1978, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 75:3727-3731); или промотор tac (DeBoer et al., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 80:21-25). Также представляют интерес следующие транскрипционные регуляторные области животных, которые проявляют тканевую специфичность и применялись в трансгенных животных: регуляторная область гена эластазы I, которая активна в ацинарных клетках поджелудочной железы (Swift et al., 1984, Cell 38:639-646; Ornitz et al., 1986, Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 50:399-409; MacDonald, 1987, Hepatology 7:425-515); регуляторная область гена инсулина, которая активна в бета-клетках поджелудочной железы (Hanahan, 1985, Nature 315: 115-122); регуляторная область гена иммуноглобулина, которая активна в лимфоидных клетках (Grosschedl et al., 1984, Cell 38:647-658; Adames et al., 1985, Nature 318:533-538; Alexander et al., 1987, Mol. Cell. Biol. 7: 1436-1444); регуляторная область вируса опухоли молочной железы мыши, которая активна в клетках яичка, молочной железы, лимфоидных и тучных клетках (Leder et al., 1986, Cell 45:485-495); регуляторная область гена альбумина, которая активна в печени (Pinkert et al., 1987, Genes and Devel. 1:268-276); регуляторная область гена альфа-фетопротеина, которая активна в печени (Krumlauf et al., 1985, Mol. Cell. Biol. 5: 1639-1648; Hammer et al., 1987, Science 253:53-58); регуляторная область гена альфа-1-антитрипсина, которая активна в печени (Kelsey et al., 1987, Genes and Devel. 1: 161-171); регуляторная область гена бета-глобина, которая активна в миелоидных клетках (Mogram et al., 1985, Nature 315:338-340; Kollias et al., 1986, Cell 46:89-94); регуляторная область гена основного белка миелина, которая активна в олигодендроцитах в головном мозге (Readhead et al., 1987, Cell 48:703-712); регуляторная область гена легкой цепи 2 миозина, которая активна в скелетных мышцах (Sani, 1985, Nature 314:283-286); и регуляторная область гена гонадотропного рилизинг-гормона, которая активна в гипоталамусе (Mason et al., 1986, Science 234: 1372-1378).

Последовательность энхансера может быть вставлена в вектор для усиления транскрипции ДНК, кодирующей компонент антител или антигенсвязывающих фрагментов (например, легкой цепи, тяжелой цепи или вариабельных областей) высших эукариот. Энхансеры представляют собой цис-действующие элементы ДНК длиной обычно приблизительно 10-300 п. о., которые воздействуют на промотор для усиления транскрипции. Энхансеры являются относительно независимыми от ориентации и положения, они были обнаружены в положениях как 5', так и 3' относительно транскрипционной единицы. Известно несколько энхансерных последовательностей, доступных из генов млекопитающих (например, генов глобина, эластазы, альбумина, альфа-фетопротеина и инсулина). Как правило, обычно применяют энхансер из вируса. Известные из уровня техники энхансер SV40, энхансер промотора ранних генов цитомегаловируса, энхансер вируса полиомы и энхансеры аденовируса представляют собой иллюстративные энхансерные элементы для активации эукариотических промоторов. Хотя энхансер может находиться в векторе как с 5'-, так и с 3'-конца относительно кодирующей последовательности, как правило, он расположен в 5'-сайте относительно промотора. Последовательность, кодирующая соответствующую нативную или гетерологичную сигнальную последовательность (лидерную последовательность или сигнальный пептид), может быть встроена в вектор экспрессии для стимуляции внеклеточной секреции антитела или антигенсвязывающего фрагмента, как описано выше. Выбор сигнального пептида или лидерной последовательности зависит от типа клеток-хозяев, в которых должно продуцироваться антитело или антигенсвязывающий фрагмент, и гетерологичная сигнальная последовательность может заменять нативную сигнальную последовательность. Примеры сигнальных пептидов описаны выше. Другие сигнальные пептиды, которые являются функциональными в клетках-хозяевах млекопитающих, включают сигнальную последовательность интерлейкина-7 (IL-7), описанную в патенте США № 4965195; сигнальную последовательность рецептора интерлейкина-2, описанную в Cosman et al.,1984, Nature 312:768; сигнальный пептид рецептора интерлейкина-4, описанный в европейском патенте № 0367566; сигнальный пептид рецептора интерлейкина-1 I типа, описанный в патенте США № 4968607; и сигнальный пептид рецептора интерлейкина-1 II типа, описанный в европейском патенте № 0460846.

Предусмотренные векторы экспрессии могут быть сконструированы на основе начального вектора, такого как коммерчески доступный вектор. Такие векторы могут содержать все необходимые фланкирующие последовательности или не содержать их. Если одна или несколько из описанных в данном документе фланкирующих последовательностей еще не присутствуют в векторе, то их можно получить отдельно и лигировать с вектором. Способы, применяемые для получения каждой из фланкирующих последовательностей, хорошо известны специалисту в данной области техники. Векторы экспрессии могут быть введены в клетки-хозяева для получения таким образом белков, включая антитела и антигенсвязывающие фрагменты, кодируемые нуклеиновыми кислотами, описанными в данном документе.

В определенных вариантах осуществления нуклеиновые кислоты, кодирующие различные компоненты антител к PAC1 или антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению, могут быть вставлены в один и тот же вектор экспрессии. Например, нуклеиновая кислота, кодирующая легкую цепь или вариабельную область антитела к PAC1, может быть клонирована в том же векторе, что и нуклеиновая кислота, кодирующая тяжелую цепь или вариабельную область антитела к PAC1. В таких вариантах осуществления две нуклеиновые кислоты могут быть разделены внутренним сайтом посадки рибосомы (IRES) и находиться под контролем одного промотора таким образом, что легкая цепь и тяжелая цепь экспрессируются с одного и того же mRNA-транскрипта. В качестве альтернативы, две нуклеиновые кислоты могут находиться под контролем двух отдельных промоторов таким образом, что легкая цепь и тяжелая цепь экспрессируются с двух отдельных mRNA-транскриптов. В некоторых вариантах осуществления нуклеиновую кислоту, кодирующую легкую цепь или вариабельную область антитела к PAC1, клонируют в одном векторе экспрессии, а нуклеиновую кислоту, кодирующую тяжелую цепь или вариабельную область антитела к PAC1, клонируют во втором векторе экспрессии. В таких вариантах осуществления клетка-хозяин может быть котрансфицирована двумя векторами экспрессии для получения полных антител или антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению.

После того как вектор был сконструирован, и одна или несколько молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих компоненты антител и антигенсвязывающих фрагментов, описанных в данном документе, были вставлены в соответствующий(соответствующие) сайт(сайты) вектора или векторов, готовый(готовые) вектор(векторы) может(могут) быть вставлен(вставлены) в подходящую клетку-хозяина для амплификации и/или экспрессии полипептида. Таким образом, настоящее изобретение охватывает выделенную клетку-хозяина или линию клеток, содержащую один или несколько векторов экспрессии, кодирующих компоненты антител к PAC1 или антигенсвязывающих фрагментов, описанных в данном документе. Применяемый в данном документе термин "клетка-хозяин" относится к клетке, которая была трансформирована или способна трансформироваться нуклеиновой кислотой и вследствие этого экспрессирует представляющий интерес ген. Данный термин включает потомство родительской клетки вне зависимости от того, идентично или нет это потомство по морфологии или по генетической структуре исходной родительской клетке, до тех пор, пока присутствует представляющий интерес ген. Клетка-хозяин, которая содержит выделенную нуклеиновую кислоту по настоящему изобретению, предпочтительно функционально связанную с по меньшей мере одной последовательностью для регуляции экспрессии (например, промотором или энхансером), представляет собой "рекомбинантную клетку-хозяина".

Трансформацию вектором экспрессии для антитела к PAC1 или антигенсвязывающего фрагмента выбранной клетки-хозяина можно осуществлять с помощью хорошо известных способов, включая трансфекцию, инфекцию, совместное осаждение с фосфатом кальция, электропорацию, микроинъекцию, липофекцию, трансфекцию, опосредованную DEAE-декстраном, или другие известные методики. Выбранный способ частично будет зависеть от типа применяемой клетки-хозяина. Эти способы и другие подходящие способы хорошо известны специалисту в данной области техники и приведены, например, в Sambrook et al., 2001.

При культивировании в соответствующих условиях клетка-хозяин синтезирует антитело или антигенсвязывающий фрагмент, который впоследствии может быть собран из культуральной среды (если клетка-хозяин секретирует его в среду) или непосредственно из клетки-хозяина, продуцирующей его (если он не секретируется). Выбор подходящей клетки-хозяина будет зависеть от различных факторов, таких как требуемые уровни экспрессии, модификации полипептидов, которые требуются или необходимы для активности (такие как гликозилирование или фосфорилирование), и легкость фолдинга в биологически активную молекулу.

Иллюстративные клетки-хозяева включают прокариотические, дрожжевые клетки или клетки высших эукариот. Прокариотические клетки-хозяева включают эубактерии, такие как грамотрицательные или грамположительные организмы, например, Enterobacteriaceae, такие как Escherichia, например, E. coli, Enterobacter, Erwinia, Klebsiella, Proteus, Salmonella, например, Salmonella typhimurium, Serratia, например, Serratia marcescans и Shigella, а также Bacillus, например, B. subtilis и B. licheniformis, Pseudomonas и Streptomyces. Эукариотические микроорганизмы, такие как мицелиальные грибы или дрожжи, являются подходящими хозяевами для клонирования или экспрессии рекомбинантных полипептидов. Saccharomyces cerevisiae или обыкновенные пекарские дрожжи наиболее часто применяются среди низших эукариотических микроорганизмов-хозяев. Однако ряд других родов, видов и штаммов являются общедоступными и применимыми в данном документе, такие как Pichia, например, P. pastoris, Schizosaccharomyces pombe; Kluyveromyces, Yarrowia; Candida; Trichoderma reesia; Neurospora crassa; Schwanniomyces, например, Schwanniomyces occidentalis; и мицелиальные грибы, такие как, например, Neurospora, Penicillium, Tolypocladium и хозяева Aspergillus, такие как A. nidulans и A. niger.

Клетки-хозяева для экспрессии гликозилированных антител и антигенсвязывающих фрагментов могут быть получены из многоклеточных организмов. Примеры клеток беспозвоночных включают клетки растений и насекомых. Были идентифицированы многочисленные бакуловирусные штаммы и варианты и соответствующие пермиссивные клетки-хозяева насекомых из таких хозяев, как Spodoptera frugiperda (гусеница), Aedes aegypti (комар), Aedes albopictus (комар), Drosophila melanogaster (плодовая мушка) и Bombyx mori. Общедоступно множество вирусных штаммов для трансфекции таких клеток, например, вариант L-1 Autographa californica NPV и штамм Bm-5 Bombyx mori NPV.

Клетки-хозяева позвоночных также являются подходящими хозяевами, и рекомбинантное получение антител и антигенсвязывающих фрагментов из таких клеток стало рутинной процедурой. Линии клеток млекопитающих, доступные в качестве хозяев для экспрессии, хорошо известны из уровня техники и включают без ограничения иммортализованные линии клеток, доступные из Американской коллекции типовых культур (АТСС), включая без ограничения клетки яичника китайского хомяка (СНО), включая клетки линии CHOK1 (ATCC CCL61), DXB-11, DG-44 и клетки яичника китайского хомяка/-DHFR (CHO, Urlaub et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 4216, 1980); линию клеток CV1 почки обезьяны, трансформированную с помощью SV40 (COS-7, ATCC CRL 1651); эмбриональную линию клеток почки человека (клетки линии 293 или 293, субклонированные для роста в суспензионной культуре (Graham et al, J. Gen Virol. 36: 59, 1977); клетки почки детеныша хомяка (BHK, ATCC CCL 10); клетки Сертоли мыши (TM4, Mather, Biol. Reprod. 23: 243-251, 1980); клетки почки обезьяны (CV1 ATCC CCL 70); клетки почки африканской зеленой мартышки (VERO-76, ATCC CRL-1587); клетки карциномы шейки матки человека (HELA, ATCC CCL 2); клетки почки собаки (MDCK, ATCC CCL 34); клетки печени крысы линии buffalo (BRL 3A, ATCC CRL 1442); клетки легких человека (W138, ATCC CCL 75); клетки гепатомы человека (Hep G2, HB 8065); опухоль молочной железы мыши (MMT 060562, ATCC CCL51); клетки линии TRI (Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383: 44-68, 1982); клетки линии MRC 5 или клетки линии FS4; клетки миеломы млекопитающих и ряд других линий клеток. В определенных вариантах осуществления линии клеток могут быть выбраны посредством определения того, какие линии клеток обладают высокими уровнями экспрессии и конститутивно продуцируют антитела и антигенсвязывающие фрагменты со свойствами, заключающимися в связывании PAC1. В другом варианте осуществления может быть выбрана линия клеток из линии дифференцировки B-клеток, которая не продуцирует свое собственное антитело, но обладает способностью продуцировать и секретировать гетерологичное антитело. Клетки линии СНО являются предпочтительными клетками-хозяевами в некоторых вариантах осуществления для экспрессии антител к PAC1 и антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению.

Клетки-хозяева трансформируют или трансфицируют с помощью описанных выше нуклеиновых кислот или векторов для получения антител к PAC1 или антигенсвязывающих фрагментов и культивируют в общепринятых питательных средах, модифицированных в соответствии с необходимостью индукции промоторов, отбора трансформантов или амплификации генов, кодирующих требуемые последовательности. Кроме того, новые векторы и трансфицированные линии клеток с несколькими копиями транскрипционных единиц, разделенных селективным маркером, особенно применимы для экспрессии антител и антигенсвязывающих фрагментов. Таким образом, в настоящем изобретении также предусмотрен способ получения антитела к PAC1 или его антигенсвязывающего фрагмента, описанного в данном документе, включающий культивирование клетки-хозяина, содержащей один или несколько векторов экспрессии, описанных в данном документе, в культуральной среде в условиях, обеспечивающих экспрессию антитела или антигенсвязывающего фрагмента, кодируемого одним или несколькими векторами экспрессии; и выделение антитела или антигенсвязывающего фрагмента из культуральной среды или клетки-хозяина.

Клетки-хозяева, применяемые для получения антител или антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению, можно культивировать в различных средах. Коммерчески доступные среды, такие как Ham's F10 (Sigma), минимальная питательная среда (MEM, Sigma), RPMI-1640 (Sigma) и модифицированная по Дульбекко среда Игла (DMEM, Sigma), подходят для культивирования клеток-хозяев. Кроме того, любую из сред, описанных в Ham et al., Meth. Enz. 58: 44, 1979; Barnes et al., Anal. Biochem. 102: 255, 1980; патентах США №№ 4767704; 4657866; 4927762; 4560655; или 5122469; WO90103430; WO 87/00195; или патенте США № 30985 можно применять в качестве культуральной среды для клеток-хозяев. Любую из этих сред можно, при необходимости, дополнить гормонами и/или другими факторами роста (такими как инсулин, трансферрин или эпидермальный фактор роста), солями (такими как хлорид натрия, кальций, магний и фосфат), буферами (такими как HEPES), нуклеотидами (такими как аденозин и тимидин), антибиотиками (такими как лекарственное средство Gentamycin™), микроэлементами (определяемыми как неорганические соединения, обычно присутствующие в конечных концентрациях в микромолярном диапазоне) и глюкозой или эквивалентным источником энергии. Любые другие необходимые добавки также могут быть включены в соответствующих концентрациях, которые должны быть известны специалистам в данной области техники. Условия культивирования, такие как температура, рН и т. п. являются такими, которые ранее применялись для клетки-хозяина, выбранной для экспрессии, и будут очевидны специалисту в данной области техники.

В ходе культивирования клеток-хозяев антитело или антигенсвязывающий фрагмент можно получать внутриклеточно, в периплазматическом пространстве, или он может секретироваться непосредственно в среду. Если антитело или антигенсвязывающий фрагмент получают внутриклеточно, то на первой стадии дебрис в форме частиц либо клетки-хозяева или лизированные фрагменты удаляют, например, посредством центрифугирования или ультрафильтрации. Антитело или антигенсвязывающий белок можно очищать с применением, например, гидроксиапатитной хроматографии, катионо- или анионообменной хроматографии или предпочтительно аффинной хроматографии с применением представляющего(представляющих) интерес антигена(антигенов) или белка А или белка G в качестве аффинного лиганда. Белок A можно применять для очистки белков, которые содержат полипептиды на основе тяжелых цепей γ1, γ2 или γ4 человека (Lindmark et al., J. Immunol. Meth. 62: 1-13, 1983). Белок G рекомендуется для всех изотипов мыши и для γ3 человека (Guss et al., EMBO J. 5: 1567-1575, 1986). Матрица, к которой присоединяется аффинный лиганд, наиболее часто является агарозой, но также доступны другие матрицы. Механически стабильные матрицы, такие как стекло с контролируемым размером пор или поли(стиролдивинил)бензол, обеспечивают более высокие скорости потока и меньшее время обработки, чем те, которые можно достигнуть с применением агарозы. Если белок содержит домен CH3, для очистки можно применять смолу Bakerbond ABXTM (J. T. Baker, Phillipsburg, N.J.). Другие методики очистки белков, такие как осаждение этанолом, обращенно-фазовая HPLC, хроматофокусирование, SDS-PAGE и осаждение сульфатом аммония также возможны в зависимости от конкретного антитела или антигенсвязывающего фрагмента, который необходимо выделить.

В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрена композиция (например, фармацевтическая композиция), содержащая одно или множество антител к PAC1 или антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению (например, моноклональных антител к PAC1 или их связывающих фрагментов) вместе с фармацевтически приемлемыми разбавителями, носителями, вспомогательными веществами, солюбилизаторами, эмульгаторами, консервантами и/или адъювантами. Фармацевтические композиции можно применять в любом из способов, описанных в данном документе. Фармацевтические композиции по настоящему изобретению включают без ограничения жидкие, замороженные и лиофилизированные композиции. "Фармацевтически приемлемый" относится к молекулам, соединениям и композициям, которые нетоксичны для людей-реципиентов в используемых дозах и концентрациях и/или не вызывают аллергических или нежелательных реакций при введении людям. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция может содержать материалы для составления, предназначенные для модификации, поддержания или сохранения, например, рН, осмолярности, вязкости, прозрачности, цвета, изотоничности, запаха, стерильности, стабильности, скорости растворения или высвобождения, адсорбции или проникающей способности композиции. В таких вариантах осуществления подходящие материалы для составления включают без ограничения аминокислоты (такие как глицин, глутамин, аспарагин, аргинин или лизин); противомикробные вещества; антиоксиданты (такие как аскорбиновая кислота, сульфит натрия или гидросульфит натрия); буферы (такие как боратный, бикарбонатный, Tris-HCl, цитратные, фосфатные буферы или буферы на основе других органических кислот); объемообразующие средства (такие как маннит или глицин); хелатирующие средства (такие как этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA)); комплексообразующие средства (такие как кофеин, поливинилпирролидон, бета-циклодекстрин или гидроксипропил-бета-циклодекстрин); наполнители; моносахариды; дисахариды и другие углеводы (такие как глюкоза, манноза или декстрины); белки (такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины); средства для окрашивания и разбавления, эмульгирующие средства, гидрофильные полимеры (такие как поливинилпирролидон); низкомолекулярные полипептиды; солеобразующие противоионы (такие как ион натрия); консерванты (такие как хлорид бензалкония, бензойная кислота, салициловая кислота, тимеросал, фенетиловый спирт, метилпарабен, пропилпарабен, хлоргексидин, сорбиновая кислота или пероксид водорода); растворители (такие как глицерин, пропиленгликоль или полиэтиленгликоль); сахарные спирты (такие как маннит или сорбит); суспендирующие средства; поверхностно-активные вещества или смачивающие средства (такие как плюроники, PEG, сорбитановые сложные эфиры, полисорбаты, такие как полисорбат 20, полисорбат 80, тритон, трометамин, лецитин, холестерин, тилоксапал); средства, повышающие стабильность (такие как сахароза или сорбит); средства, повышающие тоничность (такие как галогениды щелочных металлов, предпочтительно хлорид натрия или калия, маннит, сорбит); среды-носители для доставки; разбавители; вспомогательные вещества и/или фармацевтические адъюванты. Способы и подходящие материалы для составления молекул для терапевтического применения известны в фармацевтических дисциплинах и описаны, например, в REMINGTON's PHARMACEUTICAL SCIENCES, 18th Edition, (A.R. Genrmo, ed.), 1990, Mack Publishing Company.

В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция по настоящему изобретению содержит стандартный фармацевтический носитель, такой как стерильный забуференный фосфатом физиологический раствор, бактериостатическая вода и т. п. Можно применять различные водные носители, например, воду, забуференную воду, 0,4% физиологический раствор, 0,3% глицин и т. п., и они могут включать другие белки для повышения стабильности, такие как альбумин, липопротеин, глобулин и т. д., подвергнутые небольшим химическим модификациям или т. п.

Иллюстративные концентрации антител или антигенсвязывающих фрагментов в составе могут находиться в диапазоне от приблизительно 0,1 мг/мл до приблизительно 200 мг/мл или от приблизительно 0,1 мг/мл до приблизительно 50 мг/мл, или от приблизительно 0,5 мг/мл до приблизительно 25 мг/мл или, в качестве альтернативы, от приблизительно 2 мг/мл до приблизительно 10 мг/мл. Водный состав антитела или антигенсвязывающего фрагмента можно получать в буферном растворе с доведенным pH, например, при рН в диапазоне от приблизительно 4,5 до приблизительно 6,5 или от приблизительно 4,8 до приблизительно 5,5 или, в качестве альтернативы, приблизительно 5,0. Примеры буферов, подходящих для рН в этом диапазоне, включают ацетатные (например, ацетат натрия), сукцинатные (такие как сукцинат натрия), глюконатные, гистидиновые, цитратные и буферы на основе других органических кислот. Концентрация буфера может составлять от приблизительно 1 мМ до приблизительно 200 мМ или от приблизительно 10 мМ до приблизительно 60 мМ, в зависимости, например, от буфера и требуемой изотоничности состава.

В состав может быть включено средство для регуляции тоничности, которое также способно стабилизировать антитело или антигенсвязывающий фрагмент. Иллюстративные средства для регуляции тоничности включают полиолы, такие как маннит, сахароза или трегалоза. Предпочтительно, водная композиция является изотонической, хотя подходящими могут быть гипертонические или гипотонические растворы. Иллюстративные концентрации полиола в составе могут находиться в диапазоне от приблизительно 1% до приблизительно 15% вес/объем.

Поверхностно-активное вещество также можно добавлять к составу для снижения агрегации антитела или антигенсвязывающего фрагмента в составе и/или минимизации образования частиц в составе, и/или снижения адсорбции. Иллюстративные поверхностно-активные вещества включают неионные поверхностно-активные вещества, такие как полисорбаты (например, полисорбат 20 или полисорбат 80) или полоксамеры (например, полоксамер 188). Иллюстративные концентрации поверхностно-активного вещества могут находиться в диапазоне от приблизительно 0,001% до приблизительно 0,5% или от приблизительно 0,005% до приблизительно 0,2% или, в качестве альтернативы, от приблизительно 0,004% до приблизительно 0,01% вес/объем.

В одном варианте осуществления состав содержит идентифицированные выше средства (т. е. антитело или антигенсвязывающий фрагмент, буфер, полиол и поверхностно-активное вещество) и фактически не содержит одного или нескольких консервантов, таких как бензиловый спирт, фенол, м-крезол, хлорбутанол и хлорид бензетония. В другом варианте осуществления в состав может быть включен консервант, например, в концентрациях, находящихся в диапазоне от приблизительно 0,1% до приблизительно 2% или, в качестве альтернативы, от приблизительно 0,5% до приблизительно 1%. Один или несколько других фармацевтически приемлемых носителей, вспомогательных веществ или стабилизаторов, таких как те, которые описаны в REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 18th Edition, (AR Genrmo, ed.), 1990, Mack Publishing Company, могут быть включены в состав при условии, что они не оказывают неблагоприятного воздействия на требуемые характеристики состава.

Терапевтические составы антитела или антигенсвязывающего фрагмента получают для хранения посредством смешивания антитела или антигенсвязывающего фрагмента, характеризующегося требуемой степенью чистоты, с необязательными физиологически приемлемыми носителями, вспомогательными веществами или стабилизаторами (REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 18th Edition, (A.R. Genrmo, ed.), 1990, Mack Publishing Company) в виде лиофилизированных составов или водных растворов. Приемлемые носители, вспомогательные вещества или стабилизаторы являются нетоксичными для реципиентов в используемых дозах и концентрациях и включают описанные выше приемлемые носители, вспомогательные вещества или стабилизаторы, такие как буферы (например, фосфатный, цитратный и буферы на основе других органических кислот); антиоксиданты (например, аскорбиновая кислота и метионин); консерванты (такие как хлорид октадецилдиметилбензиламмония; хлорид гексаметония; хлорид бензалкония, хлорид бензетония; фенол, бутиловый или бензиловый спирт, алкилпарабены, такие как метил- или пропилпарабен; катехин; резорцин; циклогексанол; 3-пентанол и м-крезол); низкомолекулярные (например, с меньше чем приблизительно 10 остатками) полипептиды; белки (такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины); гидрофильные полимеры (например, поливинилпирролидон); аминокислоты (например, глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин); моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу, мальтозу или декстрины; хелатирующие средства, такие как EDTA; сахара, такие как сахароза, маннит, трегалоза или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как ионы натрия; комплексы с металлами (например, комплексы Zn-белок); и/или неионные поверхностно-активные вещества, такие как полисорбаты (например, полисорбат 20 или полисорбат 80) или полоксамеры (например, полоксамер 188), или полиэтиленгликоль (PEG).

В одном варианте осуществления подходящий состав по настоящему изобретению содержит изотонический буфер, такой как фосфатный, ацетатный или Трис-буфер, в комбинации со средством для регуляции тоничности, таким как полиол, сорбит, сахароза или хлорид натрия, который регулирует тоничность и стабилизирует. Одним примером такого средства для регуляции тоничности является 5% сорбит или сахароза. Кроме того, состав может необязательно включать поверхностно-активное вещество в количестве от 0,01% до 0,02% вес/объем, например, для предотвращения агрегации или улучшения стабильности. Значение pH состава может находиться в диапазоне 4,5-6,5 или 4,5-5,5. Другие иллюстративные описания фармацевтических составов для антител и антигенсвязывающих фрагментов можно найти в публикации патента США № 2003/0113316 и патенте США № 6171586, каждый из которых настоящим включен посредством ссылки во всей своей полноте.

Составы, применяемые для введения in vivo, должны быть стерильными. Композиции по настоящему изобретению можно стерилизовать с помощью общепринятых, хорошо известных методик стерилизации. Например, стерилизация легко осуществляется посредством фильтрации через стерильные фильтрующие мембраны. Полученные растворы могут быть упакованы для применения или отфильтрованы в асептических условиях и лиофилизированы, причем лиофилизированный препарат объединяют со стерильным раствором перед введением.

Способ сублимационного высушивания часто используется для стабилизации полипептидов для длительного хранения, особенно если полипептид относительно нестабилен в жидких композициях. Цикл лиофилизации обычно состоит из трех стадий: замораживание, первичное высушивание и вторичное высушивание (см. Williams and Polli, Journal of Parenteral Science and Technology, Volume 38, Number 2, pages 48-59, 1984). На стадии замораживания раствор охлаждают до тех пор, пока он не будет надлежащим образом заморожен. Основная часть воды в растворе на этой стадии образует лед. Лед сублимирует на стадии первичного высушивания, которую осуществляют посредством снижения давления в камере до значения ниже давления пара льда с применением вакуума. Наконец, сорбированную или связанную воду удаляют на стадии вторичного высушивания при пониженном давлении в камере и повышенной температуре хранения. С помощью данного способа получают материал, известный как лиофилизированная масса. После этого масса может быть восстановлена перед применением. Стандартная практика восстановления лиофилизированного материала заключается в добавлении объема чистой воды (обычно эквивалентного объему, удаленному во время лиофилизации), хотя для получения фармацевтических препаратов для парентерального введения иногда применяют разбавленные растворы антибактериальных средств (см. Chen, Drug Development and Industrial Pharmacy, Volume 18: 1311-1354, 1992).

Было отмечено, что в некоторых случаях вспомогательные вещества действуют как стабилизаторы для продуктов, подвергнутых сублимационному высушиванию (см. Carpenter et al., Volume 74: 225-239, 1991). Например, известные вспомогательные вещества включают полиолы (включая маннит, сорбит и глицерин); сахара (включая глюкозу и сахарозу) и аминокислоты (включая аланин, глицин и глутаминовую кислоту). Кроме того, полиолы и сахара также часто применяют для защиты полипептидов от замораживания и повреждения, вызванного высушиванием, и для повышения стабильности при хранении в высушенном состоянии. В целом, сахара, в частности дисахариды, эффективны как в способе сублимационного высушивания, так и при хранении. Другие классы молекул, включая моно- и дисахариды и полимеры, такие как PVP, также были описаны как стабилизаторы лиофилизированных продуктов.

Для инъекции фармацевтический состав и/или лекарственный препарат могут быть представлены в виде порошка, подходящего для восстановления соответствующим раствором, как описано выше. Их примеры включают без ограничения высушенные посредством сублимационного высушивания, высушенные посредством ротационного высушивания или высушенные посредством высушивания распылением порошки, аморфные порошки, гранулы, осадки или частицы. Для инъекции составы могут необязательно содержать стабилизаторы, модификаторы рН, поверхностно-активные вещества, модификаторы биодоступности и их комбинации.

Можно получать препараты с замедленным высвобождением. Подходящие примеры препаратов с замедленным высвобождением включают полупроницаемые матрицы из твердых гидрофобных полимеров, содержащие антитело или антигенсвязывающий фрагмент, причем эти матрицы имеют форму формованных изделий, например, пленок или микрокапсулы. Примеры матриц с замедленным высвобождением включают сложные полиэфиры, гидрогели (например, поли(2-гидроксиэтилметакрилат) или поли(виниловый спирт)), полилактиды (патент США № 3773919), сополимеры L-глутаминовой кислоты и этил-L-глутамата, неразлагаемый этиленвинилацетат, разлагаемые сополимеры молочной кислоты и гликолевой кислоты, такие как Lupron Depot™ (инъецируемые микросферы, состоящие из сополимера молочной кислоты и гликолевой кислоты и ацетата лейпролида) и поли-D-(-)-3-гидроксимасляную кислоту. Хотя полимеры, такие как этиленвинилацетат и сополимер молочной кислоты и гликолевой кислоты обеспечивают возможность высвобождения молекул в течение более 100 дней, определенные гидрогели высвобождают белки в течение более коротких периодов времени. Если инкапсулированные полипептиды остаются в организме в течение длительного времени, они могут денатурировать или агрегировать в результате воздействия влаги при 37°C, что приводит к потере биологической активности и возможным изменениям в иммуногенности. Для стабилизации могут быть разработаны рациональные стратегии в зависимости от используемого механизма. Например, если обнаружено, что механизм агрегации заключается в образовании межмолекулярных S-S-связей посредством тиодисульфидного обмена, то стабилизация может быть достигнута посредством модификации сульфгидрильных остатков, лиофилизации из кислых растворов, контроля содержания влаги, применения соответствующих добавок и разработки специфических полимерных матричных композиций.

Составы по настоящему изобретению могут быть разработаны для кратковременного, быстрого высвобождения, длительного действия или замедленного высвобождения, как описано в данном документе. Таким образом, фармацевтические составы также могут быть составлены для контролируемого высвобождения или для медленного высвобождения.

Конкретные дозы могут быть скорректированы в зависимости от заболевания, нарушения или состояния, подлежащего лечению (например, эпизодическая мигрень, хроническая мигрень или кластерная головная боль), возраста, веса тела, общего состояния здоровья, пола и рациона питания субъекта, интервалов между введением доз, путей введения, скорости выведения и комбинаций лекарственных средств.

Антитела к PAC1 или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению можно вводить любыми подходящими способами, включая парентеральное, подкожное, внутривенное, интраперитонеальное, внутрилегочное и интраназальное и, если требуется для местного лечения, внутриочаговое введение. Парентеральное введение включает внутривенное, внутриартериальное, интраперитонеальное, внутримышечное, внутрикожное или подкожное введение. Кроме того, антитело или антигенсвязывающий фрагмент подходящим образом вводят путем импульсной инфузии, в частности при снижающихся дозах антитела или антигенсвязывающего фрагмента. Предпочтительно, дозу вводят путем инъекций, наиболее предпочтительно внутривенных или подкожных инъекций, частично в зависимости от того, является ли введение краткосрочным или хроническим. Предусматриваются другие способы введения, включая местное, в частности трансдермальное, трансмукозальное, ректальное, пероральное или местное введение, например, через катетер, расположенный рядом с нужным участком. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению можно вводить в физиологическом растворе в дозе, находящейся в диапазоне 0,01-100 мг/кг с частотой от ежедневной до еженедельной или ежемесячной.

Антитела к PAC1 и антигенсвязывающие фрагменты, описанные в данном документе, применимы для лечения или снижения выраженности состояния, связанного с биологической активностью рецептора PAC1 у пациента, нуждающегося в этом. Таким образом, в данном документе раскрыты антитела к PAC1 и антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению для применения в способах лечения. Термин "пациент" включает пациентов-людей и применяется взаимозаменяемо с термином "субъект". Применяемый в данном документе термин "осуществление лечения" или "лечение" представляет собой вмешательство, выполненное с целью предупреждения развития или изменения патологии нарушения. Соответственно "лечение" относится как к терапевтическому лечению, так и к профилактическим или превентивным мерам. К нуждающимся в лечении относятся те, у кого уже диагностировано нарушение или те, кто страдает нарушением или состоянием, а также те, у которых необходимо предупредить нарушение или состояние. Термин "лечение" включает любой признак успеха в снижении выраженности повреждения, патологии или состояния, включая любой объективный или субъективный параметр, такой как смягчение боли, ремиссия, ослабление симптомов или способствование лучшей переносимости повреждения, патологии или состояния пациента, замедление темпа дегенерации или ухудшения, способствование менее изнурительному протеканию конечной стадии дегенерации или улучшение физического или психического здоровья пациента. Лечение или снижение выраженности симптомов может быть основано на объективных или субъективных параметрах, включая результаты физического осмотра, самостоятельного предоставления сведений пациентом, психоневрологических обследований и/или психиатрической оценки.

Соответственно, в некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении предусматривается способ лечения или предупреждения состояния, связанного с биологической активностью рецептора PAC1 (например, состояния, связанного с индуцированной PACAP активацией рецептора PAC1) у пациента, нуждающегося в этом, включающий введение пациенту эффективного количества антитела к PAC1 или его антигенсвязывающего фрагмента, описанного в данном документе. Сигнальный путь PACAP/PAC1 задействован в различных физиологических процессах, включая сердечно-сосудистую функцию, метаболическую и эндокринную функцию, воспаление, реакцию на стресс, регуляцию сосудистого тонуса и регуляцию автономной нервной системы, в частности баланса между симпатической и парасимпатической системами. См, например, Tanida et al., Regulatory Peptides, Vol. 161: 73-80, 2010; Moody et al., Curr. Opin. Endocrinol. Diabetes Obes., Vol. 18: 61-67, 2011; и Hashimoto et al., Current Pharmaceutical Design, Vol. 17: 985-989, 2011. Состояния, связанные с аберрантной или чрезмерной активацией сигнального пути PACAP/PAC1, включают без ограничения состояния, связанные с головной болью, такие как мигрень, кластерная головная боль, головная боль напряженного типа, гемиплегическая мигрень и ретинальная мигрень; состояния воспаления кожи; хроническую боль, такую как невропатическая боль; тревожные расстройства; синдром раздраженного кишечника; и вазомоторные симптомы, такие как приливы, покраснение лица, потливость и ночные потливости. Таким образом, антитела к PAC1 и их антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению можно вводить пациентам для предупреждения , снижения выраженности или лечения любого из этих состояний или нарушений или других состояний, связанных с аберрантной или избыточной биологической активностью рецептора PAC1. В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрены способы лечения или предупреждения состояния, связанного с головной болью (например, эпизодической мигрени, хронической мигрени, кластерной головной боли, головной боли напряженного типа, гемиплегической мигрени и ретинальной мигрени), у пациента, нуждающегося в этом, включающие введение пациенту эффективного количества антитела к PAC1 или его антигенсвязывающего фрагмента, как описано в данном документе. В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрен способ ингибирования активации рецептора PAC1 человека у пациента, характеризующегося состоянием, связанным с головной болью, включающий введение пациенту эффективного количества антитела к PAC1 или его антигенсвязывающего фрагмента, описанного в данном документе. В одном варианте осуществления пациент характеризуется состоянием мигренозной головной боли, таким как эпизодическая мигрень или хроническая мигрень. В другом варианте осуществления пациент характеризуется состоянием кластерной головной боли.

Как правило, "эффективное количество" представляет собой количество, достаточное для уменьшения тяжести и/или частоты симптомов, устранения симптомов и/или основной причины, предупреждения возникновения симптомов и/или их основной причины и/или улучшения или устранения повреждения, которое является результатом конкретного состояния или связано с ним. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество представляет собой терапевтически эффективное количество или профилактически эффективное количество. "Терапевтически эффективное количество" представляет собой количество, достаточное для лечения болезненного состояния или симптома(симптомов), в частности состояния или симптома(симптомов), связанного с болезненным состоянием, или иного предупреждения, препятствования, замедления или обращения прогрессирования болезненного состояния или любого другого нежелательного симптома, связанного с заболеванием в какой бы то ни было форме (т. е. которое обеспечивает "терапевтическую эффективность"). "Профилактически эффективное количество" представляет собой количество антитела или антигенсвязывающего фрагмента, которое при введении субъекту будет оказывать желаемый профилактический эффект, например, предупреждение или задержку возникновения (или повторного появления) состояния или снижение вероятности возникновения (или повторного появления) состояния. Полный терапевтический или профилактический эффект не обязательно возникает в результате введения одной дозы и может возникнуть только после введения серии доз. Таким образом, терапевтически или профилактически эффективное количество может быть введено за одно или несколько введений.

В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении предусматриваются способы подавления вазодилатации у пациента, нуждающегося в этом, включающие введение пациенту эффективного количества антитела к PAC1 или его антигенсвязывающего фрагмента, описанного в данном документе. Лиганды рецептора PAC1, такие как PACAP38 и VIP, являются сильными вазодилататорами, и блокирование связывания этих лигандов с рецептором PAC1 может подавлять вазодилатацию и снижать выраженность состояний, связанных с аберрантной или избыточной вазодилатацией, таких как состояния, связанные с головной болью, приливы и покраснение. В одном варианте осуществления пациент характеризуется состоянием, связанным с головной болью, таким как мигрень или кластерная головная боль. В другом варианте осуществления пациент характеризуется вазомоторными симптомами (например, приливами, покраснением лица, потливостью и ночными потливостями). В соответствующем варианте осуществления пациент характеризуется вазомоторными симптомами, связанными с менопаузой.

В некоторых вариантах осуществления способов по настоящему изобретению состояние, связанное с головной болью, подлежащее лечению, предупреждению или снижению выраженности представляет собой мигрень. Таким образом, настоящее изобретение включает способ лечения, предупреждения или снижения выраженности мигрени у пациента, нуждающегося в этом, включающий введение пациенту эффективного количества антитела к PAC1 или его антигенсвязывающего фрагмента, описанного в данном документе. Мигренозные головные боли представляют собой рецидивирующие головные боли продолжительностью от приблизительно 4 до приблизительно 72 часов, которые характеризуются односторонней пульсирующей болью, и/или болью со степенью выраженности от умеренной до тяжелой, и/или болью, которая усугубляется при физической активности. Мигренозные головные боли часто сопровождаются тошнотой, рвотой и/или чувствительностью к свету (фотофобией), звуку (фонофобией) или запаху. У некоторых пациентов началу мигренозной головной боли предшествует аура. Аура, как правило, является визуальным, сенсорным, языковым или моторным нарушением, которое сигнализирует о скором наступлении головной боли. Способы, описанные в данном документе, позволяют предупреждать, лечить или снижать выраженность одного или нескольких симптомов мигренозных головных болей с аурой либо без нее у пациентов-людей.

PACAP38 посредством активации своих рецепторов индуцирует вазодилатацию, в частности вазодилатацию сосудистой системы твердой мозговой оболочки (Schytz et al., Neurotherapeutics, Vol. 7(2):191-196, 2010). В частности, сигнальный каскад рецептора PACAP38/PAC1 задействован в патофизиологии мигрени (Amin et al., Brain, Vol. 137: 779-794, 2014). Инфузия PACAP38, который характеризуется более высокой аффинностью к рецептору PAC1, чем к рецепторам VPAC1 и VPAC2, вызывает мигренеподобную головную боль у пациентов с мигренью (Schytz et al., Brain 132:16-25, 2009; Amin et al., Brain, Vol. 137: 779-794, 2014; Guo et al., Cephalalgia, Vol. 37:125-135, 2017). Кроме того, уровни PACAP38 повышаются во внутричерепном кровообращении у пациентов, испытывающих приступ мигрени, и уровни PACAP38 снижаются после лечения симптомов мигрени с помощью триптанов (Tuka et al., Cephalalgia, Vol. 33, 1085-1095, 2013; Zagami et al., Ann. Clin. Transl. Neurol., Vol. 1: 1036-1040, 2014). Эти сообщения предполагают, что эндогенное высвобождение PACAP38 является важным триггером мигренозных головных болей, и его эффекты в основном опосредованы активацией рецептора PAC1.

В некоторых вариантах осуществления пациенты, подлежащие лечению в соответствии со способами по настоящему изобретению, характеризуются эпизодической мигренью, страдают от нее или имеют диагноз эпизодической мигрени. Диагноз "эпизодическая мигрень" ставится, когда пациенты с мигренью в анамнезе (например, по меньшей мере пять приступов мигрени в течение жизни) проводят 14 или меньше дней с наличием мигренозной головной боли в месяц. "День с мигренозной головной болью" включает любой календарный день, в течение которого пациент испытывает начало, продолжение или рецидив "мигренозной головной боли" с аурой продолжительностью более 30 минут или без нее. "Мигренозная головная боль" представляет собой головную боль, связанную с тошнотой или рвотой или чувствительностью к свету или звуку и/или головной болью, характеризующейся по меньшей мере двумя из следующих болевых признаков: односторонней болью, пульсирующей болью, интенсивностью боли от средней до сильной или болью, усугубляющейся при физической активности. В определенных вариантах осуществления пациенты, характеризующиеся эпизодической мигренью, страдающие от нее или имеющие диагноз эпизодической мигрени, проводят по меньшей мере четыре, но менее 15 дней с наличием мигренозной головной боли в месяц в среднем. В связанных вариантах осуществления пациенты, характеризующиеся эпизодической мигренью, страдающие от нее или имеющие диагноз эпизодической мигрени, проводят менее 15 дней с головной болью в месяц в среднем. Применяемый в данном документе термин "день с головной болью" представляет собой любой календарный день, когда пациент испытывает мигренозную головную боль, как определено в данном документе, или любую головную боль, которая длится более 30 минут или требует острого лечения головной боли.

В определенных вариантах осуществления пациенты, подлежащие лечению в соответствии со способами по настоящему изобретению, характеризуются хронической мигренью, страдают от нее или имеют диагноз хронической мигрени. Диагноз "хроническая мигрень" ставится, когда пациенты с мигренью (т. е. пациенты с по меньшей мере пятью приступами мигренозной головной боли в течение жизни) проводят 15 или больше дней с головной болью в месяц и по меньшей мере 8 дней с наличием головной боли, которые являются днями с мигренозной головной болью. В некоторых вариантах осуществления пациенты, характеризующиеся хронической мигренью, страдающие от нее или имеющие диагноз хронической мигрени, проводят 15 или больше дней с мигренозной головной болью в месяц в среднем. В определенных вариантах осуществления способов, описанных в данном документе, введение антитела к PAC1 или антигенсвязывающего фрагмента по настоящему изобретению предупреждает, снижает или задерживает прогрессирование мигрени от эпизодической мигрени до хронической мигрени у пациента.

В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении предусматривается способ лечения, предупреждения или снижения выраженности кластерной головной боли у пациента, нуждающегося в этом, включающий введение пациенту эффективного количества антитела к PAC1 или его антигенсвязывающего фрагмента, описанного в данном документе. Кластерная головная боль представляет собой состояние, которое включает, как наиболее характерную черту, повторяющиеся сильные головные боли на одной стороне головы, обычно вокруг глаза (см. Nesbitt et al., BMJ, Vol. 344:e2407, 2012). Кластерные головные боли часто возникают периодически: спонтанные ремиссии прерывают активные периоды боли. Кластерные головные боли часто сопровождаются черепными вегетативными симптомами, такими как слезотечение, заложенность носа, птоз, сужение зрачка, покраснение лица, потливость и припухлость вокруг глаза, часто ограниченные на стороне головы с болью. Средний возраст начала возникновения кластерной головной боли составляет ~ 30-50 лет. Она более распространена у мужчин при соотношении мужчин и женщин от 2,5:1 до 3,5:1. Для лечения кластерной головной боли использовали стимуляцию крылонебного ганглия (SPG). Система нейростимуляции, которая обеспечивает низкоуровневую (но с высокой частотой, с физиологической блокировкой) электростимуляцию SPG, продемонстрировала эффективность в ослабления острой изнурительной боли, относящейся к кластерной головной боли, в недавнем клиническом испытании (см. Schoenen J, et al., Cephalalgia, Vol. 33(10):816-30, 2013). С учетом этого наблюдения и поскольку PACAP является одним из основных нейротрансмиттеров в SPG, ожидается, что подавление передачи сигналов PACAP/PAC1 антителом к PAC1 или его антигенсвязывающим фрагментом, описанным в данном документе, должно иметь эффективность при лечении кластерной головной боли у людей.

Другие состояния, связанные с сигнальным путем PACAP/PAC1, которые можно лечить в соответствии со способами по настоящему изобретению, включают без ограничения воспалительные состояния кожи, как например розацеа (см. публикацию патента США № 20110229423), синдромы хронической боли, как например невропатическая боль (см. Jongsma et al., Neuroreport, Vol. 12: 2215-2219, 2001; Hashimoto et al., Annals of the New York Academy of Sciences, Vol. 1070: 75-89, 2006), головные боли напряженного типа, гемиплегическая мигрень, ретинальная мигрень, тревожные расстройства, как например посттравматическое стрессовое расстройство (см. Hammack and May, Biol. Psychiatry, Vol.78(3):167-177, 2015), синдром раздраженного кишечника и вазомоторные симптомы (например, приливы, покраснение лица, потливость и ночная потливость), как например симптомы, связанные с менопаузой. В одном варианте осуществления состояние, подлежащее лечению с помощью введения антитела к PAC1 или его антигенсвязывающего фрагмента по настоящему изобретению, представляет собой хроническую боль. В другом варианте осуществления состояние, подлежащее лечению с помощью введения антитела к PAC1 или его антигенсвязывающего фрагмента по настоящему изобретению, представляет собой невропатическую боль.

В любом из способов, описанных в данном документе, лечение может включать профилактическое лечение. Профилактическое лечение относится к лечению, разработанному для проведения до наступления состояния или приступа (например, до приступа мигрени или начала эпизода кластерной головной боли) для снижения частоты, тяжести и/или продолжительности симптомов (например, мигрени или кластерных головных болей) у больного.

В некоторых вариантах осуществления способы по настоящему изобретению для лечения или предупреждения состояния, связанного с головной болью, у пациента включают введение пациенту антитела к PAC1 или его антигенсвязывающего фрагмента, описанного в данном документе, в комбинации с одним или несколькими средствами, подходящими для острого или профилактического лечения мигренозной головной боли или другого расстройства с головной болью, описанного в данном документе. Применяемый в данном документе термин "комбинированная терапия" охватывает введение двух соединений (например, антитела к PAC1 и дополнительного средства) последовательным образом (т. е. каждое соединение вводится в разное время в любом порядке), а также введение двух соединений по сути одновременно. По сути одновременное введение включает параллельное введение и может выполняться путем введения одного состава, содержащего оба соединения (например, одного состава, содержащего фиксированное соотношение обоих соединений, или предварительно заполненного шприца с фиксированным соотношением каждого соединения), или параллельного введения отдельных составов, содержащих каждое из соединений. Таким образом, в определенных вариантах осуществления способы по настоящему изобретению включают введение антитела к PAC1 или его антигенсвязывающего фрагмента, описанного в данном документе, со вторым терапевтическим средством от головной боли.

В определенных вариантах осуществления второе терапевтическое средство от головной боли может представлять собой терапевтическое средство от острой головной боли, используемое для острого лечения головной боли или мигрени. В некоторых вариантах осуществления терапевтическое средство от острой головной боли представляет собой агонист рецептора (5-гидрокситриптамин; 5-HT) серотонина, например агонист рецептора 5HT1 серотонина. Терапевтическое средство от острой головной боли может представлять собой агонист рецепторов 5HT1B, 5HT1D и/или 5HT1F серотонина. Такие агонисты серотониновых рецепторов включают без ограничения триптаны (например, алмотриптан, фроватриптан, ризатриптан, суматриптан, наратриптан, элетриптан и золмитриптан), эрготамины (например, дигидроэрготамин и тартрат эрготамина) и агонисты 5HT1F-селективных рецепторов серотонина, например ласмидитан. Другие подходящие терапевтические средства от острой головной боли включают нестероидные противовоспалительные лекарственные средства (например, ацетилсалициловая кислота, ибупрофен, напроксен, индометацин и диклофенак) и опиоиды (например, кодеин, морфин, гидрокодон, фентанил, меперидин и оксикодон). В одном варианте осуществления терапевтическое средство от острой головной боли, которое вводят в комбинации с антителом к PAC1 или антигенсвязывающим фрагментом по настоящему изобретению, представляет собой триптан. В другом варианте осуществления терапевтическое средство от острой головной боли, которое вводят в комбинации с антителом к PAC1 или антигенсвязывающим фрагментом по настоящему изобретению, представляет собой эрготамин. В еще одном варианте осуществления терапевтическое средство от острой головной боли, которое вводят в комбинации с антителом к PAC1 или антигенсвязывающим фрагментом по настоящему изобретению, представляет собой нестероидное противовоспалительное лекарственное средство. В еще одном варианте осуществления терапевтическое средство от острой головной боли, которое вводят в комбинации с антителом к PAC1 или антигенсвязывающим фрагментом по настоящему изобретению, представляет собой опиоид.

В некоторых вариантах осуществления второе терапевтическое средство от головной боли представляет собой профилактическое терапевтическое средство от головной боли, используемое для профилактического лечения головных болей или мигрени. В одном варианте осуществления профилактическим терапевтическим средством от головной боли является противоэпилептическое средство, такое как дивальпроекс, вальпроат натрия, вальпроевая кислота, топирамат или габапентин. В другом варианте осуществления профилактическое терапевтическое средство от головной боли представляет собой бета-блокатор, такой как пропранолол, тимолол, атенолол, метопролол или надолол. В еще одном варианте осуществления профилактическое терапевтическое средство от головной боли представляет собой антидепрессант, такой как трициклический антидепрессант (например, амитриптилин, нортриптилин, доксепин и флуоксетин). В еще другом варианте осуществления профилактическое терапевтическое средство от головной боли представляет собой онаботулотоксин А.

В определенных вариантах осуществления способы настоящего изобретения включают введение антитела к PAC1 или его антигенсвязывающего фрагмента, описанного в данном документе, с антагонистом сигнального пути кальцитонин-ген-связанного пептида (CGRP) (т. е. подавляет активацию или передачу сигналов рецептора CGRP лигандом CGRP). Например, антитело к PAC1 или антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению можно вводить в комбинации с антагонистом пути CGRP для лечения или предупреждения состояния, связанного с головной болью (например, мигрени или кластерной головной боли), у пациента, нуждающегося в этом. В некоторых вариантах осуществления антагонист пути CGRP представляет собой антагонист рецептора CGRP человека. Антагонисты рецептора CGRP включают низкомолекулярные ингибиторы рецептора CGRP, такие как описанные в публикации патента США № 20060142273 и патентах США №№ 7842808; 7772244; 7754732; 7569578; 8685965; 8569291; 8377955; 8372859; 8143266; 7947677 и 7625901, все из которых включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Антагонисты рецептора CGRP могут также включать пептидные антагонисты рецептора, такие как описанные в патенте США № 8168592, который включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. В определенных вариантах осуществления антагонист рецептора CGRP, подлежащий введению с антителами к PAC1 и антигенсвязывающими фрагментами по настоящему изобретению, представляет собой моноклональное антитело, которое специфически связывается с рецептором CGRP человека, как например антитела, описанные в патенте США № 9102731 и публикации патента США № 20160311913, все из которых включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. В одном конкретном варианте осуществления способов по настоящему изобретению антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент, описанный в данном документе, вводят в комбинации с моноклональным антителом к рецептору CGRP, содержащим вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 502 (последовательность, приведенную ниже), и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность под SEQ ID NO: 503 (последовательность, приведенную ниже), для лечения или предупреждения состояния, связанного с головной болью (например мигрени или кластерной головной боли), у пациента. В другом конкретном варианте осуществления способов по настоящему изобретению моноклональное антитело к рецептору CGRP, которое вводят в комбинации с антителом к PAC1 или антигенсвязывающим фрагментом по настоящему изобретению для лечения или предупреждения состояния, связанного с головной болью (например, мигрени или кластерной головной боли), у пациента, представляет собой эренумаб.

Последовательность вариабельной области легкой цепи иллюстративного моноклонального антитела к рецептору CGRP:

QSVLTQPPSV SAAPGQKVTI SCSGSSSNIG NNYVSWYQQL PGTAPKLLIY DNNKRPSGIP DRFSGSKSGT STTLGITGLQ TGDEADYYCG TWDSRLSAVV FGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 502).

Последовательность вариабельной области тяжелой цепи иллюстративного моноклонального антитела к рецептору CGRP:

QVQLVESGGG VVQPGRSLRL SCAASGFTFS SFGMHWVRQA PGKGLEWVAV ISFDGSIKYS VDSVKGRFTI SRDNSKNTLF LQMNSLRAED TAVYYCARDR LNYYDSSGYY HYKYYGMAVW GQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 503).

В некоторых вариантах осуществления антагонист пути CGRP, подлежащий введению с антителами к PAC1 или антигенсвязывающими фрагментами по настоящему изобретению для лечения или предупреждения состояния, связанного с головной болью (например, мигрени или кластерной головной боли), у пациента, представляет собой антагонист лиганда CGRP. Антагонист лиганда CGRP может являться "ловушкой", или растворимым рецептором CGRP, или другим белком, который связывается с лигандом CGRP, такой как антитело к лиганду CGRP. Антитела к лиганду CGRP известны в уровне техники и описаны, например, в WO 2007/054809; WO 2007/076336; WO 2011/156324 и WO 2012/162243, все из которых включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. В определенных вариантах осуществления антагонист лиганда CGRP, подлежащий введению с антителами к PAC1 и антигенсвязывающими фрагментами по настоящему изобретению, представляет собой моноклональное антитело, которое специфически связывается с α-CGRP человека и/или β-CGRP человека. В одном варианте осуществления антитело к лиганду CGRP представляет собой фреманезумаб. В другом варианте осуществления антитело к лиганду CGRP представляет собой галканезумаб. В еще одном варианте осуществления антитело к лиганду CGRP представляет собой эптинезумаб.

Настоящее изобретение также включает применение антитела к PAC1 и антигенсвязывающих фрагментов в любом из способов, раскрытых в данном документе. Например, в определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении предусматривается антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент, описанный в данном документе, для использования в способе лечения или предупреждения состояния, связанного с головной болью, у пациента, нуждающегося в этом. В некоторых таких вариантах осуществления состояние, связанное с головной болью, представляет собой мигрень. Мигрень может представлять собой эпизодическую мигрень или хроническую мигрень. В других вариантах осуществления состояние, связанное с головной болью, представляет собой кластерную головную боль. В некоторых вариантах осуществления способ лечения или предупреждения состояния, связанного с головной болью, включает введение второго терапевтического средства от головной боли в комбинации с антителом к PAC1 или его антигенсвязывающим фрагментом. В одном варианте осуществления второе терапевтическое средство от головной боли представляет собой терапевтическое средство от острой головной боли, такое как агонист серотониновых рецепторов 5HT1B, 5HT1D и/или 5HT1F (например, триптан или эрготамин), нестероидное противовоспалительное лекарственное средство или опиоид. В другом варианте осуществления второе терапевтическое средство от головной боли представляет собой профилактическое терапевтическое средство от головной боли, такое как противоэпилептическое средство, бета-блокатор, антидепрессант, онаботулотоксин А или антагонист пути CGRP. В некоторых вариантах осуществления антагонист пути CGRP представляет собой антагонист рецептора CGRP человека. В одном конкретном варианте осуществления антагонист рецептора CGRP человека представляет собой моноклональное антитело, которое специфически связывается с рецептором CGRP человека, такое как эренумаб. В других вариантах осуществления антагонист пути CGRP представляет собой антагонист лиганда CGRP, такой как моноклональное антитело, которое специфически связывается с α-CGRP человека и/или β-CGRP человека. В определенных вариантах осуществления антитело к лиганду CGRP представляет собой фреманезумаб, галканезумаб или эптинезумаб.

В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении предусматривается антитело к PAC1 или антигенсвязывающий фрагмент, описанный в данном документе, для применения в способе подавления вазодилатации у пациента, нуждающегося в этом. В таких вариантах осуществления пациент может быть диагностирован или иметь состояние, связанное с головной болью, такое как мигрень (например, эпизодическая или хроническая мигрень) или кластерная головная боль. В других вариантах осуществления в настоящем изобретении предусматривается антитело к PAC1 или антигенсвязывающий фрагмент, описанный в данном документе, для применения в способе подавления активации рецептора PAC1 человека у пациента, характеризующегося состоянием, связанным с головной болью. Состояние, связанное с головной болью, может представлять собой мигрень (например, эпизодическую или хроническую мигрень) или кластерную головную боль.

Конкретно предусмотрено применение антител к PAC1 или их антигенсвязывающих фрагментов для получения лекарственных препаратов для введения в соответствии с любым из способов, раскрытых в данном документе. Например, в некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение охватывает применение антитела к PAC1 или антигенсвязывающего фрагмента, описанного в данном документе, для получения лекарственного препарата для лечения или предупреждения состояния, связанного с головной болью, у пациента, нуждающегося в этом. В некоторых таких вариантах осуществления состояние, связанное с головной болью, представляет собой мигрень. Мигрень может представлять собой эпизодическую мигрень или хроническую мигрень. В других вариантах осуществления состояние, связанное с головной болью, представляет собой кластерную головную боль. В определенных вариантах осуществления антитело к PAC1 или его антигенсвязывающий фрагмент составлены для введения в составе со вторым терапевтическим средством от головной боли. В одном варианте осуществления второе терапевтическое средство от головной боли представляет собой терапевтическое средство от острой головной боли, такое как агонист серотониновых рецепторов 5HT1B, 5HT1D и/или 5HT1F (например, триптан или эрготамин), нестероидное противовоспалительное лекарственное средство или опиоид. В другом варианте осуществления второе терапевтическое средство от головной боли представляет собой профилактическое терапевтическое средство от головной боли, такое как противоэпилептическое средство, бета-блокатор, антидепрессант, онаботулотоксин А или антагонист пути CGRP. В некоторых вариантах осуществления антагонист пути CGRP представляет собой антагонист рецептора CGRP человека. В одном конкретном варианте осуществления антагонист рецептора CGRP человека представляет собой моноклональное антитело, которое специфически связывается с рецептором CGRP человека, такое как эренумаб. В других вариантах осуществления антагонист пути CGRP представляет собой антагонист лиганда CGRP, такой как моноклональное антитело, которое специфически связывается с α-CGRP человека и/или β-CGRP человека. В определенных вариантах осуществления антитело к лиганду CGRP представляет собой фреманезумаб, галканезумаб или эптинезумаб.

В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение включает применение антитела к PAC1 или антигенсвязывающего фрагмента, описанного в данном документе, для получения лекарственного препарата для подавления вазодилатации у пациента, нуждающегося в этом. В таких вариантах осуществления пациент может быть диагностирован или иметь состояние, связанное с головной болью, такое как мигрень (например, эпизодическая или хроническая мигрень) или кластерная головная боль. В других вариантах осуществления настоящее изобретение включает применение антитела к PAC1 или антигенсвязывающего фрагмента, описанного в данном документе, для получения лекарственного препарата для подавления активации рецептора PAC1 человека у пациента, характеризующегося состоянием, связанным с головной болью. Состояние, связанное с головной болью, может представлять собой мигрень (например, эпизодическую или хроническую мигрень) или кластерную головную боль.

Антитела к PAC1 и антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению также применимы для выявления PAC1 человека в биологических образцах и идентификации клеток или тканей, которые экспрессируют PAC1 человека. Например, антитела к PAC1 и антигенсвязывающие фрагменты можно использовать в диагностических анализах, например иммуноанализах для обнаружения и/или количественного определения PAC1, экспрессируемого в ткани или клетке. Кроме того, антитела к PAC1 и антигенсвязывающие фрагменты, описанные в данном документе, можно использовать для подавления формирования PAC1 комплекса с PACAP, таким образом модулируя биологическую активность PAC1 в клетке или ткани. Такая биологическая активность включает повышение внутриклеточного уровня cAMP и вазодилатацию.

Антитела к PAC1 и антигенсвязывающие фрагменты, описанные в данном документе, можно использовать для диагностических целей для выявления, диагностики или мониторинга заболеваний и/или состояний, связанных с PAC1, включающих мигрень, кластерную головную боль и тревожные расстройства, такие как посттравматическое стрессовое расстройство. Также предусмотрены способы выявления присутствия PAC1 в образце с применением классических иммуногистологических способов, известных специалистам в данной области техники (например, Tijssen, 1993, Practice and Theory of Enzyme Immunoassays, Vol 15 (Eds R.H. Burdon and P.H. van Knippenberg, Elsevier, Amsterdam); Zola, 1987, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp. 147-158 (CRC Press, Inc.); Jalkanen et al., 1985, J. Cell. Biol. 101:976-985; Jalkanen et al., 1987, J. Cell Biol. 105:3087-3096). Примеры способов, применимых для выявления наличия PAC1, включают иммуноанализы, такие как твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA) и радиоиммуноанализ (RIA), с применением антител к PAC1 и антигенсвязывающих фрагментов, описанных в данном документе. Выявление PAC1 можно осуществлять in vivo или in vitro.

Для диагностических областей применения антитело к PAC1 или антигенсвязывающий фрагмент можно подвергать мечению с помощью выявляемой группы мечения. Подходящие группы мечения включают без ограничения радиоизотопы или радионуклиды (например, 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I), флуоресцентные группы (например, FITC, родамин, люминофоры на основе комплексов лантанидов), ферментные группы (например, пероксидазу хрена, β-галактозидазу, люциферазу, щелочную фосфатазу), хемилюминесцентные группы, биотинильные группы или заданные полипептидные эпитопы, распознаваемые вторичным репортером (например, парные последовательности лейциновых застежек, сайты связывания для вторичных антител, домены связывания металлов, эпитопные метки). В некоторых вариантах осуществления группу мечения присоединяют к антителу или антигенсвязывающему фрагменту с помощью спейсерных плеч различной длины для уменьшения потенциального стерического затруднения. Различные способы мечения белков известны из уровня техники и могут быть применены.

В другом варианте осуществления антитела к PAC1 и антигенсвязывающие фрагменты, описанные в данном документе, можно использовать для идентификации клетки или клеток, которые экспрессируют PAC1. В конкретном варианте осуществления в антитело или антигенсвязывающий фрагмент вводят метку в форме группы мечения и обнаруживают связывание меченого антитела или антигенсвязывающего белка с PAC1. Антитела или антигенсвязывающие фрагменты также можно применять в анализах иммунопреципитации в биологических образцах. В дополнительном конкретном варианте осуществления связывания антитела или антигенсвязывающего фрагмента с PAC1 обнаруживают in vivo. В дополнительном конкретном варианте осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент выделяют и проводят измерения с применением методов, известных в данной области техники. См., например, Harlow and Lane, 1988, Antibodies: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor (ред.1991 и периодические дополнения); John E. Coligan, ed., 1993, Current Protocols In Immunology New York: John Wiley & Sons.

Следующие примеры, в том числе проведенные эксперименты и достигнутые результаты, предоставлены только для иллюстративных целей и не должны рассматриваться как ограничивающие объем прилагаемой формулы изобретения.

ПРИМЕРЫ

Пример 1 Управляемое кристаллической структурой конструирование антител к PAC1 человека

Определяли кристаллическую структуру комплекса между внеклеточным доменом (ECD) PAC1 человека и Fab-фрагментом нейтрализующего антитела к PAC1 человека (29G4v9). ECD PAC1 человека и Fab к PAC1 очищали по отдельности, и затем обеспечивали образование их комплекса друг с другом при молярном соотношении 1:1. Образец последовательно прогоняли через колонку для гель-фильтрации, уравновешенную в 20 мМ TRIS с pH 7,5, 50 мМ NaCl, 5 мМ EDTA, и концентрировали до 35 мг/мл, и фильтровали.

Последовательности для тяжелой цепи (содержащей вариабельную область (VH), константную область CH1, верхнюю шарнирную область и сайт расщепления для каспазы III) и легкой цепи (содержащей вариабельную область (VL) и константную область CL) Fab-фрагмента перечислены ниже. Последовательность конструкции на основе ECD PAC1 человека представлена ниже, и она содержала аминокислоты 26-143 PAC1 человека (SEQ ID NO: 1) без области между аминокислотами 89-109.

Аминокислотная последовательность тяжелой цепи Fab 29G4v9, состоящей из VH-области (аминокислоты 1-120), CH1-области (аминокислоты 121-218), верхней шарнирной области (аминокислоты 219-221) и сайта расщепления для каспазы III (222-226):

QVQLVESGGG VVQPGRSLRL SCAASGFTFS RFAMHWVRQA PGKGLEWVAV ISYDGGNKYY AESVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TALFYCARGY DVLTGYPDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSNFGTQT YTCNVDHKPS NTKVDKTVER KGDEVD (SEQ ID NO: 2).

Аминокислотная последовательность легкой цепи Fab 29G4v9, состоящей из VL-области (аминокислоты 1-108) и CL-области (аминокислоты 109-214):

DIQLTQSPSF LSASVGDRVT ITCRASQSIG RSLHWYQQKP GKAPKLLIKY ASQSLSGVPS RFSGSGSGTE FTLTISSLQP EDFATYYCHQ SSRLPFTFGP GTKVDIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC (SEQ ID NO: 3).

Аминокислотная последовательность конструкции на основе ECD PAC1 человека:

GSMAHSDGIF KKEQAMCLEK IQRANELMGF NDSSPGCPGM WDNITCWKPA HVGEMVLVSC PELFRIFNPD QDMGVVSRNC TEDGWSEPFP HYFDACGFDE YESET (SEQ ID NO: 4).

Сначала очищенные ECD PAC1 человека и Fab к PAC1 сокристаллизировали с применением метода диффузии пара в варианте с сидячей каплей с помощью коммерчески доступных наборов для скрининга. Условия кристаллизирования (набор № 61 комплекта Qiagen MPD (134561)) дополнительно расширяли с применением метода диффузии пара в варианте с висячей каплей. Белок и буфер для кристаллизации (0,1 М лимонной кислоты с pH 4,0, 40% MPD) смешивали 1:1 в висячих каплях объемом 1 мкл над резервуаром с раствором буфера для кристаллизации при 4°C. Стержневидные кристаллы образовывались за несколько недель.

Кристалл уравновешивали в буфере для кристаллизации в качестве криопротектора и замораживали в жидком азоте для транспортировки в Национальную лабораторию Лоуренса в Беркли для сбора данных. Набор данных собирали на базе лаборатории Advanced Light Source с помощью источника синхротронного излучения Beamline 5.0.2 на CCD-детекторе ADSC-Q315r (λ=1,000Å). Данные интегрировали и масштабировали с применением HKL2000 (Otwinowski and Minor, Methods Enzymology, Vol. 276, 307-326, 1997), и они были полными на 99,8% до 2,00 Å, при этом значение Rслияния составляло 0,081 (полные на 98,0% при последнем слое 2,07-2,00 Å с I/σ=2,35). Кристаллы принадлежат к орторомбической пространственной группе P21212 с параметрами элементарной ячейки a=65,2 Å, b=177,9 Å, c=53,8 Å, α=90°, β=90°, γ=90°. Кристаллическую структуру определяли посредством молекулярного замещения с применением PhaserMR (Winn et al., Acta Crystallogr., Sect. D: Biol. Crystallogr., Vol. 67: 235-242, 2011). Специально изготовленную Fab-структуру применяли в качестве первой модели поиска для определения компонента, представляющего собой Fab к PAC1. В последующем молекулярном замещении применяли PDBID: 2JOD (Sun et al., Proc.Natl.Acad.Sci.USA, Vol. 104: 7875, 2007), структуру ECD PAC1 человека, полученную с помощью ЯМР, в качестве исходной модели для определения компонента, представляющего собой ECD PAC1 человека. В асимметричной единице содержится одна молекула ECD и одна молекула Fab. Структуру уточняли с применением как Refmac5 (Winn et al., Acta Crystallogr., Sect. D: Biol. Crystallogr., Vol. 67: 235-242, 2011; Murshudov et al., Acta Crystallogr., Sect. D: Biol. Crystallogr., Vol. 67: 355-367, 2011), так и Phenix.refine (Adams et al., Acta Crystallogr., Sect. D: Biol. Crystallogr., Vol. 66: 213-221, 2010), и построение модели проводили с применением программы графического представления Coot (Emsley and Cowtan, Acta Crystallogr., Sect. D: Biol. Crystallogr., Vol. 2004, 60: 2126-2132, 2004).

Структуру комплекса ECD PAC1 человека : Fab к PAC1 уточняли до 2,00 Å, при этом значение R-фактора составляло 20% и значение Rв свободной форме составляло 23%. Вид спереди и вид сбоку структуры комплекса показаны на фигурах 1A и 1B соответственно. Взаимодействие между Fab 29G4v9 и ECD PAC1 состоит из гидрофобных, электростатических взаимодействий и взаимодействий посредством водородных связей. Взаимодействие между Fab 29G4v9 и ECD PAC1 характеризуется значениями площади утопленной поверхности (1613 Å2) и комплементарности формы (0,695), которые являются типичными для взаимодействий антитело-антиген. Все аминокислоты в ECD PAC1, которые содержали по меньшей мере один атом, отличный от атома водорода, на расстоянии 5 Å или меньше от атома, отличного от атома водорода, в Fab 29G4v9, определяли в качестве аминокислот основного участка контакта в ECD PAC1. Расстояния для атомов рассчитывали с помощью программы PyMOL (DeLano, W.L. The PyMOL Molecular Graphics System. (Palo Alto, 2002)). Аминокислоты основного участка контакта в ECD PAC1 включают Asp59, Asn60, Ile61, Arg116, Asn117, Thr119, Asp121, Gly122, Trp123, Ser124, Glu125, Pro126, Phe127, Pro128, His129, Tyr130, Phe131, Asp132 и Gly135, при этом номера аминокислотных положений указаны относительно SEQ ID NO: 1.

Участок контакта между Fab 29G4v9 и ECD PAC1 в кристаллической структуре анализировали, чтобы идентифицировать области, где взаимодействия между двумя молекулами являлись субоптимальными. На основе структурного анализа в вариабельных областях легкой и тяжелой цепи конструировали мутации аминокислот для усиления взаимодействия в таких областях между Fab и ECD PAC1, чтобы обеспечить улучшение в отношении аффинности связывания и/или ингибирующей удельной активности антитела. В частности, в результате анализа взаимодействия между легкой цепью Fab и ECD PAC1 выявили четыре области, где мутации в легкой цепи Fab могут, возможно, обеспечить улучшение в отношении взаимодействий с PAC1. В случае зоны 1, области, содержащей аминокислоты Glu120 и Asp121 ECD PAC1, была предложена мутация с заменой Gln27 в CDR1 легкой цепи (SEQ ID NO: 3) на лизин, тирозин или аргинин для обеспечения лучшей обусловленной зарядами комплементарности или потенциала связывания посредством атомов водорода с аминокислотами Glu120 и Asp121 PAC1 (фигура 2A). Зона 2 представляет собой область с положительным электростатическим потенциалом, и была предложена мутация с заменой Ser28 в CDR1 легкой цепи (SEQ ID NO: 3) на глутамат для обеспечения лучшей обусловленной зарядами комплементарности (фигура 2A). Зона 3 представляет собой гидрофобную область, содержащую остаток Phe127 ECD PAC1, и она обладает потенциалом связывания посредством атомов водорода. Gly30, Arg31 и Ser32 в CDR1 легкой цепи находятся несколько вдали от зоны 3 (фигура 2A). Таким образом, было предложено несколько мутаций в этих трех сайтах, кратко описанных в таблице 6 ниже, для обеспечения улучшения в отношении гидрофобных взаимодействий или взаимодействий, обусловленных связыванием посредством атомов водорода, между этими тремя остатками и этой зоной ECD PAC1. Arg93 в CDR3 легкой цепи сидит в кармане из остатков с отрицательным электростатическим потенциалом PAC1 (зона 4; фигура 2B). Однако, вследствие геометрии, Arg93 не образует каких-либо непосредственных водородных связей с остатками PAC1. Были предложены мутации с заменой Arg93 в CDR3 легкой цепи на глутамин, лизин, гистидин или аспарагин для обеспечения альтернативной обусловленной зарядами комплементарности или потенциала связывания посредством атомов водорода с остатками в ECD PAC1 (фигура 2B).

В результате анализа взаимодействия между тяжелой цепью Fab 29G4v9 и ECD PAC1 выявили три основные области, где мутации в тяжелой цепи Fab могут обеспечить улучшение в отношении взаимодействий с ECD PAC1. Как показано на фигуре 3A, зона 5 охватывает аминокислоту Phe131 PAC1, и ее можно поделить на две подзоны, которые лежат по обе стороны от Phe131. Arg31 и Phe32 в CDR1 тяжелой цепи лежат в этих подзонах, и мутации в этих сайтах были предположены для обеспечения улучшения в отношении гидрофобных взаимодействий с остатком Phe131 PAC1 или обеспечения альтернативных взаимодействий на основе обусловленной зарядами комплементарности. Перечень мутаций см. в таблице 6. В случае зоны 6, которая содержит остатки Asn60 и Ile61 ECD PAC1 (относительно SEQ ID NO: 1), мутации остатков Tyr53, Asp54 и Gly56 CDR2 тяжелой цепи были предложены для обеспечения улучшения в отношении гидрофобных взаимодействий или обеспечения альтернативного связывания посредством атомов водорода с остатками Asn60 и Ile61 PAC1 (фигура 3B). В случае зоны 7, области с гидрофобными остатками и некоторым отрицательным электростатическим потенциалом, мутации остатков Val102, Leu103 и Thr104 CDR3 тяжелой цепи, представленные в таблице 6, были предложены для обеспечения улучшения в отношении гидрофобных взаимодействий или обеспечения альтернативных взаимодействий, обусловленных связыванием посредством атомов водорода (фигура 3C).

Сводные данные по конкретным мутациям, предложенным для обеспечения улучшения в отношении взаимодействия между антителом к PAC1 и рецептором PAC1 человека, исходя из анализа кристаллической структуры комплекса Fab/ECD PAC1, представлены в таблице 6 ниже.

Таблица 6. Сводные данные по структурным мутациям в вариабельных областях антитела к PAC1
Аминокислотное положение1 Мутации
Легкая цепь
Gln27 Lys, Tyr, Arg
Ser28 Glu
Gly30 Leu, Val, Ile, Thr, Tyr, Phe, Met, Ala, His, Asn, Gln, Glu, Asp, Trp, Ser
Arg31 Phe, Tyr, Leu, Ser, Thr, Gln, Asn
Ser32 Leu, Thr, Ala, Met, Lys, Gln
Arg93 Gln, Lys, His, Asn
Тяжелая цепь
Arg31 Leu, Tyr, Met, Ile, Lys
Phe32 Tyr, Lys, Gln
Tyr53 Gln, Leu, Ser
Asp54 Tyr, Gln, Asn
Gly56 Ser, Thr
Val102 Phe, Tyr, Trp, Leu, Thr, Ile, Met
Leu103 Asn, Gln, Phe, Met, Ser, Thr
Thr104 Ser
1Аминокислотные положения в случае легкой цепи указаны относительно SEQ ID NO: 3, и аминокислотные положения в случае тяжелой цепи указаны относительно SEQ ID NO: 2.

В дополнение к мутациям, разработку которых осуществляли с помощью анализа взаимодействующих аминокислот между Fab к PAC1 и ECD PAC1 человека, как описано выше, также осуществляли анализ созревания аффинности in silico с применением кристаллической структуры, чтобы идентифицировать дополнительные мутации для обеспечения улучшения в отношении аффинности связывания и/или ингибирующей удельной активности антитела к PAC1. Аминокислотные остатки в Fab 29G4v9, вовлеченные в связывание с ECD PAC1 человека, идентифицировали путем визуального изучения кристаллической структуры комплекса, описанного выше. Остатки из этого участка контакта антитела были выбраны для виртуального внесения мутаций по всем аминокислотам, кроме цистеина. Влияние мутации на взаимодействие, представляющее собой связывание антитела/ECD PAC1, оценивали путем расчета изменения значения свободной энергии связывания (ΔΔGсвязывания) при мутации конкретного остатка с применением программного обеспечения для молекулярного моделирования Discovery Studio от Biovia. Отрицательное значение ΔΔGсвязывания указывает на то, что мутация приводит к более сильному связыванию с ECD PAC1 по сравнению с исходной молекулой. С помощью этих расчетов идентифицировали примерно 65 мутаций, которые приводили к отрицательному значению ΔΔGсвязывания. Эти 65 мутаций далее сократили до 50 (18 в легкой цепи и 32 в тяжелой цепи) на основе визуального изучения и анализа "смоделированной" структуры таких вариантов с ECD PAC1. Сводные данные по этим 50 мутациям, для которых было предсказано обеспечение повышения аффинности связывания антитела к PAC1 на основе расчетов свободной энергии связывания, представлены в таблице 7 ниже.

Таблица 7. Сводные данные по мутациям в вариабельных областях антитела к PAC1, предсказанным на основе анализа in silico
Аминокислотное положение1 Мутации
Легкая цепь
Gln27 Lys, Tyr, Arg
Gly30 Arg
Ser32 Arg, Asn, His, Leu, Val
Ser91 Lys, Thr
Ser92 Gln, Ile
Leu94 Arg, His, Tyr
Phe96 Arg, Lys
Тяжелая цепь
Phe32 His
Ala33 Ser
Ser52 Ile, Gln, Met
Asp54 Tyr, Gln, Asn, Ile, Leu
Gly55 Ala
Gly56 Arg, Asn, His, Tyr
Asn57 Arg, His, Lys, Tyr
Lys58 Glu
Glu62 Arg
Gly99 Ala
Tyr100 His
Val102 Ile
Leu103 Arg
Thr104 Ser, His
Gly105 Ser, Lys
Tyr106 Arg, Lys
Asp108 Arg
1Аминокислотные положения в случае легкой цепи указаны относительно SEQ ID NO: 3, и аминокислотные положения в случае тяжелой цепи указаны относительно SEQ ID NO: 2.

По сравнению со структурным анализом, подход in silico привел к идентификации дополнительных мутаций, как предусматривающих другие аминокислоты, так и другие положения в легкой и/или тяжелой цепи.

Мутации, описанные в данном примере, вводили в антитело к PAC1 путем его рекомбинантного получения и испытывали в отношении способности подавлять индуцированную посредством PACAP активацию PAC1 человека в клеточном анализе in vitro, как описано в примере 3 в данном документе.

Пример 2. Созревание аффинности антитела к PAC1 человека 29G4v10 в дрожжевом дисплее

Один высокоэффективный подход для обеспечения созревания аффинности предусматривает конструирование библиотек на основе дрожжевого дисплея для мутантных вариантов Fab антитела и селекцию молекул, характеризующихся улучшенным связыванием, посредством активируемой флуоресценцией сортировки клеток (FACS) (фигура 4). Для получения антител к PAC1 с улучшенной ингибирующей удельной активностью для антитела 29G4v10 (VH-область под SEQ ID NO: 191; VL-область под SEQ ID NO: 52) обеспечивали созревание аффинности с помощью FACS библиотеки Fab на основе дрожжевого дисплея. Управление разработкой библиотек осуществляли на основе определенной структуры сокристалла, описанной в примере 1, комплекса между ECD PAC1 человека и Fab 29G4v9, CDR которого практически идентичны таковым из 29G4v10. С помощью структурного анализа изначально идентифицировали шесть и семь положений для мутагенеза в CDR в пределах легкой цепи (LC) и тяжелой цепи (HC) соответственно и были предложены стратегии усиления аффинности. Варианты с точечными мутациями были разработаны для обеспечения улучшения в отношении гидрофобных взаимодействий и обусловленной зарядами комплементарности и для обеспечения альтернативных взаимодействий, представляющих собой водородные связи, по всему участку контакта. См. пример 1. С этих вариантов с точечными мутациями начинали инженерный подход, который включал повторяющиеся раунды продуцирования, определения характеристик и целесообразного комбинирования полезных мутаций. Целью разработки дрожжевых библиотек являлось дополнение линейного подхода, описанного в примере 1, посредством более полного изучения комбинаций мутаций между 13 положениями и оптимизации стратегии диверсификации по каждому выбранному положению.

За счет получения отдельных библиотек LC и HC теоретические значения разнообразия поддерживали на уровне удобного в управлении размера, составляющего < 107. Библиотеку LC разрабатывали для применения насыщающего мутагенеза с применением MIX19 по пяти из шести выбранных положений (Gln27, Gly30, Arg31, Ser32 и Arg93 из SEQ ID NO: 52). MIX19 представляет собой смесь тримеров амидофосфитов (кодон), кодирующих все аминокислоты, кроме цистеина. В оставшемся положении легкой цепи (Ser28 из SEQ ID NO: 52) использовали мутацию с заменой на серин, глутамат, аланин или стоп-кодон. Для изучения всех семи положений в HC (Arg31, Phe32, Tyr53, Gly56, Val102, Leu103 и Thr104 из SEQ ID NO: 191) в одной библиотеке авторы настоящего изобретения разработали специальную смесь из девяти кодонов (MIX9) для диверсификации по пяти из семи положений CDR тяжелой цепи (Arg31, Phe32, Tyr53, Val102 и Leu103 из SEQ ID NO: 191). Специальная MIX9 содержала гидрофобные аминокислоты, основные аминокислоты и доноры и акцепторы водородной связи (например, F, L, Y, M, Q, H, K, R и S). Важно, что эта специальная MIX9 не содержала цистеина, аспарагина и триптофана, для сведения к минимуму внесения отрицательно влияющих элементов в последовательность, которые могут создавать риски в отношении последующей технологичности. Для остальных двух положений в тяжелой цепи осуществляли мутацию с заменой на глицин, аланин, серин и треонин (Gly56 и Thr104 из SEQ ID NO: 191). В целом, для этой первой кампании были разработаны библиотека mutHC с теоретическим значением разнообразия, составляющим 8,5×106, и библиотека mutLC с теоретическим значением разнообразия, составляющим 9,9×106, и запас выборок сконструированных библиотек превышал теоретические значения разнообразия в >9 раз.

Две сконструированные библиотеки Fab, mutHC и mutLC, обогащали в отношении связывания с ECD PAC1 человека с применением FACS, повышая жесткость с каждым последующим раундом путем снижения концентрации ECD, применяемой для связывания (раунд 1: 30 нМ ECD PAC1; раунд 2: 0,67 нМ ECD PAC1 и раунд 3: 0,2 нМ ECD PAC1). Идентично обрабатываемый образец дрожжей с Fab 29G4v10 в рабочем порядке применяли для осуществления гейтирования конкретно клонов дрожжей, демонстрирующих улучшенное связывание относительно исходного Fab. Нормализованное значение соотношения связывание/дисплей для каждого клона рассчитывали путем деления медианного значения флуоресцентного сигнала связывания для каждого клона на медианное значение флуоресцентного сигнала дисплея для каждого клона. К раунду 3 накопление молекул, характеризующихся улучшенным связыванием, происходило в библиотеке mutHC, но не в библиотеке mutLC. В результате укороченного скрининга ~200 клонов дрожжей из пула раунда 3 mutHC получали 11 молекул, характеризующихся умеренно улучшенным связыванием (таблица 8). Варианты с улучшенной аффинностью получали рекомбинантным путем и оценивали в отношении функциональной активности in vitro, как описано в примере 3. По счастливой случайности, сайт изомеризации аспартата в пределах исходного Fab 29G4v10, являющийся элементом, потенциально отрицательно влияющим на технологичность, был удален во всех этих 11 уникальных мутантных вариантах.

Таблица 8. Основные молекулы, характеризующиеся улучшенным связыванием, из скрининга библиотеки MutHC
Замещения по отношению к последовательности VH 29G4v10 (SEQ ID NO: 191)1 Данные скрининга в отношении связывания с помощью дрожжевого дисплея при 0,2 нМ PAC1
ID варианта антитела CDR1 HC CDR2 HC CDR3 HC Нормализованное значение соотношения сигнал связывания/
сигнал дисплея (B/D)
Соотношение значений B/D мутантного варианта и дикого типа
iPS:421855 R31K; F32Y Y53F;
D54K;
G56S
V102L 0,40 1,86
iPS:421861 F32Y D54Q V102L 0,38 1,80
iPS:421867 R31H Y53F;
D54S;
G56S
V102M 0,35 1,61
iPS:421873 R31K D54R V102L 0,42 1,95
iPS:421879 F32Y D54S;
G56A
V102L;
T104S
0,33 1,56
iPS:421885 R31H;
F32Y
Y53F;
D54K;
G56A
V102L 0,45 2,09
iPS:421891 R31H;
F32Y
D54R;
G56A
V102L 0,49 2,27
iPS:421897 R31H;
F32Y
Y53F;
D54Y;
G56S
V102F 0,39 1,83
iPS:421903 R31H Y53F;
D54F
V102F 0,44 2,07
iPS:421909 R31H;
F32Y
Y53F;
D54M;
G56T
V102F 0,43 2,01
iPS:421915 R31Y Y53H;
D54R;
G56T
V102L;
T104S
0,35 1,63
29G4v10 дикого типа - - - 0,21 1,00
1Ни для одного из этих вариантов не было изменений в последовательности легкой цепи относительно антитела 29G4v10.

Для получения дополнительных улучшений в отношении аффинности также конструировали библиотеку молекул с перетасованными цепями, в которой обеспечивали объединение мутаций, накопленных в отсортированных пулах mutHC и mutLC. Для обеспечения улучшения в отношении проведения различия между основными связывающими клонами реализовали стратегию отбора и скрининга, основывающуюся на скорости диссоциации при связывании (фигура 5). Сначала клетки дрожжей, экспонирующие мутантные варианты Fab, насыщали биотинилированным ECD PAC1 человека и тщательно промывали, после чего подвергали продолжительной инкубации в буфере, содержащем большой избыток немеченого ECD PAC1 человека (не более 24 часов). Инкубация с немеченым ECD PAC1 человека, которая происходила при температурах, находящихся в диапазоне от 25°C до 37°C, обеспечивала необратимость событий диссоциации от клеток. Клетки, сохраняющие наибольший уровень связывания с биотинилированным PAC1, тем самым демонстрирующие наименьшую скорость диссоциации, выделяли с помощью FACS после окрашивания с помощью флюоресцирующего конъюгата стрептавидина (фигура 5). Клоны дрожжей, экспонирующие Fab, демонстрирующие наименьшие скорости диссоциации, характеризовались наивысшим уровнем флуоресценции.

При основывающейся на скорости диссоциации сортировке библиотеки молекул с перетасованными цепями идентично обрабатываемый образец дрожжей с Fab 29G4v10 использовали, чтобы конкретно выделять клетки с большим уровнем связывания биотинилированного PAC1 после конкуренции с немеченым PAC1 в течение ночи. Из двух пулов, собранных при разных значениях жесткости гейтирования, ~600 отдельных клонов дрожжей подвергали скринингу с применением анализа скорости диссоциации при связывании и идентифицировали более 190 клонов с более высоким уровнем остающегося связывания с PAC1, чем в случае исходного Fab 29G4v10. Специфичность связывания этих перспективных клонов оценивали путем подтверждения того, что отсутствует связывание клонов с ECD неродственных рецепторов (белка запрограммированной гибели клеток 1 (PD1) и рецептора желудочного ингибиторного полипептида (GIPR)). Также во время скрининга удаляли мутантные варианты, содержащие дополнительные сайты с аномалиями цистеина, сайты N-связанного гликозилирования, изомеризации аспартата, дезамидирования аспарагина и окисления триптофана относительно первоначальной последовательности 29G4v10. Основные 30 мутантных вариантов с изменениями в отношении связывания показаны в таблице 9 с изменениями последовательности в CDR от исходного антитела 29G4v10 и уровнем связывания ECD PAC1 человека в процентах после анализа скорости диссоциации. Более высокий уровень ассоциации в процентах для связывания ECD PAC1 указывает на то, что мутантные варианты Fab характеризуются меньшей скоростью диссоциации.

Таблица 9. Основные молекулы, характеризующиеся улучшенным связыванием, согласно основывающемуся на скорости диссоциации скринингу библиотеки молекул с перетасованными цепями
Замещения по отношению к последовательности VH 29G4v10 (SEQ ID NO: 191) Замещения по отношению к последовательности VL 29G4v10 (SEQ ID NO: 52) Вторичный скрининг: конкуренция на основе скорости диссоциации при 30°C
ID клона CDR1 HC CDR2 HC CDR3 HC CDR1 LC CDR2 LC CDR3 LC Уровень ассоциации в % после анализа скорости диссоциации Нормализованное значение остающегося уровня связывания ECD PAC1 (отношение значения для мутантного варианта к значению для варианта Q27K LC)
2_C11 R31Y;
F32Y
D54S;
G56S
V102L Q27K;
R31Q
- - 77% 3,42
1_D07 R31F;
F32Y
Y53S;
D54F;
G56S
V102L Q27K;
R31Q
- - 56% 2,66
2_B10 R31H;
F32Y
D54Q;
G56S
V102L Q27R;
R31L;
S32A
- R93F 54% 2,79
2_G07 R31Y;
F32Y
Y53H;
D54Y;
G56T
V102P Q27K;
R31Q
- - 57% 2,41
1_H04 R31Y Y53H;
D54S;
G56A
V102L;
T104S
Q27K;
R31Q
- - 52% 2,37
1_F03 - - - Q27K;
R31W
- - 47% 3,23
2_E08 - - - Q27K;
R31W
- R93M 50% 2,29
1_F01 R31H D54S V102L Q27R;
R31L;
S32A
- R93M 50% 2,21
2_F10 R31H;
F32Y
D54S V102L;
T104S
Q27K;
G30W;
R31K
- - 46% 2,54
1_B08 R31Y;
F32Y
Y53S;
D54R;
G56S
V102L Q27K;
S28E;
G30M;
R31S;
S32L;
L33H;
ΔH341
- R93M 50% 2,18
1_A11 - - - Q27R;
S28A;
G30S;
R31N;
S32L;
L33H;
ΔH341
- R93Y 43% 2,48
2_A10 R31Y;
F32Y
Y53S;
D54M;
G56T
- Q27K;
S28A;
G30W;
R31H;
S32N
- R93M 55% 1,70
2_G10 R31M;
F32Y
D54S;
G56S
V102L Q27K;
R31Q
- R93M 49% 2,07
2_E10 R31K;
F32Y
D54M;
G56A
V102L Q27K;
R31W
- - 68% 1,53
2_C05 R31Y;
F32Y
Y53S;
D54R;
G56S
V102L Q27K;
R31Q
- R93M 48% 1,90
1_A09 R31K;
F32Y
D54S;
G56A
V102L Q27K;
R31Q
- - 36% 2,38
2_C02 R31K;
F32Y
Y53F;
D54S;
G56S
V102L;
L103M
Q27K;
R31W
- R93M 41% 2,14
1_H06 F32Y D54S;
G56A
V102L;
T104S
Q27K;
S28A;
R31F
- R93F 38% 2,16
2_D01 - - V102L Q27K;
R31W
- R93L 34% 2,10
2_B11 R31Y;
F32Y
Y53H;
D54S
V102L;
T104S
Q27R;
R31M
- R93M 45% 1,53
2_F05 R31H;
F32Y
D54S V102L;
T104S
Q27R;
S28A;
G30F;
R31G;
S32N
- R93I 51% 1,54
1_F10 R31Y Y53H;
D54S;
G56A
V102L;
T104S
Q27K;
S28A;
G30W;
R31H;
S32N
- R93M 39% 1,96
1_D05 R31Y;
F32Y
Y53S;
D54R;
G56S
V102L Q27H;
S28A;
G30Y;
R31H;
S32N
- - 45% 1,82
1_E01 R31F Y53S;
D54H;
G56T
V102L;
L103M;
T104S
Q27K;
R31W
- - 50% 1,39
2_H10 - - - Q27R;
S28A;
G30F;
R31G;
S32N
- R93M 53% 1,09
2_B08 - D54S;
G56S
V102L Q27K;
S28A;
G30W;
R31H;
S32N
- R93M 43% 1,91
1_A10 F32Y Y53F;
D54Q;
G56S
V102L Q27K;
R31W
- R93L 49% 1,65
1_B11 R31M Y53H;
D54R;
G56T
V102L Q27K;
R31Q
- - 44% 1,65
1_D04 R31H;
F32Y
D54R;
G56A
V102L Q27K;
R31Q
- - 37% 2,12
1_C09 R31H;
F32Y
Y53F;
D54H
- Q27K;
R31Q
- - 39% 1,80
29G4v10 дикого типа - - - - - - 25% 0,70
Вариант VL Q27K - - - Q27K - - 22% 1,00
1Остаток гистидина в положении 34 относительно последовательности вариабельной области легкой цепи 29G4v10 (SEQ ID NO: 52) в этих мутантных вариантах удален.

Для достижения дополнительных улучшений в отношении аффинности разрабатывали совокупность библиотек второго поколения. В случае библиотек первого поколения, описанных выше, для обеспечения диверсификации фокусировались на подсовокупности положений CDR исходного антитела 29G4v10, которые находились в пределах 4,5Å от ECD PAC1 в кристаллической структуре (пример 1). В случае библиотек второго поколения изучали мутагенез в областях, которые по большей части не были затронуты в библиотеках первого поколения, таких как CDR2 и CDR3 легкой цепи. В случае нескольких положений, уже изученных на библиотеках первого поколения, для обеспечения диверсификации в пределах ограниченной совокупности нейтральных/полезных мутаций, которые возникли после трех раундов сортировки, применяли данные по тенденциям секвенирования. Наконец, некоторые утопленные остатки каркаса, которые могут влиять на конформации CDR, являлись мишенью ограниченной диверсификации, при этом в стратегии внесения мутаций предпочтение отдавали аминокислотам, часто встречающимся в том же положении в других зародышевых линиях VH3 и VK3 человека.

Всего четыре библиотеки Fab второго поколения были разработаны таким образом, чтобы мишенями диверсификации являлись 24 остатка CDR тяжелой цепи (аминокислоты 27, 29, 31-34, 49, 52-57, 70, 72, 77, 79, 98, 100-104 и 106 из SEQ ID NO: 191) и 17 остатков CDR легкой цепи (аминокислоты 27, 28, 30-32, 34, 46, 49-54, 92-94 и 96 из SEQ ID NO: 52). Ограниченное разнообразие по многим положениям, являющимся мишенями, позволяло принимать к рассмотрению большее количество положений CDR в пределах одной библиотеки и осуществлять совместную оптимизацию HCDR1 с HCDR3 и LCDR1 с LCDR3. Четыре библиотеки, которые были сконструированы, обеспечивали 8-24-кратное перекрытие теоретических значений разнообразия, находящихся в диапазоне от 7×106 до 1×107.

В четырех сконструированных библиотеках Fab обеспечивали накопление в отношении связывания с ECD PAC1 человека с применением FACS, как описано выше. К раунду 3 только в случае библиотек mutHCDR2 и mutLCDR1-LCDR3 получали пулы с уровнем связывания, эквивалентным таковому исходного антитела 29G4v10 или превосходящим его. Следовательно, эти два пула переносили на следующий этап для получения библиотеки молекул с перетасованными цепями mutH2/mutL1L3 для обеспечения дополнительных улучшений в отношении аффинности. Для обеспечения накопления мутантных вариантов, характеризующихся наивысшей аффинностью, применяли 2B10, наиболее эффективный клон дрожжей из библиотек первого поколения (таблица 9), для установления более жестких параметров гейтирования при сортировании. После конкуренции на основе скорости диссоциации в течение ночи с немеченым PAC1 при 30°C или 37°C, можно было отсортировать клоны дрожжей со значительно сниженными значениями скорости диссоциации по сравнению с клоном 2B10. В результате ограниченного скрининга ~200 клонов выявили, что ~100 клонов характеризовались меньшими скоростями диссоциации, чем 2B10, однако большинство из перспективных связывающих молекул содержали в пределах HCDR2 элемент, обуславливающий негативную предрасположенность к потенциальному дезамидированию аспарагина. Неспецифическое связывание с ECD PD1 или GIPR было минимальным для всех клонов, подвергнутых скринингу. В результате применения жестких фильтров по связыванию и последовательности получили десять основных мутантных вариантов со значительно улучшенным уровнем связывания PAC1 по сравнению с таковым клона 2B10 (уровень ассоциации в процентах после конкуренции при 37°C в течение ночи был >2 раза выше) и без каких-либо элементов последовательности, потенциально обуславливающих негативную предрасположенность (таблица 10). Изменения последовательности от исходного антитела 29G4v10 для этих основных десяти мутантных вариантов и уровень связывания ECD PAC1 человека в процентах после анализа скорости диссоциации при 30°C и 37°C показаны в таблице 10. Уровень ассоциации в процентах рассчитывали в виде нормализованного значения уровня связывания после анализа скорости диссоциации, деленного на нормализованное значение связывания без анализа скорости диссоциации. Более высокий уровень ассоциации в процентах для связывания ECD PAC1 указывает на то, что мутантные варианты Fab характеризуются меньшей скоростью диссоциации.

Таблица 10. Основные молекулы, характеризующиеся улучшенным связыванием, согласно скринингу в отношении скорости диссоциации, проведенному в отношении библиотеки второго поколения молекул с перетасованными цепями
Замещения по отношению к последовательности VH 29G4v10 (SEQ ID NO: 191) Замещения по отношению к последовательности VL 29G4v10 (SEQ ID NO: 52) Уровень ассоциации в % после скрининга в отношении скорости диссоциации
ID клона CDR1 HC FR2 HC CDR2 HC FR3 HC CDR3 HC CDR1 LC CDR2 LC CDR3 LC 30°C 37°C
30_H10 - - D54S;
G56A;
N57F
I70V - Q27K;
R31W
- - 75,8% 63,6%
30_D05 - A49G S52N;
D54R;
G56H;
N57G
I70V - Q27K;
R31W
- - 74,2% 57,9%
30_F08 - A49G S52T;
D54T;
N57A
- - Q27K;
S28A;
R31W
- - 67,1% 54,6%
30_A05 - A49G S52N;
D54F;
G56D;
N57A
- - Q27K;
R31W
- - 65,8% 50,5%
30_E08 - A49G S52N;
Y53F;
D54Q;
G56T;
N57T
- - Q27K;
R31W
- - 60,9% 46,5%
37_E09 - A49G D54S;
G56D;
N57L
I70V - Q27K;
R31W
- - 73,4% 49,2%
37_F04 - A49G Y53F;
D54S;
N57S
I70L - Q27K;
R31W
- - 73,0% 46,5%
37_B06 - A49G D54S;
G56A;
N57S
I70M - Q27K;
R31W
- - 68,6% 43,0%
37_H05 - A49G D54T;
G56A;
N57Q
I70M - Q27K;
R31W
- - 64,3% 40,2%
37_A11 - A49G D54T;
G56Q;
N57F
I70V - Q27K;
R31Y
- - 64,9% 36,6%
2_B10, контроль R31H;
F32Y
- D54Q;
G56S
- V102L Q27R;
R31L;
S32A
- R93F 53,0% 21,5%
29G4v10 дикого типа - - - - - - - - 10,4% 8,5%

Как показано в таблице 10, все из этих главных десяти мутантных вариантов с изменениями в отношении связывания содержали мутацию Q27K в CDRL1, и все кроме одного содержали мутацию R31W в CDRL1. Все мутантные варианты содержали мутации по аминокислотным положениям D54 и N57 в CDRH2, и большинство также содержали мутацию по аминокислотному положению G56 в CDRH2. Консервативные мутации по аминокислотным положениям 49 и 70 в каркасной области 2 (FR2) и каркасной области 3 (FR3) тяжелой цепи соответственно также наблюдали во многих из этих десяти мутантных вариантов.

В конечном итоге на основе структуры ECD PAC1 в комплексе с Fab 29G4v9, близкородственном варианте нейтрализующих антител к PAC1 29G4v22 и 29G4v10, комбинаторные библиотеки мутантных вариантов 29G4v10 были разработаны и отсортированы в отношении улучшенного связывания с ECD PAC1. Чтобы выделить молекулы, характеризующиеся наиболее улучшенным связыванием, накопленные мутации объединяли путем конструирования библиотек молекул с перетасованными CDR и/или молекул с перетасованными цепями для осуществления отбора при более жестких условиях. В результате скринингов отдельных клонов дрожжей с Fab после сортировки получали молекулы, характеризующиеся улучшенным связыванием с ECD PAC1 человека, со значительно меньшими скоростями диссоциации при связывании по сравнению с таковыми для исходного антитела 29G4v10 и минимальным уровнем неспецифического связывания. Подсовокупность вариантов с улучшенной аффинностью получали рекомбинантным путем и оценивали в отношении функциональной активности in vitro, как описано в примере 3.

Пример 3. Функциональная активность in vitro вариантов антитела к PAC1 человека

Чтобы оценить эффект мутаций в вариабельных областях тяжелой и легкой цепи, идентифицированных с помощью анализа структуры сокристалла (пример 1) или библиотек на основе дрожжевого дисплея (пример 2), в отношении ингибирующей удельной активности антитела к PAC1, варианты получали с помощью способов рекомбинантной экспрессии в виде полных двухвалентных моноклональных антител и/или в виде одновалентных продуктов слияния Fab-Fc (например, Fab-области, слитой с димерной Fc-областью IgG) и оценивали в клеточном анализе cAMP, как описано более подробно ниже. Легкие цепи моноклональных антител и Fab-фрагментов содержали вариабельную область легкой цепи из указанного варианта антитела, слитую с константной областью легкой цепи каппа человека, содержащей последовательность под SEQ ID NO: 318 или SEQ ID NO: 319. Тяжелые цепи моноклональных антител и продуктов слияния Fab-Fc содержали вариабельную область тяжелой цепи из указанного варианта антитела, слитую с агликозилированной стабилизированной дисульфидными связями константной областью IgG1z человека, содержащей последовательность под SEQ ID NO: 325.

Последовательности вариантов антитела к PAC1 получали с помощью сайт-направленного мутагенеза (SDM) или с помощью сборки Golden Gate (GGA) в тех случаях, где SDM не приносил ожидаемого результата. При сайт-направленном мутагенезе использовали парные праймеры для мутагенеза, которые фланкировали сайт мутации. Реакции для осуществления ПЦР полного вектора проводили с применением матриц, представляющих собой двухнитевую плазмидную ДНК. Праймеры для всех требующихся в конкретном клоне мутаций объединяли в мастер-микс праймеров, при этом за отдельную реакцию происходило включение от одной до нескольких мутаций. После амплификации матричную плазмидную ДНК удаляли путем расщепления с помощью DpnI, эндонуклеазы, которая предпочтительно вносит разрывы в метилированную ДНК. Затем продуктом SDM трансформировали компетентные клетки для роста и скрининга с помощью секвенирования. Реакции для осуществления SDM проводили с применением набора QuikChange Lightning Multi Site-Directed Mutagenesis Kit (Agilent), следуя указаниям производителя.

Если SDM не приносил ожидаемого результата, использовали альтернативную стратегию клонирования. Вкратце, при GGA для разрезания и бесшовного лигирования друг с другом нескольких фрагментов ДНК использовали ферменты рестрикции II типа и ДНК-лигазу T4 (Engler et al., PLOS One, Vol. 3(11): e3647, 2008). В этом примере в состав нескольких фрагментов ДНК входили (i) синтетическая последовательность нуклеиновой кислоты (gBlock, Integrated DNA Technologies, Коралвилл, Айова), кодирующая консенсусную последовательность Kozak, последовательность сигнального пептида и последовательность вариабельной области антитела; (ii) фрагмент константного домена антитела, высвобожденный из вектора для экспрессии частей целевой молекулы; и (iii) остов вектора экспрессии. Реакционные смеси для GGA состояли из 10 нг gBlock, 10 нг вектора для экспрессии части целевой молекулы, 10 нг вектора экспрессии, 1 мкл 10x реакционного буфера Fast Digest+0,5 мМ АТФ (Thermo Fisher, Уолтем, Массачусетс), 0,5 мкл Esp3I FastDigest (Thermo Fisher, Уолтем, Массачусетс), 1 мкл ДНК-лигазы T4 (5 МЕ/мкл, Thermo Fisher, Уолтем, Массачусетс) и воды для доведения до 10 мкл. Реакции проводили в ходе 15 циклов, состоящих из стадии расщепления при 37°C продолжительностью 2 минуты и стадии лигирования при 16°C продолжительностью 3 минуты. После 15 циклов следовала конечная стадия расщепления при 37°C продолжительностью 5 минут и стадия инактивации фермента при 80°C продолжительностью 5 минут.

После клонирования полипептиды антитела к PAC1, из которых первые 22 аминокислоты представляли собой сигнальный пептид VK1 (MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARC; SEQ ID NO: 486), получали с помощью транзиентной трансфекции клеток HEK 293 соответствующими cDNA. Клетки при концентрации 1,5×106 клеток/мл трансфицировали с помощью 0,5 мг/л ДНК (0,5 мг/л PAC1 в векторе pTT5) или (0,1 мг/л PAC1 в векторе pTT5 с 0,4 мг/л пустого вектора pTT5) (Durocher et al., NRCC, Nucleic Acids. Res., Vol.30: e9, 2002) с 4 мл PEI/мг ДНК в среде F17 (Thermo Fisher). Через 1 час после трансфекции к культурам добавляли дрожжевой экстракт и глюкозу, и затем клетки выращивали в суспензии с применением среды для экспрессии F17 с добавлением 0,1% коллифора, 6 мМ L-глутамина и 50 мкг/мл генетицина в течение 6 дней, после чего кондиционированные среды собирали для очистки.

Варианты антитела к PAC1 очищали от кондиционированных сред с применением аффинной хроматографии с белком A (MabSelect SuRe, GE Healthcare Life Sciences, Литл Чалфонт, Бакингемшир, Великобритания) с последующей катионообменной хроматографией (колонки SP Sepharose High Performance (SP HP) (GE Healthcare Life Sciences). Концентрацию белка каждого очищенного пула определяли по поглощению в УФ-диапазоне при 280 нм (A280) с применением NanoDrop 2000 (Thermo Fisher Scientific, Рокфорд, Иллинойс, США). Очищенные пулы диализировали против 2 л 10 мМ ацетата натрия, 9% сахарозы, pH 5,2 (A52Su) с применением колб для диализа Slide-A-Lyzer с MWCO 20 кДа (Thermo Fisher Scientific) в течение 2 часов при 4°C с осторожным перемешиванием на плите магнитной мешалки. Использованный диализат декантировали, добавляли 2 л свежего A52Su, и диализ продолжали в течение ночи. После диализа образцы концентрировали с применением ультрафильтрационных концентраторов с MWCO 30 кДа (Thermo Fisher Scientific), которые концентрировали при 2000 x g посредством бакет-ротора, пока концентрация каждого образца не составляла примерно 40 мг/мл исходя из измерения A280. Конечные продукты анализировали в отношении чистоты главного пика с применением микрокапиллярного электрофореза посредством системы Caliper LabChip GXII (PerkinElmer, Уолтем, Массачусетс, США) и эксклюзионной хроматографии с применением колонки ACQUITY UPLC Protein BEH SEC, 200 Å, 4,6×300 мм (Waters Corporation, Милфорд, Массачусетс, США). Содержание эндотоксинов измеряли с применением Endosafe-MCS (Charles River, Уилмингтон, Массачусетс, США) и картриджей для PTS 0,05 ЕЭ/мл (Charles River).

Функциональную активность очищенных моноклональных антител или слитых белков Fab-Fc оценивали с применением клеточного анализа активности рецептора PAC1 на основе содержания cAMP. Как PACAP38, так и PACAP27 являются агонистами рецептора PAC1, активация которого приводит в результате к повышению внутриклеточного содержания cAMP. В анализе использовали линию клеток, происходящую из нейробластомы человека (SH-SY5Y; Biedler JL et al., Cancer Res., Vol. 38: 3751-3757, 1978), полученную из ATCC (номер по ATCC CRL-2266; "клетки CRL-2266"). Клетки CRL-2266 экспрессируют рецептор PAC1 человека эндогенно (Monaghan et al., J Neurochem., Vol. 104(1): 74-88, 2008). Кроме того, линию клеток CHO, стабильно экспрессирующую рецептор PAC1 крысы (№ доступа в GenBank NM_133511.2) или рецептор PAC1 яванского макака (эталонная последовательность в NCBI XP_015303041.1), применяли вместо клеток CRL2266 для анализов, чтобы оценить наличие межвидовой перекрестной реактивности у антител или продуктов слияния Fab-Fc к PAC1 по рецепторам PAC1 крысы и яванского макака. Для измерения содержания cAMP применяли набор для анализа cAMP LANCE Ultra (PerkinElmer, Бостон, Массачусетс).

В день анализа замороженные клетки CRL-2266 размораживали при 37°C и один раз промывали с помощью буфера для анализа. 10 мкл клеточной суспензии, содержащей 2000 клеток, добавляли в 96-луночные белые микропланшеты с половинным объемом лунок. После добавления 5 мкл варианта моноклонального антитела или слитого белка Fab-Fc к PAC1 (кривая зависимости "доза-эффект", построенная по 10 точкам: концентрация находится в диапазоне от 1 мкМ до 0,5 фМ) смесь инкубировали в течение 30 мин. при комнатной температуре. Затем в качестве агониста добавляли 5 мкл PACAP38 человека (конечная концентрация 10 пМ), и смесь дополнительно инкубировали в течение 15 мин. при комнатной температуре. После стимуляции с помощью PACAP38 человека добавляли 20 мкл смеси для выявления и инкубировали в течение 45 минут при комнатной температуре. Планшеты считывали на приборе EnVision (PerkinElmer, Бостон, Массачусетс) при длине волны излучения 665 нм. Данные обрабатывали и анализировали с помощью Prizm (GraphPad Software Inc.) с отображением POC (процент контроля, где контроль определен как активность агониста, применяемого в анализе) в виде функции от испытуемой концентрации антагониста (например, варианта антитела или слитого белка Fab-Fc к PAC1) и аппроксимировали с помощью стандартных кривых нелинейной регрессии с получением значений IC50. POC рассчитывали следующим образом:

Одновалентные слитые белки Fab-Fc получали с помощью мутаций, кратко описанных в таблицах 6 и 7, и испытывали в отношении функциональной активности в клеточном анализе cAMP, описанном выше. Мутантные варианты слитых белков Fab-Fc разделяли на две отдельные группы: мутации, которые обеспечивают улучшение ингибирующей удельной активности в отношении рецептора PAC1 человека по сравнению с исходной молекулой, и мутации, определенные как нейтральные (таблица 11). Мутации определяли как нейтральные, если мутация характеризовалась средней удельной активностью, являющейся менее чем в 1,5 раза слабее, чем таковая для исходной молекулы, и по меньшей мере одним значением удельной активности, являющимся выше, чем у исходной молекулы в одном и том же цикле.

Таблица 11. Ингибирующая удельная активность in vitro отдельных мутантных вариантов слитых белков Fab-Fc
ID № слитого белка Fab-Fc Мутации1 IC50 (нМ)
Мутации, обеспечивающие улучшенную удельную активность
Слитая исходная молекула Fab-Fc 29G4v10 - 10,37
PL-45360 LC Q27K 4,52
PL-45362 LC Q27R 6,32
PL-45398 HC D54N 1,78
PL-45399 HC D54I 2,48
PL-45400 HC D54L 3,11
PL-45405 HC D54Q 3,46
PL-45397 HC D54Y 3,62
PL-45406 HC G56R 2,81
PL-45407 HC G56N 7,98
PL-45408 HC G56H 9,46
PL-45402 HC G56S 9,49
PL-45415 HC E62R 4,27
PL-45418 HC V102I 9,68
Нейтральные мутации
Слитая исходная молекула Fab-Fc 29G4v10 - 10,37
PL-45370 LC S91T 15,19
PL-45377 LC L94R 11,05
PL-45386 HC R31K 12,12
PL-45401 HC G55A 12,58
PL-45410 HC N57R 11,63
PL-45420 HC T104H 11,29
PL-45420 HC T104S 13,36
1Аминокислотные положения в случае легкой цепи (LC) указаны относительно SEQ ID NO: 52, и аминокислотные положения в случае тяжелой цепи (HC) указаны относительно SEQ ID NO: 191.

Мутации, которые обеспечивали повышение ингибирующей удельной активности в отношении рецептора PAC1 человека, лежали в трех различных областях трехмерного пространства на поверхности антитела. Второй раунд вариантов антитела и слитых белков Fab-Fc получали путем объединения мутаций в этих трех областях для потенциального обеспечения дополнительного повышения удельной активности. Кроме того, включали некоторые из нейтральных мутаций, поскольку существовала вероятность, что они не будут оказывать существенного влияния на связывание, однако могут обеспечивать механизмы для модифицирования биофизических характеристик антитела. Вариабельные области, содержащие требующиеся мутации, включали в двухвалентное моноклональное антитело, содержащее агликозилированную Fc-область IgG1 человека и/или одновалентный слитый белок Fab-Fc. Fc-область агликозилированного IgG1-антитела человека содержала последовательность Fc-области IgG1z человека с мутациями N297G, R292C и V302C согласно нумерации EU (SEQ ID NO: 325). Варианты антитела и слитые белки Fab-Fc с комбинациями мутаций оценивали в отношении функциональной активности в клеточном анализе cAMP. Результаты показаны в таблице 12 ниже.

Таблица 12. Ингибирующая удельная активность in vitro вариантов антитела и слитых белков Fab-Fc
Замещения по отношению к последовательности VL 29G4v10 (SEQ ID NO: 52) Замещения по отношению к последовательности VH 29G4v10 (SEQ ID NO: 191) Функциональная активность mAb
(двухвалентное связывание мишени)
Функциональная активность слитого белка Fab-Fc
(одновалентное связывание мишени)
ID варианта Ab CDR1 LC CDR2 LC CDR3 LC CDR1 HC CDR2 HC CDR3 HC IC50 (SD) в нМ Кратное увели-чение относи-тельно исходного
(в планшете)1
Кратное увели-чение относи-тельно исходного (сред.)2 IC50 (SD) в нМ Кратное увеличение относительно исходного
(в планшете)1
Кратное увеличение относительно исходного (сред.)2
iPS:420649 Q27K - - - D54N - 0,18 (0,04) 6,4 4,3 0,71
(0,09)
10,5 12,9
iPS:420653 Q27K - - - D54I - 0,18 (0,06) 6,4 4,3 0,99
(0,13)
8,1 9,2
iPS:420657 Q27K - - - D54Q - 0,29 (0,05) 2,5 2,7 0,87
(0,23)
9,2 10,4
iPS:420661 Q27K - - - D54Y - 0,21
(0,05)
3,4 3,7 1,83
(0,28)
4,4 5,0
iPS:420665 Q27K - - - G56R - 0,44
(0,19)
1,7 1,8 1,94
(0,50)
4,1 4,7
iPS:420672 Q27K - - - G56N - 1,04
(0,50)
0,7 0,7 3,17
(0,97)
2,5 2,9
iPS:420679 Q27K - - - E62R - 0,47
(0,22)
1,6 1,7 1,34
(0,31)
6,0 6,8
iPS:420686 Q27K - - - - V102I 0,78
(0,39)
0,9 1,0 1,92
(0,19)
4,2 4,7
iPS:420690 - - - - D54N;
G56R
- 0,16
(0,02)
4,4 4,8 1,86
(0,17)
3,6 4,9
iPS:420697 - - - - D54I;
G56R
- 0,20
(0,06)
3,4 4,0 1,48
(0,48)
4,5 6,1
iPS:420704 - - - - D54Q;
G56R
- 0,18
(0,05)
3,7 4,4 2,00
(0,20)
3,4 4,5
iPS:420711 - - - - D54Y;
G56R
- 0,45
(0,29)
1,5 1,7 3,45
(0,13)
1,9 2,6
iPS:420718 - - - - D54N;
G56N
- 0,60
(0,21)
1,1 1,3 3,33
(0,63)
2,0 2,7
iPS:420725 - - - - D54I;
G56N
- 0,56
(0,04)
1,2 1,4 4,06
(0,58)
1,7 2,2
iPS:420732 - - - - D54Q;
G56N
- 0,74
(0,18)
0,9 1,1 1,82
(0,32)
3,7 5,0
iPS:420739 - - - - D54Y;
G56N
- 0,63
(0,13)
1,1 1,2 2,76
(0,34)
2,9 3,3
iPS:420746 - - - - D54N;
E62R
- 0,18
(0,04)
4,2 4,4 0,81
(0,13)
9,8 11,3
iPS:420753 - - - - D54I;
E62R
- 0,16
(0,05)
4,8 5,0 1,55
(0,11)
5,1 5,9
iPS:420760 - - - - D54Q;
E62R
- 0,32
(0,06)
2,4 2,5 2,70
(0,85)
2,9 3,4
iPS:420767 - - - - D54Y;
E62R
- ND ND ND 1,49
(0,54)
5,3 6,1
iPS:420774 - - - - D54N V102I 0,69
(0,30)
1,1 1,1 1,04
(0,20)
7,6 8,7
iPS:420781 - - - - D54I V102I 0,40
(0,05)
1,9 1,9 1,81
(0,43)
4,4 5,0
iPS:420788 - - - - D54Q V102I 0,46
(0,17)
1,6 1,7 1,59
(0,83)
6,0 5,7
iPS:420795 - - - - D54Y V102I 0,50
(0,09)
1,5 1,5 4,25
(1,91)
2,3 2,1
iPS:420802 - - - - G56R;
E62R
- 0,17
(0,05)
3,9 4,6 1,51
(0,01)
6,4 6,0
iPS:420809 - - - - G56N;
E62R
- 0,77
(0,20)
0,9 1,0 2,51
(0,28)
3,8 3,6
iPS:420816 - - - - G56R V102I 0,50
(0,07)
1,3 1,6 2,44
(0,43)
3,9 3,7
iPS:420823 - - - - G56N V102I 1,41
(0,42)
0,5 0,6 2,30
(0,42)
4,2 3,9
iPS:420830 - - - - E62R V102I 0,91
(0,64)
0,7 0,9 1,73
(0,16)
5,5 5,3
iPS:420837 Q27K - - - D54N;
G56R
- 0,21
(0,10)
3,2 3,7 0,67
(0,18)
12,4 13,5
iPS:420841 Q27K - - - D54I;
G56R
- 0,14
(0,00)
6,1 5,6 0,69
(0,10)
12,0 13,1
iPS:420845 Q27K - - - D54Q;
G56R
- 0,12
(0,04)
7,5 6,8 0,83
(0,14)
10,1 10,9
iPS:420849 Q27K - - - D54Y;
G56R
- 0,22
(0,04)
4,0 3,6 1,73
(0,74)
4,8 5,2
iPS:420853 Q27K - - - D54N;
G56N
- 0,39
(0,06)
2,2 2,0 1,93
(0,73)
4,3 4,7
iPS:420857 Q27K - - - D54I;
G56N
- 0,47
(0,13)
1,8 1,7 1,94
(0,27)
4,3 4,7
iPS:420861 Q27K - - - D54Q;
G56N
- 0,43
(