Питательная среда для поверхностного выращивания продуцентов пектолитическихферментов
;7 1
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
3I0929
Союз Сиеетсмиз
Социалистическиз
Республик
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Зависимое от авт, свидетельства ¹
Заявлено 10Л!1.1970 (№ 1412912/28-13) с присоединением заявки №
Приоритет
Опубликовано 09Л 111,1971. Бюллетень М 24
Дата опубликования описания 11.Х.1971
МПК С 12Ь 3/00
С 12d 13/10
Комитет 00 делам изобретений и открытий при Совете Министров
СССР
УДК 577.15 07(088.8) Авторы изобретения Л. С. Лосякова, К. А. Калунянц, Л. H. Мушникова, Т. P. Струнникова и Т. П. Руденко
Заявитель Всесоюзный научно-исследовательский институт биосинтеза белковых веществ
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ПОВЕРХНОСТНОГО
ВЪ|РАЩИВАНИЯ ПРОДУЦЕНТОВ ПЕКТОЛИТИЧЕСКИХ
ФЕРМЕНТОВ
Изобретение относится к ферментной промышленности.
Известна питате:п,ная среда для поверхностного выращивания продуцентов пектолитических ферментов, например Aspergillus foetidus, содержащая пшеничные отруби и свекловичный жом при рН 4,9 — 5,05.
Однако отруби злаковых культур не являются оптимальной средой, так как синтез пектинрасщепляющих ферментов стимулируется наличием в питательной среде пектиновых Веществ.
Цель изобретения — получение комплексного ферментного препарата, содержащего высокоактивные пектолитические ферменты.
Для этого в питательную среду дополнительно вводят аммонийные соли серной H;IH соляной кислот, причем эти компоненты содержатся в следующих соотношениях (в вес. %): пшеничные отруби 64 — 74; свекловичный жом 25 — 35, аммонийные соли 1.
Перечисленное сырье в указанных соотношениях смешивают, увлажняют до влажности 60 — 62%, стерилизуют при 1 атл в течение 1 «ас.
Охлажденную до 35 — 37 С питательную среду при рН 5,1 — 5,5 засевают конидиями гриба Aspergillus foetidus. Культивирование проводят при 28 — 32 С, максимальное накопление ферментов наблюдается через 38—
40 ((ас, 11з культуры плесневого гриба Aspergillus foetidus (рН 4,95 — 5,05) получают водную диффузионную В1>1тяхкку в количестве 350 о(о от веса абсолютно сухой культуры. Выделение комплексного препарата ферментов проводят путем осаждения ферментов из диффузионной вытяжки этиловым спиртом при концентрации его в смеси 73 — 74%. Выход препарата составляет 6,5 — 7,5о(о. Активность Ilo10 лучаемогп препарата составляет 29000—
36000 ед!г.
В ферментных препаратах, получс1гных этим способом, повышена активность Ileêòèíрасцепляющих ферментов на 300 — 360%
15 (29000 — -36000 ед г против 9000 — 10000 ед(г) .
НОВЫЙ ВысокоактllВный ПРе11аР(1 1 xIIPHI 20 Пример 1. Культивирование в лаоораторных условиях: 30 г свекловичного жома, 69 г пшеничных отрубей и 1 г сернокислого аммония ((ХН.1) з50 ) или солянокислого «ммони я (Х Н.(С1) с мети ива1от и увл аж и я ют 25 130 лл водопроводной воды до % = 60 — 62%. Питателы1ую среду стерилнзуют в течение 1 «ас при 1 атл. После охлаждения ннтательную среду засевают споровой суспензисй гриба Aspergillus foetidus. Культивирование проЗО водят поверхностным способом В кюветах на 310929 Предмет изобретения Составитель М. Ларина Техрсд E. Борисова Корректор E. В. Исакова Редактор А. Бер Заказ 2692/14 Изд, Ма 1114 Тираж 473 Подписное ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР Москва, 7К-35, Раушская наб., д. 4/5 Типография, пр. Сапунова, 2 200 г питательной среды при 30 С в течение 38 — 40 час, Начальное значение рН питательной среды 5,1 — 5,4, конечное — 5,0. Из полученной культуры гриба ферменты извлекают путем экстракции при соотношении водопроводной воды и абсолютно сухой культуры 4,5: 1 в течение 1 час и при 30 С. Комплексный ферментный препарат выделяют из экстракта путем осаждения этиловым спиртом при крепости смеси 73 — 74% и 5 С. Осадок отделяют на центрифуге при 3000 об/мин. В культуре активность пектолитических ферментов — 3897,0 ед/г. В высушенном препарате активность пектинрасщепляющих ферментов 36192,0 ед/г, мацерирующая активность 2200 ед/г, кислая протеиназа 25 ед/г. Выход препарата 7,5 /о. Пример 2. Культивирование в полузаводских условиях: 21,0 кг свекловичного жома, 48,3 г пшеничных отрубей и 0,7 кг сернокислого аммония смешивают и смесь увлажняют до W=600/o Полученную питательную среду стерилизуют в автоклаве в течение 1 час при 1 атм. Охлажденную питательную среду (рН среды 5,6) засевают споровым посевным материалом гриба Aspergillus foetidus в количестве 0,3%. Культуру выращивают на кюветах в растительных камерах в течение 38 — 40 час при 28 — 30 С, рН готовой культуры — 4,9. Ферменты извлекают из культуры плесневого гриба водой диффузионным способом, при отборе диффузионной вытяжки 300— 350%. Выделение комплексного препарата ферментов из поверхностной культуры гриба Aspergillus foetidus проводят осаждением этиловым спиртом при крепости смеси 73— 74 о/о. B результате из 46,4 кг культуры плеснево10 ro гриба Aspergillus foetidus с активностью пектинрасщепляющих ферментов — 2607 ед/г получено 3,3 кг комплексного сухого препарата с активностьх ед/г: пектинрасщепляющих ферментов 33194, кислой протеиназы 33, ма15 церирующих ферментов 2000. Выход препарата составил 7 /о. 20 Питательная среда для поверхностного выращивания продуцентов пектолитических ферментов, например Aspergillus foetidus, содержащая пшеничные отруби и свекловичный жом, при рН 4,9 — 5,05, отличающаяся тем, 25 что, с целью получения более активных ферментов, в питательную среду дополнительно вводят аммонийные соли серной или соляной кислот, причем вышеуказанные компоненты содержатся в следующих соотношениях (в 30 вес. %): пшеничные отр„— 74, свекловичный жом 25 — 35, аммонийные соли 1.
