Способ очистки микроорганизмов

 

(72) Авторы изобретения

П. P. Хашимова, Л. А. Кондратьева и Т. Д. Тропина

Таджикский научно-исследовательский институт эпидемиологии и гигиены (7I) Заявитель (54) СПО ОБ ОЧИСТКИ МИКРООРГАНИЗМОВ

Изобретение относится к микробиоло гни и может быть использовано для получения бактериальной массы высокой степени чистоты для дальнейшего приготовления из нее специфических антигенов..

Известен способ очистки микроорганизмов путем отделения биомассы от жидкой фазы с помощью физического фактора (1J .

Сцнако известный способ не позволяет ©

19 достичь полной очистки микроорганизмов от примесей, например культуральной жидкости и ее составляющих.

Целью изобретения является повышение степени очистки.

Эта цель достигается тем, что соглас но способу очистки микроорганизмов путем отделения биомассы от жидкой фазы с помощью физического фактора отделение биомассы от жидкой фазы осуществляют с помощью электрофореза при . силе тока 24-25 мА и напряжении 100120 В в течение 180-200 мин.

Предложенный способ осуществляют с помощью устройства.

На фиг. 1 изображена верхняя камера, общий вид; на фиг. 2 - то же, вид сверху; на фиг. 3 - нижняя камера, общий вид, разрез; иа фиг. 4 - то же; вид сверху.

Устройство состоит из верхней 1 (фиг. 1) и нижней 2 (фиг. 3) камер, стенки которых выполнены иэ. оргстекла.

Обе камеры содержат по два платиновых электрода 3 с выведенными иэ камер клеммами 4 для подключения тока.

Верхняя камера 1 снабжена угловыми опорами 5. Ко дну верхней камеры с внешней стороны под прямым углом одна к другой прикреплены четыре пластины 6, образующие стенки емкости.

Между пластинами 6 формируется 7%ный полиакриламидный гель. Между основаниями пластин дно камеры снабжено прорезью 7, в которую заливают реакти-. вы, . формирующие гелевый блок.

926009

Зазор между пластинами определяет толщину гелевого блока, а высота пластин — его длину.

Пример. Гелевый блок формируют следующим образом.

К нижней части пластин 6 приклеивают полоску лейкопластыря, образующую днище емкости гелевого блока. Емкость заполняют через прорезь 7 35 мл мономера геля .(реактивы стандартные). 3атем наслаивают воду для формирования ровной поверхности геля, что исключает доступ кислорода, препятствующего полимеризации геля. Полимеризацию осуществляют 45-60 мин. Конец полимеризации определяют по образованию четкой границы раздела между фазами. Лейкопластырь снимают, сливают воду.

На поверхность сформированного 7%ного полиакриламидного геля наносят

2 мл бактериальной массы в виде суспенэии.

Бактериальная масса представляет собой культуру лептоспир штамма Autos выращенную в жидкой питательной среде с добавлением в качестве примеси кроличьей сыворотки.

Камеры 1 и 2 заполняют трисглициновым буферным раствором, рН 8,9.

Верхнюю камеру 1 помещают над нижней камерой 2, устанавливая ее так, 5 чтобы угловые опоры 5 встали на стенки нижней камеры 2. Прибор клеммами

4. электродов 3 включают в электрическую сеть через выпрямитель переменного тока. Электрофорез геля с нанесенной на его поверхность бактериальной массой ведут 180-200 мин током 24-25 мА при напряжении 100-120 В.

Под действием электрического тока примесь кроличьей сыворотки проникает в гель,,а на поверхности остаются бактерии лептоспир высокой степени чистоты.

Способ очистки микроорганизмов пу тем отделения биомассы от жидкой фазы с помощью физического фактора, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения степени очистки, отделение биомассы от жидкой фазы осуществляют с помощью электрофореза при силе тока

24-25 мА и напряжении 100-120 В

40 в течение 180-200 мин.

Источники информации, принятые во внимаwe при экспертизе

1. фробишер М..Основы микробиологии. М., "Мир", 1965, с. 337-338.

По истечении времени электрофореза с поверхности геля снимают механическим путем, например соскребанием, отделенные и неразрушенные жизнеспособные бактерии.

Антиген, полученн уй из взвеси лептоспир, очищенный предложенным способом в реакции преципитации и иммуноэлектрофореза с истощенной от примесей ан10 тисывороткой дает одну линию. Это является следствием того, что получены бактерии высокой степени частоты, в то время как антиген, очищенный известным способом, в подобной реакции дает 5-7 линий, 4-6 из которых приходятся на примесь кроличьей сыворотки.

Иммунизация животных антигенами, полученными из культуры, очищенной предложенным способом, приносит желаемые

20 результаты. Антигены высокой степени чистоты вырабатывают в живом организме только специфические антитела, что позволяет своевременно выявлять инфекционнате и бактериальные заболева2S ния, Кроме того, предложенный способ позволяет значительно снизить трудоемкость процесса очистки микроорганизмов от пр имесей.

30 ф ор мула изобретения