Способ разведения хищных клещей семейства phytoseiidae и других таксонов надотряда parasitiformes с помощью селективно-направленного отбора
Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к биологическому способу защиты растений от вредителей, и может быть использовано при массовом разведении хищных клещей семейства Phytoseiidae и других таксонов надотряда Parasitiformes, которые применяются или являются перспективными в качестве агентов биологической защиты сельскохозяйственных культур, и представляет собой оптимизацию и усовершенствование этапов производства хищных клещей. Заявляемый способ заключается в выведении хищного клеща, который способен одинаково равнозначно и эффективно питаться как природным, так и альтернативными видами кормов, не теряя своих биологических и экологических показателей, благодаря осуществлению заявляемого способа разведения Phytoseiidae и других таксонов надотряда Parasitiformes с помощью селективно-направленного отбора, по которому растение-носитель заселяют вредителем, являющимся природным кормом для хищника, с целью его культивации, затем растения с накопленным вредителем заселяют хищником с его последующим селективным отбором по показателям наибольшей плодовитости и прожорливости, которого затем помещают на альтернативный сыпучий субстрат, где он питается альтернативными видами кормов для формирования адаптации с последующей культивацией хищника, при этом селекция и разведение природных видов кормов происходит единовременно с этапом направленного отбора и накоплением альтернативного корма, также параллельно совершается процесс селективного отбора хищника как на природном корме, так и на альтернативном с его дальнейшим производством. 1 ил., 2 табл., 2 пр.
Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к биологическому способу защиты растений от вредителей, и может быть использовано при массовом разведении хищных клещей семейства Phytoseidae и других таксонов надотряда Parasitiformes, которые применяются или являются перспективными в качестве агентов биологической защиты сельскохозяйственных культур, и представляет собой оптимизацию и усовершенствование этапов производства хищных клещей.
Биологический контроль подразумевает под собой использование живых организмов для борьбы с вредителями. Наиболее актуальным является введение в агроценоз определенного организма для регулирования численности другого, конкретного вида вредоносного организма. Чаще всего в качестве биологических агентов используют энтомофагов для борьбы с насекомыми-вредителями сельского хозяйства. На фоне отсутствия негативного влияния на здоровье человека и окружающую среду применение биоконтроля имеет долгосрочный результат, потому способ должен быть предпочтительнее в использовании по сравнению с другими методами борьбы (D.J. Greathead and J.K. Waage, 1983).
В тепличных хозяйствах применение энтомофагов достаточно актуально и стало основой для комплексных программ борьбы с вредителями, что связано с достаточно высокой резистентностью последних к пестицидам в закрытых экосистемах (George Lazarovits and all, 2007). Само же использование пестицидов на протяжении длительного времени привело к их негативному влиянию на целые популяции живых организмов (Köhler H.R, Triebskorn R, 2013). Ныне все больше потребителей сельскохозяйственной продукции настроены на получение качественного товара, не содержащего вредных компонентов, что еще раз подтверждает необходимость в использовании биологических методов защиты растений.
В тепличных хозяйствах агенты-энтомофаги используются против основных видов вредителей: тлей (Aphidoidea), трипсов (Thysanoptera), белокрылок (Aleyrodidae) и паутинных клещей (Tetranychidae). Коммерческая система массового разведения хищных клещей, представленных семейством Phytoseiidae и в целом надотряда Parasitiformes, направлена на получение максимально большого выхода хищника с использованием минимальных затрат на сам процесс.
Потому существует множество разработок в данной области, которые сводятся к основным этапам:
1. Поддержание чистоты вида хищного клеща (хищника);
2. Нахождение оптимального объекта-носителя, как среды, для жизнедеятельности хищника и кормовых видов (растений или сыпучего материала);
3. Определение кормовой базы (естественных либо альтернативных видов корма) для энтомо-акарифага;
Примером применения биологического способа является выращивание хищных клещей на растениях либо материале зараженных видами-жертвами (Brígida Souza Luis L. and all 2019) - производство фитосейид, при котором используются в качестве основы для жизнедеятельности растение-хозяин, подразумевает наличие трех изолированных друг от друга помещений: первое - теплица, где будут выращиваться растения (в основном представители семейства Fabaceae, либо другие экономически и технологически пригодные); второе – лаборатория, в которой достигшие возрастного оптимума растения заразят представителями кормовой базы для хищников; третье – непосредственно маточник, где произойдет заселение зараженных растений хищным клещом (Monteiro and all. 2008;).
Так, массовое разведение Neoseiulus californicus (Wei-Lan Ma and Laing, J.E., 1973) и Neoseiulus Reductus (Колодочка Л.А., Лысая E.A., 1976) осуществляется по методике разведения Phytoseiulus persimilis в теплицах на растениях-хозяевах с использованием природного источника питания – паутинного клеща. Массовое разведение включает в себя этапы производства, описанные выше, и завершается сбором хищных клещей, после чего отбирают наиболее подходящих представителей фитосейид с точки зрения специалиста-технолога, для разведения – запуска нового цикла производства. К недостаткам данного способа относится нестабильность количества произведенного акарифага (в зависимости от сезона с 1 м2 собирают от 13 до 40 тысяч особей хищника), длительный период его накопления (35-55 дней), а также в виду довольно энерго- и ресурснозатратной системы, которая не является экономически выгодной, потому существуют варианты разведения на сыпучих материалах.
Одним из наиболее известных способов промышленного разведения хищных клещей, а именно Amblyseius cucumeris, является способ по методике Г.А. Беглярова и Ф.А., Сучалкина (1985), который подразумевает внесение фитосейидного клеща на зараженный мучным клещом Acarus faris материал-носитель. Данный материал предварительно обеззараживают при температуре 45-50°С в течение 1 суток в термостате. Для разведения используют садки в виде кристаллизаторов различного объёма: в меньший помещают материал с Acarus faris слоем примерно 3 см, в больший – 15%-ный раствор КОН для обеспечения влажности в садках, после чего накрывают крышкой. После достаточного накопления кормового клеща в садки помещают хищника, который накапливается 40-60 дней, после чего отбираются особи хищного клеща для запуска новой системы. Очевидно, что в промышленных масштабах данный способ неэффективен в виду длительного срока накопления и небольшого выхода хищного клеща, а также достаточно трудоемкого процесса разведения. Предложенный усовершенствованный способ, описанный в патенте RU 2351126 C2, подразумевает сокращение времени наращивания Amblyseius cucumeris до 14-15 дней. Способ подразумевает наращивание мучного клеща на обеззараженном материале в виде отрубей до 9,5-10 тыс. особей/см3, который будет находиться в 3-х литровых банках, помещенных в кюветы-боксы, после чего происходит изъятие кормового клеща-хозяина, обеззараживание боксов и в отдельной комнате заражение Amblyseius cucumeris при соотношении 1:50-1:100 особей/см3 (100-130 особей/см3). Выход хищного клеща увеличивается на 48 % в конце цикла накопления, после чего отбираются наиболее подходящие представители особей фитосейид для запуска новой системы. Представленный способ включает в себя трудоемкие этапы разведения, такие как размещение в стеклянную тару, помещение в пластиковые боксы, обеззараживание данных емкостей, а также сбор хищных клещей в конце каждого цикла, при этом довольно небольшой прирост Amblyseius cucumeris и длительный срок его накопления.
В научной литературе (EP1686849 B1) описывается разведение Amblyseius swirskii по схожему принципу, но с использованием в качестве корма-хозяина Carpoglyphus lactis: кормового клеща разводят на среде, в которую внесены пекарские дрожжи, помещенную в контейнер с вентиляционным отверстием. Высота слоя должна стартовать от 1 см; постепенно в контейнер вносят свежий материал, доводя примерно до 10 см. Слой не должен быть слишком высоким - для предотвращения слеживания субстрата. Прирост биомассы должен увеличиваться от 2 до 4 раз в неделю. Хищника отбирают поштучно (соотношение самок и самцов равно 2,5:1) и поселяют на сыпучий материал, например, шелуху гречихи, в контейнер с вентиляцией. Высота субстрата варьируется от 5 до 25 см. Сюда же вносят Carpoglyphus lactis в соотношении от 1:7 до 1:12, после чего помещают в лабораторию с оптимальными микроклиматическими условиями, где прирост хищника должен составить от 100 до 500 особей/грамм субстрата. В конце цикла, когда плотность хищника достигнет высоких показателей, отбираются особи Amblyseius swirskii при соотношении самок и самцов 2,5:1 для запуска новой системы. Таким образом, помимо оптимизации производственного процесса с помощью применения в качестве кормовой базы Carpoglyphus lactis, перемещение клещей в контейнер другого типа позволяет сократить энергоресурсы при разведении фитосейид. Известно, что в лабораторных условиях под определенные нужды производства (Красавина Л.П. и др.,2009) Amblyseius swirskii выращивают по схожей схеме, используя 3-х литровые контейнеры, в которых высота субстрата не должна превышать 5 см. Емкость держат в боксах с установленными микроклиматическими условиями. Через 2 недели плотность хищника составляет 60 особей/см3. В конце цикла отбираются наиболее подходящие особи для запуска новой системы. Данный вид логистики в производстве не позволит иметь высокий выход хищного клеща в виду длительного срока накопления, небольшой плотности и достаточно низкого объема полученного субстрата-носителя.
Также, в патенте EA022197 B1 предлагается альтернативное использование контейнера, при котором возможно как наращивание хищного клеща, так и поставку этого же контейнера в теплицу для освобождения энтомо-акарифага непосредственно на зараженные растения. Для этого контейнер должен иметь закрытое отверстие, которое может открываться, и конструкция должна иметь крючок для подвешивания. Такой способ разведения хищных клещей и их поставки в теплицы упрощает логистику производства, однако при этом увеличивается себестоимость единицы продукции, так как контейнер должен быть пригодным не только для выпуска клещей, но и полностью обеспечивать оптимальные условия жизнедеятельности фитосейид, а это подразумевает обеспечение нормальной циркуляции воздуха и размещение нужного количества сыпучего материала-носителя (достаточный объем контейнера).
В заявке на патент ES2533918 B1 описан способ единовременного разведения кормовых и хищных клещей с введением искусственной диеты в виде гомогената членистоногих, который будет обеспечивать большую часть питательных веществ для фитосейидных клещей. Однако, при упрощенном способе разведения, плотность хищника увеличивается в конце недельного цикла на 50 %, из которых необходимо отобрать часть популяции для запуска новой системы, хотя в других источниках описаны способы возможного увеличения в 2-5 раз по сравнению с закладываемой плотностью. Также механизм получения микрокапсул с гомогенатом членистоногих усложняет процесс получения хищных клещей.
В свою очередь, качество природной, альтернативной или дополнительной кормовой базы играет решающую роль в развитии, продолжительности жизни и размножении хищных клещей (Badii and all. 1990; Yao and Chant 1990; Momen 1994; Jung and Croft 2001; Williams and all. 2004; Hussein 2010; Walzer and Schausberger 2013). Также количество и качество пищи напрямую влияет на размер тела и биомассу, что косвенно определяет физическую форму (Walzer and Schausberger 2011, 2013, 2014). В отношениях хищник-жертва несоответствие размеров тела и биомассы определяет успех покорения жертвы (Sabelis 1981; Yao and Chant 1990; Walzer and Schausberger 2008, 2011; Reis and all. 2003). Например, известно, что Neoseiulus californicus потребляет приблизительно от 15 до 20 яиц паутинного клеща в день, питаясь всеми биологическими стадиями добычи (Moraes and Flechtmann, 2008), при этом развивается быстрее при потреблении именно Totranychus urticae Koch, чем при питании на других источников пищи (Barber A and all 2003). Однако, он также будет успешно развиваться и размножаться при потреблении других видов клещей и пыльцы. В работе “Life history of Neoseiulus californicus (McGregor, 1954) (Acari: Phytoseiidae) fed with castor bean (Ricinus communis L.) pollen in laboratory conditions» (PP Marafelia and all, 2014) представлены данные, которые говорят о таких же темпах роста и воспроизводства Neoseiulus californicus, находящегося на диете использованием пыльцы клещевины (Ricinus communis L.). В этом же исследовании приводятся данные об увеличении периода до яйцекладки почти в 2 раза.
Другой клещ из семейства Phytoseiidae – Аmblyseius swirskii – откладывает 2, 3 яйца в день, питаясь белокрылкой в качестве добычи (Bolckmans and all. 2005), а период до яйцекладки составляет около 5 дней (Park HH, and all 2010). Хищник, питающийся живой добычей, развивается быстрее и откладывает больше яиц по сравнению с хищником, который употребляет в пищу альтернативный вид корма – пыльцу: самки откладывали 38 и 26 яиц соответственно (Park HH, and all 2011). Частота хищничества за сутки в среднем 15-20 яиц или 10-15 личинок белокрылки (Bolckmans and all. 2005).
Потому актуальным является нахождение оптимального способа кормления и среды для жизнедеятельности как жертвы, так и хищника, что прямо коррелирует с качеством производимой продукции. Данную потребность возможно обеспечить путем селективного отбора как кормовой базы по показателям высокой плодовитости и длительности жизни, так и поддержания оптимального уровня хищничества у особей в популяции, при котором энтомо-акарифаги остаются на том же уровне способностей контролировать численность природного вида корма в условиях искусственного разведения.
В научной литературе известны способы выведения селективным путем у членистоногих различных признаков. Например, исследования Siddiqui and all. (2015) сравнили отобранных и селективно выведенных особей Propylea dissecta (Mulsant), которые имели более быстрый темп развития до имаго, с контрольными особями и выяснили, что группа, которая подверглась селекции, демонстрируют более высокие показатели хищничества. В статье «Selection for non-diapause in Amblyseius cucumeris …» (van Houten and all., 1995) говорится об эксперименте с N.cucumeris, которые были подвергнуты отбору по признаку устранения диапаузы для более длительного промежутка действия хищника в теплицах при падении температур окружающей среды. Отобранные клещи были репродуктивно активны в условиях, вызывающих диапаузу. Исследование, посвященное отбору признака эффективного процесса добычи корма у хищных клещей Phytoseiulus persimilis показало, что все черты (поиск добычи, потребление ресурсов и эффективность преобразования) существенно изменились во время отбора. При том, что процесс отбора затронул также и другие коррелированные ответы по другим признакам жизненного цикла, все полученные штаммы показали лучшие результаты уровня хищничества и роста популяции по сравнению с контрольными штаммами. Кроме того, выбранные фенотипы оставались стабильными после прекращения отбора. (Nachappa and all., 2010, 2011). Также, в работе «Селекция хищного клеща фитосейулюса на устройчивость к повышенным температурам» показано, что с помощью массовой селекции Phytoseiulus persimilis была создана теплоустойчивая линия, которая существенно превосходила по выживаемости особей из контрольной линии и в производственных условиях в 2 раза быстрее подавляла паутинного клеща, чем неселектируемая популяция (Максимова Л.Г., 2013).
В целом, селективное поддержание определенных качеств у членистоногих характеризуется удобством в силу возможности поддержания необходимых условий среды в течение многих поколений за счет малых размеров и короткого жизненного цикла организмов для оценки признаков в контрольной и селективной популяциях (Kawecki and all., 2012; Magalh aes & Matos, 2012).
Главным недостатком известных способов является то, что разведение хищника происходит лишь на альтернативном источнике корма, целью которого является лишь его накопление.
Из уровня техники не выявлено технического решения аналогичного заявляемому.
Задача, стоящая перед автором, состоит в закреплении «штамма» хищных клещей, который способен одинаково равнозначно и эффективно питаться как природным, так и альтернативными видами кормов, при этом не теряя максимума своих биологических и экологических показателей.
Выше указанную задачу можно решить, добавив к основным этапам, на которых базируются работы в области прикладной акарологии и коммерческая реализация энтомофагов, (Brígida Souza and all, 2019) тему выведения селективным способом «штамма» хищника, который способен одинаково равнозначно и эффективно питаться как природным, так и альтернативными видами кормов, не теряя своих биологических и экологических показателей. Данная концепция нашла отражение в заявляемом способе, который базируется на определенном алгоритме последовательных операций, включающий в себя такие этапы:
1. Культивация природных вредителей тепличных хозяйств в качестве кормовой базы хищных клещей.
2. Направленный отбор и культивация альтернативных кормовых клещей.
3. Направленный отбор и культивация хищных клещей на природных кормах.
4. Адаптация хищников к альтернативным видам корма и их культивация.
5. Промышленное производство альтернативных видов кормов и хищных клещей и реализация конечного продукта.
6. Мониторинг качества работы произведенных энтомо-акарифагов в тепличных условиях.
Сущностью заявляемого изобретения, является выведения хищного клеща, который способен одинаково равнозначно и эффективно питаться как природным, так и альтернативными видами кормов, не теряя своих биологических и экологических показателей, благодаря осуществлению заявляемого способа разведения Phytoseiidae и других таксонов надотряда Parasitiformes с помощью селективно-направленного отбора, по которому растение-носитель заселяют вредителем, являющимся природным кормом для хищника, с целью его культивации, затем растения с накопленным вредителем заселяют хищником с его последующим селективным отбором по показателям наибольшей плодовитости и прожорливости, которого затем помещают на альтернативный сыпучий субстрат, где он питается альтернативными видами кормов для формирования адаптации с последующей культивацией хищника, при этом селекция и разведение природных видов кормов происходит единовременно с этапом направленного отбора и накоплением альтернативного корма, также параллельно совершается процесс селективного отбора хищника как на природном корме, так и на альтернативном с его дальнейшим производством.
Таким образом, предложенный способ способен удовлетворить потребность в качественной продукции для поставки в тепличные хозяйства путем повышения биологических показателей энтомо-акрифагов в 1,33-1,5 раза (например, репродуктивный ответ от источника питания, интенсивность потребления корма, выживаемость младших возрастных стадий, продолжительность жизненного цикла, термолабильность вида и т.д.).
На фиг. показана схематическая структура логистики производства, основанная на внедрении заявляемого способа разведения Phytoseiidae и других таксонов надотряда Parasitiformes с помощью селективно-направленного отбора.
Способ массового разведения членистоногих включает в себя различные методы, известные сельскому хозяйству около 80 лет. В качестве источников пищи для коммерчески используемых хищников долгое время использовали природные виды корма, например, Phytoseiulus persimilis вскармливался обыкновенным паутинным клещом по методике, предложенной Н.Ф. Бакасовой (1976), либо взращивание на растениях фасоли Amblyseius reductus и кормление его также обыкновенным паутинным клещом (Колодочка Л.А., Лысая Е.А.,1976).
Согласно предложенному способу, стандартное разведение природных кормовых видов представляет собой процесс выращивания видов вредителей на растениях в лабораторно-полевых условиях в Отделе культивации природных кормов. В качестве растений-хозяев используют различные виды с различными сроками роста - это необходимо для увеличения спектра питания видов вредителей, что улучшает их трофическую ценность. Используются такие растения:
- разные виды бобовых растений Fabaceae, а именно – фасоль, соя, бобы, горох, нут, клевер;
- разные виды злаков Poáceae – кукуруза, сорго, ячмень, пшеница, овес, просо;
- разные виды тыквовых Cucurbitáceae – огурец, тыква;
- растения разных систематических групп – амарант, лаконос, клещевина, перец, табак, горчица.
В качестве природных кормовых видов-вредителей используют: трипсов, тетраниховых клещей, белокрылок, эриофидных клещей и тарзонемидных клещей.
По заявляемому способу, молодые кондиционные растения заселяют вредителями и помещают в отдельную комнату, микроклиматические условия которой подходят под потребности членистоногого. Например, трипсов, обыкновенного и красного паутинных клещей разводят при температуре +27° - +31° С и влажности воздуха – 35-55%, тепличную белокрылку – +30 – +35°С. Затем отбираются экземпляры растений, на листьях которых популяция вредителя достигла высокого уровня плодовитости и длительности жизненного цикла и используются в качестве кормовой базы для хищных клещей.
Внедрение в качестве пищи альтернативных видов кормов существенно облегчило производство хищных клещей, увеличив выход хищника в несколько раз и сократив энерго и ресурсозатраты (CA2658292C), а также упростило доставку продукции в тепличные хозяйства и расширило разнообразие упаковки. Параллельно с этими процессами возникла необходимость в совершенствовании физических характеристик кормовой базы, такие как плодовитость и выживаемость в условиях крайних пределов оптимума, которые могли бы поддержать и пролонгировать жизнедеятельность хищников в среде агроценоза. Известно, что при определенном внешнем воздействии у организма вырабатывается устойчивость к неблагоприятным факторам внешней среды: предполагается, что у кормовых клещей возможно сформировать приспособляемость к более высоким температурам воздуха и низким показателям его влажности. Отбор по данным характеристикам проводят в отделе селекции и культивации альтернативных видов кормов по методу массовой прерывистой селекции, предложенным Н.В Ворошиловым (1979) для энтомофагов, адаптированным для каждого вида: в чашку Петри или пластиковый герметичный контейнер с вентиляцией, помещают ватный фильтр, обильно смоченный водой, затем – пищевую добавку, на котором находятся особи клещей; плотно закрытые крышками емкости помещают в термостат и воздействуют температурой, соответствующей верхней границы нормы оптимума жизнедеятельности организма в течение определенного времени, проводя при этом также мониторинг влажности воздуха. Спустя сутки производят подсчёт выживших особей, которых вновь используют для отбора, до тех пор, пока не образуется достаточное количество кормовых клещей с заданными характеристиками. Для отбора наиболее плодовитых самок альтернативных кормовых клещей полученных особей по паре укладывают в пластиковые емкости на фильтровальную бумагу с добавлением пищевой добавки. После начала кладки яиц самку изымают и ежедневно перемещают в отдельный садок для удобства подсчетов. Мониторинг возрастной структуры проводят ежедневно, отбирая потомство наиболее плодовитых самок. Количество потомства и срок развития каждого периода учитывается до момента гибели самки. Отбор происходит в течение 50 поколений для закрепления признака, после чего полученных особей используют для образования и наработки объема очистной линии, которую передают в подотдел массового выращивания альтернативных кормов для производства хищных клещей.
Очистные линии производства – такие линии кормовых и хищных клещей, в образовании которых берут участие индивидуально отобранные кормовые клещи и хищные клещи с заданными селективно выведенными показателями для обновления производственной линии. Также данные линии несут в себе функцию поддержания видовой чистоты и «омоложения» субстрата, который служит основой для жизнедеятельности композиции.
При этом происходит формирование «стартовой» очистной линии, которое подразумевает заселение отобранных особей кормовых клещей в контейнеры объемом 100 мл с вентиляцией на кормовой субстрат в количестве 30-100 ос/см3. Кормовой субстрат представляет собой смесь либо монокомпонентный материал из пшеничных, овсяных, просяных отрубей, гречневой либо рисовой шелухи, либо опилок и вермикулита, который обеззараживают путем выдержки в духовом шкафу при температуре 90oС на протяжении 5 часов, затем увлажняют в перерасчете 10-45 мл воды/л субстрата. В качестве катализирующего источника пищи добавляют дрожжи пекарские, овсянную муку, манку либо пыльцу цветочную, солод, или изоляты пищевых добавок. Эти катализаторы необходимы для повышения трофической ценности кормовых клещей, что обеспечивает высокий биотический потенциал производимых хищников. Оптимальное количество субстрата составляет 10-70% от объема контейнера. Затем садок размещают в помещении с нужным микроклиматом температурой воздуха 15-32oС и относительной влажностью 35-75%, где происходит культивация клеща на протяжении 7-14 дней, при этом необходимо ежедневно перемешивать материал для предотвращения слеживания и улучшения аэрации. Количество объема субстрата очистных линий должна составлять минимум 1-3% от объема линий конечного производства. Спустя цикл накопления проводится мониторинг плотности альтернативных кормовых клещей и состояния субстрата. При наличии необходимой плотности делают разведение субстрата в 1,5-3 раза с внесением нового обеззараженого увлажненного субстрата (10-45 мл воды / л субстрата) и катализирующего источника пищи. При этом «стартовая линия» переходит в блок «промежуточной». В случае недостаточной плотности клеща делают дополнительное внесение нового обеззараженного увлажненного субстрата (25-100 мл воды/л субстрата) и пищевой добавки, после чего оставляют созревать на 5-7 дней, пока плотность достигнет необходимого показателя для накопления новой системы клеща.
После достижения 6-10% от производственной линии и достаточной плотности кормового клеща, очистную «стартовую» переводят в блок «смещающей». Садки находятся непосредственно на стеллажах с рабочей линией, где происходит накопление плотности клеща путем его разведения по методике. Садки представляют из себя пластиковую тару с вентиляцией и объемом 10 литров. Оптимальное количество субстрата составляет 10% - 70% от объема контейнера. В конце цикла (через 7 суток) проводят мониторинг популяции кормового клеща и его разведение. Один из важных показателей качества развития «смещающей» линии – еженедельное увеличение плотности хищника и объема субстрата в 2-3 раза, таким образом, «смещающая» линия заменяет производственную, достигнув 50% от объема производственной. В конце каждого цикла часть производственной линии поступает в отдел промышленного производства хищных клещей, часть используется для запуска новой системы.
Для сохранения видовой чистоты, работы с «очистными» линиями, кроме «смещающей», проводят в отдельных помещениях с установленными требованиями к биобезопасности в порядке степени развития составляющих блоков.
Далее, согласнозаявляемому способу, для производства разведения хищного клеща, выбранный хищник объединяется с природным кормовым, при этом проводят направленный отбор по необходимым характеристикам, затем с альтернативным, проводя адаптацию к различным видам, при этом хищнику не ограничивают доступ в питании кормовыми клещами. В качестве хищника используют клещей из семейства Phytoseidae и других таксонов надотряда Parasitiformes, а в качестве кормовых – клещей из надотряда Acariformes.
Повышение продуктивности и показателя индекса хищничества клещей-фитосейид можно решить с помощью усовершенствования методики селективного отбора хищников для образования чистой линии по ряду критериев на производстве. Процесс отбора хищных клещей для формирования очистных линий производства включает в себя несколько этапов.
Выращивание фитосейид на природном корме (например, паутинном клеще, тепличной белокрылке, трипсах и т.д.) происходит в подотделе культивации хищников на природных кормах по примеру методики разведения Phytoseiulus persimilis, предложенной Г.А. Бегляровым (1968), непосредственно на растениях фасоли или других видах растений. Процесс включает в себя отдел культивации фитосейид на природных кормах, который поставляет материал в подотдел селекции и культивации хищных клещей в лабораторных условиях. Для отбора наиболее плодовитых и прожорливых самок, листья фасоли или других видов растений, заселенные вредителем в фиксированном количестве, укладывают в пластиковые емкости на фильтровальную бумагу, куда помещают по одной паре хищных клещей. После начала кладки яиц самку изымают и ежедневно перемещают в отдельный садок для удобства подсчетов. Мониторинг возрастной структуры проводят ежедневно, отбирая потомство наиболее плодовитых самок. Количество потомства и съеденного корма учитывается через 5-6 суток. Отбор проводится в течение жизнедеятельности 50 поколений. Затем, отобранных генеративноактивных самок перемещают в отдел адаптации и отбора хищных клещей на альтернативных кормах, где дают возможность без ограничений питаться альтернативными кормами в течение 20 циклов для закрепления адаптивных свойств питания к определенным видам кормовой базы. Далее в подотделе адаптации хищника к разным видам альтернативных кормов происходит заселение отобранных особей хищников и кормовых видов в контейнеры объемом 20 мл с вентиляцией, на кормовой субстрат в количестве около 25 ос/см3. Кормовой субстрат представляет собой смесь либо монокомпонентный материал из пшеничных, овсяных или просяных отрубей, гречневой либо рисовой шелухи, либо опилок и вермикулита, который обеззараживают путем выдержки в духовом шкафу при температуре 90oС на протяжении 3-5 часов, затем увлажняют в перерасчете 10-45 мл воды/ л субстрата. В качестве катализирующего источника пищи добавляют дрожжи пекарские, овсянную муку, манку, пыльцу цветочную или пищевые изоляты белков и углеводов. Соотношение хищник: жертва составляет 1:3-1:50. Оптимальное количество субстрата составляет около 10-60% от объема контейнера. Затем садок размещают в помещении с температурой воздуха 20-27oС и относительной влажностью 50-75%, где происходит культивация клеща на протяжении 7-14 дней, при этом необходимо ежедневно перемешивать материал для предотвращения слеживания и улучшения аэрации. Спустя цикл накопления проводится мониторинг плотности хищника и альтернативных кормовых клещей, а также состояния субстрата. При наличии необходимой плотности делают разведение субстрата в 1,5-3 раза с внесением нового обеззаражинного увлажненного субстрата (10-45 мл воды / л субстрата) и дополнительного источника пищи. В случае недостаточной плотности клеща делают дополнительное внесение нового обеззараженного увлажненного субстрата (70-100 мл воды / л субстрата) и пищевой добавки, после чего оставляют созревать на 5-7 дней, пока плотность достигнет необходимого показателя для накопления новой системы клеща.
Далее, спустя 20 циклов развития культуры хищника перемещают в подотдел культивации хищных клещей и их подготовки к массовому разведению где происходит массовый отбор оплодотворенных самок на пластиковые или картонные пластины, при этом хищников, выращенных на разных кормах, смешивают для получения культуры, которая будет адаптирована к двум и более видам альтернативных кормов, после чего самок отбирают и помещают на новый кормовой обеззараженный увлажненный субстрат с добавлением того вида корма, который будет в конечном счете поступать в тепличные хозяйства вместе с хищником, согласно регламенту поизводства. Таким образом, линии маркируются в соответствии с используемой кормовой базой – например, «Линия 1 T.e. 28/30 14.07.20» (предочистная линия 1 на Tyreophagus entomophagus с указанием недели начала и конца цикла, даты формирования). Данные линии именуются «предочистными» и должны составлять минимум 1% от объема конечного производства, чтобы перейти в отдел промышленного производства хищных клещей. В отделе проходит одновременно два процесса, первый из которых включает в себя подотдел формирования очистных линий на разных видах альтернативных кормовых клещей. «Предочистные» линии, поступив в отдел, формируют систему очистных «стартовых» линий. Параллельно с описанным процессом, может происходить запуск «очистной» линии специалистом на производстве. Хищных клещей отбирают, поместив непосредственно на садки планшетки и ожидая, пока наиболее активные самки поднимутся на них, и запускают в субстрат, который представляет собой смесь либо монокомпонентный материал из пшеничных, овсяных или просяных отрубей, гречневой либо рисовой шелухи, либо опилок и времикулита, который обеззараживают путем выдержки в духовом шкафу при температуре 90oС на протяжении 5 часов, затем увлажняют в перерасчете 10-45 мл воды/ л субстрата, который помещают в садок объемом 3 литра с вентиляцией. Оптимальное количество субстрата составляет около 10-60% от объема контейнера, в который затем помещают отобранных фитосейид и альтернативного кормового клеща в соотношении 1: 3-1: 50 особей/см3. Количество объема субстрата очистных линий также должно составлять минимум 1% от объема конечного производства. Затем садки размещают в помещении с температурой воздуха 20-25oС и его влажностью 55-75%, где происходит культивация хищника на протяжении 7-14 дней, при этом необходимо ежедневно перемешивать материал для предотвращения слеживания и улучшения аэрации. Линии маркируются в соответствии с используемой кормовой базой – например, «Линия 1 T.е. 28/29 14.07.20» (очистная линия 1 на Tyreophagus entomophagus с указанием недели запуска и созревания, и даты образования), по аналогии каждая линия отмечается с указанием используемого кормового клеща, даты запуска и статуса.
Ежедневно проводят мониторинг состояния субстрата и популяции хищника и кормового клеща; при наличии необходимой плотности через 7 суток делают разведение субстрата в 1,5-3 раза с внесением нового обеззаражинного увлажненного субстрата (10-45 мл воды / л субстрата) и кормового клеща в соотношении 1: 3-1: 50 особей / см3. При этом «стартовая линия» переходит в блок «промежуточной». В случае недостаточной плотности хищного клеща делают дополнительное внесение кормового клеща в зависимости от плотности хищника и нового обеззараженного увлажненного субстрата (50-100 мл воды / л субстрата), после чего оставляют созревать на 5-7 дней, пока плотность достигнет необходимого показателя для накопления новой системы хищного клеща. Некоторая часть хищников передается в подотдел культивации фитосейид на природных видах кормов.
За каждой рабочей линией хищного клеща должно быть закреплено 3 очистных линии, находящихся на разных этапах развития, что обеспечивает цикличность производства и качество отгружаемого материала.
Далее, после достижения объема 6-10% от производственной линии и достаточной плотности хищного клеща, очистные линии переходят в подотдел производства и подготовки к реализации конечного продукта и именуются «смещающими». Данный блок представляет собой линию, имеющей на начальном этапе плотность хищника 55-60% от нижней границы необходимой плотности; в противном случае произойдет ранний пик развития линии и к концу цикла она станет непригодной для реализации. Садки находятся непосредственно на стеллажах с рабочей линией, где происходит накопление плотности энтомо-акарифага путем его разведения по приведенному выше рецепту. Садки должны представлять из себя пластиковую тару с вентиляцией, объемом 10 -12 литров. Оптимальное количество субстрата составляет 10% - 75% от объема контейнера. В конце цикла (через 7 суток) проводят мониторинг популяции хищника и кормового клеща; в случае недостаточной плотности хищного клеща делают дополнительное внесение кормового клеща в зависимости от плотности хищника и нового обеззараженного увлажненного субстрата (70-100 мл воды / л субстрата), после чего оставляют созревать на 1-5 дней, пока плотность достигнет необходимого показателя для накопления новой системы хищного клеща. Один из важных моментов качества развития «смещающей» линии – еженедельное увеличение плотности хищника и объема субстрата в 2-2,5 раза, таким образом, «смещающая» линия заменяет производственную, достигнув 50% от объема производственной. В конце каждого цикла часть производственной линии с готовой продукцией поступает в подотдел производства, подготовки и реализации конечного продукта часть – остается на производстве для запуска новой системы.
Для сохранения видовой чистоты работы с «очистными» линиями, кроме «смещающей», проводят в отдельном помещении с установленными требованиями к биобезопасности в порядке степени развития составляющих блоков линий.
Производственные процессы завершаются предоставлением информацией касательно работы продукции в тепличных условиях отделом мониторинга качества конечного продукта. Здесь же происходит сбор материала в полевых условиях для отдела культивации хищников на природных видах кормов, который должен соответствовать таким показателям, как 100% принадлежность к виду и ранние стадии развития.
Пример 1. Культивация хищника Amblyseius californicus
Согласно предложенному способу выращивания, первым этапом культивации является выращивание хищного клеща на природном корме, выбранном из рода Tetranychus – Tetranychus urticae. Для выращивания обыкновенного паутинного клеща используют растения фасоли обыкновенной, семена которой высаживают в пластиковые контейнеры в заранее обеззараженный грунт в духовом шкафу при температуре 100-120оС. Уход соответствует стандартным производственным требованиям выращивания растений. По истечении 2-х недельного срока взошедшие растения перемещают в пластиковые стаканы. Через 7-10 дней при интенсивном освещении фасоль прорастает до фазы 3-х - 4-х настоящих листьев. Молодые растения заселяют Tetranychus urticae и помещают в отдельную комнату, микроклиматические условия которой подходят под потребности клеща, где происходит процесс его накопления на протяжении 7-14 дней. Затем, согласно композиции, хищнику Amblyseius californicus позволяют питаться природным кормом Tetranychus urticae, при этом происходит селективный отбор наиболее плодовитых и прожорливых самок акарифага. По литературным данным, самки-фитосейиды откладывают 2-4 яйца в сутки, потому показатель наибольшей репродуктивности является верхний предел (3,5-4 яйца/сутки); за сутки способны уничтожить 10-15 самок вредителя, в среднем – 11,6 особей, потому за эталонный показатель прожорливости выбрали 13-15 шт/сутки. Листья фасоли, заселенные Tetranychus urticae в количестве 20 шт, укладывают в пластиковые емкости на фильтровальную бумагу, куда помещают по одной паре Amblyseius californicus. Этикетка на емкости должна содержать информацию о номере линии и поколении хищника. После начала кладки яиц самку изымают и ежедневно перемещают в отдельный садок, где уже присутствует растение с кормом. Мониторинг возрастной структуры и количества съеденных паутинных клещей проводят ежедневно, отбирая потомство наиболее плодовитых и прожорливых самок. Учет проводится по 5-е сутки кладки, так как начальный этап жизнедеятельности самки характеризуется наивысшими показателями плодовитости и прожорливости, а в яйцекладке наблюдается 60%-70%-содержание представителей женских особей. Из развившихся имаго самку и самца, отобранных из разных садков во избежание близкородственных связей, помещают в один для повторного отбора. Для закрепления признаков селекцию проводят в 50 поколениях. На начальном этапе заселяют 10 контейнеров (10 самок и 10 самцов); спустя 5-й повторности кладки выделяют потомство, которое соответствует необходимым параметрам (табл. 1.1).
Таблица 1.1
Характеристики плодовитости и прожорливости самок Amblyseius californicus
Таким образом, спустя 5 дней кладки отбираются особи из Р2, Р6 и Р9. Затем по аналогии процедура проводится до получения минимум 250 самок за 50 поколений.
Полученных самок помещают в кормовой субстрат и позволяют питаться альтернативными видами корма – Tyreophagus entomophagus и Glycyphagus destructor для выработки адаптивных свойств к новой кормовой базе и наращивания необходимой плотности хищника с последующей передачей в производственный блок. Разведение происходит следующим образом: самок хищника помещают на заранее обеззараженный увлажненный кормовой субстрат объемом 10 мл в пластиковый контейнер объемом 20 мл, в который добавляют Tyreophagus entomophagus и Glycyphagus destructor в соотношении 70:30 соотвественно. Пропорции хищный клещ:кормовой составляют 1:3-1:50 на усмотрение специалиста. Плотность хищника должна стартовать от 25 ос/см3, так как на начальных этапах адаптации данный показатель снижается, затем, спустя несколько поколений, снова повышается.
Спустя 20 циклов развития хищника происходит отбор оплодотворенных самок – перезапуск очистной линии, при этом Amblyseius californicus, выращенный на Tyreophagus entomophagus, смешивают с Amblyseius californicus, выращенным на Glycyphagus destructor, – для скрещивания и образования потомства, которое будет адаптировано к двум видам альтернативных кормов. При этом самок помещают на новый кормовой обеззараженный увлажненный субстрат с добавлением того вида корма, который будет в конечном счете поступать в тепличные хозяйства вместе с хищником: очистная линия, предназначенная производства рассыпного материала, будет совмещена с Tyreophagus entomophagus; очистная линия, предназначенная для производства пакетов-саше, будет совмещена с Tyreophagus entomophagus и Glycyphagus destructor с целью пролонгирования действия продукции в полевых условиях. Объем такой линии должен составлять 1% от производственной.
Для отдела производства Amblyseius californicus заселяют в кормовой субстрат объемом 1 л, представляющий из себя пшеничные отруби, заранее его обеззаразив путем выдержки в духовом шкафу при температуре 90oС на протяжении 5 часов, затем увлажнив в перерасчете 10-45 мл воды/ л субстрата, в контейнер объемом 3 л с вентилируемым отверстием. В качестве дополнительного источника пищи добавляют дрожжи пекарские и пищевые изоляты белков и углеводов в количестве 1-5 г/л субстрата. На усмотрение специалиста вносят кормовых клещей в соотношении «хищник : жертва» 1:3-1:50. В данном случае передается 5-8 садков субстрата с общим количеством хищника 75 000 – 120 000 особей.
В отделе производства специалист занимается культивацией хищного клеща, наращивая плотность до 40 ос/см3 и объем «стартовой»/»промежуточной» очистных линий до необходимых 6-10%. Наращивание происходит путем еженедельного разведения в 2-3 раза с добавлением нового обеззараженного увлажненного кормового субстрата, объем которого равен 100-150% от субстрата с хищником, и внесением необходимого кормового клеща в соотношении хищник:жертва 1:3-1:50 до достижении общего количества фитосейида 1,9-2,5 млн особей. Затем «смещающая" линия занимает место в помещении, где размещается рабочая линия, постепенно ее вытесняя путем увеличения своего объема до необходимого производству количества хищного клеща, часть из которых используется для накопления новой системы, часть – для поставки в тепличные хозяйства (табл. 1.2). Единовременно, с разницей в 1-2 дня, на производстве ведется культивация Amblyseius сalifornicus в пределах 3-х рабочих линий для обеспечения видовой чистоты и снижения производственных рисков.
Таблица 1.2
Динамика плотности популяции Amblyseius Californicus в процессе культивации производственной линии №1 T.е. 2.02.2020 с использованием Tyreophagus entomophagus
| Срок жизни производственной линии | Плотность Amblyseius Californicus, ос/см3 | Плотность Tyreophagus entomophagus, ос/см3 | |||
| В закладке | Через 7 суток | Статус линии | В закладке | Через 7 суток | |
| Неделя 1 | 12,8 | 24,8 | стартовая | 250,0 | 52,1 |
| Неделя 2 | 14,6 | 26,4 | промежуточная | 290,0 | 44,2 |
| Неделя 3 | 13,2 | 30,4 | промежуточная | 254,0 | 39,1 |
| Неделя 4 | 15,2 | 38,6 | промежуточная | 230,0 | 31,3 |
| Неделя 5 | 19,3 | 44,2 | смещающая | 380,0 | 26,7 |
| Неделя 6 | 22,1 | 50,8 | смещающая | 440,0 | 22,5 |
| Неделя 7 | 25,4 | 63,5 | смещающая | 450,0 | 19,2 |
| Неделя 8 | 31,8 | 79,5 | смещающая | 470,0 | 18,5 |
| Неделя 9 | 40,0 | 92,0 | производственная | 520,0 | 13,5 |
| Неделя 10 | 46,0 | 110,4 | производственная | 598,0 | 13,0 |
| Неделя 11 | 55,2 | 115,8 | производственная | 550,0 | 11,6 |
| Неделя 12 | 58,0 | 116,4 | производственная | 580,0 | 10,2 |
Мониторинг состояния возрастной структуры популяции показал, что количество яиц на 1 самку варьирует от 3,0 до 4,0 штук (табл.1.3), что соответствует ожидаемому количеству и свидетельствует о закреплении признака высокой сложности у самок.
Таблица 1.3
Динамика количества самок Amblyseius Californicus и их соотношение с количеством яиц в процессе культивации производственной линии №1 T.е. 2.02.2020 с использованием Tyreophagus entomophagus
| Срок жизни производственной линии | Количество особей женского пола Amblyseius californicus в конце цикла, ос/см3 | ||
| Количество самок | Количество яиц | Количество яиц/1 самку | |
| Неделя 1 | 16,2 | 52,0 | 3,2 |
| Неделя 2 | 15,6 | 51,5 | 3,3 |
| Неделя 3 | 18,4 | 55,2 | 3,0 |
| Неделя 4 | 22,4 | 78,4 | 3,5 |
| Неделя 5 | 22,2 | 79,6 | 3,6 |
| Неделя 6 | 27,4 | 104,0 | 3,8 |
| Неделя 7 | 31,0 | 101,0 | 3,9 |
| Неделя 8 | 38,2 | 139,5 | 3,6 |
| Неделя 9 | 36,8 | 121,4 | 3,3 |
| Неделя 10 | 43,2 | 139,0 | 3,1 |
| Неделя 11 | 45,2 | 135,6 | 3,0 |
| Неделя 12 | 40,7 | 122,0 | 3,0 |
Пример 2. Сравнение работы в тепличном хозяйстве селектируемых линий с выращенными на альтернативном корме.
Испытание селектированных линий Amblyseius californicus и сравнение с хищником, выращенном на альтернативном корме (контроль), проводилось в течение 12 недель на территории тепличного хозяйства. Оценивали выживаемость хищного и кормовых клещей в тепличных условиях и количество съеденного вредителя. Amblyseius californicus поступил в теплицу в виде пакетированной продукции саше в количестве по 12 штук одинарных саше, в которых содержалось по 500 особей хищника/саше. В качестве кормовой базы использовали Tyreophagus entomophagus и Glycyphagus destructor при соотношении хищник:корм 1:30. В качестве катализирующего источника питания – дрожжи пекарские и сухой яичный желток и изоляты белков и углеводов.
Эксперимент проводился в садках, представляющих собой конструкцию в виде куба с ребрами длиной 1 м, стороны которого покрыты ситотканевым материалом в качестве препятствия для других фитосейид. Внутрь помещены по кусту роз сорта Little Flirt, пораженные паутинным клещом; в каждый садок помещены по 2 пакетика-саше с селективно выведенным и с контрольным акарифагом. Мониторинг исследуемых показателей проводился еженедельно, среднее количество всех стадий развития паутинного клеща считали по 15 листам (табл. 2.1). Количество вредителя варьировало от 91,0 до 116,0 ед/лист, в среднем – 100,4 ед/лист.
Таблица 2.1
Сравнительная характеристика прожорливости селектируемых линий Amblyseius californicus с изначально выращенными на альтернативном корме
| Номер недели, п/п | Средняя плотность Amblyseius californicus, ос/см3 | Средняя плотность обыкновенного паутинного клеща из разных садков, ед/лист | ||
| селективная | контрольная | селективная | контрольная | |
| 1 | 68,2 | 69,0 | 93,3 | 95,9 |
| 2 | 71,4 | 65,2 | 51,0 | 72,3 |
| 3 | 70,8 | 45,0 | 32,7 | 54,0 |
| 4 | 61,6 | 36,8 | 23,6 | 39,6 |
| 5 | 49,2 | 29,4 | 15,7 | 25,6 |
| 6 | 33,6 | 18,2 | 9,0 | 17,3 |
| 7 | 25,0 | 12,0 | 4,3 | 11,0 |
| 8 | 15,4 | 5,8 | 4,0 | 6,0 |
| 9 | 8,4 | 2,4 | 2,6 | 4,0 |
| 10 | 5,6 | - | 4,6 | 8,3 |
| 11 | 3,8 | - | 10,0 | 17,6 |
| 12 | 1,6 | - | 15,6 | 26,0 |
В результате исследования выяснилось, что селективно выведенные хищники в саше находились до 12 недель исследования, тогда как представили контрольной группы перестали обнаруживаться после 9-й недели. Повышение численности популяции наблюдалось на второй недели в обоих вариантах, однако в контрольной группе этот показатель начал падать с каждым последующим подсчетом, а в селективной группе плотность хищника продержалась практически на одном уровне в течение трех недель, после чего также начала снижаться. Что касается количества вредителя, то, начиная со второй недели, фитосейид из контрольной линии поглощал меньше паутинного клеща, чем из селективно выведенной группы; минимум количества особей вредителя наблюдалось на 9-й недели в обоих вариантах, но численность из контрольной группы на 35% превышала численность селективной, а в конце эксперимента – на 32%. Таким образом, удалось пролонгировать срок действия пакетиков саше до 12 недель; номинал в 250 особей на пакетик сохранился до 7 недель. Это показатель одинаковой эффективности Amblyseius californicus питаться как альтернативным, так и природным кормом: отобранные хищники имеют низкий срок адаптации к виду трофического объекта, высокий репродуктивный ответ, повышеную трофическую активность.
Таким образом, предложенный способ способен удовлетворить потребность в качественной продукции для поставки в тепличные хозяйства путем повышения биологических показателей энтомо-акрифагов в 1,33-1,5 раза (например, репродуктивный ответ от источника питания, интенсивность потребления корма, выживаемость младших возрастных стадий, продолжительность жизненного цикла, термолабильность вида и т.д.).
Благодаря осуществлению заявляемого способа, достигается закрепление «штамма» хищных клещей, который способен одинаково равнозначно и эффективно питаться как природным, так и альтернативными видами кормов, при этом не теряя максимума своих биологических и экологических показателей. Это позволяет получать высокую продуктивность системы при массовом производстве хищных клещей, а также получать высокие результаты контроля вредителей на культуре, при использовании в системе защиты растений.
Таким образом, поставленная задача, выполнена.
Список использованной литературы
1. Adventures in Biocontrol George Lazarovits1, Mark S. Goettel2andcharles Vincent, Aafc 2007. Biological Control: a Global Perspective (eds C. Vincent, M.S. Goettel and G. Lazarovits.
2. Barber A, Campbell CAM, Crane H, Lilley R, Tregidga E. 2003. Biocontrol of two-spotted spider mite Tetranychus urticae on dwarf hops by the phytoseiid mites Phytoseiulus persimilis and Neoseiulus californicus. Biocontrol Science and Technology 13: 275-284.
3. Houten van Y. M., Østlie M. L., Hoogerbrugge H., and Bolckmans, K. 2005. Biologicalcontrol of western flower thrips on sweet pepper using the predatory mites Amblyseiuscucumeris, Iphiseius degenerans, Amblyseius andersoni and Amblyseisus swirskii. IOBC/WPRS Bulletin 28, 283-286.
4. Kawecki, T.J. and all. (2012) Experimental evolution. Trends Ecol. Evol.27, 547–560
5. Köhler H.R, Triebskorn R, 2013. Wildlife ecotoxicology of pesticides: can we track effects to the population level and beyond? Science, 341 (6147): 759-765
6. Ma, Wei-Lan, Laing, J. E. — 1973. Biology, potential for increase and prey consumption of Amblyseius chilenensis (DOSSE) [Acarina: Phytoseiidae]. — Entomophaga, 18, 47–60.
7. Magalhaes, S. and all. (2009) Are adaptation costs necessary to build up alocal adaptation pattern? BMC Evol. Biol. 9, 182.
8. Maya Monteiro CM, Almeida PE, D’Avila H, Martins AS, Resende AP, Castro-Faria-Neto H, and all. Leptin induces macrophage lipid body formation by a phosphatidylinositol 3-kinase and mammalian target of rapamycin- dependent mechanism. J Biol Chem. (2008) 283:2203-10
9. Natural Enemies of Insect Pests in Neotropical Agroecosystems, Biological Control and Functional Biodiversity, Brígida Souza Luis L. Vázquez Rosangela C. Marucci, Springer Nature Switzerland AG 2019, P189-197
10. Nachappa P, Margolies DC, Nechols JR & Morgan TJ (2010) Response of a complex foraging phenotype to artificial selec-tion on its component traits. Evolutionary Ecology 24: 631–655.Nachappa P, Margolies DC, Nechols JR & Campbell JF (2011) Variation in predator foraging behaviour changes predator-prey spatio-temporal dynamics. Functional Ecology 25: 1309–1317
11. Opportunities for Biological Control of Agricultural Pests in Developing Countries D.J. Greathead and J.K. Waage, The International Bank for Reconstruction and Development / THE WORLD BANK 1818 H Street, N.W. Washington, D.C. 20433, U.S.A., 1983
12. Park HH, Shipp L, Buitenhuis R. 2010. Predation, development and oviposition by the predatory mite Amblyseius swirskii (Acari: Phytoseiidae) on tomato russet mite (Acari: Eriophyidae). Journal of Economic Entomology 103: 563-569.
13. Park HH, Shipp L, Buitenhuis R, Ahn JJ. 2011. Life history parameters of a commercially available Amblyseius swirskii (Acari: Phytoseiidae) fed on cattail (Typha latifolia) pollen and tomato russet mite (Aculops lycopersici). Journal of Asia-Pacific Entomology 14: 497-501.
14. PP Marafelia, PR Reisa, EC. da Silveiraa, GC Souza-Pimentela, MA. de Toledoa. Life history of Neoseiulus californicus (McGregor, 1954) (Acari: Phytoseiidae) fed with castor bean (Ricinus communis L.) pollen in laboratory conditions». Braz. J. Biol. vol.74 no.3 São Carlos Aug. 2014
15. Siddiqui, A., Kumar, A., Kumar, N., & Tripathi, C. P. M. (1999). Prey predator relationship between Lipaphis erysimi Kalt. (Homoptera: Aphididae) and Coccinella septempunctata Linn. (Coleoptera: Coccinellidae): III. Effect of host plants on the searching strategy, mutual interference and killing power of the predator. Biological Agriculture and Horticultural, 17, 11–17. doi:10.1080/01448765.1999.9754820
16. van Houten YM, van Stratum P, Bruin J & Veerman A (1995) Selection for non-diapause in Amblyseius cucumeris and Amblyseius barkeri and exploration of the effectiveness of selectedstrains for thrips control. Entomologia Experimentalis etApplicata 77: 289–295.
17. Бегляров Г.А. Сучалкин Ф.А. Методические указания по биологическому методу борьбы с табачным трипсом в защищенном грунте. - М.: ВНИИФ 1985, с. 16 - 20.
18. Колодочка Л.А., Лысая E.A. Выживаемость голодающих хищных клещей фитосеид Phytoseiulus persimilis, Amblyseius andersoni, Amblyseius reductus (Parasiti-formes, Phytoseiidae) Вестн. зоол. 1976. №3. С. 88-9
19. Красавина Л.П., Козлова Е.Г., Зуева Л.И. Оптимизация массового разведения хищных клещей амблисейусов. Защита И Карантин Растений. 2009. № 12. С. 39-40.
20. Максимова Л.Г. Селекция хищного клеща фитосейулюса на устройчивость к повышенным температурам: дис. канд. биол. наук Санкт-Петербурский государственный аграрный университет, Санкт-Петербург, 2013,
21. Патент «Способ разведения хищного клеща амблисейуса amblyseius cucumeris ond.» - Publication of RU2351126C2
22. Патент Mite composition, use thereof, method for rearing the phytoseiid predatory mite amblyseius swirskii, rearing system for rearing said phytoseiid mite and methods for biological pest control on a crop - EP1686849B1
23. Патент Composition for biological pest control on plants, use thereof, a container for rearing a phytoseiid predatory mite, and methods for rearing a phytoseiid predatory mite and for biological pest control on a crop - EA022197B1
24. Патент Procedure of production and release of predatory mites, composition useful for it and use in the biological control of pests - ES2533918B1
25. Патент A method of rearing amblyseius predatory mites using thyreophagus entomophagus as prey - CA2658292C
Способ разведения хищного клеща Amblyseius californicus с помощью селективно-направленного отбора, согласно которому фасоль обыкновенную заселяют Tyreophagus urticae, затем растения с накопленным вредителем заселяют хищным клещом Amblyseius californicus с его последующим селективным отбором по показателям наибольшей плодовитости и прожорливости, далее хищного клеща Amblyseius californicus помещают на сыпучий субстрат, в соотношении «хищник : жертва» 1:3-1:50, содержащий Tyreophagus entomophagus и Glycyphagus destructor в соотношении 70:30, соответственно, или Tyreophagus entomophagus или Glycyphagus destructor с последующим смешиванием хищного клеща Amblyseius californicus, использующего в питании Tyreophagus entomophagus, с хищным клещом Amblyseius californicus использующим в питании Glycyphagus destructor, при этом селекцию и разведение хищного клеща Amblyseius californicus проводят единовременно с этапом направленного отбора и накоплением Tyreophagus entomophagus и Glycyphagus destructor как альтернативного корма.
