Способ определения состояния клеточного иммунитета организма

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОСТОЯНИЯ КЛЕТОЧНОГО ИММУНИТЕТА ОРГАНИЗМА путем выделения лейкоцитов из крови сенсибилизированного организма с последующим заполнением капилляров взвесью лейкоцитов, культивированием их в питательной среде и измерением зон миграции лейкоцитов под действием специфического антигена, отличающий СИ тем, что, с целью повышения точности определения состояния организма при гриппе, лейкоциты предварительно выдерживают с вируссодергащей аллантоисной жидкостью,для заполнения капилляров используют образовавшийся осадок лейкоцитов с адсорбированным вирусом.

СОЮЗ COBETCHHA

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (19) (11) 1 А

3(5)) A 61 В 10 00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 2986528/28-13 (22) 15. 08. 80 (46) 15.12.83. Бюл. )) 46 (72) A.Г.Стопчанская (71) Одесскийнаучно- исследовательс кий институт вирусологии и эпидемиологии им. И.И.Мечникова (53) а 616-07 (088. 8) (56) 1. Иммунологические методы.

Под ред. Х.фримеля.-М., Мир, 1979, с. 159-164(прототип). (54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОСТОЯНИЯ КЛЕТОЧНОГО ИММУНИТЕТА ОРГАНИЗМА путем выделения лейкоцитов из крови сенсибилиэированного организма с последующим заполнением капилляров вэвесью. лейкоцитов, культивированием) их в питательной среде и измерением эон миграции лейкоцитов под действием специфического антигена, о т личающийся тем,что,с целью повышения точности определения состояния организма при гриппе, лейкоциты предварительно выдерживают с вируссодержащей аллантоисной жидкостью,для заполнения капилляров используют образовавшийся осадок лейкоцитов с адсорбированным вирусом.

Q

Изобретение относится к сблас-.к медицины.

Известен способ определен!ля

coстояния клеточного иммунитета организма путем выделения лейкоцитов иэ крови сенсибклиэирова <ного организма с последую! км заполнением капилляров нэзе<"ью лейкоцитов, культивированием их в питательной среде к измерением зон миграции лейкоцитов

ПОД ДЕйСтв Е"Л CHЕЦт<фт<Ч<ЕСКОГО аитИГЕ-. на (1) .

Однако известный сп<«со б не поз золяет точно определить состоя !ке при гриппе.

Целью кэобретенкя является повы-шение точности определения состоя IHH организма при гркгпе.

Цель дос игается o.0 ганиэма путем выделения лейкоцитов иэ крови сенсибилизкрованного органиэ ма с последующим заполнение к апилляров нэ несью лейкоцитов, куль т ивиро . ганием их в питательной среде и кз- 25 мерением зон миграции лейкоцитов под действием специфического антигена „ лейкоциты предварительно выдерживают с вируссодержащей аллантоисной жидкостью, для заполнения капилляров "«О используют образовавшийся осадок лейкоцитов с адсорбкрозанным вирусом,.

Спо соб осуше отзляют от! едук!щкм обра зом.

Вирус грит:.па (неочищенную тл неконцентрированн ую нкруссодержащую аллантоисную «

ЦИИ КЛЕТОК В ОПЫТЕ (ЛЕйКОттитЫ + ВИрус) и контроле (лейкоьтитьт без вируса}. По кх отношению (индекс миграции) судят о степени сенсибкли-. зации организма к антигенам вируса 55 гриппа ° Соотношение лейкоцитов и Бк руса гриппа оптимально прк добавлении к 6 10 2 мл нируссодержащей аллантоисной жидкости с плтром гема..глютининон 1."256.

Пример. Лейкоцить; выделяют из 15 мл гепаринизкрозанной крови людей добавлением 2 мл 3Ъ-ной желатины. Через 15 мин после осаждения эрктроцктон пдазму со нэнешеннымк .<леткамк переносят в центрифу;:.тые пробирки, центрифугиру.-от 10 ми;! прк

800! Об/мкн р к Ос<<Д!< "/;<ëÐòoê Для лиэ- иса зритроцитоз добавляют 5 мл

",От;одного 0„83;. †но раствора хлор-.!стого аммония (!<(Н4СИ), тщательно перемешивают„ снова центрифугируют прк тех ><е ларам:.трах и однократно о;.мынают 5 мл холодного забуференного фк"-кологкческого раствора (рН вЂ” 7, 2) . Осадок клеток делят на дне равные ча-ти. Одна из нкх кспользуется для заполнения капилляров, которы- помещают в контрольные ка.ет ы. Ко второй части клеток добанля!от 2 мл вирус содержа!!!ей аллантоксной л<кдкости с титром гемагглютининов: 256 (вирус гриппа А/Ленинград 0139/76 (Н- !(,, ) „смесь инкубиру-. ют — ри 4 С н течение 30 мин „ц<ентрифигурируют 10 мик при 800 об/мин, надосадок голностьо удаляют, а взвесью клеток с адсорбированныМ на них варHoнамH эаголняют капилляры, которые помещаю-. в опытные камеры. Перед внесением капиллярон н камеры один конец er-o эапакзают, капилляры центркфугируют 5 мин при 800 об/мин и облалтывают ниже границы слоя клеток,. Отрезок капилляра с клетками укладь:вают на дно камеры запаянным

:<онцом и каплю стерильного вазелкноного масла., Контрольные и опытные к=-меры заполкяют средой 199 с 1% альб ...мин=- елоне<а и антибиоткками

:- e -; = .-: —.,-: ã å H а . Н" и нот яже ни и всего пер ода OOTBB!

О

Цля одного исследования используют

4 кон:рот!в!лых к 4 опытных капилляра.

По окот-".анин сро:<а инкубацки с помощью, отоунелкчит еля р егистрируют площадь маграцик клеток в опытных и контрольных камерах. Зону миграции вырезают и взвешивают на торэионных весах. !тндекс Mrs "рации нычксляют:

::äå т«о — соедний зес лоща-: дей миграции под влиянием вируса гртлппа, р срВ!ТННА вес в !

В таблице приведены результаты параллельного определения сос.то ян к я клеточHoão иммунитета (ГЗТ ) у людей, привитых инактивкронанной гриппозной

АГХ-в"ê,ö,:èíîé иэ rтттамма вируcà гркппа

А/Ленкнград/0139 76/, через 20 дней после двукратного введения препарата в прямом капилляр

91917"

Номер исследоваВ среду культивирования (извест ный способ) К лейкоцитам (предлагаемый rn î со б) ния

0,5

0,5

0,6

0,2

0,6

0,1

0,9

0 i 3

0,7

0,2

0,7

0,3

Среднее 0,66+0,05

0,26+0,05 индекс торможения миграции.

Составитель С.Малютина

Редактор Л.утехина Техред Т.Маточка Корректор И.Эрдейи

Заказ 10693/6 Тираж 713 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП Патент, г.Ужгород, ул.Проектная, 4 известным. способом. В известном способе в среду культивирования добавляли вирус гриппа, очищенного сорбцией-, элюцией на куриных эритроцитах и сконцентрированного центрифугированием при 20 тысячах об/мин в течение

2 ч на центрифуге ЦВР-1, конечный титр гемагглютинина в среде культивирования был равен l:256.

Как видно из данных, приведенных в таблице различия в уровне тормо(жения миграции лейкоцитов под влиянием вируса гриппа А2 при использовании предлагаемого способа по сравнению с известным, статистически. . достоверны (р C 0,001) и подтверждают большую 15 точность предлагаемого способа (индекс торможения миграции в известном способе — 0,66-0,05, а в предлагаемом — О, 26-+0, 06) .

Добавление к лейкоцитам алланто- 20 исной жидкости незаряженных куриных эмбрионов не влияло на показатели реакции, различий по сравнению с контролем не отмечено.

При исследовании с помощью предлагаемого способа ГЗТ у привитых через 10 дней после повторного введения вакцины наблюдали резкую ингибицию миграции (индекс торможения миграции составлял 0,05). В отдален- 3> ные сроки (3-6 месяцев после иммунизации) индексы повышались до 0„20,7. При изучении ГЗТ известным способом индексы миграцйи колебались от 0,5 до 0,7, независимо от срока, прошедшего после прививки. Следовательно, с помощью предлагаемого способа более точно удается определить состояние клеточного иммунитета у людей, сенсибилизированных к антигенам вируса гриппа.

Индексы торможения миграции лейкоцитов, привитых гриппозной инактивированной вакциной из штамма A/Í 8g /, при использовании известного и йредлагаемого способа

Показатель торможения миграции лейкоцитов при добавлении виру с /Н3 "г/