Способ очистки ингибиторов протеиназ

Авторы патента:

ВАЛУЕВА ТАТЬЯНА АЛЕКСАНДРОВНА

КОЛОСОВА ГАЛИНА ВЛАДИМИРОВНА

МОСОЛОВ ВЛАДИМИР ВАСИЛЬЕВИЧ

ВАЛУЕВ ЛЕВ ИВАНОВИЧ

ПЛАТЭ НИКОЛАЙ АЛЬФРЕДОВИЧ

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

<>964533 (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 1601.81 (21) 3262051/28-13 (51)М.Кп з

G 01 и 33/50 с присоединением заявки №вЂ”

Государственный комитет

СССР но делам изобретений и открытий (23) Приоритет

Опубликовано 071082. Бюллетень ¹ 37

Дата опубликования описания 071082

{S3) УДК 612.13 (088. 8) Т,А.Âàëóåâà,Ã.Â.Êîëoñîâà,B.Â.Ìîñîëoâ, и Н.A.Ïëàòý (72) Авторы изобретения

Ордена Ленина институт биохимии иМ. A.Н.$

Ленина, ордена Октябрьской Революции и ор

Красного Знамени московский государственй им. M.Â.Ëîìîíoñoâà (71) Заявители (54) СПОСОБ ОЧИСТКИ ИНГИБИТОРОВ ПРОТЕИНАЗ

Изобретение относится к биохимии и медицине, а именно, к способу очистки ингибиторов протеиназ.

Известен способ очистки ингибиторов протеиназ путем адсорбции ингибитора на аффинном адсорбенте

При РН 8,0-8,5 с последующей элюцией адсорбированного ингибнтора солевым раствором при РН 1,5-2,5. В качестве аффинного адсорбента используют сефарозу с иммобилизованным трипсином (1).

Недостатком способа является невысокая степень очистки целевого продукта.

Цель изобретения вЂ” повышение степени очистки целевого продукта.

Поставленная цель достигается .тем, что согласно способу очистки .ингибиторов протеиназ путем адсорбции ингибитора на аффинном адсорбенте при

РН 8,0-8,5 с последующей элюцией адсорбированного ингибитора солевым раствором при РН 1,5-2,5 в качестве адсорбента используют гидрофильный мономер, выбранный из группы: акриламид, метакриламид или N-винилпирролидон, сополимернзованный с трипсином, ацилированным ангидридом или галоидангидридом акриловой или метакриловой кислоты, й, N -метиленбисакриламидом, диэфиром гликоля и акриловой.или метакриловой кисло5

П р и м е. р 1. В колонку помещают 10 мл адсорбента на основе акриламида, сополимеризованного с трип10 сином, ацилированным ангидридом акриловой кислоты, и N,N -метиленбисакриламидом. Содержание иммобилизо-, ванного трипсина составляет 10 мг/мп адсорбента. Колонку уравновешивают трис-буфером (РН 8,0), содержащим.

0,5 М NaC f и 0,02 М СаСе.1. Через колонку пропускают 30 мп раствора, содержащего препарат ингибитора трипсина из сои в том же буфере с

20 суммарной концентрацией белка 2 мг/мл и удельной активностью 7,42 ИЕ/мг.

Колонку промывают 100 мп стартового буфера для удаления не связанных с адсорбентом балластных белков и ингибитор удаляют с колонки элюцией

20 мл 0,2 М раствора КС при РН 1 7i

Получают 12,5 мг ингибитора с удельной активностью 32,56 ИЕ/мг. Ско« рость протекания всех растворов составляет 15 мл/ч. Выход активности составляет 91,4В. Согласно известно964533

Формула изобретения

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1 ° Swartz М.1,, Hitchel(Н.L., Сох D.l,, Reeck G.R. Purification

and characterization of à trypsin

inhiЬ1tor from Opaque-2 Corn Seed.I Biol.Chem, 1977, ч.252,922,р,8105.35 8) 07 °

Составитель Е,Житникова

Техред М.Гергель Корректор А.Гриценко

Редактор O.Юрковецкая

Заказ 7620/24 Тираж 887 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, iK-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4 му выход активности равен 80,6%, скорость протекания растворов 10 мл/ч.

Пример 2. Процесс проводят по примеру 1, используя в качестве адсорбента метакриламид, сополимеризованный с трипсином, ацилированным хлорангидридом метакриловой кислоты, и диэфиром метакриловой кислоты и полиэтиленгликоля. Содержание иммоби" лизованного трипсина составляет

7 мг/мп адсорбента. Через колонку при рН 8,5 пропускают 20 мл раствора, содержащего препарат ингибитора трипсина из поджелудочной железы быка с суммарной активностью 16,56 ИЕ и концентрацией белков 1,5 мг/мл.

Элюцию проводят при рН 1,5. Получают 5,3 мг ингибитора с удельной активностью 28,45 HE/мг. Исходная удельная активность составляет

5,52 ИЕ/мг. Скорость протекания всех растворов равна 20 мл/ч.

Пример 3. Процесс проводят по примеру 1, используя в качестве адсорбента N-винилпирролидон, сополимеризованный с трипсином, аЦилированным хлорангидридом акриловой кислоты, и N, N -метиленбисакриламидом.

Содержание иммобилизованного трипсина составляет 15 мг/мл адсорбента.

Через колонку при рН 8,2 пропускают 30 мл раствора овомукоида из куриного яйца с концентрацией белка 2 i r/мл и удельной активностью 14,40 ИЕ/мг. Элюцию проводят при рН 2,5. Получают 15 мг ингибитора с удельной активностью 35,48 ИЕ/мг

Скорость протекания растворов составляет 30 мл/ч.

Способ позволяет ускорить процесс очистки ингибиторов протеиназ в

2-3 раза и повысить степень очистки

5 целевого продукта.

10 . Способ очистки ингибиторов протеинаэ путем адсорбции ингибитора на аффинном адсорбенте при рН 8,0-8,5 с последующей элюцией адсорбированного ингибитора солевым раствором

15,, при рН 1,5-,2,5, о т л,и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью, повышения степени очистки целевого продукта, в качестве адсорбента используют гидрофильный мономер, выбранный из группы: акриламид, метакриламид или N-винилпирролидон, сополимеризованный с трипсином, ацилированным ангидридом или галоидангидридом ак. риловой или метакриловой кислоты, N, N -метиленбисакриламидом, диэфиром гликоля и акриловой Hzn метакри ловой кислоты.

Способ выделения белка // 932817

Способ выявления ореолообразующих клеток лейкоцитов // 930049

Способ сенсибилизации белковых частиц // 909633

Способ количественного определения антипирина в крови // 906941

Способ определения направленности патологического процесса при онкологических заболеваниях // 902348

Способ количественного определения лютенурина // 885152

Способ определения скорости рассасывания пересаженного трансплантата // 881616

Способ определения пепсинообразующей функции желудка // 878249

Способ определения катехоламинов в биологической жидкости // 789752

Способ определения галактозы в сыворотке крови // 2101705

Изобретение относится к биохимии и ветеринарии и касается способа определения гексоз, например галактозы, в сыворотке крови для ранней диагностики нарушений минерального обмена

Способ определения мочевины и креатинина в биологических жидкостях // 2101706

Изобретение относится к медицине и касается видов патологии или состояний организма, связанных с нарушениями азотистого обмена, особенно при различных видах почечной патологии, обширных хирургических ранах, ожогах

Способ прогнозирования течения ишемической болезни сердца // 2102756

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в кардиологии, терапии

Способ оценки состояния больного // 2103692

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической биохимии и может быть использовано для диагностики и прогнозирования состояния больного в послеоперационном периоде и при развитии острого воспалительного процесса

Способ прогнозирования продолжительности жизни онкологических больных четвертой стадии заболевания после диагностических хирургических вмешательств // 2104536

Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии, и может быть использовано при проведении больным с неблагоприятным прогнозом адъювантных методов терапии

Способ диагностики сахарного диабета // 2104537

Изобретение относится к медицине, в частности к эндокринологии, и может быть использовано для проведения дифференицальной диагностики инсулинзависимого и инсулиннезависимого диабета, состояния их компенсации

Способ прогнозирования цирроза печени у больных с хроническими диффузными заболеваниями печени // 2104538

Изобретение относится к медицине, а именно гепатологии, и предназначено для прогнозирования цирроза печени у больных с хроническими диффузными поражениями органа

Способ оценки микросомальной системы печени при действии ксенобиотиков алкилирующего типа // 2104539

Изобретение относится к области исследования или анализа материалов особыми способами, а именно к способам исследования крови при действии ксенобиотиков, и может быть использовано для оценки микросомальной системы печени после воздействия малых доз иприта и люизита при реальных путях поступления ОВ (отравляющих веществ) в организм, а также при решении задач по уничтожению ХО (химического оружия) в районах военно-химических объектов, в частности по обследованию здоровья населения и обслуживающего персонала в местах по хранению и уничтожению ХО

Прибор для мониторинга параметров взвешенных частиц // 2106627

Изобретение относится к оптико-электронной промышленности и может быть использовано для комплексного исследования параметров взвеси частиц микронных и субмикронных размеров (10-8 - 10-4 м): распределения частиц по группам с определенными размерами, химического состава частиц, скоростей изменения этих характеристик

Способ лечения ишемической болезни сердца // 2107910

Изобретение относится к медицине, в частности, к кардиологии, и может быть использовано для лечения любых клинических вариантов ишемической болезни сердца