Способ получения полипептидов

Авторы патента:

A61K38/08 - пептиды, содержащие 5-11 аминокислот

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОПИПЕПТИДОВ путем гомогенизации измельченной ткани железы тимуса, ценШ :ттщ |ЗГ::,,::,13 трифугирования, удаления осадка, обработки надосадочной жидкости ацетоном с последующей фильтрацией,отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и вьвделения полипептидов основной природы , ткань тимуса после гомогенизации экстрагируют разбавленной уксусной кислотой в присутствии хлорида цинка в течение 48-72 ч, далее экстракт центрифугируют и дополнительно обрабатывают ацетоном.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

ОЮ %

РЕСПУБЛИН

459 А

4(5!) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕ

К ASTOPCXOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21 ) 2942205/28-13 (22) 18.06.80 (46) 30.06.85. Бюл. В 24 (72) В.Г.Морозов и В.Х.Хавинсон (53) 615.45:611.435 (088. 8) (56) 1. Ноорег Т.А. et.al. "The

purification and properties of Ьоvine thyuosin".Ann N.J. Acad $е

1975, 249, 125-144. (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИПЕПТИДОВ путем гомогенизации измельченной ткани железы тимуса, центрнфугирования, удаления осадка, обработки надосадочной жидкости ацетоном с последующей фильтрацией,. отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и выделения полипептидов основной природы, ткань тимуса после гомогенизации экстрагируют разбавленной уксусной кислотой в присутствии. хлорида цинка в течение 48-72 ч, далее экстракт центрифугируют и дополнительно обрабатывают ацетоном. а 1

934589

Изобретение относится к химикофармацевтической промышленности и касается получения физиологически активных препаратов для лечения иммунодефицитных состояний. 5

Известен способ получения полипептидов путем гомогенизации измельченной ткани железы тимуса, центрифугирования, удаления осад- ка, обработки надосадочной жидкое- 10 ти ацетоном с последующей фильтрацией Ц .

Однако указанный способ является трудоемким, имеет сложную многостадийную технологию производства 15 и не позволяет получать ряд биологически активных веществ, содержащихся в тимусе.

Цель изобретения вЂ” упрощение, способа и выделение полипептидов 20 основной природы.

Цель достигается тем, что при осуществлении способа получения полипептидов путем гомогенизации изб мельченной ткани железы тимуса, цен- 25 трифугирования, удаления осадка, обработки надосадочной жидкости ацетоном с последующей фильтрацией, ткань тимуеа после гомогенизации экстрагируют разбавленной уксусной 30 кислотой в присутствии хлорида цинка в течение 48-72 ч, далее экстракт центрифугируют и дополнительно об, рабатывают ацетоном.

Способ поясняется следующим примером.

Пример 1. Исходное количество тимуса 500 r, Ткань тимуса очищают от сосудов, сгустков крови, жировой клетчатки, промывают водой, 40 затем ацетоном и помещают в соотношео нии 1:4 при 4-10 С. Через 24 ч ацетон сливают,, а ткань тимуса взвешивают и гомогенизируют. Гомогенат помещают в ЗХ-ный раствор уксусной 45 кислоты из расчета 1 часть гомогената на 6 частей раствора кислоты (рН=3,5-4,0). К раствору кислоты добавляют ZhC1 из расчета 1 г ZnCl< на 1 л ЗХ раствора кислоты. Экстрак- 50 цйю проводят в течение 72 ч. По окончании экетракции субстрат центрифугируют при ЗООО об../мин в течение 20 мин. К супернатанту добавляют ацетон в соотношении 1,5 (1 часть 55 супернатанта и 5 частей ацетона).

Осадок промывают ацетоном и высушивают на фильтре. Получают 5,0-5,5 r белого порошка, содержащего физиоло. гически активные вещества тимуса.

Для получения лекарственной формы препарата тимуса (тималина) полученный порошок растворяют в 550 мл 5Х уксусной кислоты. Раствор препарата стерилизуют фильтрацией и разливают в.стерильные флаконы по 1 мл, затем лиофилиэируют и закрывают стерильными резиновыми пробками. В результате в одном флаконе содержится 10 мг веществ, выделяемых из тимуса.

Пример 2. Исходное количество тимуса 10 кг. Ткань тимуса очищают от сосудов, сгустков крови, жировой ткани, промывают водой, затем ацетоном и помещают в ацетон в с соотношении 1:4 при 4-10 С. Перед экстракцией ацетон сливают, а ткань тимуса взвешивают и гомогениэируют.

Гомогенат ткани тимуса помещают в

ЗХ-ный раствор уксусной кислоты из расчета 1 часть гомогената на 6 частей раствора кислоты (рН=3,5-4,0).

К раствору кислоты добавляют ZnCl из расчета 1 г ZnC1 на 1 л ЗХ-ного раствора кислоты. Экстракцию проводят в течение 72 ч в емкости с мевЂ” шалкой для периодического перемешивания субстрата. По окончании экстрак-. ции субстрат центрифугируют при

3000 об /мин в течение 20 мин. К супернатанту добавляют ацетон в соотношении 1:5. Осадок промывают ацетоном и высушивают на фильтре. Получают

100-110 г белого порошка, содержащего физиологически активные вещества тимуса. Для получения лекарственной формы препарата тимуса (тималина) полученный порошок растворяют в 11Х и 5Х-ной уксусной кислоте. Раствор препарата стерилизуют фильтрацией и разливают в стерильные флаконы по

1 мл, затем лиофнлизируют и закрывают стерильными резиновыми пробками.

Один флакон препарата содержит 10 мг веществ, выделенных из тимуса. Полу.ченный тималин представляет собой комплекс веществ (нуклеопептидов и полипептидов) со следующими характеристиками.

При изучении в эксперименте установлена высокая биологическая активность препарата (стимуляция клеточного иммунитета, процессов регенерации и гомопоэза). В терапевтических дозах препарат не обладает токснчес934589

Состав тималина

Изозлек» трическая точка (0,2 ед.рН) Молекулярная масса (х500) Компонент

Содержание компонентов, вес. 7

Максимум оглощеия в уфпектре предел среднее колебания (НМ) 660

Нуклеопептиды 75-85

2,5

260

Кислые полипептиды

4,0,5000

10-20

280

Основные полипептиды

8,5

5000

3-8

280

Редактор Л.Письман ТехредМ.Гергель КорректорА.ОбруЯаР

Заказ 4497/3 Тираж 722 . Подписное

BHHHI1H Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 филиал IIIIII "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 кими свойствами и не вызывает аллер« гических реакций.

Результаты экспериментального и клинического изучения показали, что препарат обладает выраженной биологической активностью, которая выражается в усилении иммунологической реактивности (увеличение количества лимфоцитов, Т-лимфоцитов, антителообразующих клеток в. селезенке в

4 ответ на введение тимусзависнмого антигена) и сможет найти широкое применение в медицинской практике для лечения и предупреждения ряда заболеваний человека..

Способ получения тималина позволяет выделять нуклеопротеиды и пептиды основной природы, отличается простотой, содержит меньшее количест1О во операций (6 стадий).

Октапептид,обладающий способностью специфически ингибировать прессорный эффект и миотропное действие ангиотензина 11 // 891648

Способ получения полипептидов // 884565

Способ получения пентапептидов или их эфиров или их амидов или их солей // 772481

Способ получения глутамилсодержащих пептидов // 715574

Способ получения пептидов или их уксуснокислых солей // 691082

"октапептид,облобладающий способностьюспецифически ингибировать прессорный эффекти миотропное действие ангиотензина п4 // 687794

Способ получения пептидов // 668594

Способ получения сульфата октапептидамида-терминального октапетида холецистокининпанкреазимина // 659083

-а цилированный пентапептидамид или его динатриевая соль, обладающие способностью природного гастрина стимулировать выделение желудочного сока // 624911

Производные пептида или их фармацевтически приемлемые соли // 2100369

Изобретение относится к новым химическим веществам, имеющим ценные биологические свойства, более конкретно к производным пептида формулы (I): AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6 (I), где AA1 группа D- или L-9Н-тиоксантенглицин, D- или L-9Н-ксантенглицин, D-5Н-дибензо(a, d)циклогептенглицин, L- или D-10,11-дигидро-5Н-дибензо(a, d)(циклогептен-5-ил)глицин или L- или D--амино-10,11-дигидро-5Н-дибензо(a, d)циклогептен-5-уксусная кислота, при этом указанные аминокислоты могут иметь защитные группы; AA2 лейцин, аргинин, орнитин или глутаминовая кислота; AA3 аспарагиновая кислота, N-метиласпарагиновая кислота; AA4 изолейцин, фенилаланин; AA5 изолейцин, N-метилизолейцин; AA6 триптофан, N-формилтриптофан или их фармацевтически приемлемым солям

Пептид и способ его получения // 2107691

Изобретение относится к медицине, а именно к способам получения биологически активных веществ, обладающих иммуннорегулирующими свойствами, и может найти применение в медицине, ветеринарии, а также в экспериментальной биохимии

Пептид и способ его получения // 2107692

Изобретение относится к медицине, а именно к способам получения биологически активных веществ, обладающих иммуннорегулирующими свойствами, и может найти применение в медицине,ветеринарии, а также в экспериментальной биохимии

Способ получения пептида, обладающего анаболической активностью, стимулирующего увеличение массы тела, развитие эпидермального слоя и роста волосяного покрова // 2110275

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, точнее к способам получения биологически активных веществ, и может найти применение в клинике, ветеринарии, а также в экспериментальных исследованиях

Пептиды и фармацевтическая композиция на их основе // 2111214

Изобретение относится к новым пептидам, обладающим высокой биологической активностью того же типа, которая присуща известному природному соединению BPC, но имеющим более короткие аминокислотные цепи

Пептиды, или их фармацевтически приемлемые кислоты, или соли, фармацевтическая композиция, обладающая антагонистической активностью по отношению к бомбезину, способ лечения рака у млекопитающих // 2114118

Изобретение относится к пептидам формулы (I): X - A1 - A2 - Тгр - Ala - Val - Gly - His - Leu - psi - A9 - Q, где X представляет собой водород, простую связь, связывающую альфа-аминогруппу A1 с гамма-карбоксильной частью на 3-пропионильной части A2, если A2 является Glu[-], или группу формулы R1CO-, где R1 выбирают из группы, включающей в себя: водород, C1 - C10 - алкил, или фенил C1 - C10 - алкил, A1 представляет собой D- или L-аминокислотный остаток, выбранный из группы, включающей в себя: Phe, p - Hl - Phe, pGlu, Nal, Pal, Tpi, незамещенный Trp или Trp, замещенный в бензольном кольце одним или несколькими заместителями из группы, включающей C1 - C3 - алкил, либо A1 представляет собой пептидную связь, связывающую ацильную часть R1CO с альфа-аминочастью A2, если A2 представляет собой Gln, Glu/-/ Glu (Y) или His, где /-/ представляет собой простую связь, связывающую гамма-карбоксильную группу A2 с альфа-аминогруппой A1, если A2 является Glu, где X представляет собой простую связь, Y представляет собой - ОR5, где R5 является водородом, C1 - C3 - алкилом или фенилом; Leu - psi - представляет собой редуцированную форму Leu, где C = 0 - часть присутствует вместо - CH2-, так, что связь указанной - CH2 - части с альфа-аминогруппой соседнего A9 - остатка является псевдопептидной связью; A9 представляет собой Тас, МТас, или DМТас; а Q представляет собой NH2 или CQ1, где Q1 является водородом, и к фармацевтически приемлемым кислотам или солям, а также к фармацевтической композиции, обладающей антагонистической активностью по отношению к бомбезину и к способу лечения рака у млекопитающих на основе пептидов формулы (I)

Производные нонапептидов или их солей с фармацевтически приемлемыми кислотами, способ их получения и фармацевтическая композиция // 2115659

Пептиды, обладающие антистрессорным, противосудорожным и нейропротекторным действием // 2115660

Изобретение относится к новым биологически активным соединениям, конкретно - пептидам общей формулы: Trp-X-Gly-Gly-Asp-R, где X - остаток гидроксилсодержащей аминокислоты L- или D-конфигурации, R-Ala-Ser-Gly-Glu или Ala-Ser-Gly, или Ala-Ser, или Ala; а также их фармацевтически приемлемые соли, обладающие антистрессорным, противосудорожным и нейропротекторным действием

Производные пептида или их соли, фармацевтическая композиция // 2116312

Изобретение относится к медицине

Липопептиды, способ получения, лекарственное средство и штамм actinoplanes sp. dsm 7358 в качестве продуцента липопептидов // 2117672