Патент ссср 403407

 

р, .ля

О П И " -" И вЂ” ЕИЗОБРЕТЕН И

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ

403407

Союз Советсних

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства ¹

Заявлено 26.ll.1968 (№ 1220355131-16) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 26.Х.1973. Бюллетень №

М. Кл. А 61k 17/00

Государственный комитет

Совета Министров СССР ло делам изобретений и открытий

УДК 615.739(088.8) Дата опубликования описания 14.III.19

Авторы изобретения

А. И. Коломийченко, Я. Л. Поволоцкий, Л. С. Балаховский, А. К. Покотиленко, А. И. Цыганов и Г. В. Терентьев

Заявитель

Киевский научно-исследовательский институт отоларингологии

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОСТИМУЛЯТОРА

Изобретение относится к технологии производства медикаментов из веществ животного происхождения.

Известен способ получения биостимулятора, согласно которому плаценту отмывают дистиллированной водой и в бриллиантовой зелени, выдерживают при 2 — 4 С, отмывают дистиллированной водой, измельчают, настаивают при комнатной температуре, далее нагревают на водяной бане при 70 — 80 С, фильтруют, фильтрат кипятят 2 мин, вновь фильтруют, ампулируют и стерилизуют.

Целью изобретения является повышение биологической активности препарата.

Это достигается тем, что эмбриональную ткань человека, например 8 — 10-недельные эмбрионы после измельчения промывают, обрабатывают трипсином, клетки отделяют, отмывают, суспендируют и культивируют в питательной среде в течение 7 — 8 суток при температуре около 37 С, после чего из культуральной жидкости целевой продукт отделяют и очищают центрифугированпем. Ткань обрабатывают 0,2 — 0,4%-ным раствором трипсина при перемешивании и температуре около

37 С. Для культивирования посев производят из расчета 1 млн. клеток па 1 мл питательной среды.

Пример. 8 — 10-недельные человеческие эмбрионы погружают в среду № 199 или

0,5% -ный р 1cTBOp l ll jp 1JI1133T 1 лактальбумпна, содержащие по 500 сд. пенициллина и стрептомпцпша в 1 мл с добавлением до 10% нативпой донорской сыворотки из крови со5 ответству1ощсго биологического вида. В такой среде эмбриональную ткань добавляют и месту переработ1 и и хранят прп температуре

2 — 4 С не более 24 час (крайнпй срок использования — 48 час).

10 Затем ткань измельчают до кашпцеобразного состояния и до 5 раз промывают такoi же средой, в какой ее хранили, с добавой антибиотиков.

После промывки измельченную ткань поме15 щают в плоскодонную колбу и заливают 0,2—

0,4%-ным раствором трипспна, который берут в избытке по отношеншо к ткани и перемешивают содержимое в течение 1 час прн температуре не более 37 С. В результате получают

20 суспензшо отдельнь;х клеток в растворе трнпсина, от которого пх отделяют цептрпфугнровапием прп 1,5 Tblc. об/мпн и отмывают от остатков трипспна в среде ¹ 199 илп в 0,5%ном растворе гидролпзата лактальбумина, в

25 зависимости от того, какая пз этих двух сред будет использована для культивирования.

Осадок отмытых клеток ресуспендируют в среде № 199 илн 0,5%-ном растворе гидролнзата лактальбумина, содержащих по 100 ед.

30 пенициллина н стрептомнцина на 1 мл пита403407

Составитель Т. Головина

Техред Е. Борисова

Корректор Л. Новожилова

Редактор Д. Пинчук

Заказ 572/5 Изд. Мв 199 Тираж 467 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, 7К-35, Раушская наб., д, 475

Типография, пр. Сапунова, 2 тельной среды, многократно пипетируя суспензию для разделения конгломератов клеток.

Посев в стерильные стеклянные матрицы производят из расчета 1 млн клеток на 1 мл питательной среды после подсчета их концентрации в камере Горяева. Матрицы помещают в термостат и выдерживают при 37 С до образования хорошо выраженного клеточного пласта (обычно 7 — 8 суток), после чего куль.туральную среду отсасывают и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мин.

Полученная таким образом свободная от клеток прозрачная надосадочная жидкость оранжево-желтого цвета и является биостимулятором.

Предмет изобретения

1. Способ получения биостимулятора из ткани путем ее измельчения с последующим выделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения биологической активности препарата, эмбриональную ткань человека, например 8 — 10-недельные эмбрионы после измельчения промывают, обрабатывают трипсином, клетки отделяют, отмывают, суспендируют и культивируют в питательной среде в течение 7 — 8 суток при температуре около 37 С, после чего из культуральной жид10 кости отделяют целевой, продукт и отмывают центрифугированием.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что ткань обрабатывают 0,2 — 0,4 7о -ным раствором трипсина при перемешивании при температуре около 37 С.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для культивирования посев производят из расчета 1 млн. клеток на 1 мл питательной среды.