Способ диагностики кандидоза

 

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ КАНДИДОВА путем выделения и исследования патологического материала, отличающийся тем, что, с целью ускорения диагностики, исследуют адгезивную активность Candida albicans путем инкубации их с эпителиальными клетками при соотношении 1:100 в течение 1,5-2 ч в термостате и при адгезии в среднем 16 и более клеток гриба на одну эпителиальную клетку диагностируют кандидоз.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

Num

РЕСПУБЛИК

09 . (11) зри А 61 Б 1 0 00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

14, 684È!:.: ", ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTMA

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ. (21) 3425285/28-13 (22) .21.04.82 (46) 23.05.84 Бюл.Р19 (72) Т.Н. Лебедева (71) Лениградский государственный ордена Ленина институт усовершенствования врачей им. С.И. Кирова (53) 616.992.282(088.8) (56) 1. Кашкин П.Н., Шекланов Н.Д.

Руководство по медицинской микологии, И., "Медицина", 1978. (54) (57) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ КАНДИДОЗА путем выделения и исследования патологического материала, о т л ичающийс я тем, что, с целью ускорения диагностики, исследуют адгезивную активность Candida

albicans путем инкубации их с эпителиальными клетками при соотношенпи

1:100 в течение 1,5-2 ч в термостате и при адгезии в среднем 16 и более клеток гриба на одну эпителиальную клетку диагностируют кандидоз.

1093323

Изобретение относится к области микологии и может быть использовано в диагностике кандидоза, вызванного

Candida albicans, Наиболее часто кандидоз вызывается дрожжеподобными грибками С.albicans.

Известен способ комплексной клинико-лабораторной диагностики кандидо-, за, включающий клиническое, микроскопическое, культуральное, серологическое исследование и постановку внутри" кожных проб со специфическим аллергеном (1 ) .

Недостатком способа является высеваемость C.albicans, положитель-ные серологические реакции и результаты постановки внутрикожных проб со специфическим аллергеном у части практически здоровых лиц, а также часто негативные результаты этих тес" тов у больных кандидозом. В связи с этим кандидоэная природа заболевания устанавливается лишь с учетом динамики изменения культуральных находок и сероло нческих сдвигов (увеличение количества клеток гриба в патологическом материале, нарастание титров противокандидозных антител в сыворотке крови) при повторных исследованиях.

Цель изобретения — ускорение диаг" ностики кандидоза, вызванного С, albicans.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу путем выделения и исследования патологического материала обследуемых лиц исследуют адгезивную активность Candida

albicans путем инкубации их с эпителиальными клетками при соотношении

i 100 в. течение 1,5-2 ч в термостате и при адгезии в среднем 16 и более клеток гриба на одну эпителиальную клетку диагностируют кандидоз.

Способ осуцествляется следующим образом.

В фазу овуляции (14-18-й день менструального цикла) от 22 здоровых женцин забирают поверхностные эпителиальные клетки слизистой оболочки влагалища путем смыва вагинального содержимого 10-ю мл стерильного абуференногофизиологического раствора (ЗФР) рН 7,2.,;Полученный материал смешивают трижды, отмывают, аким же раствором центрифугированием в режиме 2000 об./мин по 10 мин и суспендируют в ЗФР рН 7,2 до конечобщее количество прилипших клеток гриба

500

Пример 1. Больная 37 лет поступила в клинику глубоких мико" зов с жалобами на эуд наружных половых органов в области ануса, небольшие пенисто-творожистые выделения из влагалыда. При осмотре гинекологом обнаружены явления вульвовагинита.

Антитела к специфическому антигену присутствовали в сыворотке крови в титрах l:64. При микроскопии мазков отделяемого влагалища обнаружена влагалищная трихимонада.

Посев патологического матернала на

50 сусло-агар выявил рост дрожжевых грибов в .количестве 12500 колоний/мл, культура идентифицирована как Candida albicans. Выделенный гриб в тот же день засевали на сусло-агар, ин55 кубировали 2 сут при 37ОС. Культуру гриба смывали с агара и определя" ли ее адгезивную активность. Индекс адгезии составил 18,0,что указывало ной концентрации 50000 клеток в I мл (подсчет клеток осуществляют в каме. ре Горяева). Двухсуточную культуру исследуемых штаммов С.albicans выращенных на сусло-агаре, смывают

ЗФР рН 7,2, профильтровывают через

6-слойный марлевый фильтр, троекратно отмывают от остатков среды

20 объемами ЗФР рН 7,2 центрифугированием при 2000 об./мин в течение

15 мин и взвешивают в таком же растворе до концентрации клеток 500000 в I мл 0,25 мл суспензии эпителиальных клеток, смешивают с равным

15 объемом взвеси гриба и полученную смесь инкубируют в термостате при

37 С в течение 1,5 ч при периодичес. о ком перемешивании. Затем материал ресуспендируют и на предметных стеклах готовят по 5 мазков для каждого из исследуемых штаммов. Мазки высушивают при комнатной температуре, окрашивают

0,17.-ным раствором трипанового синего в течение 10 мин, остатки краски смывают слабой струей водопроводной воды и стекла вновь подсушивают. В каждом мазке под микроскопом подсчитывают общее количество клеток гриба, прилипших к 100 неповрежденным

30 эпителиальным клеткам. Результаты выражают индексом адгезии, определяющимся по формуле:

1093323 4 активность полученного гриба. Индекс адгезии оказался равным 6,2, что сви. детельствовало о кандиданосительстве у данной больной.

3 на наличие у больной кандидоэного вульвовагинита.

Действительно, на основании пов" торных микологических и серологических исследований, проведенных через неделю, у больной подтвердилось наличие кандидозного вульвовагипита.

Больной поставлен диагноз хроническо го вульвовагинита смешанной кандидозно-трихомонадной этиологии в стадии обострения. Сочетанное лечение противогрибковыми и антитрихомониазными препаратами привело к положительному эффекту.

П р и и е р 2. Больная 42 лет пос. тупила в клинику глубоких микозов с жалобами на сухой постоянный кашель, затрудненное дыхание, боли в левом боку при вдохе, непереносимость едких запахов, слабость, субфебрильную тем. пературу по вечерам, головные боли.

В 1977 г. впервые перенесла пневмо-. нию, после чего беспокоит постоянный кашель, слабость, периодическое повышение температуры до субфебрильной.

С 1975 r. на работе имеет контакт с алесневыми грибами. При объективном

Обследовании у больной обнаружены явления трахеобронхита °

При бактереологическом исследова" мии мокроты выявлен стафилококк. 21 апреля иэ мокроты выделены плесне вые грибы (аспергил и пеницилл). При повторном микологическом исследовании патологического материала, проведенном 5 мая, в мазке мокроты обнаружены единичные дрожжевые клетки, а посевном материале — дрожжевые грибы в количестве 400 колоний /мл, которые были идентифицированы как

Candida albicans. Одновременно вы" деленную культуру гриба засеяли на сусло-агар, инкубировали 2 сут при

37 С и 13 мая определяли адгезивную

45 количество штаммов индекс адгеэии

От 16 до 17

От 17 до IS

От 5 до 6

От 6 до 7

Штаммы гриба, выделенные от здоровых количество индекс адгезии штаммов

Действительно, последующие микологические и иммунологические иссле. дования, проведенные спустя неделю, подтвердили отсутствие кандидоза у больной. Был поставлен диагноз хронического бронхита бактериальноплесневой этиологии в стадии умеренного обострения, микогенной сенсибилиэации к Candida albicans,îáóñловленной кандидоносительством в бронхах °

Таким образом, предложенный способ позволяет обойтись при диагностике кандидоза без постановки сероло.

20 гических реакций и внутрикожных проб, а также исключает необходимость повторных культуральных и серологических исследований, Предложенный способ позволяет сок25 ратить Бремя диагностики кандидоза на срок около б дней.

Предлагаемое изобретение проверено на 20 штаммах Candida albicans, выделенных от больных кандидозным

30 вульвовагинитом, и 10 культурах того же гриба, полученных от здоровых женщин. Результаты исследования показали что у грибов., полученных из влагалища здоровых женщин, индекс адгезии гриЗ5 ба к клеткам эпителия влагалища не превышал 1 1, у грибов, выделенных из влагалища здоровых женщин, этот показатель равнялся 16 и более.

Результаты, опытов представлены

40 в таблице.

Таким образом, предложенный способ позволяет сократить время исследования с 10 до 4-х дней, что ускоряет диагностику кандидоза на 6 дней.

Штаммы гриба, выделенные от больных

l 093323

Продолжение таблицы

Штаммы гриба, выделенные от здоровых

Штаммы гриба, выделенные от больных индекс адгезии количество штаммов индекс адгезии количество штаммов

23,4

Составитель Г. Крюкова

Редактор С.Патрушева Техред Т.Фанта Корректор A.Ëåæíèíà

3326/3 Тираж 688 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Заказ

Филиал ППП "Патент", r . Ужгород, ул. Проектна я, 4

От 7 до 8

От 8 до 9

От 18 до 19

От 19 до 20