Способ определения активности иммунных сывороток к ооцитам

 

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

t »

1 <, .»г1

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ASTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ. (21) 2908111/30-15 (22) 11. 01. 80 (46) 28.02.86. Бюл. У 8 (71) Всесоюзный ордена Трудового

Красного Знамени научно-исследовательский институт животноводства (72) A.Ä. Субботин и И.И. Соколовская (53) 578.085.2(088.8) (56) Орлов Ф.М. Ветеринарная лабораторная практика. Изд-во с.-х. литературы, журналов и плакатов, M.:

1963, т. 1, с. 158-173. (54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВ. НОСТИ ИИМУННЫХ СЫВОРОТОК К ООЦИТАМ, включающий инкубацию ооцитов в исследуемой сыворотке, отмывание их, воз„,Я0„„1215026 А цц 4 С 01 И 33/54 действие на ооциты протеолитическими ферментами и микроскопирование целостности ооцитов, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью количественного определения активности иммунных сывороток, перед инкубацией делают разведения иммунных сывороток и ооциты инкубируют в каждом из разведений сыворотки, а об активности сыворотки судят по наивысшему ее разведению, которое обеспечивает целостность ооцитов при использовании в качестве протеолитического фермента

1,9-2,17-ного раствора трипсина и времени воздействия его на ооциты в течение 3-4 ч.

1215026

В растворах трипсина 1,9-2,1 максимальное разведение иммунных сывороток к ооцитам (титр сывороток), при которых прозрачная зона сохранялась не менее 3 ч, была для сывороткй морской свинки 2 512, свинки 3 64 и свинки 4 128 раз.

Таким образом, оптимальной концентрацией раствора трипсина для выявления титра иммунных сывороток к ооцитам млекопитающих является концентрация 1,9-2,1 . ть И, Тареева

Кастелевич Корректор В. Синицкая

Редактор A. Огар

Изобретение относится к биологии, в частности к иммунологии, и может быть использовано в научных исследованиях для количественного определения активности антител в иммунных сыворотках к ооцитам (яйцеклеткам) в условиях эксперимента или в нормальных сыворотках и естественных жидкостях организма животных и человека.

Цель изобретения — количественное 10 определение активности иммунных сывороток к ооцитам.

Прозрачная зона ооцитов после контакта ее с антителами к ооцитам длительное время сохраняет свою 15 целостность в растворах протеолитических ферментов (трипсина или (папаина), которые при прочих условиях вызывают ее полное переваривание в течение 30-60 мин. 20

Время сохранения прозрачной зоной устойчивости к переваривающему действию протеолитических ферментов зависит от концентрации антител в испытуемой иммунной сыворотке и может составлять от 60 мин до нескольких недель.

Для определения активности иммунной сыворотки к ооцитам делают ряд последовательных разведений ее 1 .-ным 3О раствором хлористого натра и про= водят во всех разведениях инкубацию о ооцитов (при 37 С во влажной камере) того вида животных, ооциты которого использованы для иммунизации животного — продуцента сыворотки или ооцитов, наличие антител к которым предполагается в исследуемой сыворотке.

Инкубацию (в каждом варианте не менее трех ооцитов) -проводят в течение 1 ч, после чего отмывают ооциты от сыворотки 1%-ным раствором хлористого натрия и помещают их для инкубации в 2Е-ный раствор трипсина во влажную камеру при 37 С. В продолжение инкубации с интервалом

30 мин проводят периодическое микроскопирование ооцитов с целью определения целостности прозрачной зоны.

Составите

Техред Ж.

Титром иммунной сыворотки к ооцитам считают то ее максимальное разведение после инкубации в котором обеспечивается сохранность целостности прозрачной зоны в 2%-ном растворе трипсина не менее 3 ч.

Пример. Проводили определение титра иммунной сыворотки. Исследовали активность иммунных сывороток взятых от морских свинок 2, 3 и 4, к ооцитам крупного рогатого скота.

Приготовили ряд разведений этих сывороток: 2, 4, 8, 16, 32, 64, 128, 256, 512 и 1024 раза. В каждом разведении проинкубировали по 9 ооцитов.

Для выявления степени приобретенной после такой r инкубации устойчиФ вости прозрачной зоны ооцитов к действию протеолитических ферментов применили следующие разведения трипсина: 1, 1 5, 1 8, 1 9, 2 О, 2 1, 2,2, 2,5 и 3%.

Микроскопическую проверку проводили через каждые 30 мин инкубации в трипсине.

В растворах трипсина с концентрацией выше 2,1 во всех вариантах прозрачная зона ооцитов разрушалась менее, чем за 3 ч. В растворах с концентрацией менее 1,9 целостность прозрачной зоны ооцитов сохранялась после инкубации в иммунных сыворотках от морских свинок 2 и 4 при всех разведениях, включая и 1024 раза, а в сыворотке от морской свинки 3 при всех разведениях, кроме 512 и 1024 раза.

Заказ 902/52 Тираж 778 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал IIIITI "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4