Способ разрушения бацилл для получения элементов клеток
СПОСОБ РАЗРУШЕНИЯ БАЦИЛЛ ДНЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЭЛЕМЕНТОВ КЛЕТОК путёН обработки биомассы химическими веществами с последукяцим выделением элементов клеток, отличаю- : щ и и с я тем, что, с целью упрощения способа и максимального сохранения структуры клеточной оболочки, обработку биомассы осуществляют солевой средой а, сконцентрированной в 4-10 раз.
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИК
09) (11) Ш4 С12N106
ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Н ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3581612/28-13 (22) 12.01.83 (46) 07.05.86. Бюл. N- 17 (71) Ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. почетного академика Н.Ф.Гамалеи (72) А.Г.Сабельников и Б.Н.Ильяшенко (53) 576.8.093.1(088.8) (56) Bernhard К, Schrepf H.,Joebel W.
Bacteriocin and. antibiotic resistance plasmids in Bacillus cereus
and Bacillus subtilis. — J. BacterioloSX, 133 (2), р. 897-903, 1978. (54) (57) СПОСОБ РАЗРУШЕНИЯ БАЦИЛЛ
ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЭЛЕМЕНТОВ КЛЕТОК путей обработки биомассы химическими веществами с последующим выделением элементов клеток, о т л и ч а ю— щ н и с я тем, что, с целью упрощения способа и максимального сохранения структуры клеточной оболочки, обработку биомассы осуществляют солевой средой а, сконцентрированной в 4-10 раэ.
40462
Техред О.Гортвай
Корректор Л.Патай
Редактор О. Кузнецова
Тираж 490
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д, 4/5
Заказ 2715/1
Подписное
Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная, 4
1 11
Изобретение относится к микробиологии.
Целью изобретения является упрощение способа и максимальное сокращение структуры клеточной оболочки.
Способ осуществляется следующим образом.. Ночную (18 ч роста) культуру бациллярного штамма засевают в свежий мясопептонный бульон (MIIB) и выращивают при 37 С до конца логариф" мической фазы роста (3-3,5 ч), Клетки осаждают центрифугированием, отмывают однократно 0,85 -ным раствором NaCl и ресуспендируют в растворе, по составу соответствующем среде а, сконцентрированной в 4 раза. Инкубируют 3 ч при 37 С или ночь (18 ч) при комнатной температуре. О степени разрушения клеток судят по несколь- . ким критериям: по визуально наблюдаемому лизису; исследованию клеточной массы под микроскопом; определению количества жизнеспособных. клеток .в лизатах путем высева на мясопептонный агар (выражают в по .отношению к исходному количеству); спектрометрическому анализу супернатантов после осаждения клеток.
Пример 1. 2 мл 17-часовой культуры Bacillus cereus штамма GP7, переносят в 40 мл свежего МПБ. Выра" щивают со встряхиванием (150 об/мин)
3 ч при 37 С. Клетки осаждают центрифугированием при 5000 g, однократно отмывают 0,85 -ным раствором NaC1 и ресуспендируют в 1 мл среды а, имеющей состав на 1 л, r:
К НРОц 10,5
KH PO 4,5 (ИН„) 80„ 1
Цитрат натрия 2Н О 0,5
Смесь инкубируют 1 ч при 37 С. По всем исследованным параметрам лизис клеток не наблюдается.
Пример 2. 2 мл 20-часовой культуры штамм GP7 переносят в 40 мл
10 свежего ИПБ, затем выращивают и отмывают, как в примере 1. Клеточную массу ресуспендируют в 1 мл среды а (см. пример 1), сконцентрированной в 4 раза (обозначение à х 4) я инкубиру15 ют 1 ч при 37 С. После инкубации визуально наблюдают появление значительной вязкости, что свидетельствует о лизисе клеток. Исследование ли" затов под микроскопом показывает на20 личие пустых клеточных оболочек, что говорит о выходе в среду клеточного содержимого.
Определение количества жизнеспособных клеток в лизатах показывает, 25 что после инкубации в среде а х 4 степень выживаемости бацилл значительно снижена по сравнению с исходной. Количество разрушенных клеток составляет 83 .
30 Дополнительным свидетельством лизиса клеток являются данные спектрофотометрического анализа супернатантов после, осаждения: клеток. Анализ спектров поглощения указывает
4 на наличие в лизатах материала нукле5 отидного и белкового происхождения и, возможно, полисахаридов.
