Способ определения регенерационного процесса в печени

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕГЕНЕРАЦИОННОГО ПРОЦЕССА В ПЕЧЕНИ путем гистологического исследования ткани и определения митотической активности гепатоцитов, отличаю щ и и с я тем, что, с целью повышения точности способа путем оценки степени выраженности регенерационного процесса, дополнительно определяют количество нормальных гепатоцитов и объем их ядер и при увеличении митотической активности и одновременном уменьшении количества нормальных гепатоцитов и объема их ядер определяют слабую степень регенерационного процесса, при увеличении митотической активности и объема ядер и уменьшении количества нормальных гепатоцитов определяют среднюю степень регенерационного процесса и при увеличении митотической активности и уменьшении коли- g чества нормальных гепатоцитов и объ (Л С ема их ядер определяют выраженную степень регенерационного процесса.

COOS СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

OllHGAHHE ИЗОЕРЕТЕН @

Н АВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ь., ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЭОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЬП ИЙ (21) 32366 57/28-13 (22) 08.01.81 (46) 23.03.84. Бюл. Р ll (72) Н.Л.Иванова, И.N.Солопаева и С.Б.Блинов (71) Горьковский научно-исследовательский педиатрический институт (53) 616" 091.8(088.8) (56) 1. Сидорова В.Ф. Постнатальный рост и восстановление внутренних органов у позвоночных, М., ! Наука, 1969, с. 15.

2. Карташов О.Я., Максимова A.A.

Функциональная морфология печени.

Рига, Зинатне, 1979, с.94. (54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕГЕНЕРАЦИОННОГО ПРОЦЕССА Б ПЕЧЕНИ путем гистологического исследования ткани и определения митотической активности гепатоцитов, о т л и ч а ю и.

„„su„„1081466 А

1(511 С 01 8 1/28У А 61 В 10/00 шийся тем, что, с целью повышения точности способа путем оценки степени выраженности регенерационного процесса, дополнительно определяют количество нормальных гепатоцитов и объем их ядер и при увеличении митотической активности и одновременном уменьшении количества нормальных гепатоцитов и объема их ядер определяют слабую степень регенерационного процесса, при увеличении митотической активности и объема ядер и уменьшении количества нормальных гепатоцитов определяют среднюю степень регенерационного про, цесса и при увеличении митотической активности и уменьшении количества нормальных гепатоцитов и объема их ядер определяют выраженную степень регенерационного процесса.

1081466

Изобретение относится к медицине и касается оценки состояний печени при патологических процессах.

Известен способ определения регенерационного процесса в печени., включающий подсчет митотически делящихся гепатоцитов в нормальной печени при постнатальном росте животного Ã1»

Однако известный способ не дает воэможность оценить степень регенерации патологически измененной печени.

Наиболее близким по технической сущности к изобретению является способ определения регенерационного процесса в печени путем гистологического исследования ткани и определения митотической активности гепатоцитов при разлкчньцс функциональных состояниях органа (23.

Недостатком этого способа определения регенерационного процесса 20 в печени является невозможность оценки степени выраженности регенерационного процесса в патологически измененной печени.

Целью изобретения является повы- 25 шение точности способа путем оценки степени выраженности регенера ционного процесса.

Указанная цель достигается тем, . что согласно способу определения; 30 регенерационного процесса в печени путем гистологического исследования ткани и определения митотической активности гепатоцитов, дополнитель. но определяют количество нормаль- 35 ных гепатоцитов и объем их ядер и I при увеличении митотической активности и одновременном уменьшении количества нормальных гепатоцитов и объема их ядер бпределяют слабую 40 степень регенерационного процесса, .при увеличении митотичвской активности и объема ядер к уменьшении количества нормальных гепатоцитов определяют среднюю степень регенера- 45 ционного процесса и при увеличении митотической активности и уменьшении количества нормальных гепатоцитов и объема их ядер определяют выраженную степень регенерационного процесса.

Способ осуществляют следующим образом.

Кусочки печени фиксировали в 10%ном нейтральном формалине,. после чего приготавливали парафиновые 55 срезы общепринятым методом. После депарафинирования срезы окрашивали гематоксилин-зозином и с помощью окулярной морфометрической сетки под микроскопом при увеличении в 60

1350 раз подсчитывали количество нормальных гепатоцитов, которые имели ядро, неповрежденную ядерную к клеточную оболочку и белок в цитоплазме.

Кроме того,. подсчитывали колк чество митоэов в среднем на 10 тыс. гепатоцитов.

Суммарный .объем ядер гепатоцитов определяли по среднему числу узлов сетки, попавших на ядра прк многих случайных наложениях сетки на иэображение пРепарата, и выражали в условных. единицах, при этом подсчитывали количество ядер, находящихся на площади препарата, ограниченной сеткой. После подсчета общего количества и суммарного объема ядер гепатоцитов на площади препарата, ограниченной сеткой, вычислялк средний объем ядра гепатоцита, который также выражали в услов-, ных единицах.

С помощью регресионного анализа были выведены уравнения связи вида

У-В о+В1Х 1+В2Х 2 для каждой велйчийы, где Вв, В„и

B2 - коэффициенты регрессий для изменения мктотической активности гепатоцитов У, количества нормаль1 ных гепатоцктов У и объемов их ядер.

У в зависимости от продолжительности временк наблюдения Х„и количестsа инъекций препарата, стимулирующего регенерацию Х .

Каждая из величин не являлась линейной комбинацией остальных независимых переменных. Интервалы между значениями верхнего и нижнего уровня были не меньше и не равны ошибке, с которой они задавались. Величины Х„и Х изменялись от -1 до +1, Х ="1, Х 2 -1, соответствовали начальной гранйчной точке эксперимента.

Аналогично рассчитывали конечную граничную точку.

Уравнение регрессии определены по, результатам эксперимента в граничных точках. Коэффициенты уравнений свидетельствуют о том, на сколько велико влияние переменной на изменение функции. Количество митотически делящихся-гепатоцитов подсчитывается по уравнению.

У„= О, 885+0, 332 Х1+О, 541 Х ° (1 )

Количество нормальных гепатоцйтов изменяется по уравнению

У -" 5,340+0,333 Х„+ 0,465 Х . (2)

Объем ядер гепатоцитов изменяется по уравнению

У>-0,280+0,022 Х,. +0,020 Х>, (3)

Изменение митотической активности гепатоцитов МИ, количества нормальных клеток К„„ и объема кх ядер

ОЯ в зависимостй от степени выраженности регенерационного процесса представлено в табл.1.

1081466

Таблица 1

ОЯ

ИИ

"нгО, 1-0, 11

О, 27-0,48

0,14-0,26

0,22-0,23

Слабая

Средняя

Выраженная

0,24-1, 03

1,05-6,63

0tl2 0113

0 2""0 21

Интактные животные

75 85 МК на 100 r массы в течение

25:3 сут. с интервалом 24 ч. При изучении действия хориогонина на,вос . становителвные процессы в печени выявлялось его выраженное стимулирукхцее регенерацию свойство.

Изменение митотической активности, количества нормальных гепатоцитов и объема их ядер у экспериментальных животных после введения хориогонина ХГ представлено в табл. 2.

Таблица 2

Группы животных

Показатели регенерации

МИ

ОЯ

1, 03+0,14 4, О+0,6

0..48фО, 05

С гепатитом, С гепатитом, получившие 1 раз ХГн

6,2+0,6

2,110,2

0,26+0,84

С гепатитом, получившие 2 раза ХГр

0 27+0 05

0,19 6,05 5,8<0,4

С гепатитом, получившие 3 раза ХГг

0„1+0,02

4, 5+0,2

0,3310,04

Пока з атели реге нера ционного процесса

Пример 1. Для экспериментальных исследований были использованы беспородные крысы.

Патологию печени вызывали 20кратными инъекциями СС9< в дозе

0,2 мл в 0,1 мл косточкового масла на крысу при введении 4 раза в неделю. В печени раэвивалисй явления,. сходные с хроническим персистируюцим гепатитом человека.

Для дальнейшей стимуляции регенерационного.процесса в печени живот:ным вводили хориогонин в дозе

3,4-4,0

4,1-5,8

5,9-8, 5

8, 54-8, 6

Степень выраженности регенерацио нного режима

1081466

Состав итель Л. Стебаева

Техред С.Мигунова Корректор В. Бутяга

Редактор В.Данко

Заказ 1522/35 Тираж 823 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

11 3035, Москва, F-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал пllll патент, г. Ужгород, ул. проектная, 4

Данные, получерные в эксперименте, послужили основанием для исполь- эования хориогонина в комплексе с другими биологически активными веществами для лечения хронических гепатитов у детей. Его примеАение в различных дозах под контролем состояния печени позволило установить, что дозы 75 85 МК на 100 r массы ребенка оказывают такой же выраженный стимулирукщий эффект, как и дозы 160 170 NE, что позволи- ло снизить лечебную дозу препарата.

Предлагаемый способ определения регенерационного процесса в печени позволяет наряду с контролем за лечением больных также ускорить и уточнить оценку процесса регенераю ции в печени в 4-5 раза по сравнению с известным способом.