Способ определения дигидротестостерона и его производных в масляной смеси
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДИГВДРОТЕСТОСТЕРОНА И ЕГО ПРОИЗВОДНЫХ В МАСЛЯНОЙ СМЕСИ путем добавления 2,4-динитрофенш1Гидразина с последующей хроматографией образца в тонком слое сорбента и фотометрией, отличающийс я тем, что, с целью упрощения, пробу нагревают при 90-100°С в течение 1,5-2 ч в присутствии 1,8-2N соляной кислоты.
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОИ ЛНО \
РЕСПУБЛИК
ÄÄSUÄÄ1083116
3 „G 01 N 33/48
ГОСУДАРСТЕЕННЬЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЦТИЙ
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ н автсюснамм сииайвъатвм
3В» (21) 3371232/28-13 (22) 29. 12. 81 (46) 30.03.84. Бюл. S 12 (72)-Т.П. Согоян, К.Ф; Кулеш и Л.K. Борозенец (71) Харьковский научно-исследовательский институт эндокринологии и химии гормонов (53) 616.06(088.8) (56) 1. Kokih В., Vejdelek L.G.
"Handbuch der Kolorimetrie", Bd.IÜ (Kolerimerrie in der pharmazie).
VK3. G. Fischer Verlag, Jena, f963, в. 905-907.
2. Авторское свидетельство ЧССР
Ф 167783, кл. РЧ3542-74, 1977 (про, тотип). (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДИГИДРОТЕСТОСТЕРОНА И ЕГО ПРОИЗВОДНЫХ В
МАСЛЯНОЙ СМЕСИ путем добавления
2,4-динитрофенилгидразина с последующей хроматографией образца в тонком слое сорбента и фотометрией, отличающийся тем, что, с целью упрощения, пробу нагревают при 90-100 С в течение 1,5-2 ч в приУ сутствии 1,8-2N соляной кислоты.
1083116
Х П
D0 где Х вЂ” содержание определяемого
3-кетостероида в 1 мл исследуемого масляного раствора, мг;
D — оптическая плотность исследуемого раствора;
Ро — оптическая плотность стандартного раствора; а — содержание определяемого
3-кетостероида в 1 мл стандартного масляного раствора смеси 3-кетостероидов, мг.
Hp и м е р 1. 0,03 мп масляного раствора, содержащего в сумме 10 мг
2о -метилдигидротестостерона, 2d. †ìåòèëдигидротестостерона пропионата и
2о -метилдигидротестостерона капроната подвергают определению по описанному способу.
Исследованная смесь содержит
23,33 мг/мл 2а(-метилдигидротестостерона, 48,17 мг/мл 2К-метилдигидро1
Изобретение относится к области аналитической химии, а именно к способам количественно о определения стероидных соединений, прнменяе" мых в практике здравоохранения, 5
Известен весовой способ количественного определения стероидных соединений, содержащих.карбонильную группу, с помощью 2,4-динитрофенилгидразина 1 .
Известен также способ, позволяющий проводить разделение и определение смеси 17-кетостероидов на основе реакции с 2,4-динитрофенилгидраэином Г23. 15
Указанный способ неприменим для проведения анализа масляных растворов без предварительного отделения масла, в присутствии которого возможно неполное разрушение избыт- 20 ка реактива, мешающего определению
3-кетостероидов в виде их 2,4-динитрофенилгидразонов.
Цель изобретения — упрощение способа количественного определения 25 дигидротестостерона и его производных из маслянистых растворов без предварительного отделения масла.
Указанная цель достигается тем, что в способе определения дигидро- 30 тестостерона и его производных в масляной смеси путем добавления
2,4-динитрофенилгидразина с последующей хроматографией образца в тонком слое сорбента и фотометрией пробу нагревают при 90-100 С в течео ние 1,5-2 ч в присутствии 1,8-2N соляной кислоты.
Способ осуществляют следующим образом.
Исследуемыи масляный раствор ди40 гидротестостеронаи его производных помещают в пробирку, приливают 15 мл
0„f5X-ного раствора 2,4-динитрофенилгидразина в 1,8-2N соляной кислоте и нагревают при 90-100 С в течение о 45
1,5-2 ч. После охлаждения осадок отфильтровывают через стеклянный фильтр, промывают 5 мл 0,5 N соляной кислоты и водой. Затем осадок растворяют на ф ьтре в мин, ьном коли- 50 честве органического растворителя, например метиловом спирте и хлоро" форме. Раствор переводят в склянку вместимостью 20 мл и упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в
1,00 мл хлороформа, и пробы раствора, содержащие в сумме 200"300 мкг смеси анализируемых З-кетостероидов,. наносят на хроиатографические пластинки Силуфол. Хроматографируют вос" ходящим методом, используя в качестве подвижной фазы хлористый метилен; при необходимости для лучшего разделения компонентов смеси хроматографирование проводят дважды. Пятна разделенных на хроматограмме 2,4-динитрофенилгидразонов, 2d- метилдигидротестостерона, 2-метилдигидротестостерона пропионата и с(метилдигидротестостерона капроната вырезают, элюируют их 10 мл органического растворителя, например смесью метилового спирта и хлороформа (7:3).
Количество анализируемого 3-кетостероида определяют фотометрически при длине волны 366 нм. Оптимальный интервал концентрации определяемого
3-кетостероида в фотометрируемом растворе 10-15 мкг мл. Расчет количества анализируемого 3-кетостероида ведется методом сравнения со стандартным масляным раствором смеси тех же Э-кетостероидов, концентрация которых близка к концентрации исследуемой смеси, после проведения операций, которым подвергается исследуемый раствор.
Расчет количественного содержания дигидротестостерона и его производных в масляном растворе ведут по формуле
1083! 16 тестостерона пропионата и 273,4мг/мл "«пионата н 238,4 мг/мл,2а(-метилдигил2оИ етнлдигидротестостерона капроротестостерона энантата: определено ната: определено соответственно, соответственно, мг/мл: 0,972; 4,090; мг/мл: 23,12; 48,50; 275,6. 234,6.
Пример 2. 0,04 мп масляного раствора, содержащего в сумме Таким образом, предлагаемы "спо10 мл дигидротестостерона, дигидро- соб,пЬзволяет вести определение тестостерона пропионата и 2с ;метил- 3-кетостероидов непосредственно иэ дигидротестостерона энантата, поме- масляного раствора, что значительно, щают в пробирку и подвергают тем !и экономит время, необходимое на проже операциям, что и в примере 1 ° ведение анализа, и уменьшает количеИсследованная смесь .содержит ство операций за счет того, что отпа0,997 мг/мп дигидротестостерона,,дает необходимость разрушать избыток
4,003 мг/мл дигидротестостерона про- реактива.
Составитель И. Емельяненко
Редактор Т. Портная Техред T,Äóáèí÷àK Корректор Г. Решетник
Заказ 1735/39 Тираж 8гз Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва., Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4
