Способ получения производных мурамилдипептидов

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ ""793384

Союз Советских

Социалистических

Республик

К ПАТЕНТУ (61) Дополнительный к патенту— (22) Заявлено 2Ы677 (21) 2497271/23-04

<51)М. К .

С 07 С 103/52//

7I 61 К 37/02 (23) Приоритет — (32) 28. 06. 76

74072/1976 16.12.76 (31) 150328/1976 03.02.77

11122 /1977 (33) -Япония

Опубликовано 30.12.80. Бюллетень М 48

Дата опубликования описания 05.0181

Государственный комитет

СССР по делам изобретений н открытн и (53) УДК 547. 964 .4.07(088.8) Иностранцы

Юичи Ямамура, Тецуо Шиба, Ичиро Азума, Соичи Кусумото, Тадамаса Хираяма и Цунео Кусама (Япония) (72) Авторы изобретения

Иностранная фирма

"Дейити Сейяку Ко. Лтд"

{Япония) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ МУРАМИЛДИПЕПТИДОВ

0Е

Р о ?15

Сит OY ке 0?r

?!неоСн

НзССНС00

Изобретение относится к способу получения производных мурамилпептида, обладающих биологической активностью которые могут найти применение в медицине.

В пептидной химии известен карбодиимидный способ конденсации аминокислот и пептидных фрагментов между собой с соединениями, имеющими свободную карбоксильну!а группу (1J. Кро ме того в органической химии широко используется реакций переэтерификации (2).

Цель предлагаемого изобретения получение синтетических соединений с интересными фармакологическими свойствами с использованием известных химических методов.

Поставленная цель достигается способом получения производных мурамилди пептида общей формулы где Y — микомиколоил-, кординомико- лоил-, нокардомиколоил- или синтетическая ацильная группа с числом атомов углерода от С3о до С о, имеющаЯ в оС

-положении разветвленную алкильную цепь; — L-аланил-, О-изоглутамил-, глицил-D-изоглутамил-, L-серил-О-изоглутамил, заключающийся в то!, что бензил-N-ацетил- оС-мурамид формулы I! сн, Он н,I .NI oo?r где Z — бензил, подвергают взаимодействию с микомиколевой, кординомиколевой, нокардомиколевой или с синтетической жирной кислотой, содержащей от С30 до С о углеродную цепь, имеющую в c(. †ïoëîæåнии разветвленную алкильную цепь, и с дипептидом, выбранным из группы

L-аланил-0-изоглутамин, глицин-0-изоглутамин или L-серил-D-изоглутамин, в любой последовательности.

793384

Карбоксильную группу исходного материала, т. е. бензил-N-ацетил- С-мурамид (11) защищают подходящей защитной группой, например, дифенилметильной. Эта защита карбоксильной группы может предупреждать нежелательные побочные реакции на последующих стадиях. Затем гидроксильную группу С-6-соединения активируют обработкой тозил хлоридом или метансульфонил хлоридом в растворителе основного характера, например в пиридине.

Полученный тозилат вводят во взаимодействие с миколатом щелочного металла в подходящем полярном растворителе, например диметилФормамиде или диметилсульфоксиде при температуре 15

100-140 С. Реакция протекает гладко, если ее проводят в неполярном раство- рителе, например, бензоле, в присутствии каталитического количества циклического полиэфира, например 18-кро- Щ ун-6.

Полученная таким образом защитная группа карбоксильной группы соединения (» ) удаляется например трифторуксусной кислотой. Полученный про- д дукт вводят во взаимодействие с,ципептидом, например бензиловым эфиром

L-аланил-0-изоглутамина в присутствии подходящего конденсирующего агента, например, дициклогексилкарбодилмида и N-гидроксисукцинимида. Эту реакцию проводят при перемешивании в подходящем неполярном растворителе, например этилацетате, бензоле, диоксане или тетрагидрофуране, при комнатной температуре.

Наконец, оставшиеся защитные группы удаляют обычным методом, например, гидрированием в присутствии палладиевой черни или платины или путем о6работки раствором бромистоводород- 40 ной кислоты в уксусной кислоте.

Целевое соединение может быть также получено путем взаимодействия бензил-N-ацетил-g-мурамида в начале с дипептидом, а затем с миколевой кислотой или синтетической жирной кислотой.

Один из исходных материалов миколевая кислота может быть получена путем гидролиза бактерий Hycoba«е

rium tuberculosis М. phlei, М. Smegmatis, Миколевая кислота может быть индивидуальной кислотой или смесью высших жирных килот., имеющих общее число атомов углерода 28-90 и сс-положение у которых замещено длинной боковой цепью из алкильной группы и

Р-положение замещено гидроксильной группой.

Полученный таким образом препарат является смесью нескольких видов N миколевой кислоты и, если необходимо, то дальнейшей очисткой может быть выделена индивидуальная кислота. Однако с точки зрения биологической активности в этом изобретении, пол ная очистка,цо отдельной кислоты не столь важна и может быть использована смесь нескольких видов кислоты.

Все получаемые в смеси миколевые кислоты, являются высшими жирными кислотами с общим числом атомов углерода

70-90 и имеющими длинную боковую цепь из алкильной группы (C С ) в д

2Я 24

-положении.

С другой стороны в качестве среднего класса миколевых кислот могут быть перечислены нокардомиколевая кислота, кориномиколевая кислота или артробактериальная миколевая кислота, имеющие общее число атомов углерода

28-70 и длинную боковую цепь из алкильной группы (С8-С., ) в +-положении и гидроксильную группу в 3 -положении.

В качестве бактерий вида Nocardia для получения нокардомиколевой кислоты Могут быть использованы Nocardia

actегоides, Н, rubra, Н. Brasi!iensu или й. Porycnromogenes и т. и.

В качестве бактерий вида Corinobacterium u Arthrobacter для получения кориномиколевой кислоты могут быть использованы Corynodiohtheriae. с. pseudotuberculosis, с. xегоsis, с. renale, Arthrobacter simplex, A. flavescens.

Получение нескольких видов миколевой кислоты.

1. Воск. Д. Цельные бациллы, стенки клеток и оболочки клеток МусоЬасterium tuberculosis штамма Лояма В, гидролизуют щелочью и хроматографируют в колонке с активированным глиноземом. Получают миколевую кислоту.

К раствору 0,50 г миколевой кислоты в 5 мл хлороформа добавляют одну каплю 1%-ного раствора фенолфталеина и смесь титруют 2,405 мл 0,2 н.метанольным раствором КОН.

Из этого следует, .что средний Молекулярный вес миколевой кислоты как одноосновной кислоты составляет 1186.

Раствор концентрируют под уменьшенным давлением, к остатку добавляют метанол, нерастворимые вещества отфильтровывают, получают 0,51 г миколята калия. Выход 98%; т. пл. 7183 С.

Элементарный анализ миколевой кислоты:

Найдено, Ъг С 81,57; Н 13,48.

Вычислено, Ъ: С 81,33; Н 13,62.

Из среднего молекулярного веса, полученного титрованием и элементарным анализом определяют, что средняя молекулярная формула миколевой кислоты должна быть СбоН 803, 1176.

2. Цельные бациллы Nocardi a astегоides 131 гидролизуют щелочью этерифицируют (метильная этерификация), чистят в хроматографической колонке с силикагелем и затем гидролизуют для получения средней миколевой кислоты.

793384

Выход 80Ъ.

Элементарный анализ, Ъ: С 76,48;

Н 12,69.

К раствору 385 мг кориномиколевой кислоты в 5 мл хлороформа добавляют каплю фенолфталеина и смесь титруют

1,47 мл 0,5 н.метанольным раствором

КОН (f = 1,00). Из этого вычисляют средний молекулярный вес кориномиколевой кислоты, как одноосновной кислоты, он равен 524. Раствор концентрируют под уменьшенным давлением, 55

Смесь из 1,24 г средней миколевой кислоты (нокардомиколевой кислоты) и 2 мл 3 н.метанольного раствора KOH нагревают 2,5 часа с обратным холодильником, затем концентрируют под уменьшенным давлением, остаток растворяют в 100 мл диэтилового эфира и промывают 1 н.водной соляной кислотой и затем водой. Раствор сушат над

MgSO4„ концентрируют в вакууме. Остаток промывают охлажденным льдом этанолом и сушат над пятиокисью фосфора под уменьшенным давлением, получают

0,82 r воскообразного продукта.

Выхоц 73Ъ.

Элементарный анализ, Ъ: С 79,69;

H 12,76. 15

К раствору 870 мг нокардомиколевой кислоты в 10 мл хлороформа добавляют каплю 1Ъ-ного раствора фенолфталеина и смесь титруют 2,465 мл 0,5 н.метанольным КОН (f = 0,92). Из этого вы- 2О числен средний молекулярный вес нокардомиколевой кислоты как одноосновной кислоты 767. Раствор концентрируют в вакууме, остаток растворяют в диэтиловом эфире и фильтруют. Фильтрат концентрируют под уменьшенным давлением, получают 0,88 г воскоподобного продукта, выход: 98Ъ.

Из элементарного анализа и полученного среднего молекулярного веса определяют молекулярную форму нокардомиколевой кислоты C „ Н9 0 768..

3. Цельные бациллы Corynobacterium

diphteria PW8 обрабатывают как описано для йосаrdià astегоides 131 для получения средней миколевой кислоты. 35

Смесь из 0,53 r метилового эфира средней миколевой кислоты (кординомиколевой кислоты) и 2 мл 3 H.ìåòàíoëüного раствора КОН нагревают с обратным холодильником 2,5 ч. После кон в 4() центрации под уменьшенным давлением, остаток растворяют в 15 мл диэтилоного эфира, промывают 1 н.водным раствором HCI и затем водой. Раствор сушат над обезвоженным MgS04, концентрируют под уменьшенным давлением. 4

Полученный остаток растворяют в небольшом количестве метанола. Раствор охлажают,, выпавший в осадок воскоподобный продукт отделяют декантацией, промывают холодным метанолом, 50 сушат под уменьшенным давлением и получают 0,41 г воскоподобного продукта. остаток растворяют в эфире, фильтруют. Фильтрат концентрируют под уменьшенным давлением, получают 412 мг воскоподобного продукта. Выход 99Ъ.

Из элементарного анализа и среднего молекулярного веса определена молекулярная формула нокардомиколевой кислоты Сз> Н660 5 519.

Пример 1.Краствору1,0r бензил-N-ацетил- с(.-мурамида в 10 мл тетрагидрофурана добавляют 0,8 г дифенилдиазометана. Смесь перемешивают

30 мин при комнатной температуре.

После удаления растворителя остаток кристаллизуют из гексана.

После перекристаллизации из смеси этилацетата и гексана получают 1,3 г дифенилметилового 1 в — О-бензил-N-ацетилмураминовой кислоты. После повторной кристаллизации из того же растворителя получают продукт; т, пл. 155-156 С; (d.j + 122 о (с = 1,0; хлороформ).

Элементарный анализ для С НЗ О

9f 35

Вычислено, Ъ: С 67,74; H 6,42, N 2,55.

Най,цено, Ъ: С 67,62; Н 6,50; и 2,52.

К раствору 0,3 г дифенилметилового эфира 1- с .-бензил-N-ацетилмураминовой кислоты в 3 мл пиридина добавляют

1,2 г тозил хлорида, смесь перемешивают один час, затем выливают в воду и продукт зкстрагируют зтилацетатом.

Этилацетатный раствор последовательно промывают 0,3 н.раствором едкого натрия, 1 н.соляной кислотой и водой, и затем сушат над безводным сульфатом магния.

После отгонки растворителя в вакууме остаток чистят колоночной хроматографией на силикагеле (10 r). Продукт элюируют смесью бензол:этилацетат (5:1), получают 0,34 г чистого дифенилметилового эфира 1 †-0-бензил-6-тозил-й-ацетилмураминовой кислоты; т. пл. 68-73 С; (o() -" + 84,4о (с = 0,5; хлороформ).

Элементарный анализ для СзйН4 0„ й5

Вычислено, Ъ: С 64,85; Н 5,87;

N 1,99; S 4,56.

Найдено, Ъ: С 64,68; Н 5,92; и 1,93; 5 4,31.

К раствору 0,33 г дифенилметилового эфира 1-о(.-О-бензил-6-0-тозил-N-ацетилмураминовой кислоты в 10 мл бензола добавляют 0,38 r микомиколята калия и смесь кипятят с обратным холодильником 3 ч.

Растворитель отгоняют в вакууме, остаток промывают ацетоном. Нерастворимый материал хроматографируют на колонке с силикагелем.

Элюат (со смесью бензола и этилацетата 10:1 об/об) обрабатывают эфирным раствором диазометана при комнатной температуре. Растворитель отгоняют в вакууме, остаток вновь хроматографируют на колонке с силикагелем.

793384

Метилмиколят элюируют бензолом, смесью бенэол-этилацетат (10:1), элюат собирают. Растворитель отгоняют, остаток кристаллизуют из ацетона, получают 0,32 г дифенилметилоного эфира 1-Q-О-бенэил-б-О-микромиколоил-N-ацетилмураминовой кислоты; т. пл.

54-57 С; f

Вычислено, Ъ: С 78, 07; Н 1 1, 27

N 0,82.

Найдено, Ъ: С 78,34; Н 11,48;

N 0,85.

Смесь из 0,3 г дифенилметилоного эфира 1- (.-О-бензил-б-О-микомиколоил- 15

-N-ацетилмураминовой кислоты и 1 мл анизола растворяют в 20 мл хлороформа.

К охлажденному льдом раствору добавляют 3,0 мл трифторуксусной кисло- 2g ты, смесь перемешивают. в течение

30 мин, затем к ней добавляют ацетон и растворитель удаляют н вакууме. Остаток промывают этанолом, растворяют в 10 мл тетрагидрофурана. 25

К этому раствору, охлажденному на ледяной бане, при перемешивании добавляют 75 мг N-гидроксисукцинимида, 65 мг гидрохлорида бензилоного эфира

L-аланин-0-изоглутамина, 24 мг триэтиламина, растворенного н 0,2 мл тетрагидрофурана и 37.мг дициклогексикарбодиимида. Леремешинание продолжают в течение ночи, при этом температура поднимается до комнатной.

Образонавшиеся хлористоводородный триэтиламин и N N -циклогексилмочевину отфильтровывают. Растворитель отгоняют в вакууме, остаток растворяют в этаноле, фильтруют и хроматографируют на силикагеле. Продукт элю-

Остаток кристаллизуют из смеси бензола и метанола, получают 0,124 г бензилового эфира 1-с(-О-бензил-6-045

-микромиколоил-N-ацетиламурамил-L-аланил-0-изоглутамина," т. пл. 1711 72 С; (oL32 + 30,2 О (с = 0,5; хлороформ) ., Элементарный анализ для

СНЗ Н оо01 й, Вычислейо, Ъ: С 74,13; Н 11,01;

N 3,06.

Найдено, Ъг С 63,63; Н 11,05; и 3,18.

76 мг бенэилового эфира 1-a(-О-бен- Б5 зил-б-0-микромиколоил-й-ацетилмурамил-Е-аланил-0-изоглутамина растворяют в 20 мл тетрагидрофурана и подвергают гидрогенолиэу в присутствии палладиевой черни. Затем раствори- () тель отгоняют в вакууме. Остаток кристаллиэуют иэ смеси эфира и этанола, получают 64 мг 6-О-микомиколоил-й-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглутамина; т. пл. 137-160 С;(с 3++ 6

+ 24,3О(после 9 мин, с = 0,4; тетрагидрофуран — вода 50: 1); (с j + 25, 8 (после 24 ч, с = 0,4 -.åòðàãéäðîôóðàíвода 50:1).

Элементарный анализ для

С99 Нл 88 Ол N Н О.

Вычислено, Ъ: С 71,25; Н 11,48; и 3,36.

Найдено, Ъ: С 71,08; H 11,40;

N 3,26.

Пример 2. B 15 мл бензола растворяют 0,48 г дифенилметилоного эфира 1- &0-бензил-N-ацетилмураминоной кислоты и 0,03 r 18-Крон-б.

К раствору добавляют 0,31 г кориномиколята калия и раствор кипятят с обратным холодильником 3 ч.

После охлаждения реакционную смесь промывают 0,1 н.соляной кислотой и водой, сушат. Растворитель отгоняют н вакууме, остаток хроматографируют в колонке с силикагелем. Элюат из смеси бензол-этилацетат (5:1) концентрируют и получают 0,30 г дифенил.метилового эфира 1- (-О-бензил-6-0-кориномиколоил-N àöåòèëìóðаминовой кислоты;(с j + 58,4 (c =- 1,0; хлороформ).

Элементарный анализ для

Сб, Н99 О лир и .

Вычислено, Ъ: С 73,17; Н 9,5;

N 1,33.

Най,цено, Ъ: С 72,85; Н 9,27;

N 1,40.

0,22 г дифенилметилового эфира

1-с ;О-бензил-б-О-кориномиколоил-N-ацетилмураминовой кислоты и 0,1 мл анизола растворяют в 10 мл дихлорметана.

K охлажденному льдом раствору добавляют 1,6 мл трифторуксусной кислоты. После перемешивания в течение

30 минут, растворитель отгоняют в вакууме. Остаток хроматографируют на силикагеле. После элюирования смесью бензола и этилацетата 5:1, анизола и дифенилметанола, продукт элюируют смесью хлороформа и метанола (5:1), элюат собирают, растворитель отгоняют в вакууме, получают 1- -О-бензил-б-О-кориномиколоил-N-ацетилмураминовую кислоту. К этому продукту добавляют 89 мг хлористоводородного бензилового эфира L-аланил-D-изоглутамина и 0,036 мл триэтиламина в 5 мл тетрагидрофурана.

К охлажденной смеси (до -15 С) дор бавляют 42 мг N-гидроксисукцинимида и 46 мг дициклогексилкарбодиимида и смесь перемешивают один час при той же температуре. Температуру поднимают до комнатной и перемешивание продолжают н течение ночи.

Образовавшиеся хлористоводородный триэтиламин и N,N -дициклогексилмочевину отфильтровывают. Растворитель отгоняют, остаток промывают смесью метанола и воды (1:1) и эфиром. Пос793384

10 ле перекристаллизации из смеси метанола и воды получают 0,13 r бензилового эфира 1-,С-О-бензил-б-О-кориномиколоил- N-avervx pamrx-L-аланил-0-изоглутамина; т. пл. 172-174 С;

Id.) й+ 53,7 (с = 1,0; хлороформ).

Элементарный анализ для

Сбь Н о80,й 5 й4

Вычислено, Ъ: С 67,54; Н 9,28; и 4,77.

Найдено, Ъ: С 67,50; Н 9,10;

N 5,01.

105 мг бензилового эфира 1-, -0-бензил-б-О-кориномиколоил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглутамина растворяют в 8 мл тетрагидрофурана.

Продукт подвергают гидрогенолизу в присутствии палладиевой черни ири

28 С.

Растноритель отгоняют в вакууме.

Остаток кристаллизуют из смеси метанол, зАир и ацетон, получают 59 мг б-О-кориномиколоил-N-ацетилмурамил- -аланил-0-изоглутамина; т. пл. 152155 С;(о()"" + 31,9 (с = 0,88; тетрагидрофурай — вода 50:1).

Элементарный анализ для

С52 Н < с, 0 и . 2, 5 Н 0 .

Вычислено, Ъ: С 60, 14; Н 9,80;

N 5,40.

Найцено, Ъ: С 59,81; Н 9,60;

N 5,29.

Пример 3. В условиях, описан ных в примере 2, из 0,35 г дифенилметилового эфира 1-с -О-бензил-N-ацетилмураминоной кислоты и 0,31 г нокардомиколята калия получают 0,34 г дифенилметилового эфира 1-<(-0-бензил-б-0-нокардомиколоил — N-ацетилмураминовой кислоты;(с(3. + 46,7 (c = 1,0; хлороформ), Элементарный анализ для

С82 1 1ЪО 010,6 и

Вычислено, Ъ: С 75,79; Н 10,08; и 1,08.

Найдено, Ъ С 75,38; H 10,18;

N 1,03.

Обработав О, 24 r дифенилметилового эфира 1-d. — 0-бензил-б-0-нокардомиколоил-й-ацетилмураминовой кислоты трифтоуксусной кислотой, получают свободную карбоновую кислоту, которую конденсируют с 75 мг хлористоводородного бензилового эфира L-аланил-О-изоглуамина, в условиях аналогичных описанным в примере 2, получают

0,14 г бензилового эфира 1-4;0-бензил

-б-О-нокардомиколоил-й-ацетилмурамил— L-аланил-0-изоглутамина, т. пл. 164167 C;(+3Я + 44,7 (c = 1,0; хлороформ), Элементарный анализ для

С84 Н159 Ояь N4

Вычислено, Ъ: С 70,91; H 9,85;

N 3,94.

Найдено, % С 70,99; Н 9,92; и 3,92.

84 иг этого соединения подвергают гидрогенолизу в условиях, описанных в примере 2, получают 51 мг б-О-нокардомиколоил-N-ацетилмурамил-L-аланил-0-изоглутамина; т. пл. 154157 С (с разложением); () > + 30,0 (c = 1,0; тетрагидрофуран — вода 50:1, после 24 ч).

Элементарный анализ для с о н„т,о,зь й4 1,5 нг0.

Вычислено, Ъ: С 66,22; Н 10,32;

N 4,41.

Найдено, Ъ: C 66,07; Н 10,58; и 4,26.

Пример 4. К раствору смеси дифенилметилового эфира 1- (-О-бензил-6-О-микомиколоил-й-ацетилмураминовой кислоты и 0,2 мл анизола в 20 мл дихлорметана добавляют 3 мл трифторуксусной кислоты. После перемешивания раствора в течение 30 мин, растЩ норитель отгоняют в вакууме. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем. После элюирования анизолом и диАенилметаном, смесью бензола и этилацетата (5:1), растворитель заменяют на смесь хлороформа и метанола (5:1), злюат собирают и растворитель отгоняют н вакууме, получают

1-d. — О-бензил-б-О-микомиколоил-N-ацетилмураминовую кислоту.

К процукту добавляют 0,15 r хлористоводородного бензилового эфира 0—

-бензил-L-серил-0-изоглутамина и

0,05 мл триэтиламина в 10 мл тетрагидрофурана, раствор охлаждают до

-10 С. Затем при перемешинании, постепенно, в течение одного часа в раствор вводят 50 мг N-rvzpoxcvcywu>s мида и 69 мг дициклогексилкарбодиимида и перемешивание продолжают в течение ночи при комнатной темпера40 туре. Образовавшиеся в качестве побочного продукта хлористоводородный триэтиламин и N N -дициклогексилмочевину отфильтровывают и растворитель отгоняют. Остаток подвергают

4 колоночной хроматографии на силикагеле.

Продукт злюируют смесью хлороформа и метанола (30:1), элюат собирают и растворитель отгоняют. Остаток кристаллизуют из смеси бензола и метанола, получают 0,35 г бензилового эфира 1- (-0-бензил-б-0-микомиколоил-N-ацетилмурамид-О-бензил-L-серил-0-изоглутамина; т. пл. 164-166 С;

poL3 Д + 32,1 (с = 0,5; хлороформ).

Элементарный анализ для дН2оь О ð N4

Вычислено, %: С 74,39; Н 10,74;

N 2,89.

Найдено, %: С 74,41; Н 10,59;

60 и 2,87.

Раствор 0,2 г бензилового эАира

1- С-0-бенэил-6-О-микомиколоил-й-ацетилмурамил-0-бензил-L--серил-D-изоглутамина в 20 мл тетрагидрофурана подвергают гидрогенолизу н присутствии

793384

25 палладиевой черни при комнатной температуре. Растворитель отгоняют в вакууме.

Остаток кристаллизуют из смеси тетрагидрофурана и метанола, получают

0 14 г 6-0-микомиколоил-й-ацетилмураI

5 мил-L-серил-0-изоглутамина; т. пл.

114-120 С (с разложением);(с1 3 + о и

+ 35,2 (с = 1,9; тетрагидрофуранвода 50:1, через 48 ч).

Элементарный анализ для

С99 Н И8 0„45 й4

Вычислено, Ъ: С 71,33; Н 11,39;

N 3,36.

Найдено, Ъ: С 71,03; Н 11,33;

N 3,42.

Пример 5. Исходя из 0,5 г 15 дифенилметилового эфира 1-, -0-бензил-6-0- нокардомиколоил-N-ацетилмурамил-С-серил-D-изоглутамина, получают, пользуясь метоцикой примера 4, 6-0-нокардомиколоил-N-ацетилмурамил-L-серил-D-изоглутамин; т. пл . 125130 С (с разложением);(ЫД + 32,2 (c = 1,0; тетрагидрофуран — вода

50:1, через 48 ч).

Элементарный анализ для

С О Н т7 014 6 N4 Н О.

Вычислено, Ъ: С 65,85; Н 10,21; и 4,39.

Найдено, Ъ: С 65,62; Н 10,33;

N 4,48.

Пример 6. К раствору 0,5 г натрия в 5 мл безвоцного метанола добавляют 3,6 г диэтилмалоната. После перемешивания при 50 С в течение

20 мин к реакционной смеси при той же температуре добавляют 6,0 r тетрадецилбромида, затем смесь кипятят

5 часов с обратным холодильником.

После охлаждения к раствору добавляют эфир. Выпавший в осадок бромистый натрий отфильтровывают, растворитель 4О отгоняют. Получившееся масло добавляют к 15 мл безводного метанола, содержашего 0,5 r натрия. Затем в раствор вводят 6,0 г тетрадецилбромида и раствор кипятят с обратным холодиль 45 ником 5 часов. После охлаждения смесь разбавляют водой и продукт экстрагируют эфиром. Эфирный экстракт промывают водой и сушат. Растворитель отгоняют. Остаток перекристаллизовывают из этанола, получают 6,7 г диэтил-2,2-бистетрадецилмалоната; т. пл.

30-32 С.

К раствору 2,7 r едкого калия в смеси из 100 мл воды и 20 мл этанола добавляют 6,5 r диэтил 2,2-бистетрадецилмалоната. Раствор кипятят с обратным холодильником 10 ч, затем охлаждают и подкисляют 3 М серной кислотой, продукт экстрагируют эфиром.

Эфирный экстракт промывают водой д и сушат. Растворитель отгоняют, ос.таток греют 1 ч при 190-200 С и затем перекристаллизовывают из метанола, получают 4,9 г 2-тетрадецилгексадекановой кислоты; т. пл. 73,5-75 С

Элементарный анализ для С НбоО, Вычислено, Ъ: С 79,57; Н 13,36.

Найцено, Ъ: С 79,57; Н 13,35.

Раствор 1,0 г 2-тетрадецилгекса,цекановой кислоты и 0,79 г хлористого тионила в 5 мл бензола, кипятят с обратным холодильником 7 ч. После удаления бензола и хлористого тионила к остатку добавляют безводный бензол, затем бензол отгоняют. Эту операцию повторяют 3 раза для полного удаления хлористого тионила. Остаток кристаллизуют из безводного гексана; получают 0,75 г хлористого

2-тетрадецилгексадеканоила; т. пл.

51-53 С.

К раствору 0,85 г бензилового эфира 1-СС-0-бензил-й-ацетилмурамил-L—

-аланил-0-изоглутамина в 35 мл безводного пиридина добавляют при 1718 С 4,9 r хлористого 2-тетрадецило гексадеканоила, растворенного в

35 мл безводного тетрагидрофурана.

Через 45 мин смесь разбавляют 20 мл воды и раствор перемешивают 35 мин при комнатной температуре. Затем реакционную смесь подкисляют 1 м соляной кислотой до рН 3, продукт экстрагируют xJIopoAopMQM. Хлороформенный экстракт промывают насыШенным раствором соли, сушат. После удаления растворителя остаток хроматографируют в колонке с силикагелем. Продукт элюируют смесью хлороформа и метанола

-(20:1), элюат собирают и концентрируют, остаток кристаллизуют из метанола получают 0,75 г бензилового эфира

6-0-(2-тетрацецилгексадеканоил) — 1-с(—

-0-бензил-N-ацетилмурамил-L àëàíèë— 0-изоглутамина; т. пл. 173-174 С.

Элементарный анализ для

С<< Н1о1 0, N4.

Вычислено, Ъ: С 68,39; Н 9,20;

N 5,06.

Найдено, Ъ: С 68,0.4; Н 9,29;

N 5,03.

0,70 г полученного таким образом бензилового эфира в 15 мл тетрагидрофурана перемешивают в присутствии палладиевой черни в атмосфере водорода при 30 С 15 дней. Полученный продукт подвергают хроматографированию в колонке с силикагелем, злюируя смесью хлороформа, метанола и уксусной кислоты (95:5:3),Элюат собирают, концентрируют, остаток растворяют в смеси диоксанвода (1:1). Раствор лиофилизируют, получают 0,50 г 6-0†(2-тетрадецилгексадеканоил)-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглутамина; т. пл. 152-155О С.

Элементарный анализ,цля

С4 Н87 012 й, - 2Н20. . Вычислено, Ъ: С 61,16; Н 9,74;

N 5,82.

Найдено, %: С 61,10; H 9,60;

N 5,83.

Пример 7. К раствору 0,65 r

1- -0-бензил-6-0-микомиколил-й-аце13

793384 тилмурамовой кислоты дифенилметильного эфира и 1 мл анизола в 20 мл хлороформа добавляют 3,0 мл трифторуксусной кислбты, охлажденной до температуры льда. После перемешивания в течение 30 мин в реакционную смесь добавляют ацетон. Отгоняют растворитель в вакууме. Остаток промывают этанолом и затем растворяют в 10 мл тетрагидрофурана. К раствору, охлажденному льдом, при перемешивании добавляют 75 мг N-orcczcyrcvz aa, 10

72 мг дициклогексилкарбодиимида и

1,2 ммоль триэтиламина в 0,2 мл тетрагидрофурана и 237 мг бензилглицил— D-изоглютамитгидрохлорида. Затем реакционную смесь перемешивают в тече-15 ние ночи при комнатной температуре.

Выпавшие в осадок триэтиламингидрохлорид и N,й -дициклогексилмочевину отфильтровывают.

Растворитель отгоняют в вакууме, 20 остаток хроматографируют на силикагеле. Элюат в смеси бензол-ацетон (3:1) собирают, кроме первоначальной фракции вытекаюшего раствора и отгоняют растворитель. Остаток рекристал- 5 лиэовывают иэ смеси бензола и этанола, получают 0,284 r 1-(-О-бензил-О-микомиколоил-й-ацетилмурамилглицил-D-изоглютамин бензильного эфира; т. пл. 148-150 CfГс() + 36,7 (с

0,5; хлороформ).

Элементарный анализ для .,дв О,,эg . й4 - СНЗОН.

Вычислено, Ъ: С 73,39; Н 11,03;

N 3,03.

Найдено, Ъ: С 73,27; Н 10,83; и 2,87.

Элементарный анализ, Ъ:

ВычисленО для С49 Н9О О й4, Ъ

С 63,47; Н 9,79; и 6,04;

Найдено, Ъ: С 63 26; Н 9 81;

N 5,91.

Пример 9. б-О-(2-Тетрадецилгексадеканоил)-й-ацетилмурамил-L—

-аланил-0-изоглутамин получают cl1oсобом, описанным в примере б; т. пл.

152-155 С.

Вычислено для С49 Н 87 О 2 й4 - 2 Н2 О, Ъ: С 61,16; Н 9,74; и 5,82.

Найдено, Ъ: С 61,10; Н 9,60;

5,83.

Пример 10. б-О-(2-Докоцилтетракозаноил)-N-ацетилмурамил-L-аланил-О-изоглутамин получают способом, описанным в примере 2; т. пл. 150 С (раэложение).

Вычислено для С6 Н 01 N4, Ъ:

67,79; Н 10,68; N 4,86.

Найдено, Ъ: С 67,40; Н 10,57;

N 4,67.

Пример 11. 6-О-(2-Докоцил-3-гидроксигексакоэа ноил)-И-ацетилмурамил-L-аланил-О-иэоглутамин поЛучают способом, описанным в примере 2; т. пл. 169-170 С (разложение); с(7+

+ = 0,5; хлороформ:метанол о D

1:1).

Вычислено для Cb7 Н yg 01 N4 . —" Н О, Ъ: С 66,80; Н 10,63; и 4,65.

Найдено, Ъ: С 66,49; Н 10,42;

N 4,56.

Пример 12. б-О-(2-Тетрадецил-3-гидроксиоктадеканоил)-N-ацетилмурамил — L — àëàíèë-О-изоглутамин получают способом, описанным в примере 2; т. пл. 170-172 С (разложение); (M3 + о + 30,8 (с = 0,5, хлороформ:метанол

1:1), ВычисленО для С5 Н94 О„ й4, Ъ:

С 63,06; H 9,75; N 5,77.

Найдено, Ъ: С 62,66; Н 9,67;

N 5,65.

Пример 13. б-О-(2-Докоцилгетракозаиоил)-й-ацетилмурамил-L

-серил-О-иэоглутамин получают способом, описанным в примере 2; т. пл.

170-180 С (разложение).

Вычислено для СЬ Н4 01 и 2. 1Н О, Ъ: С 66,35; Н 10,54; Й 4,76.

Найдено, Ъ: С 66,16; H 10,56;

N 4,67.

Пример 14. 6-О-(2-Докоцил-3-гидроксигексакозаноил)-й-ацетилмурамил-L-серил-D-изоглутамин получают способом, описанным в примере 2; т. пл. 165-180 С (разложение).

ВысчитанО для С Н О и Н О

Ъ: С 65,44; Н 10,41; N 4,56

Найдено, Ъ: С 65,22; Н 10,44; и 4,41.

Раствор 0,23 r 1-с -О-бензил-б-О-микомиколоил-N-ацетилмурамилглицил-D-изоглютамин бенэильного эфира в 40

40 мл тетрагидрофурана гидрогенизируют в присутствии палладия на углероде при комнатной температуре. Раствори— тель отгоняют в вакууме, остаток растворяют в этаноле, фильтруют. Раствор 45 хроматографируют на силикагеле. Продукты элюируют смесью хлороформ:этанол (10:1), элюат собирают, за исключением самой первой фракции. Растворитель отгоняют и остаток перекристаллизовывают из смеси эфир-этанол, получают 0,135 г 6-О-миколоил-й-ацетилмурамилглицил-О-изоглютамин; т. пл. 206-207 С; Д.) + 37,1 (после

9 мин +39,1, после 20 ч, с = 0,4, тетрагидрофуран-вода = 50:1).

Элементарный анализ С98 Н 86 0 q N.

Вычислено, Ъ: С 71,90; Н 11,48;

N 3,42.

Найдено, Ъ: С 71,81; Н 11,23;

N 3,40. 60

Пример 8. 6-О-триаконтаноил-й-ацетилмурамил-L-аланил-D-иэоглутамин получают способом, описанным в примере 2. Температура плавления

192 С (разложение). 65

793384

3П1 0С 5

ИфСнбоон

Составитель В. Волкова

Редактор Л. 1ерасимова Техред N.Ðåéâåñ Корректор И. Муска

Заказ 9635/68

Тираж 495 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, >К-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

15:" с

ФВрАлЯ йзобретения

Способ получения производяйх мурамилдипептидов общей формулы

Сй, от

НО 3HLO(H

z (eood где Y — - микомиколоил-, кординомико- <0 лоил-, нокардомиколоил- или синтетическая ацильная группа с числом атомов углерода от

С с до С „, имеющая в о -положении разветвленную алкильную цепЫ

L-аланил-0-изоглутамил-, гли-. цил-0-изоглутамил и L-серил-О-иэоглутамил-, отличающийся тем, что бенэил-й-ацетил-d.-мурамид общей формулы !! СНАМОМ где Z — бензил, подвергают взаимодействию с мико— миколевой, кординомнколевой, нокардомиколевой или с синтетической жирной кислотой, содержащей от С до С о о углеродную цепь, имеющую в с -положении разветвленную алкильную цепь, и с дипептидом, выбранным из группы

L-аланил-D-иэоглутамин, глицил-D-изоглутамин или L-серил-0-изоглутамин в любой последовательности.

Приоритет по признакам:

28.06.76 при У вЂ” миколоильная группа, полное число атомов углерода 7090; Q — L-аланил-0-изоглутамин.

16.12.76 при Y — миколоильная группа, полное число атомов углерода 7090; 0 — глицил-D-изоглутамин.

03.02.77 при Y — миколоильная группа, полное число атомов углерода 28бб; Q — L-аланил-D-изоглутамин.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Э. Шредер, К. Любке. Пептиды, ч. 1, M. "Мир", 1967, с. 116.

2. Вейганд-Хильгетаг. Методы эксперимента в органической химии. М., "Химия", 1968, с. 352.