Способ очистки биологической жидкости при определении желчных кислот

 

«» 427277

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Зависимое от авт. свидетельства— (22) Заявлено 23.12.71 (21) 1728229/31-16 с присоединением заявки ¹â€” (32) Прпорптет—

Опубликовано 05.05.74. Бюллетень ¹ 17

Дата опуб1икования описания 23.01.75 (5! ) Л!. Кл. G Oln 31/08

Государственный номитет

Совета Министров СССР оо делам изобретений и открытий (53) У ДК 621 7.02:612..11/12 (088.8) (72) Автор изобретения

Я. И. Карбач

Винницкий медицинский институт им. Н. И. Пирогова," (71) 3 аявитель (54) СПОСОБ ОЧИСТКИ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЖИДКОСТИ

ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ ЖЕЛЧНЫХ КИСЛОТ

Изобретение может быть использовано в медицине и биологии.

Известен способ очистки биологической жидкости (сыворотки крови или желчи) при определении желчных кислот путем обработки сыворотки и желчи солями бария, отделения образовавшегося осадка, обработки пробы эфиром и элюции бариевых солей желчных кислот этиловым спиртом. Однако указанный способ не позволяет полностью очистить биологическую жидкость.

Целью изобретения является разработка способа, позволяющего повысить степень очистки биологической жидкости.

По предлагаемому способу пробу жидкости наносят на хроматографическую бумагу, обработанную солями бария, и последовательно обрабатывают бумагу с нанесенной пробой диэтиловым эфиром и этиловым спиртом.

Пример. Желчь разводят вдвое 0,02 н. раствором гидроокиси натрия, а сухой остаток, полученный после экстракции сыворотки крови этанолом, растворяют в 0,3 — 0,6 лл щелочного бутанолового раствора (100 лл а-бутилового спирта смешивают с 1,0 лл

30% -ного раствора гидроокиси натрия, хорошо перемешивают и фильтруют) . В зависимости от ожидаемой концентрации желчных кислот, обработанные, как это описано выше, образцы желчи и крови наносят по

0,03 — 0,4 лл на центр хроматографической бумаги размером 30х40 лл, одна из коротких сторон которой срезана в виде заостренного клина. Бумагу предварительно обрабатывают 0,01 н. раствором хлористого бария, отжимают от избытка реактива между двумя листами фильтровальной бумаги и высушивают. Нанесенную на обработанную бумагу пробу высушивают и бумажку вставляют в аппарат для экстракции, состоящий из приемника (стеклянная пробирка размером

15 — 20 лл Р 150 лл) и воздушного холодильника (стеклянная трубочка размером

10 — 13 ллХ500 лл), соединенных между собой при помощи шлифа. Для этого бумажку с пробой сворачивают в форме цилиндра и на /„- ее длины вставляют заостренным ко«цом наружу, в шлиф воздушного холодиль20 ника. В приемник наливают 2 — 2,5 лл диэтилового эфира, свободного от этилового спирта и перекисей, соединяют с воздушным холодильником, в просвет шлифа которого вставлена бумажка с нанесенной пробой, и экстрагируют в течение десяти минут на водяной бане при температуре 50 — 60 С. Время экстракции отсчитывают с того момента, когда эфир начнет скапывать с клиновндно заостренного конца бумаги (бумага не должна касаться стенок приемника во избежание не427277

Предмет изобретения

Составитель С. Шингва

Техред 3. Тараненко

Редактор T. Каранова

Корректор И. Симкина

Заказ 1713/472 Изд. л/з 782 Тираж 651 Подписное

Ц1-1ИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, >К-35, Раушскан наб., д. 4/5

Тип. Харьк. фил. пред. «Патент» полного омывания всей поверхности конденсированным эфиром, который в месте контакта сплывает по стенке, минуя ниже расположенный участок бумажки). Указанного времени достаточно для удалвния из пробы 5 холестерина, лецитина и других веществ, растворимых в эфире. После экстракции эфиром, меняют приемник на новый, в который наливают 1 мл 96 этилового спирта, соединяют приемник с воздушным холодильником (с ос- 10 тавшейся в нем бумажкой, проэкстрагированной эфиром) и ведут экстракцию на кипящей водяной бане этанолом в течение 15 мин, считая с момента скапывания спирта с бумажки.

При этом в спирт переходят все бариевые Г5 соли желчных кислот, а бариевые соли жирных кислот и билирубина, благодаря адсорбцип и плохой растворимости в спирте остаются на бумаге. После окончания экстракции спиртом трубку воздушного холодильника вместе со вста1вленной,B него бумажной отсоединяют от приемника, а имеющийся в нем спирт выпаривают досуха на кипящей водяной бане. Оставшийся после выпаривания сухой остаток используют для определения жел чн ы х ки слот.

Способ очистки биологической жидкости при определении желчных кислот путем осаждения жирных кислот и части пигментов солями бария и обработки надосадочной жидкости органическими растворителями, отличаюи1ийся тем, что, с целью повышения степени очистки, пробу жидкости наносят на хроматографическую бумагу, обработанную солями бария, и последовательно обрабатывают бумагу с нанесенной пробой диэтиловым эфиром и этиловым спиртом.