Способ определения чувствительности бактерий к антисептическим средствам в растворе

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ определения чувствительности бактерий к антисептическим средствам в растворе, включающий подготовку взвеси культуры микроорганизма, выделенного и идентифицированного из клинического материала пациента или из окружающей среды, с разведением 1,5×10⁵; пробирку с 0,1 мл микробной взвеси ставят в водяную баню-термостат при 32°С, вносят в нее 0,9 мл антисептического средства, перемешивают и оставляют в этих условиях на время, указанное производителем препарата антисептика в инструкции, с последующим добавлением 0,5 мл нейтрализатора; затем 0,1 мл полученной смеси высевают на твердую питательную среду и проводят подсчет числа колоний. По количеству колоний либо отсутствию роста бактерий делают вывод об устойчивости исследуемой культуры микроорганизма к тестируемому антисептику. Изобретение обеспечивает расширение арсенала способов определения чувствительности бактерий к антисептическим средствам в растворе, повышение точности определения за счет создания условий, моделирующих условия реального применения кожного антисептика. 2 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к бактериологии, эпидемиологии, дезинфектологии, и может быть использовано для изучения чувствительности бактерий к антисептическим средствам с различными действующими веществами.

Накопленный за десятилетия опыт работы с антимикробными препаратами позволяет достоверно утверждать, что к любому из них рано или поздно микроорганизм приобретет устойчивость. В настоящее время значительные силы научного сообщества брошены на изучение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам. Однако согласно актуальным научным данным проблему резистентности бактерий к антимикробным препаратам необходимо рассматривать комплексно, в том числе и с вниманием к её отдельным составляющим, а именно к исследованию чувствительности-резистентности возбудителей инфекций к антисептикам, традиционно используемых для обработки кожного покрова и слизистых.

Нарастающее количество сообщений о фактах выделения антибиотикорезистентных штаммов микроорганизмов, необоснованная стратегия и тактика применения антибиотиков, неэффективность или невозможность применения антибиотиков для коморбидных пациентов в целом, необходимость применения местной антимикробной терапии - все эти факторы способствуют поиску, в том числе эффективного местного антимикробного лечения, профилактики. Проблема резистентности микроорганизмов к антисептикам серьезно ослабляет позиции данной терапии и профилактики в лечебно-диагностическом процессе. Проявления нечувствительности бактерий к данным бактериоцидам снижает эффективность проводимых противоэпидемических мероприятий. В отечественной и зарубежной медицинской литературе последних лет неоднократно описывались случаи недостаточной эффективности противоэпидемических мероприятий, связанные с формированием устойчивости микроорганизмов к дезинфектантам и антисептикам, что способствует поддержанию высокого уровня заболеваемости инфекциями, связанными с оказанием медицинской помощи (ИСМП).

В принятой Правительством РФ «Стратегии предупреждения распространения антимикробной резистентности в РФ на период до 2030 года» в рамках ограничения распространения антимикробной устойчивости четко сформулированы такие цели и задачи как, совершенствование мер по предупреждению и ограничению распространения и циркуляции возбудителей с антимикробной резистентностью; обеспечение системного мониторинга распространения антимикробной резистентности. Федеральный закон от 30 декабря 2020 г. N 492-ФЗ "О биологической безопасности в Российской Федерации" относит распространение резистентности, как способности патогенов противостоять воздействию лекарственных, химических и (или) биологических средств, к основным биологическим угрозам. Меры по предупреждению и преодолению резистентности включены в комплекс мер, направленных на защиту населения и охрану окружающей среды от воздействия опасных биологических факторов, на предотвращение биологических угроз (опасностей), создание и развитие системы мониторинга биологических рисков.

Реализация поставленных задач в полной мере может быть осуществима только в условиях полноценного методического сопровождения проблемного вопроса устойчивости микроорганизмов к антисептикам. А именно при наличии единой унифицированной методики детекции чувствительности к данным биоцидам.

Стандартизация методики определения чувствительности-резистентности к антисептикам складывается из следующих компонентов [1], позволяющих нивелировать действие случайных и систематических ошибок:

1) проведение этапа нейтрализации резидуального эффекта биоцидного препарата;

2) продолжительность in vitro взаимодействия испытуемого штамма и биоцидного препарата;

3) плотность микробной суспензии;

4) условия in vitro взаимодействия испытуемого штамма и биоцидного препарата;

5) шаг разведения биоцидного препарата и необходимое количество повторений определений.

На федеральном уровне нет унифицированных методик, оценивающих именно чувствительность микроорганизмов к кожным антисептикам. Наиболее распространенными являются способы, в которых оценивается эффективность антисептического средства. Так в Руководстве 4.2.2643-10 [2] предлагается в лабораторных условиях проводить оценку эффективности различных групп антисептиков методом смыва с кожи рук, которые были искусственно контаминированы тест-микроорганизмами. В практических условиях медицинской организации рекомендуется оценивать эффективность обеззараживающего действия антисептиков, предназначенных для гигиенической обработки, для обработки рук хирургов, операционного и инъекционного полей методом смыва с кожи рук в отношении естественной микрофлоры. Подобный подход крайне неудобен для рутинной деятельности, так как создает определенные эпидемиологические риски для персонала при искусственной контаминации тест-микроорганизмами.

Для научно-практической деятельности разработано множество авторских методик, имеющих свои недостатки для рутинного применения в медицинских организациях. Например, способ, описанный в Методических рекомендация РФ 1100/25-0-17 «Определение чувствительности микроорганизмов к дезинфектантам и антисептикам методом диффузии в агар с использованием дисков» [3]. Принцип методики основывается на применении бумажных дисков, пропитанных различными антимикробными средствами (антибиотики, растворы дезинфицирующих или антисептических средств). Суть методики заключается в изучении зон задержки роста суточной культуры микроорганизма. Этапы методик коротко: в чашку Петри вливают мясопептонный агар с взвесью суточной культуры исследуемых микроорганизмов, на поверхность которой помещают бумажные диски, пропитанные биоцидными средствами. После инкубации в термостате производят учет результатов по размеру зоны задержки роста: штамм считают устойчивым при отсутствии зоны задержки роста; умеренно устойчивым - зона 5-6 мм; чувствительным - зона более 6 мм. Недостатки метода: отсутствие этапа нейтрализации не позволяет определить минимальную бактерицидную концентрацию; предложенные критерии для оценки чувствительности - устойчивости штаммов микроорганизмов неудобны, относительны и не валидированы; пропитка бумажных дисков является не валидированным трудо- и времязатратным действием в медицинской организации; в продаже отсутствуют заводские пропитанные дезинфектантами и антисептиками бумажные диски; некоторыми формами выпуска антисептиков (например, гелями) трудно пропитать бумажные диски.

Другим примером авторской методики является способ определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным веществам [4], суть которого заключается в том, что чувствительность невыделенных и неидентифицированных микроорганизмов, содержащихся в биологическом материале, изучают в плотной богатой питательной среде с введенным в нее тестируемым антимикробном веществом. Исследуемое антимикробное вещество вводят в питательную среду до начала культивирования микроорганизмов в концентрации, близкой к максимально достижимой в месте забора биологического материала. Оценку чувствительности микроорганизмов к антимикробному веществу осуществляют после появления видимого роста микроорганизмов в контрольном посеве. Недостатки метода: отсутствует этап нейтрализации; продолжительность in vitro взаимодействия испытуемого штамма и биоцидного препарата определяется скоростью роста микроорганизма; данный метод не позволяется дать полноценную микробиологическую характеристику госпитальному штамму микроорганизма, тем самых отсутствует полноценная реализация микробиологического мониторинга.

Известен способ определения чувствительности микроорганизмов к дезинфицирующему средству (варианты) [5]. В способе предусматривается следующее: взвесь микроорганизмов заданной мутности смешивают в пробирке с дезинфицирующим средством или в случае нанесения на поверхность полученной взвеси, дают этой поверхности подсохнуть и наносят дезинфицирующее средство. Добавив дезинфицирующее средство, проводят экспозицию полученной смеси в течение времени, известного для данного дезинфицирующего средства. После этого, добавляют в пробирку или наносят на поверхность нейтрализатор дезинфицирующего средства. Затем, высевают полученную взвесь на твердую питательную среду, а в случае нанесения на поверхность, предварительно проводят экспозицию, после которой смывают полученную смесь с поверхности тампоном и проводят посев полученной смеси при помощи тампона на твердую питательную среду. О чувствительности микроорганизмов к дезинфицирующему средству судят по росту микроорганизмов на питательной среде, проводя подсчет выросших колоний с количественной градацией полученного результата.

Недостаток способа [5], наиболее близкого к заявляемому по технической сущности, достигаемому результату и выбранному в качестве прототипа для настоящего изобретения, в реализации задачи определения чувствительности бактерий к антисептикам состоит в следующем: не учитываются внешние условия применения кожных антисептиков, т.е. в методике отсутствует моделирование практических температурных условий использования антисептика - дезинфицирующее средство смешивается с бактериальной взвесью при комнатной температуре, а не при температуре кожного покрова человека, что может искажать результаты проведения эксперимента, так как есть несоответствие практических и лабораторных условий взаимодействия микроорганизма и препарата.

Указанный недостаток значительно снижает эффективность способа.

Кожные антисептики имеют достаточно ограниченную область применения - различные участки кожного покрова человека. Бактерицидный эффект данных биоцидов реализуется непосредственно на кожном покрове человека, то есть в том числе в условиях определенной температуры. По литературным данным известно, что средневзвешенная температура кожного покрова человека составляет 32±1,0°С [6]. Температурные характеристики кожи человека - основной поверхности взаимодействия антисептического средства с кожной микрофлорой - важно учитывать при разработке методик определения чувствительности бактерий к антисептикам в контексте создания оптимальных условий in vitro взаимодействия испытуемого штамма и биоцидного препарата.

Задачи заявляемого решения - усовершенствование способа для определения чувствительности бактерий к антисептикам, своевременной идентификации микроорганизмов резистентных к антисептику с последующей его ротацией.

Технический результат, достигаемый при использовании предлагаемого способа - расширение арсенала технических средств, используемых микробиологической лабораторией для определения чувствительности бактерий к антисептическим средствам в растворе, повышение точности определения за счет создания условий, моделирующих условия реального применения кожного антисептика.

Технический результат, достигается тем, что в растворе готовят взвесь культуры микроорганизма, выделенного и идентифицированного из клинического материала пациента или из окружающей среды, по стандарту мутности 0,5 единиц МакФарланда; методом последовательных десятикратных разведений стерильным изотоническим раствором хлорида натрия доводят микробную взвесь до разведения 1,5×10⁵; в стеклянную пробирку вносят 0,1 мл микробной взвеси, затем пробирку со взвесью ставят в водяную баню-термостат, при температуре 32°С в пробирку со взвесью вносят 0,9 мл антисептического средства, перемешивают несколько секунд, пробирку со смесью оставляют в водяной бане-термостате при температуре 32°С; время нахождения пробирки в водяной бане-термостате зависит от времени, указанном производителем препарата в инструкции, как время втирания антисептика в кожу рук медицинского персонала, кожу пациента до полного высыхания (обычно это время составляет не менее 30 сек), по истечении времени экспозиции антисептика в пробирку вносят 0,5 мл нейтрализатора и перемешивают встряхиванием, высевают на твердую питательную среду (МПА) 0,1 мл смеси, инкубируют в термостате при температуре 37°С 18-24 ч, для антисептиков класса А (для обработки кожи операционного поля пациента) и класса Б - в случае роста 1 и более колоний делают вывод об устойчивости исследуемой культуры микроорганизма к тестируемому антисептику, при отсутствии роста бактерий - о чувствительности микроорганизма к антисептику; для антисептиков класса А (для обработки кожи инъекционного поля пациента) и класса В - в случае роста 51 и более колоний делают вывод об устойчивости исследуемой культуры микроорганизма к тестируемому антисептику, при росте 50 и менее колоний - о чувствительности микроорганизма к антисептику.

Способ осуществляют следующим образом:

Выполняют выделение и идентификацию микроорганизма из клинического материала или из смыва с объекта внешней среды. Готовят бактериальную взвесь из культуры изучаемого микроорганизма, выращенной на плотной питательной среде при температуре 37°С в течение 18-24 часов, путем смыва 0,9% стерильным изотоническим раствором хлорида натрия. Бактериальную взвесь доводят до мутности, соответствующей концентрации 1,5×10⁸ клеток/мл, что соответствует 0,5 единицам МакФарланда (измерение денситометром согласно данным фирмы-изготовителя стандартов МакФарланда bioMerieux). Методом последовательных десятикратных разведений стерильным изотоническим раствором хлорида натрия доводят микробную взвесь до разведения 1,5×10⁵. В стеклянную пробирку вносят 0,1 мл микробной взвеси, затем пробирку со взвесью ставят в водяную баню-термостат, где установлена температура 32°С. Тестируемое антисептическое средство перед проведением эксперимента не переливают из заводской упаковки, не разбавляют. В пробирку со взвесью вносят 0,9 мл антисептика, перемешивают несколько секунд, пробирку со смесью оставляют в водяной бане-термостате при температуре 32°С на время, указанное производителем препарата в инструкции, как время втирания антисептика в кожу рук до полного высыхания (обычно это время составляет не менее 30 сек), по истечении времени экспозиции антисептика в пробирку вносят 0,5 мл нейтрализатора и перемешивают встряхиванием. Согласно действующему Руководству 4.2.2643-10 [2] для нейтрализации антимикробного действия дезинфицирующих средств из различных химических групп применяют следующие нейтрализаторы: для средств из группы окислителей (галоидсодержащие, окислители, средства, содержащие надуксусную кислоту, озон) - 0,5-1% растворы тиосульфата натрия; - для альдегид- и фенолсодержащих средств - воду; универсальный нейтрализатор, содержащий твин-80 - 3%, сапонин - 3%, гистидин - 0,1% и цистеин - 0,1%; - для катионных поверхностно-активных веществ - 0,1-1,0% растворы сульфонола или 0,5-1,0% растворы сульфонола с 10% обезжиренного молока.

После экспозиции нейтрализатора 0,1 мл смеси высевают на твердую питательную среду (мясо-пептонный агар), инкубируют в термостате при температуре 37°С 18-24 ч.

После заданного времени инкубации подсчитывают выросшие колонии и дифференцировано в зависимости от класса антисептика (согласно МУ 3.5.1.3674-20. 3.5.1.) [7] делают вывод об устойчивости исследуемой культуры микроорганизма к тестируемому антисептику:

- для антисептиков класса А: тестируемый препарат предназначен для обработки кожи операционного поля пациента) - в случае роста 1 и более колоний делают вывод об устойчивости исследуемой культуры микроорганизма к тестируемому антисептику, при отсутствии роста бактерий - о чувствительности микроорганизма к антисептику; тестируемый препарат предназначен для обработки кожи инъекционного поля пациента - в случае роста 51 и более колоний делают вывод об устойчивости исследуемой культуры микроорганизма к тестируемому антисептику, при росте 50 и менее колоний - о чувствительности микроорганизма к антисептику;

- для антисептиков класса Б (для обработки рук хирургов и других медицинских работников, участвующих в выполнении оперативных и иных инвазивных вмешательств) - в случае роста 1 и более колоний делается вывод об устойчивости исследуемой культуры микроорганизма к тестируемому антисептику, при отсутствии роста бактерий - о чувствительности микроорганизма к антисептику;

- для антисептиков класса В (для гигиенической обработки кожных покровов) - в случае роста 51 и более колоний делается вывод об устойчивости исследуемой культуры микроорганизма к тестируемому антисептику, при росте 50 и менее колоний - о чувствительности микроорганизма к антисептику.

Параллельно с проведением опыта ставят контроли:

1) Контроль жизнеспособности микроорганизма;

2) Контроль антисептика без добавления культуры;

3) Контроль полноты нейтрализации антисептика.

Необходимость использования определенных количественных отличительных интерпретационных признаков в предлагаемом способе обеспечивает возможность количественной оценки чувствительности и возможность использования дифференцированных критериев, соответствующих современной нормативно-методической базе [7]. Количественные критерии оценки обоснованы следующими проведенными авторами расчетами.

Готовится взвесь микроорганизмов 0,5 единиц по стандарту мутности МакФарланда (это значит, что в 1 мл взвеси содержится 1,5×10⁸ микробных клеток). Методом последовательных десятикратных разведений стерильным изотоническим раствором хлорида натрия доводят микробную взвесь до разведения 1,5×10⁵. Микробную взвесь объемом 0,1 мл смешивают с 0,9 мл антисептического средства (таким образом, общий объем смеси составляет 1 мл и содержит 1,5×10⁴ микробных клеток). Добавляется 0,5 мл нейтрализатора (таким образом, общий объем смеси составляет уже 1,5 мл и содержит 1,5×10⁴ микробных клеток). Из полученной смеси объемом 1,5 мл берется 0,1 мл (для высева на питательную среду). В этом объеме (0,1 мл) содержится в 15 раз меньше микробных клеток, чем в 1,5 мл (т.е. 0,1×10⁴ - это количество высевается на питательную среду).

Согласно МУ 3.5.1.3674-20. 3.5.1. Дезинфектология. Обеззараживание рук медицинских работников и кожных покровов пациентов при оказании медицинской помощи. Методические указания (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 14.12.2020) [7] антисептики класса А для обработки операционного поля обеспечивают снижение общей микробной обсемененности не менее чем на 100%, антисептики класса А для обработки кожи инъекционного поля пациента обеспечивают снижение общей микробной обсемененности не менее чем на 95%; антисептики класса Б обеспечивают снижение общей микробной обсемененности не менее чем на 100%; антисептики класса В обеспечивают снижение общей микробной обсемененности не менее чем на 95%. Таким образом для определенных классов антисептиков допускается рост не более чем 5% микроорганизмов. В разрабатываемом способе было рассчитано количество микроорганизмов, допустимых к росту при взаимодействии с антисептическим средством.

В 0,1 мл смеси, высеваемой на питательную среду, содержится 0,1×10⁴ микроорганизмов (100%), допустим рост не более 5% общего количество микроорганизмов, т.е. 50 КОЕ. Таким образом допускается рост не более 50 КОЕ микроорганизма. При таком количестве выросших микроорганизмов дается вывод о чувствительности бактерий к тестируемому антисептику. При росте 51 КОЕ и более делается вывод о резистентности микроорганизма к тестируемому антисептику.

Кратность постановки эксперимента должна быть не менее трех (при условии получения однотипных результатов). При необходимости статистической обработки - не менее восьми.

Приводим экспериментально-лабораторные примеры использования предложенного способа.

Пример 1. В эксперименте использовался тест-штамм S.aureus №906 с известными фенотипическими свойствами. Тестируемый антисептик композиционный препарат, содержащий четвертичные аммониевые соединения (ЧАС) и амины [N,N-бис-(3-аминопропил) додециламин-0,17%, алкилдиметилбензиламмоний хлорид-0,25%, N,N-дидецил-N,N-диметиламмоний хлорид-0,2%]. Согласно инструкции производителя тестируемый антисептик можно применять для всех видов обработки кожного покрова, поэтому препарат можно отнести к универсальному. Оценка производилась по наиболее эпидемиологически важному назначению препарата (обработка операционного поля пациента), относящего препарат к классу А [7].

Была приготовлена бактериальная взвесь из культуры изучаемого микроорганизма, выращенной на плотной питательной среде при температуре 37°С в течение 18 часов, путем смыва 0,9% стерильным изотоническим раствором хлорида натрия. Бактериальная взвесь доведена до мутности, соответствующей концентрации 1,5×10⁸ клеток/мл, что соответствует 0,5 единицам МакФарланда (измерение денситометром согласно данным фирмы-изготовителя стандартов Мак-Фарланда bioMerieux). Методом последовательных десятикратных разведений стерильным изотоническим раствором хлорида натрия микробная взвесь доведена до разведения 1,5×10⁵. В стеклянную пробирку внесли 0,1 мл микробной взвеси, затем пробирку со взвесью поставили на водяную баню-термостат, где установлена температура 32°С; в пробирку со взвесью внесли 0,9 мл антисептического средства, перемешали несколько секунд, пробирку со смесью оставили в водяной бане-термостате при температуре 32С°; время экспозиции составляло 2 мин. По истечении времени к смеси добавили 0,5 мл универсального нейтрализатора, пробирку со смесью встряхнули, перемешали. После экспозиции нейтрализатора 0,1 мл смеси высевали на твердую питательную среду (мясо-пептонный агар), инкубировали в термостате при температуре 37°С 24 ч.

По истечении времени инкубации производился подсчет выросших колоний. В данном эксперименте на твердой питательной среде выросло 0 колоний, что для выбранного класса препарата можно трактовать как отсутствие резистентности (полная чувствительность) у S.aureus №906 к тестируемому препарату.

Пример 2. От пациента с инфекцией, связанной с оказанием медицинской помощи (нагноение место выхода периферического венозного катетера), был взят клинический материал - раневое отделяемое), в лабораторных условиях произошло выделение, идентификация, изучение фенотипических свойств клинического штамма, а именно был выделен Pseudomonas aeruginosa, проявлявший свойства полирезистентности к антибиотикам Тестируемый антисептик содержит в своем составе в качестве действующих веществ полигексаметиленгуанидин гидрохлорид (0,40±0,04%) и дидецилдиметиламмоний хлорид (0,20±0,02%) .

В данном случае тестирование антисептика происходило с целью поиска факторов передачи возбудителя гнойно-септической инфекции пациенту в условиях оказания медицинской помощи и условий, способствующих возникновению данной инфекции. Тестируемый антисептический препарат применялся медицинским персоналом для гигиенической обработки рук при работе с внутривенным катетером, т.е. отнесен к классу В[7].

Культура микроорганизма, выращенная на плотной питательной среде в течение 24 часов до эксперимента, смывалась стерильным изотоническим раствором хлорида натрия. Бактериальная суспензия микроорганизма доводилась до мутности, соответствующей 0,5 единицам МакФарланда, методом последовательных десятикратных разведений доведена до разведения 1,5×10⁵. В стеклянную пробирку внесли 0,1 мл микробной взвеси, затем пробирку со взвесью поставили на водяную баню-термостат, где установлена температура 32°С; в пробирку со взвесь внесли 0,9 мл антисептического средства, перемешали несколько секунд, пробирку со смесью оставили в водяной бане-термостате при температуре 32°С; время экспозиции 30 сек. По истечении времени к смеси было добавлено 0,5 мл универсального нейтрализатора, пробирку со смесью встряхнули, перемешали. После экспозиции нейтрализатора 0,1 мл смеси высевали на твердую питательную среду (мясо-пептонный агар), инкубировали в термостате при температуре 37°С 24 ч.

По истечении времени инкубации произвели учет результатов. За время инкубации на твердой питательной среде выросло 68 КОЕ P.aeruginosa. Согласно критериям оценки для антисептиков класса В был сделан результат о нечувствительности данного микроорганизма к тестируемому антисептику.

Проведенные экспериментально-лабораторные исследования позволяют говорить о следующих преимуществах заявляемого изобретения:

1) преимуществом заявленного способа является сам методологический подход, исключающий контаминацию рук исследователя микробной флорой, как предлагается в других методах, что существенно повышает эпидемиологическую безопасность проводимого эксперимента;

2) строгий количественный подход в объемах вносимых реактивов и учете результатов позволяет нивелировать долю случайной ошибки в исследовании и стандартизовать условия эксперимента;

3) возможность проводить исследования с несколькими антисептическими препаратами, так как в практических условиях медицинской организации зачастую используется несколько средств даже в рамках одного подразделения;

4) в способе предусмотрен этап нейтрализации, позволяющий моделировать строгие условия эксперимента и изучать эффект от воздействия антисептика (снижение обсемененности) за определенное время (заявленное производителем препарата);

5) данный способ прост для исполнения в рутинной практике и экономичен;

6) градация полученных результатов по классу тестируемого препарата позволяет дифференцировано подходить к интерпретации и выводам о чувствительности микроорганизмов к антисептикам.

Способ определения чувствительности бактерий к антисептическим средствам в растворе, отличается наличием возможности исследовать свойства микроорганизмов к антисептическим препаратам без нанесения микробной взвеси на руки исследователя, при этом моделируются температурные условия, близкие к параметрам кожного покрова человека; возможностью стандартизации параметров проведения эксперимента; возможностью изучать любые штаммы микроорганизмов (стандартные тест-штаммы и госпитальные штаммы); возможностью интерпретировать полученный результат основываясь на современной нормативной базе.

Литература:

1. Методологические проблемы определения чувствительности микроорганизмов к дезинфектантам и антисептикам / Косякова К.Г. // Клинико-лабораторный консилиум. - 2014. - № 1 (48). - С. 67-70.

2. РУКОВОДСТВО Р 4.2.2643-10 Дезинфектология. Методы лабораторных исследований и испытаний дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности.

3. Определение чувствительности микроорганизмов к дезинфектантам и антисептикам методом диффузии в агар с использованием дисков. МР 1100/25-0-17. Сост. Н.В. Зубчонок, Е.С. Ясная [и др.], утв. МЗ РФ от 10.01.2000 г.

4. Способ определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным веществам. Тец В.В., Тец Г.В. Патент на изобретение RU 2505813 C1, 27.01.2014. Заявка № 2012147280/15 от 06.11.2012.

5. Способ определения чувствительности микроорганизмов к дезинфицирующему средству (варианты). Шкарин В.В., Ковалишена О.В., Благонравова А.С., Ермольева С.А., Воробьева О.Н., Алексеева И.Г., Усачева С.Ю. Патент на изобретение RU 2378363 C1, 10.01.2010. Заявка № 2008123115/13 от 10.06.2008.

6. Gaifutdinov R.T., Ismagilov М.F., Khasanova D.R. Physiological mechanisms of thermoregulation, their disorders in cerebral autonomic dysregulation // Neurology Bulletin. - 1999. - Vol. XXXI. - N. 1-4. - P. 63-76. doi: 10.17816/nb80949.

7. МУ 3.5.1.3674-20. 3.5.1. Дезинфектология. Обеззараживание рук медицинских работников и кожных покровов пациентов при оказании медицинской помощи. Методические указания (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 14.12.2020).

Способ определения чувствительности бактерий к антисептическим средствам в растворе, включающий подготовку взвеси культуры микроорганизма, выделенного и идентифицированного из клинического материала пациента или из окружающей среды, по стандарту мутности 0,5 единиц МакФарланда, методом последовательных десятикратных разведений стерильным изотоническим раствором хлорида натрия доведение микробной взвеси до разведения 1,5×10⁵; смешивание в пробирке 0,1 мл этой взвеси с 0,9 мл дезинфицирующего средства и экспозицию полученной смеси, последующее добавление 0,5 мл нейтрализатора, забор 0,1 мл полученной смеси и высевание на твердую питательную среду, отличающийся тем, что пробирку с 0,1 мл микробной взвеси ставят в водяную баню-термостат, при температуре 32°С, затем в пробирку со взвесью вносят 0,9 мл антисептического средства, перемешивают несколько секунд, пробирку со смесью оставляют в водяной бане-термостате при температуре 32°С на время, указанное производителем препарата в инструкции, как время втирания антисептика в кожу рук медицинского персонала, кожу пациента до полного высыхания; по числу колоний, выросших на твердой питательной среде, для антисептиков класса А, используемых для обработки кожи операционного поля пациента, и класса Б в случае роста 1 и более колоний делают вывод об устойчивости исследуемой культуры микроорганизма к тестируемому антисептику; при отсутствии роста бактерий – о чувствительности микроорганизма к антисептику; для антисептиков класса А, используемых для обработки кожи инъекционного поля пациента, и класса В в случае роста 51 и более колоний делают вывод об устойчивости исследуемой культуры микроорганизма к тестируемому антисептику, при росте 50 и менее колоний – о чувствительности микроорганизма к антисептику.