Способ получения корпускулярных препаратов,

 

. Е 391206

ОП И А

Союз Советских

Социалистических

Респу6лик

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Зависимое от авт. свидетельства ¹

М. Кл. А 61k 27/00

Заявлено 24 1Х.1971 (№ 1701535j31-16) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 17.!Х.1973. Бюллетень М .37

Дата опубликования описания 23.1.1974

Государственный комитет

Совета Министров СССР

llo делам изобретений и открытий

УДК 615.45:615.771.7 (088.8) Авторы изобретения

Л. Б. Меклер, Б. А. Клящицкий, A. В. Соколов, Л. Ф. Малышева и В. Х. Митина

Институт экспериментальной и клинической онкологии АМН СССР

Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОРПУСКУЛЯРНЫХ ПРЕПАРАТОВ, СОДЕРЖАЩИХ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫД

НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫЙ КОМПОНЕНТ

Изобретение относится к медицине, а именно к производству лекарственных препаратов.

Известен способ получения корпускулярных препаратов, содержащих биологически активный низкомолекулярцый компонент, например фолиевую кислоту, согласно которому фолиевую кислоту наносят на адсорбент, например активированный уголь, Однако по такому способу возможна десорбция активного вещества по мере движен ия корпускулы к месту действия в организме с одновременной неспецифической сорбцией биологичсски активных веществ, грисущих самому организму.

С целью повышения избирательности действия целевого продукта в предлагаемом способе к биологически активному низкомолекулярному компоненту, например 6-мсркаптопурину, добавляют вещество, обладающее функционально активными группами, способнымп связаться с биологически активным нпзкомолекулярным веществом и полимером-носителем, напр имер глутатион и йод, с последующим добавлением полимера-носителя, наприме р белка и .глутарового альдегпда, до пслучения частиц размером 0,1 — 1 мк.

Пример 1. Получение корпускулярных препаратов на основе бычьего альбумина и

6-меркаптопурина.

Синтез проводят по известному методу., исходя из ипозина. Общий выход в расчете на инозин 50%, т. пл. 211 — 213 С.

Найдено, %: Х 19,48; S 11,36.

5 СгоН>еХ О,S.

Вычислено, %. N 19,7; $11,28.

К раствору 56.8 мг рибозида 6-меркаптопурина в 4 мл О,1 .Ч натрий-фосфатного буферного раствора рН 7,5 добавляют 1 мл 0,5 М

10 раствора периодата натрия, смесь перемешивают 30 мин, дооавляют 0,3 мл 1 М раствора этиленгликоля и перемешивают еще 5 мин.

Затем реакционную смесь добавляют при перемешивании к раствору 268 мг бычьего

15 альбумина в 7 .ял дистиллированной воды, поддерживая рН смеси на уровне 8,0 — 9,0 с помощью 5о о-ного раствора углекислого калия. Перемешивание продолжают 45 лшн при рН 9,0 и добавляют раствор 150 лгг борпид20 рида натрия в 5 лгл дистиллированной воды.

Реакционную смесь оставляют на 18 час при

20 С и рН 9,0 — 9,5 и затем наносят на колонку с сефадексом Г-25, уравновешенную 0,01 М натрий-фосфатным буферным раствором рН

25 7,0, для отделения белка от низкомолекулярных компонентов. Выделяют белковую фракцию (приблизительно 30 лгл). По данным

УФ-спектроскопии и определения содержания азота по методу Кьельдаля эта фракция яв30 ляется конъюгатом бычьего альбумина с

397206

Составитель С. Щенева

Техред Т. Курнлко

Редактор Л. Гончарова

Корректор В. Жолудева

Заказ 3717/3 Изд. № 26 Тираж 647 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, К-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр.

Сапунова, 2

6-меркаптопур ином (Х„»«314 нм и 280 ки), содержащем 18 молей меркаптопурина па

1 моль аль бумина.

30 мл полученного раствора конъюгата кон центрируют до 10 мл и затем при 0 С добавляют 1 мл 25 /о -ного раствора глутарового альдегида в дистиллированной воде, Реакционную смесь перемешивают 40 мин при 0 С « вводят в колонку с сефадексом Г-25. уравновешенную 0,14 М натрий-фосфатным буферным раствором рН 7,5, для отделения корпускул и неконцентрированного белка от глутарового альдегида. Фракцию, содержащую макромолекулы, подвергают гель-фильтрации на колонке из сефарозы 2 В, уравновешенной тем же буфе рным раствором, и выделяют три фракции корпускулярных препаратов с разме рами частиц: 0,1 — 1 мк (выход 10%);

0,1 — 0,05 мк, (выход 60 /о) и менее 0,05 ик (выход 30%), Размер частиц определяют по кривой элюции корпускул из калиброванной (с целью определения молекулярного веса) колонки с сефарозой 2 В.

Аналогично получают корпускулярные препараты на основе яичного или бычьего аль;буминов с инозином, урид ином, азауридином и аденозинмонофоофатом. ,П ip и м е р 2. Получение корпускулярных препаратов на основе яичного альбумина и смешанного дисульфида 6-меркаптопу рина и глутатиона.

248 мл 6-меркаптопурина растворяют при

45 C в 70 мл 0,01 М однозамещенного фосфата нацрия, доведенного с помощью 5,0 M

КаОН до рН 11,8. Раствор охлаждают до

30 С и добавляют за 2 .Вин при перемешивании восстановленный глутатион и по каплям раствор йода (3,5 мл 0,2 н). По окончании добавления раствора йода смесь подкисляют

85 -ной фосфорной кислотой до рН 5,.0 и затем добавляют 100 мг восстановленного глутатиона для восстановления выделившегося йода, после чего вновь подкисляют смесь до рН 5,0 с помощью 85 /о-ной фосфорной кислоты. Реакционную смесь фильтруют, .фильтрат вводят в колонку с биогелем P-2, уравновешенную 0,01 М натрийчфосфатным буферным раствором рН 5,0. Элюцию ведут тем же буферным раствором прои 4 С. Фракции, содержащие дисульфид меркаптопурина и глутапиона, лиофилизируют, остаток растворяют в 0,01 М натрий- фосфатном буфе рном растворе рН 3,0 при 4 С, осадок отделяют и

".одержание смешанного дпсульфида в растворе определяют с помощью УФ-спектроскопии (л„»;с 280 нм) . Содержание глутатиона в дисульфпде определяют при помощи,реакции с нингидрином. Найдено, что весовое содержание глутатиона в дисульфиде составляет 65% (теоретическое значение 67 /о). Выход дисульфида 25% (в расчете на 6-меркаптопурин).

К пе ремешиваемому и охлажденному до

2 С раствору 100 яг белка в 5 мл 0,01 М натрий-фосфатного буферного раствора (pH 7,0) добавляют ipacraop 47 мг 6-меркаптопуринилглутатионилдисульфида в 4 лл того же буфера и 0,5 мл 25%-ного раствора глутарового альдегида, через 35 — 40 нин реакционную смесь вводят в колонку с сефадексом Г-25 для отделения от глутарового альдепида, а затем белковую фракцию пропускают через колонку с сефа розой 2 В. Выделение фракций корпускул проводят, как описано в примере 1.

Для определения количества 6-меркаптопурпна в полученных корпускулах их гидролизуют 0,2% раствором пепсина в 0,06 М соляной кислоте при 37 С в течение 16 час, затем доводят рН смеси до 8,0, добавляют 4 мг цистеина и выдерживают 30 мин; согласно данным УФ-спектра полученной смеси содержание 6-меркаптопурина (Хм»«315 ни) в полученных корпускулах составляет 5 молей на

1 моль альбумина.

Предмет изобретения

Способ получения корпускулярных п репаратов, содержащих биологически активный низкомолекулярный компонент путем íàнесения последнего на носитель, отличающийся тем, что, с целью повышения избирательности действия целевого продукта, к биологически активному низкомолекулярному компоненту, например 6-меркаптопурину, добавляют вещество, обладающее функционально активными пруппами, способными связаться с биологически активным низкомолекулярным веществом и полимером-носителем, например тлутатион и йод, с последующим добавлением полимера-носителя, например белка и глутарового альдепида, до получения частиц размером 0,1 — 1 мк.