Способ лиофилизации сухожилий для пластических операций

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОееС НОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советсимн

Сецмаиистичесимн республик

<и>921486 (61) Дополнительное к авт. саид-ву (22) Заявлено 19.02,79 (21) 2727081/28 13 с присоединением заявки М (23)Приоритет (51)М. Кл.

А 01 и 1 02

Пкудерстееннын квинтет

CCCP ав делам нзебретеннй н етнрытнй (53) УДК 612.75-. (088.8) Опубликовано 23.04.82, Бюллетень М 15

Дата опубликования описания 23.04,82

Ъ

А. А. Путилин (72) Автор изобретения (71) Заявитель

Астраханский государственный медицинский ин им. А. В. Луначарского (54) СПОСОБ ЛИОФИЛИЗАЦИИ СУХОЖИЛИЙ

ДЛЯ ПЛАСТИЧЕСКИХ ОПЕРАЦИЙ

Изобретение относится к медицине, а имен. но к трансплантологии.

Известен способ лиофилиэации сухожилий для пластических операций, включающий стерилизацию, эамораяа:ванне и сублимацию (1)

Однако известный способ не обеспечивает сохранение биологических свойств сухожилий из-эа трудностей поддержания постоянной температуры, длительности приготовления тканей к обработке и возникновения изменений структуры и физико-химических свойств тканей после стерилизации.

Целью изобретения является сохранение биологических свойств сухожилий.

Указанная цель достигается тем, что при

1$ осуществлении способа лиофилизации сухожилий дпя пластических операций, включающем стерилизацию, замораживание и сублимацию, стерилизацию осуществляют путем обработки 70-75% этиловым спиртом при 30/35 С в течение 30—

40 мин, а сублимацию ведут давлением 1е а10 мм рт. ст. в течение 12 — 14 ч.

Пример 1. Сухожилия длиной 12 см, толщиной 0,5 сь(, заготовленные в нестериль ных условиях . (судебно-медицинский морг, мясокомбинат), дополнительно индифицировали вэвесями микробной флоры 1000000 микробных тел в 1 мл: белый стафилококк, эолотисть.й стафилококк, кишечная палочка, палочка сине-зеленого гноя и помещали в камеру лиофилизатора s 70% этиловый спирт при — 30 на 40 мнн, после чего подвергали сублимационной сушке в течение 16 ч при разряжеmm 1 ° 10 mt p . cr. Cyxomums хранились при комнатной температуре от 1 сут до 8 мес.

В течение этого периода проводились бактериологические физикомеханические и морфологичес4 кие исследования. Накануне изучения образцов сухожилия подвергались регидратации путем помещения их в стерильный физиологический раствор на )6 ч. Бактериологические исследо= вания проводились через 1 сут, 1 мес, 3 мес, 8 мес. Фрагмент сухожилий ткани помещали в пробирки с соответствующей питательной средой и выдерживали в термостате 7 сут б.;последующим пересевом на плотные питательные среды. Данные этих исследований приведены в табл. 1.

1486

3 92

Иэ приведенных данных в табл. 1 видно, что, как после стерилизации, так и в процессе хранения пластический материал остается стерильным, Морфологические исследования проведены в сроки 1 сут, 1 мес, 3 мес, 6 мес, 8 мес.

Из консервированных сухожилий готовились гистологические среды с окраской препарата гемотоксилин-зозином и на ван-гизону.- Излучение полученных препаратов показала, что сухожилия сохраняют свою структуру, как после лиофилизации, так и в процессе длительного хранения.

Затем определяли механические свойства сухожилий.. Результаты исследований представлены в табл. 2.

В качестве контроля служили идентичные образцы свежих сухожилий.

Из табл. 2 видно, что после стерилизации и лиофилизации, а также в процессе длительного хранения сухожилия сохраняют свои механические свойства, Остаточная влажность сухожилий является важным показателем качества полученных тканей, Определение остаточной влажности сухожильных образцов проверялось как после лиофилизации, так и в процессе хранения.

Результаты определения остаточной влажности представлены в табл. 3.

Из табл. 3 видно, что при применяемом. способе лиофилизации удается добиться низкой остаточной влажности, причем она остается низкой и в процессе хранения.

Подготовленные к оперативному использованию сухожилия вшивали в предварительно созданный дефект ахиллового сухожилия реципиента. В результате операции получен положительный эффект. Срок наблюдения

1,5 года после оперативного вмешательства..

Пример 2. Сухожилия длиной 12 см. и толщиной 1,0 см, заготовленные в нестерильных условиях (судебно-медицинский морг, мясокомбинат), дополнительно взвесили

1000000 микробных тел в 1 мл флоры: белый стафилококк, золотистый стафилококк,кишечная палочка, палочка сине-зеленого гноя и помещали в камеру лиофилизатора в 75% этиловый спирт при -50 на 60 мин, после чего подвергали сублимационной сушке в течение 24.ч при разряжении 1 ° 10 мл рт. ст. Сухожилия хранились цри комнатной температуре от 1 сут о до 3 мес. В течение этого периода проводились, бактериологические, физико-механические и морфологические исследования. Накануне изучения образцов сухожилия подвергались регидратации путем помещения их в стерильный физиологический раствор на 24 ч.

Бактериологические исследования проводились через 1 сут, 1 мес, 3 мес, 6 мес, 8 мес.

Фрагменты сухожильной ткани помещали в пробирку с соответствующей питательной средой и

10 выдерживали в термостате 7 сут с последующим пересевом на плотные питательные среды. Данные этих исследований приведены в табл. 4.

Из приведенных данных видно, что как после стерилизации, так и в процессе хранения плас15 тический материал остается стерильным.

Морфологические исследования проходили в сроки 1 сут, 1 мес, 3 мес, 6 мес, 8 мес.

Иэ консервированных сухожилий готовились гистологические срезы с окраской препаратов ге20 листоксилин-зозин и Ван-Гизону. Изучение полученных препаратов показало,что сухожилия сохраняют свою структуру, как после лиофилизации, так и в процессе длительного хранения.

Определяли механические свойства сухожилий. Результаты испытаний представлены в табл. 5.

Из табл. 5 видно, что после стерилизации и лиофилиэации, а также в процессе длительного хранения сухожилия сохраняют свои механические свойства.

Определение остаточной влажности определялось как после лиофилизации, так и в процессе хранения. Результаты представлены в табл.6.

Несмотря на то, что объем испытуемых образцов был больше, чем в предыдущем опыте, удается добиться низкой остаточной влажности, причем она остауся на этих уровнях и в процессе хранения (табл. 6).

Лиофилизированные сухожилия предлагаемым способом пересасены 30 кроликам со сроком наблюдения от 1 мес„до 1,5 лет. В результате установлено, что сухожильные транс45 плантаты хорошо приживаются, не вызывают отрицательных. реакций со стороны организма животного и являются ценным пластическим материалом. Таким образом предложенный способ прост, экономичен, позволяет заготавливать

50 сухожилия в нестерщтьных условиях, при этом сохраняются биологические свойства сухожилия, 921486

Резчльтаты посевов .

Вид микроба

Через

6 мес

Через

8 мес

Золотистый стафилококк

60 60

Кишечная палочка

Палочка сине-зеленого

60 гноя

Т а б л и ц а 2

Количество образцов

Идентичные образцы

75,2 + 0,2

Свежие сухожилия

75,8 + 9,3

75,1 t 0,1

74,8 + 0,2

74,8 1 0,2

50.Таблица 3

Количество опытов Велйчина остаточной влажности, %

Исследуемые образцы

1,50 + 0,02

1,50 3 0,02

1,58 т 0,02

30

1,58 + 0,02

1,58 f 0,03

Количество опытов

Белый стафилококк 60

Через сутки после лиофилизации

Через 1 мес после лиофилизации

Через 3 мес после лиофилизации

Чевез 8 мес после лиофилизацни

Через 1 сут после лиофилизации

Через 1 мес после лиофилизации

Через 2 мес после лиофилизации

Через 4 мес после лиофилизации

Через 8 мес после лиофилизации

Через Через сутки месяц

Через

3 алвес

Та блица . I

Величина нагрузки

921486

Результаты посевов

Вид микроба

Через Через Через Через Через сутки 1 мес. 3 мес 6 мес 8 мес

Белый стафилококк

60 60

Таблица 5

Испытуемые образцы

158,5 i 0,2

Свежие сухожилия

Через 1 сут после лиофилизации

158,5 + 0,3

Через 1 мес после лиофили. зации

158,4 ф 0,2

Через 3 мес после лиофилиэации

158,5 ф 0,1

Через 8 мес после лиофюж зации

157,8 + 0,1

Таблица 6

Испытуемые образцы

1,8 0,02

1,79 3 0,03

181 + 0,01

30

1 84 «+ +0,02

186 + 0,03

Золотистый стафилококк

Кишечная палочка

Палочка сине-зеленого гноя

Через сутки после лиоф илизации

Через 2 мес, после лиофилизации

Через 2 мес, после лиофилизации о

Через 4 мес, после лиофилизации

Фреэ 8 мес,.после лиофилизации

Количество опытов

Количество опытов

Количество опытов ь Таблица 4

Величина разрывной нагрузки

Величина остат8чной влажности, %

Способ лиофилизации сухожилий для пластических операций, включающий стериляэацию, замораживание и сублимацяю, о т,л я ч а ю - s шийся тем, что, с целью сохранения биологических свойств сухожилий, стерилизацию и замораживание осуществляют одновременно путем обработки 70 — 75Яным этиловым спиртом

Редактор Н. Лжуган

Заказ 2407/1 Тираж 699

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Формула изобретения

921486 10 при 30 — 35" С в теченяе 30-40 мин, а сублимацию ведут давлением 1 10 мм рт. ст. в теченяе 12-24 ч.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

l. Коваленко П. П. Заготовка и консервиро. ванне тканей, применяемых в хирургической практике. Методические рекомендации. Ростовна-Лону, с. 10 — 20, 1964, Составитель Ю. Алмаэова

Техред М. Гергель Корректор С. Щомак