Способ определения повреждения органов

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОВРЕЖДЕНИЯ ОРГАНОВ путем перфузии органа и исследования пер узата, о т л и-чающийся тем, что, с целью упрощения способа, в перфузионную среду вводят флюоресцендиацетат в концентрации 10 -10 М и интенсивность флюоресценции в оттекающем от органа перфузате свидетельствует о степени повреждения органа.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (l9) ((1>

4(5() А 61 В 10 00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

И АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

13., В%а с

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

Г1О ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3594979/28-13 (22) 11.03.83 (46) 23.03.85. Бюл. к- 11 (72) Н.С.Пушкарь, В.И.Луговой, В.К.Дворцевой В.А.Коптелов, А.М.Грек и О.Б.Колоколова (71) Институт проблем криобиологии и криомедицины АК Украинской ССР (53) 591.461.23.01(088.8) (56) 1. Биленко M.Â. Биологические аспекты аллотрансплантации почки, М., "Медицина", 19?8, с. 56-61.

2. Шумаков В.И., Штенгольд Е.Ш., Онищенко Н.А. Консервация органов.

М., "Медицина", 1975, с. 162-169

;(прототип) . (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЩНИЯ ПОВРЕЖДЕНИЯ ОРГАНОВ путем перфузии органа и исследования перфузата, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью упрощения способа, в перфузионную среду вводят флюоресцендиацетат в ф концентрации 10 -10 М и интенсивность флюоресценции в оттекающем от органа перфузате свидетельствует о степени повреждения органа.

1 11460

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при определении функционального состояния органов в процессе консервирования и непосредственно перед трансплантацией,.

Для решения вопроса о целесообраз ности консервирования и трансплантации органа необходимо иметь данные о степени его повреждения, позволяющие 10 судить о его функциональном состоянии, Известен биохимический способ определения степени повреждения органов, основанный на определении количества продуктов метаболизма в ткани консервируемого органа (1) .

Однако этот способ громоздок, требует значительных затрат времени и реактивов, связан с нарушением целостности органа и не позволяет 20 оценивать его состояние в процессе консервирования °

Известен способ определения повреждения органа путем его перфузии и исследования оттекающего перпуэата, 25 основанный на анализе энергетического баланса перфузируемого органа. Для этого измеряют скорость перфуэии, напряжение углекислоты и кислорода, концентрацию водородных ионов и. 30 бикарбонатного буфера, после чего на основании математического расчета определяют состояние органа (2) .

Однако известный способ трудоемок, требует значительных затрат времени и сложной аппаратуры.

Цель изобретения — упрощение способа определения степени повреждения органа.

Указанная цель достигается тем, 40 что согласно способу определения повреждения органов путем перфуэии органа.и исследования перфуэата,. в перфузионную среду вводят флюоресцен6 диацетат в концентрации 10 -10 М 45 и йнтенсивность флюоресценции в оттекающем от органа перфузате свидетельствует о степени повреждения органа.

Пример 1, Были проведены

3 серии опытов (в каждой по 6 почек кролика): 1-я серия — почки со сроком ишемии 5 мин, 2-я серия — со сроком ишемии 30 мин и 3-я серия— со сроком ишемии 60 мин.

Все почки после тепловой ишемии перфузировали раствором Хэнкср„ в который был добавлен флуоресцеиндиацетат в концентрации 10 И при 4 С, 00 2 перфузионном давлении 60 мм рт.ст., пульсирующим потоком в течение 60 мин.

Флуоресцендиацетат (См Н,ь О ) представляет собой кристаллический порошок слабожелтого цвета, плохо

-d растворимый в воде (= 10 М),мол.вес

416,4, т.пл . 202-204 С. Применяется для изучения клеточных мембран и гистохимического определения эстераз °

В перфузат добавляют нефлуоресцирующее соединение флуоресцендиацетат, которое при повреждении органа разлагается на флуоресцеин и уксусную кислоту. Уровень интенсивности флуоре сцен ции перфузат а соответствует степени повреждения клеток органа и определяется на спектрофлуориметре в проточной кювете в оттеке перфузата из вены при длине волны возбужпения

Лв = 481 — 1 нм и максимуме длины волны флуоресценции А4 617-1 нм.

-8

В концентрации 10 — 10 М флуооресцеиндиацетат не оказывает повреждающего действия на орган. Уровень интенсивности Аруоресценции увеличи вается параллельно времени тепловой ишемии органа.

Через 5 мин интенсивность флуоресценции не изменялась, через 30 мин. ишемии возрастала в 1,5 раза, через

60 мин. ишемии в 2 раза. После окончания перфузии почки подключали на абдоминальный отдел аорты с целью изучения их функционального состояния. В 1-й серии после подключения почек к кровеносным сосудам в них восстанавливался почечный кровоток, почки были розового цвета, из мочеточника отмечалось выделение мочи (0,25- 0,07 мл/мин. Количество креатинина в моче составляло 40,3

2,5 мг X. Индигокарминовая проба положительная на 2-.й минуте.

Во второй серии опытов после подключения почек к сосудам кролика кровоток восстанавливается на 5-й мин. почки были с синюшным оттен- ком, диурез мочи — 0,10 0,05 мл/мин, 1 креатинина в моче — 10,2-0,6 мг X.

Индигокарминовая проба положительная на 7-й минуте,.

В 3-й серии кровоток восстанавливается Hà 10-й мин., почки синюшного цвета, мочи не было, индигокарминовая проба - отрицательная;

Как видно из приведенных примеров, предлагаемый способ прост, не требует сложной аппаратуры, позволяет с высоСоставитель Н. Гуляева

Редактор Н. Данкулич ТехредЛ.Мартяшова Корректор M. Роэман

Закаэ 1244/3

Тирам 722

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам иэобретений и открктий

tf3035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Ю

Филиал ППП "Патент", г. Уагород, ул. Проектная, 4

3 1146000 кой точностью определить степень факторам и Дает воэмоаность осуществповрелдения органов, обладает высо- лять динамический контроль эа состоя-! кой чувствительностью к поврендающим нием органа в процессе «онсервироваиия,