Патент ссср 353956
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
353956
GE))os Советских
Социалистических
Республик
Зависимое от авт. свидетельства ¹
Заявлено 19Л11.1971 (№ 1634957/28-13) М. 11Л. С 12d 13/10
С 07д 7/028 с присоединением заявки Л
Приоритет
Опубликовано 09.Х.1972. Бюллетень ¹ 30
Дата опубликования описания 9.Х1.1972
Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров
СССР
У Д К 663, 15 (088.8) Авторы изобретения Р. Г. Дегтярь, М. Ф, Гулый, Л. В. Гудкова и В. А. Вакуленко
Заявитель
Институт биохимии АН Украинской ССР (1 р," ., ° 1 .(с ) IА
Г::1 1ЬЛ51С1 =:.= -(А
СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ОЧИЩЕННЫХ ФЕРМЕНТ
ПРЕПАРАТОВ КАТАЛАЗЫ
Изобретение относится к ферментной промышленности.
Известен способ выделения очищенных ферментHûõ препаратов каталазы из культуральной жидкости плесневого гриба Реп)с)111(нн
vit3lc Pidopl. ct Bilai путем адсорбции ее, отделения адсорбента с каталазой, например, центрнфугнрованнем, выделения каталазы элюцией н осаждением спиртом.
Предлагаемый способ по сравненшо с нзвестнымн является более простым и Обеснсчивает достато шо полное выделение ферм НТ3 из кул(»тура((ЬНОЙ жид) 8,6, а элюцию — раствором одноосновного фосфорнокислого калил, Способ выделения очище)шых ферментных препаратов каталазы осуществляется следующим образом. К культуральной жидкости при pI I 8,0 — 8,6 прибавляют при перемешивании одновременно равные объемы 0,5М растворов шестиводного хлористого кальция и двухосновного фосфорнокислого натрия в количестве, рассчитанном ( (g< 1 на содерж()ние каталазы в культуральной жид- . кости и сорбционной емкости образуемого геля. На гель, образованньш из 1 л(л 0,5М раствора шестиводного хлористого кальция. 5 ll эквимолярного I(OJIH EccTB3 фосфорнокислого натрия, сорбируется В сред-, нем 5000 ед. каталазы. Это соответствует, сорбцни на гель, образсгванный из 1 г шее!и-, ВОДНОГО ХЛОРНСТОГО КЯЛЬЦИЛ Н ЭКВНМОЛЯPHO)0 i (10 кол))честна (I)00 каталазу ЭJ)101)p) !OT 0,5))1 раСТВОром ОДНООСНОВНОГО (1)ОС- форно! Нслого ) 15 ленного раств<)ра xJ)0)HcTA10 каlhHHH. Элlоцию прово,)(IT llpH ин енсивно .)(Hcрех!е- ( (HHI33 ((II 0 C()I(CH в Т("и<. ни< 30 .((((((. 3 3TL ) I эл!ОЯТ отделяют центрифугнрованием, Осl)ëo)(геля промывщот на Ll< нтрнфуге 0,3)Ч раствором од-, 20 ноосновного фосфорнокислого калия, прибав- лЯЯ f0 в количестве, Равном )/а от обьема ( элюата, Элюат н промывной раствор смеши-, вают, содержание каталазы в смеси составляет 80 — -90% от количества сорбированного 25 (1) piELHTEI. 1 lз 1(0 l)J i)cнного раствор; катал (!.3% 0c3>Hä310T НОл1(тОрн(э!)(Объсх(ом спирта, на!!ри- мер этилового, прн температуре 0 — 4 С или( изопропнлового при комнатной температуре., Осадок отделяют центрнфугированием, раство-! 30 ряют в воде, вторично переосаждают тем же 353956 Предмет изобретения Составитель М. Ларина Техред А. Камышникова Корректор Л. Царькова Редактор А. Бер Заказ 3700/9 Изд. г,"е 1493 Тираж 406 Подписное ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР Москва, 7К-35, Раушская наб., 4/5 Типография, пр. Сапунова, 2 спиртом, растворяют в воде, диализируют против воды и высушивают в вакууме. Выход каталазы в препарате составляет 70 — 80% от его содержания в культуральной жидкости. Полученные препараты содержат в 1 иа 5000 — 8000 сд. каталазы. 1. Способ выделения очищенных ферментных препаратов каталазы из культуральной жидкости плесневого гриба Penicillium vitale Pidopl. et Bilai путем адсорбции ее, отделения адсорбепта с каталазой, например, центрифугированием, выделения каталазы элюцией и осаждением спиртом, отличающийся тем, что, с целью более полного выделения каталазы и упрощения процесса, адсорбцию проводят на гель фосфатс кальция непосредствсн5 но из культуральной жидкости путем введения в нее при перемешивании равных обьемов 0,5М растворов шестиводного хлористого кальция и двухос нов ного фосфор нокисло го натрия. 10 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что адсорбцию ведут при рН, преимущественно равном 8,0 — 8,6. 3. Способ по пп, 1 и 2, отличающийся тем, что элюцию ведут раствором одноосновного 15 фосфорнокислого калия.
