Способ приготовления иммунофлюоресцентных
О П И С А Н И Е 370498
ИЗОБРЕТЕН ИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Союз Советских
Социалистических
Республик
Зависимое от авт, свидетельства №
Заявлено 20.1Ч.1971 (№ 1652770/31-16) с присоединением заявки №
Приоритет
Опубликовано 15.11.1973. Бюллетень № 11
Дата опубликования описания 5.IV.1973
М. Кл. G 01 п 1, ЗО
Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров
СССР
УДК 519.449.57:614.48 (088.8) Авторы изобретения
Заявитель
В. Я. Кармышева и Л. Л. Миронова
Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов
Академии медицинских наук СССР
СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ИММУНОФЛ1ООРЕСЦEHTHblX
ПРЕПАРАТОВ
Изобретение относится к области медицины.
Известен способ приготовления иммунофлюоресцентных препаратов путем нанесения на исследуемый объект иммунофлюоресцентной сыворотки с последующим исследованием препарата в люминесцентном микроскопе.
Однако этот способ не дает возможности ретроспективно с использованием обычно приготовляемых и длительно сохраняемых постоянных гистологических препаратов выявлять специфические антигены и уточнять причины заболеваний или наблюдаемых изменений.
Целью предложенного способа является ретроспективное иммунологическое изучение препарата.
Это достигается тем, что используют объект постоянного длительно сохраняемого гистологического препарата, который обрабатывают органическим растворителем, проводят по спиртам нисходящей концентр ации, обесцвечивают, промывают в проточной воде и буферном физиологическом растворе, с последующим нанесением иммунной сыворотки.
Пример. Постоянные гистологические препараты культур клеток почек макак резус, фиксированные спирт-формалином или по
Буэну и окрашенные гематоксилином и эозином, с морфологическими изменениями или без них, опускают в ксилол (бензол, толуол) 2 на 15 — 30 мин (или больше) для растворения бальзама и снимают покровное стекло.
Препараты проводят по спиртам нисходящей концентрации для постепенного обводне5 ния: 100, 96, 70 (по 5 — 10 мин), Красители обесцвечивают в 70 спирте с добавлением нескольких капель соляной кислоты 3 — 5 мин.
Затем препараты промывают сначала в проточной водопроводной воде 15 — 30 мин, а за10 тем в двух порциях буферного физиологического раствора по 5 — 10 мик. Затем препараты помещают во влажную камеру и наносят несколько капель меченой изотиоцианатом флюоресцеина иммунной сыворотки (при пря15 мом методе флюоресцирующих антител). Используют меченые сыворотки к вирусу кори и обезьяньему вирусу 40. Возможно также применение непрямого метода флюоресцирующих антител. Препараты выдерживают 20 — 30 мин
20 при 37 C. После этого препараты обильно промывают в двух-трех порциях буферного физиологического раствора, споласкивают дистиллированной водой, подсушивают или заключают в буферный раствор глицерина 1:9 и затем
25 просматривают в люминесцентном микроскопе.
Предмет изобретения
Способ приготовления иммунофлюоресцентЗО ных препаратов путем нанесения на исследу е370498
Составитель С. Щенева
Техред E. Борисова
Редактор Т. Шагова
Корректоры: Е. Давыдкина и В, Петрова
Заказ 672/8 Изд. № 259 Тираж 755 Подписное
IIHHHIIH Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Москва, _#_-35, Раушская наб., д. 4/5
Типография, пр. Сапунова, 2 мый объект иммунофлюоресцентной сыворотки с последующим исследованием объекта в люминесцентном микроскопе, отличающийся тем, что, с целью ретроспективного иммунологического изучения препарата, объект постоянного длительно сохраняемого гистологического препарата обрабатывают органическим растворителем, проводят по спиртам нисходящей концентрации, обесцвечивают, промывают в проточной воде и буферном физиологическом растворе с последующим нанесением иммунной сыворотки.
