Способ электрофоретического разделения белковмышечной ткани

 

t

1

1 пп 42I923

ОПИС Е

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Реслублик (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 27.03.72 (21) 1765065/23-26 с присоединением заявки № (32) Приоритет

Опубликовано 30.03.74. Бюллетень № 12

Дата опубликования описания 03.09.74 (51) М Кч С 01п 27 26

G 01п 33/12

Гасударственный комитет

Совета Министров СССР па делам изобретений и открытий (53) УДК 543.545.4:543. .865 (088.8) (72) Авторы изобретения

Г. 3. Якубов и Е. В. Гунар

Всесоюзный научно-исследовательский институт холодильной промышленности (71) Заявитель (54) СПОСОБ ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОГО РАЗДЕЛЕНИЯ БЕЛКОВ

МЫШЕЧНОЙ ТКАНИ

Изобретение относится к области биохимии белковых веществ, а именно к способам электрофоретического разделения белков мышечной ткани.

Известен способ электрофоретического разделения саркоплазматических и миофибриллярных белков мышечной ткани, например, убойных животных, в крахмальном геле, включающий приготовление геля на буферном растворе, содержащем лимонную кислоту, трис и мочевину, и применение электродного буферного раствора, содержащего борную кислоту и гидроокись щелочного металла.

Недостатками известного способа являются низкая разрешающая способность (геля) даже в условиях вертикального электрофореза, длительность процесса разделения, сложность методики приготовления геля.

С целью ускорения процесса и упрощения методики разделения, а также повышения разрешающей способности геля, его готовят на буферном растворе с содержанием 88—

92 об.% смеси 0,0030 — 0,0035 М лимонной кислоты и 0,013 — 0,019 М триса, 8 — 12 об.% смеси 0,015 вЂ,025 М гидроокиси лития и 0,065—

0,080 М борной кислоты, 0,75 — 4,60 M мочевины, а в качестве гидроокиси щелочного металла, входящей в состав электродного буфера, берут гидроокись лития.

При этом с целью обеспечения возможности разделения саркоплазматических белков гель готовят па буферном растворе, содержащем

0,75 — 1,50 М мочевины, а для разделения миофибриллярных белков гель готовят на буферном растворе, содержащем 3,2 — 4,6 М мочевины.

При этом электрофорез в предложенной буферной системе приводит к увеличению раз10 решающей способности геля и ускорению разделения белков мышечной ткани, причем методика приготовления ге.чя и проведения электрофореза упрощается в связи с возможностью использования горизонтального электрофореза.

Пример. Гель для разделения саркоплазматических белков готовят следующим образом: к 23 г частично гидролизованного крахмала в литровой колбе добавляют 250 мл буфера (90% смеси 0,0033 М лимонной кислоты, 0,016 М триса и 10% смеси 0.02 М гидроокиси лития и 0,076 М борной кис,чоты, 1 М мочевины, рН 8,5) и. нагревая над газовой горелкой при помешивании. доводят до кипения в тече25 ние 30 — 40 сек. после чего удаляют воздух под вакуумом. Полученный продукт заливают в кювету. из плексигласа (270 К 110)(6 мм), выдерживают 1,5 — 2,0 час при комнатной температуре и используют в качестве гелевой

30 пластины при горизонтальном электрофорезе.

421923

Предмет изобретения

Составитель В. Ключников

Тсхред Е. Борисова Корректоры: А. Николаева и О. Данишева

Редактор Г. Тимофеева

Заказ 2111715 Изд. Х 1447 Тираж 651 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, 5К-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

Разделение миофибриллярных белков мышечной ткани проводят в гелевой пластине, полученной из 24,5 r частично гидролизованного крахмала и 220 мл буфера, содержащего

4 М мочевины.

3 — 4 мг исследуемого белка саркоплазмы растворяют в (),04 мл трис-боратного буфера, содержащего 0,5 М сахарозы. При исследовании миофибриллярных белков используют раствор белка в 8 М мочевине. В раствор белка помещак>т полоску хроматографической бумаги ватман 3 мм (3 10 мм), которую затем вставляют в гель с прорезанными обычным путем лунками.

Крахмальную пластину покрывают смазанной силиконовым маслом полиэтиленовой пленкой так, чтобы закрыть гель и электродные камеры. Последние устанавливают по обоим концам гелевой пластины и заливают буферным раствором (0,38 М борной кислоты и 0,1 М гидроокиси лития, рН 8 5). Для подключения электродных ванн к блоку питания (типа ЭФА-1) используют платиновые электроды. Разделение проводят при силе тока

30 ма и напряжении 950 в, продолжительность электрофореза 2 час. Протеинограмму окрашивают 0,0125%-ным раствором нигрозина в смеси, содержащей этанол, воду и уксусную кислоту (5: 4: 1) .

1. Способ электрофоретического разделения белков мышечной ткани, например, убойных животных, в крахмальном геле, включающий приготовление геля на буферном растворе, содержащем лимонную кислоту, трис и мочевину, и применение электродного буферного раствора, содержащего борную кислоту и гидроокись щелочного металла, отличающийся тем, что, с целью ускорения процесса и упрощения методики разделения, а также повышения разрешающей способности геля, его готовят на буферном растворе с содержанием

88 — 92 об.% смеси 0,0030 — 0,0035 М лимонной кислоты и 0,013 — 0,019 М триса, 8 — 12 об.o смеси 0,015 — 0,025 М гидроокиси лития и

0,065 — 0.080 М борной кислоты, 0,75 — 4,60 М мочевины, а в качестве гидроокиси щелочного

2О металла, входящей в состав электродного буферного раствора, берут гидроокись лития.

2. Способ по п. 1, отлич ающийся тем, что, с целью обеспечения возможности разделения белков саркоплазмы, гель готовят на

2S буферном растворе, содержащем 0,75 — 1,50 М мочевины.

3. Способ по п. 1, отл и ч а ю щийс я тем, что, с целью обеспечения возможности разделения белков миофибрилл, гель готовят на

ЗО буферном растворе, содержащем 3,2 — 4,6 М мочевины.