Способ выделения аспдрагиназы

 

опНСАННЕ 35048I

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 07.XII.1970 (№ 1607920/31-16) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 13,IX,1972, Бюллетень № 27

Дата опубликования описания 4.1.1973

М. Ь;л. А 61k 19/00

Комитет по делам иаабретений и открытий ори Совете Министров

СССР

УДК 577. 155,32(088,8) Автор изобретения

В. Э. Калис

Заявитель Ордена Трудового Красного Знамени институт органического синтеза

АН Латвийской ССР

СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ АСПАРАГИ НАЗЫ

Изобретениее относится к медицине.

Известен способ выделения аспарагиназы из растворов сорбционным методом. Однако известный способ отличается сложностью процесса и небольшим выходом целевого продукта.

В предлагаемом способе для повышения выхода целевого продукта и упрощения процесса в качестве сорбента используют карбобензокси-1 -аспарагин.

Пример 1. В качестве исходного используют водный экстракт E. coli, содержащий

10% сахарозы. Работу производят при 7,5—

8,5 С. 5 мл экстракта пропускают в течение

0,5 лтин через слой смоченного 10% сахарозой растертого до среднего размера частиц в

20 — 30 лтк карбобснзокси-1 -аспарагина (750 мг) в воронке Бюхнера диаметром 7,5 с 1. Полученный фильтрат хранят при 0 С. Слой карбобензокси-L-аспарагина промывают 3 раза

5 мл 0,123 М ацетотного буфера,при рН 5,0.

Аспарагиназу из слоя карбобензокси-1 -аспарагина вымывают 5 мл 0,005 н. в 10%-ной саха розе.

Ферментативная активность ГС-2 аспарагиназы в полученном растворе =200 Х ед/лг белка.

Пример 2. В качестве исход ного |иопользуют тот же подсахаренный водный экстракт, что в примере 1. 10 мл предварительно охлажденного до 0 — 1 С экстракта пропускают в течение 4,иин через слой подготовленного, кяк в примере 1, предварительно охлажденного при 0 — 1 С карбобензокси-1 -аспарагнна (1500 .яг). Аспарагиназу из слоя кябобснзокси-1.аспарагина вымывают при комнатной температуре 10 л л 0,005 и. NF1.,0Н в 10% сахарозе в течение 10 нпн.

10 Ферментативная активность ГС-2 аспарагиназы в полученном растворе =200 iU ед./лг белка.

П р и м ер 3. Через регенерированвый слой карбобензокси-L -аспарагина при комнатной

15 температуре на воронке Бюхнера профильтровывают 10 л1л экстракта E coll. содержащеl о

2,14 м. ед./лл. аспарапшазы и 2,0 лтг/льi белков. Полученный фильтрат внов» пропускают через слои карбобснзокси-L-ëoï;iðoãèíä.

20 Фильтрацию повторяют 3 раза in исчезновения мутности в фильтрате на пробу 10",„ного раствора трихлоруксусной кислоты.

Пример 4. 11спользуют регснcр»puвяпный

25 карбобензоксп-l.-аспарагпн. Через слой его i3 течение 4,5 лiия пропускают (аналогH«lfo ilpliмеру 1) 8 л л. экстракта Е coli 8,4 м. ед./.ил. аспарагиназы и 1,7 лг/л л белков. Выход аспярагиназы в фильтрате — — 8%. Аспаряпшязу

30 из слоя карбобензокси-1 -аспараьчща вымьцга