Способ глубинного культивирования клеток dioscorea dеlтоidеа wall

 

™ ФЧЧВФ Ъ Юа а а а

lehr;o ж ва,и т, "атею тЕХ М ИНДЕЕК К. О

Союз Советских

Социолистических

Республик (и) 770I94

Ч 1 Д

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 24.04.78 (21) 2608088/28-13 с присоединением заявки № (51) М. К .

С 12N 5/00 ло долом изоо етеиир (43) Опубликовано 15.09.82. Бюллетень № 34 (53) УДК 567.8.093.1 (088.8) и открытий (45) Дата опубликования описания 15.09.82 (72) Авторы изобретения (71) Заявитель

А. Х. Липский, P. Д. Сойфер и P. Г. Бутенко

Ордена Трудового Красного Знамени институт физиологии растений им. К. А. Тимирязева (54) СПОСОБ ГЛУБИННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КЛЕТОК

DI0SC0REA DELT0IDEA WALL

ГосУдоРствеииый комитет (23) Приоритет

Изобретение относится к области микробиологической промышленности и касается культивирования растительных клеток.

Известен способ глубинного культивирования клеток Dioscorea deltoidea Wall в питательной среде, содержащей углеводы, минеральные соли, витамины, фитогормоны в аэробных условиях (1).

Однако известный способ не предотвращает адгезию клеток.

Целью изобретения является предотвращение адгезии клеток.

Эта цель достигается тем, что культивирование ведут в присутствии полиоксипропиленгликолевого эфира в концентрации

0,005 — 0,2%/объем питательной среды, причем полиоксипропиленгликолевый эфир используют в виде водной эмульсии с концентрацией 0,1 — 10 .

Пример 1. Готовят питательную среду для культивирования клеток Dioscorea

deltoidea W. следующего состава, мг/л:

КН4ИОз 1650

К1 1Оз 1900

СаС1з.2НзО 440

MgSO4 7Н О 370

КН2Р04 170

НзВОз 6,2

MnSO4 ° 4НзО 22,3

ZnSO4 7НзО 8,6

KJ 0,83

ХазМо04. 2НзО 0,25

CuSO4 5НзО 0,025

СоС1з 6НзО 0,025

5 FeSO4 7НзО 27,85

МазЭДТА 37,25

Фолиевая кислота 0,5

Рибофлавин 0,5

Биотин 1,0

Са-пантотенат 1,0

Пиридокспн 1,0

Тиамин 1,0

Никотинамид 2,0

Кобаламин 0,0015

15 Кинетин 0,1

2,4-D 1,0

Сахароза 30000

Пропинол Б-400 (0,1%-ная эмульсия) 50

20 Приготовленную среду в количестве 4,6л вносят в ферментационный аппарат объемом 7,5 л, стерилизуют в автоклаве при атмосферном давлении в течение 15 мин (температура около 100 С), выдерживают

25 при 0,7 — 0,8 атп 20 мин (температура

116 — 118 С) с последующим плавным спуском давления пара до атмосферного в течение 15 мин. В охлажденный аппарат асептически вносят инокулюм в количестве

30 400 мл, содержащий 2X10 клеток.

770194

Формула изобретения

Редактор О. Филиппова Техред А. Камышникова Корректор Е. Михеева

Заказ 1653/20 Изд. ¹ 218 Тираж 505 Подписное

НПО «Поиск» Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раугиская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

В качестве инокулята используют штамм

Dioscorea deltoidea Wall, выращенный в колбах на качалке при 100 об/мин в термостатируемой комнате при 26+-1 С в темноте в течение 10 суток. 5

Процесс ферментации ведут при 27++0,2 С со скоростью вращения мешалки

500 об/мин при расходе воздуха 1,5—

3,5 л/мин с поддержанием концентрации растворенного кислорода 60 — 90% от пасы- 10 щения максимального по питательной среде.

В ходе ферментации периодически отбирают пробы культуральной жидкости, в «оторых контролируют рН, концентрацию 15 клеток, вес биомассы (влажной и сухой), содержание диосгенина. Накопительное культивирование ведут в течение 2 — 3 педель, получают 4 л культуральной жидкости с концентрацией клеток 7X10 кл/мл 20 (10 г/л сухого вещества биомассы) и содержанием диосгенина 1,37% в пересчете на абсолютно сухой вес биомассы. Общий выход диосгенина составляет 100—

140 мг/л. 25

Пример 2. Питательную среду готовят аналогично примеру 1, при этом пропинол Б-400 вносят в количестве 2 г/л в виде

10%-ной водной эмульсии. Все последующие операции (стерилизация среды, процесс культивирования, биосинтез диосгенина) остаются неизменными.

Использование изобретения позволит увеличить выход целевого продукта.

1. Способ глубинного культивирования клеток Dioscorea deltoidea Wall в питательной среде, содержащей углеводы, минеральные соли, витамины, фитогормоны в аэробных условиях, отличающийся тем, что, с целью предотвращения адгезии клеток, культивирование ведут в присутствии полиоксипропиленгликолевого эфира в концентрации 0,005 — 0,2%/объем питательной среды.

2. Способ по п. 1, отл ич а ющий ся тем, что полиоксипропиленгликолевый эфир используют в виде водной эмульсии с концентрацией 0,1 — 10%.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Бутенко P. Г. «Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений», М., 1964, с. 272.