Способ получения кальцитонина

 

О П И С-А Н-.И Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Соцквпистинесккх

Республик

111) 72719?

К ЬВТОРСКОМ СВИДКтЯЛЬСтВ (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 13.09.78 (21) 2663070/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет— (51) М. Кл, А 61 К 35/26

Государственный комитет

СССР (53) УДК 615,45. .615.34 (088.8) ао делам изобретений н открытий

Опубликовано 15.04.80. Бюллетень № 14

Дата опубликования описания 25.04.80

Г. К. Коротаев, Н. Д. Гафурова, А. Л. Стальмакова, Е. В. Гамазина, П. М. Кочергин и А. А. Гендролис (72) Авторы изобретения

Всесоюзный научно-исследовательский институт технологии кровезаменителей и гормональных препаратов (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КАЛЪЦИТОНИНА

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способам получения кальцитонина из щетовидной железы.

Известен способ получения кальцитонина путем экстракции щитовидной железы 0,2 н раствором уксусной кислоты при температуре 70 С, очистки экстракта путем ионообменной хроматографии на анионите ИРА-400 с последующим растворением сырца в смеси

40% уксусной кислоты и бутанола с добавлением гептана и лиофилизацией. Получен- 1о ный продукт очищают на сефадексе, лиофилизируют и вновь очищают с помощью противоточного распределения в двухфазной системе растворителей бутанол-вода-уксусная кислота (5:4:1), затем добавляют гептан и после ргсслаивания, водные фракции объединяют и лиофилизируют. Выход гомогенного кальцитонина 54 — 270 ЕД на 1 кг сырья с активностью 200 — 270 ЕД/мг (11.

Однако известный способ является сложным и трудоемким процессом, включающим:

2 противоточных распределителя, 2 ионообменных и 1 гелевая хроматографии, 4 — 6 лиофилизаций — делают его неудобным для промышленного получения кальцитонина.

Кроме того, экстракция сырья осуществляется при температуре 70 С, что приводит к денатурации многих белковых комплексов и снижает выход целевого продукта.

Цель изобретения — повышение выхода целевого продукта и упрощение технологии производства.

Поставленная цель достигается тем, что сырье экстрагируют ацетоном подкисленным соляной кислотой при температуре

4 — 25 С, полученное извлечение обрабатывают ацетоном и перед очисткой на сефадексе остаток обрабатывают водой подкисленной уксусной кислотой, эталоном, затем осаждают целевой продукт из водно-спиртового раствора избытком ацетона.

Способ поясняется следующими примерами.

Пример 1. 40 кг свежезамороженной щитовидной железы свиней измельчают,добавляют 180 литров 86% ацетона, подкисленного соляной кислотой до рН 0,05,полученную смесь перемешивают при комнатной температуре (20 С) в течение 1,5 часов, по окончании экстракции, жмых отделяют, к прозрачному экстракту добавляют 4 объема

727197

Формула изобретения

Составитель Т. Павлович

Техред К. Шуфрич Корректор М. Вигула

Тираж 673 Подписное

ЦИ И И П И Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, )K — 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал П П П «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Редактор Н. Катаианина

Заказ 1015/2

3 ацетона, смесь выдерживают при 2 — 8 C в течение 15 — 17 час.

Надосадочную жидкость декантируют, а осадок высушивают ацетоном.

280 г полученного сырца кальцитонина растворяют в 28 л смеси содержащей бутанол, воду, уксусную кислоту в соотношении

5:4:1. Через 4 час нижнюю фазу отделяют и отбрасывают, а к верхней фазе добавляют

10 объемов ацетона и оставляют при комнатной температуре на 4 — 6 час.

Надосадочную жидкость декантируют, à 1@ осадок высушивают ацетоном.

28 r полученного продукта (с активностью 6 — 8 ЕД/км) растворяют в 560 мл воды,подкисленной уксусной кислотой до рН

4,5 и добавляют этанол в концентрации 85о/р.

Затем с помощью 12О/р раствора аммиака повышают рН до 6,5, выпавшие в осадок балластные вещества отделяют, а к раствору добавляют 10 объемов ацетона, смесь оставляют при комнатной температуре на

4 часа, надосадочную жидкость декантиру- 20 ют, осадок высушивают ацетоном.

6 г полученного продукта (с активностью

25 — 30 ЕД/мг) растворяют в 60 мл 1 М уксусной кислоты, вносят в колонку размером

4,3.134 см наполненную сефадексом Г-25 (тонкий) и элюируют этим же раствором со скоростью 150 мл/час. Объем фракции

15 мл. Фракции третьего пика, соответствующие пробиркам 110 †1, объединяют и лиофилизируют.

Вес продукта 400 мг с активностью не ниже 200 ЕД/мг.

Пример 2. 250 г лиофилизированной щитовидной железы крупного рогатого скота измельчают, добавляют 1750 мл 76 /< ацетона, подкисленного соляной кислотой до рН 1, перемешивают в течение 2 часов при комнатной температуре, по окончании экстракции жмых отделяют, а к прозрачному экстракту добавляют 4 объема ацетона, смесь выдерживают при 2 — -8 С в течение 15

17 час, затем надосадочную жидкость декантируют, осадок высушивают ацетоном.

Вес сырца кальцитонина 3 — 4 г, активность 0,6 — 0,8 ЕД/мг.

Далее сырец кальцитонина очищают, как описано в примере

Предложенный способ получения высокоочищенного кальцитонина позволяет более чем в 10 раз повысить выход чистого кальцитонина до 2400 ЕД на 1 кг щитовидной железы с стандартной активностью «е ниже 200 ЕД,/мг.

Способ получения кальцитонина, путем экстракции щитовидной железы растворителем, обработки извлечения смесью бутанола, воды, уксусной кислоты, очистки на сефадексе и лиофилизации, отличающийся тем, что. с целью повышения выхода целевого продукта и упрощения технологии производства, сырье экстрагируют ацетоном подкисленным соляной кислотой при температуре 4 25 С, полученное извлечение обрабатывают ацетоном и перед очисткой на сефадексе остаток обрабатывают водой подкисленной уксусной кислотой, этанолом, затем осаждают целевой продукт из водноспиртового раствора избытком ацетона.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1.,3. Biochemistry 1970, 9, 1665.