Способ определения цитотоксичности дифтерийного токсина
опНСА Е
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Союз Советских
Социалистических
Республик
<и>860764 (61) Дополнительное к авт, свид-ву (22) Заявлено 21)3979 (21) 2820777/28-13 с присоединением заявки Йо (23) Г)рноритет
Опубликовано 070931. Бюллетень N9 33
Дата опубликования описания 100981 (51) М. K .
A 61 . К 35/74
Государственный комитет
СССР но делам изобретений и открытий (5З) УДК 578 . 08 7. .23 (088.8) (72) Авторы изобретения
Г.P. Гаэизова, P.Е. Самойлова, А.A. Аб и Ф.Р. Рахимова (71) Заявитель
Казанский научно-исследовательский и микробиологии (54 ) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИТОТОКСИЧНОСТИ
ДИФТЕРИИНОГО ТОКСИНА антибиотиков) с десятикратным шагом от 10 " до 10 . По 1 мл каждого разведения токсина вносят в 4 пробирки с клеточной культурой. Для контроля клеточной культуры 8 пробирок оставляют без токсина, заменив ростовую среду на поддерживающую. Штатив с опытными и 4 контрольными пробирками помещают в рефрижератор с температурой 10 С на 3 ч для синхронизации клеточной культуры. Остальные
4 контрольные пробирки (беэ токсина) сразу ставят в термостат при 37 С.
После проведенной синхронизации клеточные культуры переносят в термостат при 37 С. Через 6 ч (т.е. через
3 ч после окончания синхронизации) проводят первое чтение цитотоксического эффекта, наблюдая опытные клеточные культуры в сравнении с контрольными под микроскопом при малом увеличении (об. 8х, ок. 10х).
ЦТЭ оценивают плюсами по проценту гибели клеток: 100%(++++), 75%(+++), 50Ъ (+1) . 25В (+) клеток монослоя.
Отсутствие цитотоксического эффекта отмечают минусом (-).
Результаты сравнительного титрования нативного дифтерийного токсина с. 335 Уфимского НИИВС на обычной
Изобретение относится к области медицины, а именно к способам определения цитотоксичности дифтерийного токсина.
Известен способ определения цитотоксичности дифтерийного токсина путем совместной инкубации его с клеточной культурой с последующим подсчетом количества дегенерированных клеток 1) .
Однако этот способ недостаточно точен и довольно длителен.
Цель изобретения — повышение точности способа и ускорение его.
Это достигается тем, что для оп- тз ределения цитотоксичности дифтерийного токсина его инкубируют совместно с клеточной культурой с последующим подсчетом количества дегенерированных клеток, причем в качестве 20 культуры используют 18-часовую однослойную культуру амниотического эпителия человека, инкубацию ведут вначале при 10"С в течение 3 ч, затем продолжают при 37 С, а подсчет количества дегенерированных клеток проводят через 6 и 24 ч.
П р е р. Испытуемый дифтерийный токсин разводят поддерживающей средой (средой 199 беэ сыворотки и 30
I, < .д т .",.;у с Фт ин титу „,.эпидемиологи.Л
860764 эпителия человека -приведены в таблице, 1 ° 10
++++ +
++++ +
++++ +
++++ +
0,7 ° 10
++++
++++
++++
++++
0,3-10
++++
++++
++++
++++
1 ° 10 я сяихронизированной 18-часовой культуре перевиваемого амниотического койтроль клеток 4
++++
++++
++++
++++
++++
++++
++++
++++
++++
++++
++++
++++
++++
++++
+ +++
++++
++++
++++
++++
++++
++++
++++
++++
++++
++++
860764
Формула изобретения
Составитель Л. Морозова
Редактор T. Колодцева Техред С. Мигунова Корректор С. Шекмар, Тираж 687 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Заказ 6430/1
Филиал ППП "Натент", г. ужгород, ул. Проектная, 4
Таким образом, предлагаемай спосо определения цитотоксичности дифтерийного токсина более чувствителен и протекает быстрее.
Способ определения цитотоксичности дифтерийного токсина путем совместной инкубации его с клеточной культурой с последующим подсчетом количества дегенерированных клеток, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повышения точности способа и ускорения его, в качестве культуры используют 18-часовую однослойную культуру амниотического эпителия человека, инкубацию ведут вначале прн 10 С в течение 3 ч, продолжают при 37 С, а подсчет количества дегенерированных клеток проводят через 6 и 24 ч.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1. Васенович М.H. Левченко Л.A.
Методика титрования дифтерийного токсина и анатоксина в культуре ткани фибробластов куриного эмбриона, сб.
Инструктивно-методические материалы по вопросам контроля и стандартизации биологических препаратов, М., 1965, с, 52-56.
