Способ определения концентрации гепарина в крови

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ГЕПАРИНА В КРОВИ путем титрования плазкы крови антагонистом гепарина в присутствии активатора свертывания, отличаю «ий .с я тем, что, с цельи упрощения способа, в качестве антагониста гепарина используют нестехиометрический полиэлектролитный комплекс на основе полиметакриловой кислоты и четвертичной соли поли-4-винилпирндина при весовом соотношении комплекса и гепарина 2 - 20:1.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕаЪЬЛИН

«е «и

3(59 G 01 и 33 48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3487670/28-13 (22) 31.08.82 (46) 23.02.84. Бюл. 9 7 (72) В.С.Ефимов, A.Â.Çåçèí, В.A. Êàáàíoâ, В.А. Кеме нова, К.M.Лакин, A.M. Скородинская, О.В.Чернова и К.Н.Дулевич (71) Филиал по разработке готовых лекарственных средств Научно-исследовательского института по биологическим испытаниям химических соединений (53) 615.361.363612.11.12(088.8) (56) 1. Лопухин F).M., Иолоденков M.Н.

Гемосорбция. h1., "Иедицина", 1978,,с. 99-111 (прототип). (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ГЕПАРИНА В КРОВИ путем титрования плазмы крови антагонистом гепарина в присутствии активатора свертывания, о т л и ч а ю щ и и .с я тем, что, с целью упрощения способа, в качестве антагониста гепарина используют нестехиометрический полиэлектролитный комплекс на основе полиметакриловой кислоты и четвертичной соли поли-4-винилпиридина при весовом соотношении комплекса и гепарина 2т1 — 20:1.

1075164

Изобретение относится к медицине, в частности к определению гепарина в крови.

Известен способ определения концентрации гепарина в крови путем титрования плазмы крови антагонис- 5 том гепарина — протаминсульфатом в присутствии активатора свертывания тромбин-кальциевой смеси, заключающийся в регистрации времени образования сгустка при последова" åëüíîì : О повышении концентрации протаминсульфата, добавляемого к плазме крови(1 .

Недостатком способа является отсутствие стабильного нейтралиэующего весового соотношения протаминов с гепарином. Это соотношение колеблется от 1,5 до 4 мг/1 мг гепарина и зависит от значения рН.

Кроме того, протаминсульфат в количестве, превышающем количество при-сутствующего в плазме гепарина, сам О оказывает антикоагулянтное действие, которое ошибочно может быть приписано не полностью нейтрализованному гепарину. Кроме того, низкая селективнссть протаминсульфата к взаимодействию с гепарином в условиях крови удлиняет время титрования и определения количества гепарина.

Нейтрализующая активность протаминсульфата меняется от препарата к 38 препарату„ а также изменяется прч кратковременном хранении его в вод-. ных растворах, Целью и=, ñ"áT Hòeûûÿ является упро-щение способа определения гепарина в крови, Эта цель достигается тем, что

Определение содержания гепарина B крови ведут с использованием в качестве антагониста гепарина нестехиометричного голиэлектролитного комплекса на основе полиметакриловой кислоты и четвертичной соли поли-4-винилпиридина при весовом соотношении комплекса и гепарина 2:1-20:1.

Пример,. - Кровь для исследо-. вания из краевой вены уха кролика берут в силиконированные пробирки, содержащие 3,8%-ный раствор цитрата натрия в объемном соотношении 9:1 (кровь".цитрат), После добавления

0,1 ьп =» Ъ;;--ного раствора гепарина смесь перемешивают и центрифугируют

10 мин са скоростью 3000 об/мин.

Плазму отбирают и помещают в термостат коагулометра Мнитгера и Гросса.

Исходный раствор нестехиометричного полиэлектролитного комплекса на основе полиме".àêðèëîâîé кислоты и четвертичной соли поли-4-винилпиридина 2,2% разводят последовательно в 2 раза до концентрации 2,210 Ъ.

-9

В реагентную прОбирку, помещенную в термостат коагулометра, вносят

0,1 мл плазмы, 0,1 мп одного из приготовленных растворов комплекса 65 и 0,2 мл тромбин-кальциевой смеси такой активности, чтобы свертывание контрольной плазмы наступало за

10-12 с, используя автоматическую пипетку с магнитным пускателем отсчета времени. При.образовании сгустка секундомер коагулометра автоматически отключается. Аналогичные измерения проводят с другими разведениями комплекса. При добавлении нестехиометричного полиэлектролитного комплекса в концентрации, 0,275% (соотношение антигепаринат:гепарин

1,1:1) время свертывания составляет

29,7 с. При увеличении концентрации комплекса в 2 раза (соотношение

2,2:-1) время свертывания плазмы составляет 10,2 с и не изменяется до . достижения 20-кратного переизбытка комплекса. Таким образом, минимальная нейтралиэующая доза достигается при концентрации комплекса 0,55, что соответствует концентрации гепарина:

Скомп лексо О, 55% rename но и Фт =. — 0 25% концентрации введенного гепарина, где в - нейтрализующее соотношение комплекс:гепарин.

В таблице приводится титрование пла.з ы, содержащей 0,08 мг гепарина/1 мл плазмы по известному и предлагаемому способам.

Из приведенных данных видно, что для определения гепарина в об— раэце плазмы по известному способу требуется по крайней мере 7 титрований (общее время титрования

24 мин),, тогда как по предлагаемому способу уже третий опыт дает необходимый результат, т.е. число опера-. ций сокращается в 2,3 раза (время титрования 4 мин 30 c) . При использовании,протаминсульфата в качестве

1 нтагониста гепарина невозможно рименение автоматического коагулометра, так как происходит выпадение осадка, препятствующее образованию прочных нитей фибрина. В предлагаемом способе для регистрации используют автоматический коагулометр, что сокращает время, необходимое для титрования одного образца. Кроме того, сокращение времени исследования достигается за счет приготовления заранее и возможности длительного хранения растворов нестехиометричного полиэлектролитного комплекса. Протаминсульфат же необходимо заново готовить перед каждым опытом.

Поэтому общее время, необходимое для определения содержания гепарина, сокращается почти в 6 раз. упрощение определения концентрации гепарина в крови, ведущее к значительному сокращению времени определения, является черезвычайно важным в послеоперационный период

1075164 шает вероятность опасных последствий, выз ванных гиперкоагуляцией. для своевременного введения точного количества антигепаринового агента, так как уменьПредлгФгаемяй способ

Известный способ

Порядок добавления титрующего агента

Время свертывания, с

Нестехиометричный полиэлектролитный комплекс(концентрация),Ъ

Время свертывания, с

Протаминсульфат (концентрация),В

О, 1

0,10

0,05

0,025

0,0125

Составитель Н. Гуляева

Редактор Т. Кугрынева Техред,Л.Микеш Корректор И. Эрдери

Заказ 490/37 Тираж 823 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. ужгород, ул. Проектная, 4

0,20

0,050

0,075

0,025

0,0125

0,006

Более 60

Более 60

Более 60

Более 60

30,5+0,6

12,4+0,6

18,6+0,4

10,2+0,4

10,1+0,5

10,2+0,4

18,4+0,6