Средства для активации роста и повышения титра клубеньковых бактерий

 

Применение культурапьной жидкости Actinomyces sporoverricosus в качестве средства для активации роста и повышения титра клубеньковых бактерий.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (191 (11) (504 С 12 N 1 06

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3600312/30-15 (22) 03.06.83 (46) 07.06.87. Бюл. В 21 (71) Отдел микробиологии АН МССР (72) А.Ф.Шикимака, В.И.Сабельникова, Е.А.Мехтиева и Г.В.Мохова (53) 631.461.52(088.8) (56) Руководство к практическим занятиям по микробиологии. — МГУ, с. 68, 1971.

Хотянович А.И. и др. Вопросы экологии и физиологии микроорганизмов, используемых в сельском хозяйстве.Л., 1976. (54) СРЕДСТВА ДЛЯ АКТИВАЦИИ РОСТА И

ПОВЫШЕНИЯ ТИТРА КЛУБЕНЬКОВЫХ БАКТЕРИЙ (57) Применение культуральной жидкости Actinomyces sporoverricosus

7-274 в качестве средства для активации роста и повышения титра клубеньковых бактерий.

1,5-2,5

Остальное

В качестве контроля используют питательную среду с дрожжевым автолизатором, рН сред 6,4-6,5.

Питательную среду разливают по

200 мл в колбы емкостью 750 мл, стерилизуют в автоклаве при 1 атм. в течение 30 мин. Затем в колбы вносят суспензию клеток Rhizobium japonicum

646. Выращивание проводят на качал1 t1

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в микробиологической промьппленности для производства препаратов клубеньковых бактерий; используемых в растениеводстве.

Известно применение дрожжевого автолизата или пекарских дрожжей в .качестве средства для активации роста микроорганизмов, в частности, и медленнорастущих клубеньковых бактерий.

Однако в этом случае отмечается недостаточно интенсивный рост медленнорастущих клубеньковых бактерий например, Rhizohum japonicum 646 и

Rhizobium japonicum M-3.

Целью изобретения является ускорение роста клубеньковых бактерий сои и повып1ение их титра в питательных средах. указанная цель достигается тем, что в качестве средства для активации роста и повьппения титра клубеньковых бактерий используют культуральную жидкость Actinomyces sporoverricosus 7-274.

Культуральную жидкость актиномицета перед внесением в питательные среды стерилизуют при кипячении 4060 мин или в автоклаве при 1 атм 1ч.

Пример 1. Проводят выращивание Rhizobium j aponicum 646 глубинным методом на среде, в состав ко.торой входят, мас. %:

Кукурузный экстракт 1,0

Глюкоз а 0 5

Меласса 0,5 (Мна) БОФ 0,05

К НР04 ЗН О 0,025

Кн P0 . 0025

MgS0 7Н О 0,02

Культуральная жидкость Actinomyces sporoverricosus 7-274

Вода

23293 2 ках в течение 72 ч при температуре

27-28 С, В опытном варианте наблюдается активный рост клубеньковых бактерий.

Сроки культивирования сокращаются по сравнению с контролем до 48 ч при высоком выходе риомассы клеток—

44,0-57,6 млрд/мл против 9,3 млрд/мл в контроле или в 4,7-6,3 раза вьппе

10 (см. табл. 1).

Количество микробных клеток опре- деляют методом учета колоний при. глубинном высеве на агариэованные

15 питательные среды в разведении 10 и выращивании в термостате при 27 — .

28 С.

Пример 2. Проводят выращивание клубеньковых бактерий Rhizobium

20 japonicum 646 и Rhizobium j aponicum

М-3 на агаризованных средах, для чего в чашки Петри вносят 1 мл суспен-В зии клеток в разведении 10 и заливают теплой агаризованной средой, в состав которой входят, мас. :

Гороховый отвар 5 0

Глюкоза 1,0 (Ина4 БОа 0,1

30 К НРОа ° ЗН О 0,05

kH P0 0 05

MgS0< 7Н О 0,02

Агар-агар 1,8-2,0

Культураль35 . Actinomyces

sporoverricosus 274 1,5-2,5

Вода. Остальное

40 Одновременно проводят выращивание клубеньковых бактерий на питательной среде с дрожжевым автолизатом, рн сред 6,4-6,5.

Посев проводят глубинным способом

45 с последующим выращиванием культуры, в термостате при 27-28 С, Использование предлагаемого средства способствует обильному росту колоний, активизирует скорость накоп"

50 ления биомассы бактерий. Колонии появляются уже на 3-4 день после по-, сева. Титр клеток штамма 646 в 4,87,2 раза, а штамма М-3 в 11,9-15,5 раза выше, чем на среде без культу55 ральной жидкости .актиномицета (см. табл. 2).

На агаризованной среде вырастают компактные колонии клубеньковых бак

Таблица.!

Рост Rhizobium japonicum 646 при глубинном культивировании

Титр клеток в 1 мл

Вариант исходный, 24 ч, млрд 48 ч,млрд млн

72 ч, млрд

Контроль (питательная среда с дрожжевым автолизатом) 0,057

11,8

9,3

6,2

Питательная среда, содержащая культуральную жидкость Actinomyces sporoverricosus

7- 274:

3,95

83,5

57,6

5,8

1,5Х

71,8

44,0

5,6

7,20

2,5Х

3 11 терий с четкими очертаниями и значительно крупнее, чем в контрольной среде.

Пример 3. Выращивают штамм

646 и штамм M-3 на наполнителе-сорбенте — гидролизном лигнине из подсолнечной лузги. 20 г наполнителя . помещают в колбы Эрленмейера емкостью 100 мл, стерилизуют в автоклаве при 1 атм. 1 ч трижды. В опытные образцы вносят культуральную жидкость актиномицета из расчета 1,5Х к весу лигнина. Лигнин инокулируют суспензиями клеток чистых культур клубень« ковых бактерий в асептических условиях. Затем колбу слегка встряхивают для равномерного распределения микробных клеток в наполнителе. Подращивают клетки в препарате при комнатной температуре (18-20 С) в течение 15 дней.

23293 4

Прирост клеток клубеньковых бактерий в препарате определяют, как указано в примере 1.

В вариантах с использованием предпредлагаемого средства происходит более активное нарастание клеток бактерий (см. табл. 3).

Таким образом, предлагаемое сред- ство обеспечивает ускорение роста

10 и получение высоких титров клеток медленнорастущих клубеньковых бактерий при глубинном культивировании на вторые сутки (титр 44,057,6 млрд/мл); на агаризованных сре15 дах колонии появляются уже на третьичетвертые, сутки после высева. Количество их увеличивается по сравнению с контролем в 11,9-15 5 раза, в наполнителе-сорбенте через 15 дней

20 .титр клеток увеличился в 2,3-2,5 раза.

1123293

Таблица 2

Рост клеток Rhizobium japonicum на агариэованных средах

Количество колоний на чашку

Вариант штамм 646 штамм М-3

Контроль

98

2,5Х

562

460

730

710

1 5Х

Таблица 3

Рост Rhizobium japonicum на наполнителе (1,5Х культуральной жидкости Actinomyces sporovexricosus 7-274 к весу лигнина) Титр клеток в 1 r лигнина, млн

° р исходный через 5 дней через 15 дней

Штамм, вариант

Rhizobium japonicum 646

56,1

12,5

12,1

73,6

60,8

36,0

90,8

34,0

Предлагаемое средство

ВНИИПИ Заказ 2681/1 Тираж 499 Подписное

Произв.-полигр. пр-тие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Среда с добавлением культуральной жидкости

Actinomyces sporoverricosus 7-274

Контроль (среда с дрожжевым автолизатом) Предлагаемое средство

Rhizobium japonicum М-3

Контроль (среда с дрожжевым автолизатом) 138,4

283,0

118,8

296,0