Способ получения 5- @ 3- @ 2-/2,2,2-трифторэтил/-гуанидин @ -пиразол-1-ил @ -валерамида

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИ Х

РЕСПУБЛИН

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К 0АТЕНТУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3506256/23-04 (62) 3411500/23-04 (22) 26.10.82 (23) 05.03.82 (31) 8107273 (32) 09.03.81 (33) GB (46) 23.05.86. Бюл. ¹ 1,9 (71) Империал Кемикал Индастриз

ПЛС (GB)4 Ай-Си-Ай Америказ Инк (US) (72) Тобиас Орегон Еллин (US) и Дэвид Джон Гилман (GB) (53) 547.298.).07(088.8) (56 Патент Великобритании ¹ 2052478, кл. С 07 D 277/38, опублик. 1980.

„„SU ÄÄ 1233799 А 3 (51)4 С 07 С 127/19 231 38 (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 5- (3- (2-(2,2,2-ТРИФТОРЭТИЛ)-ГУАНИДИН)-ПИРАЗОЛ-1-ИЛ)-ВАЛЕРА11ИДА, о т л и ч а ю— шийся тем, что, 5-(3-(2-(2,2,2трифторэтил)-гуанидино1-1-ил)-валеронитрил подвергают гидролизу концентрированной серной кислотой.

12331

Изобретение относится к получению биологически активных веществ, в частности к способу получения 5— 13- (2-(2,2,2-трифторэтил)-гуанидин)-пиразол-1-ил)-валерамида, являюшегося антагонистом гистамина

Н-2 и ингибирующего секрецию кислоты желудочного сока.

Известно, что физиологически активное соединение гистамин, который образуется в организме животных, способен в процессе проявления его активности соединяться с некоторыми специфическими рецепторами, из которых известны по меньшей мере два определенньгх и отличных один от другого типа. Первый носит название рецептор Н-1, и действие гистамина на данный рецептор блокируется (антагонизируется) классическими антигистаминовыми лекарствами, TGKHMH как мепирамин. Второй рецептор гистамина носит название рецептор Н-2, и действие гистамина. на данный рецептор блокируется такими лекарствами, как циметидин. Одним из результатов блокирования действия гистамина на рецептор Н-2 является ингибирование секреции кислоты желудочного сока, и соединение, обладающее такой способностью, находит применение для лечения язвы желудка и двенадцатиперстной кишки и других заболеваний, вызванных раздражением за счет желудочной кислотности„

Цель изобретения — разработка способа получения нового соединения, являющегося активным антагонистом гистамина H-2 и сильно ингибирующего секрецию кислоты желудочного сока„

40

Пример. 5 — (3-12-(2,2,2 Три— фторэтил)-гуанидино) -пиразол-1-ил)валеронитрил (13 г) добавляют в те— чение 10 мин к концентрированной серной кислоте (65 мл) при одновременном перемешивании. Полученный раст<1 вор поддерживают при 20 С в течение

18 ч и затем разбавляют льдом (300мл) и подщелачивают с помощью 10,8 н. 50 гидрата окиси натрия,цо достижения рН 9. Смесь экстрагируют этилацетатом (Зх200 мл), экстракт высушивают (над сульфатом магния) и выпаривают в вакууме до получения в остатке 55 масла, которое кристаллизуется. Сырой продукт перекристаллизовывают из

Et0A<, в результате чего получают

99 2

7,2 г 5-13-(2 — (2,2,2-три<1>торэтил)гуанидино)1- иразол-1 -ил -валерамид, т. гпт. 130 С. ЯМР-спектр (d„ DNCO):

7,4 (d, ТН); 5,65 (d, I Н), 4,0 (m, 4Н); 2,1 (t, 2 Н); 2,6 (m, 4Н).

Исходный м;.териал получают следующим образом.

Гидрид натрия в виде пастообразной массы (6,16 г 61 мас.7.-ной суспензии в жидком парафине) вводят отдельными порциями в течение 30 мин в раствор 3-нитропиразопа (17,4 r) в обезвоженном диметилформамиде (150 мл) с внешним охлаждением льдом с целью поддержания температуры раствора 20-30 С. Смесь перемешивают в течение 45 мин и к почти прозрачному раствору добавляют 5-бромвалеронитрил (25 г) в течение 30 мин при 25 — 30 С, затем смесь перемешивают в течение

4 ч. Добавляют воду (450 мл) и

Et0Ac (450 мл), верхний слой отделяют, высушивают (над Мд$04) и выпаривают в вакууме до получения в остатке масла, которое представляет собой смесь 5-(3-нитропиразол-2-ил)-валеронитрила и 5-(5-нитропиразол-1-ил)-валеронитрила. Это масло разделяют на две (пс 15 г) порции, которые фракционируют, пропуская их через колонку с силикагелем (диаметр 3,5 см, длина

100 см). Элюирование осуществляется при давлении 2 атм смесью этилацетатпетролейный эфир (т. кип. 60-80 С)

B соотношении 3:7 (об.). Сначала элюируется 3:5 изомер, а затем 1:3 изомер. Получаемый 5-(3-нитропиразол— 1 — ил)-валеронитрил имеет т. пл. 3233 С.

К раствору 5-(3-нитропиразол-1—

-ил)-валеронитрила (3,16 г) в обезвоженном тетрагидрофуране (200 мл) добавляют палладий (5%) на угле о (1,8 г). Смесь перемешивают при 20 С в атмосфере водорода. В течение 4 ч абсорбируется 3,2 л водорода. Катализатор отфильтровыва1<п, фи-гьтрат выпаривают в вакууме, в результате чего получается 5-(3-аминолиразол— 1-ил)-валеронитрил в виде масла.

В раствор 5-(3-аминопиразол-1— ил)-валеронитрила (7,0 г) в ацетонутриле (25 мл) вводят 2,2,2-трифторэтилизотиоцианат (6,02 ). Спустя

15 мин растворитель выпаривают в вакууме, в результате че о получаетг ся 5- 13 3-(2,2,2-трифторэтил)— тиоуроидо) -пиразол-1-ил -ва ТерсННТ

1233799

10

55 рил в виде белого кристаллического твердого вещества, т. пл. 96-98 С.

Указанную тиомочевину (12,5 r) растворяют в 8 M растворе аммиака в

Et0H (120 мл). К раствору добавляют окись ртути (12,8 r) и смесь перемео шивают при 20 С в течение 30 мин.

Полученную смесь фильтруют, фильтрат выпаривают в вакууме, в результате чего получается 5- (3-(2-(2,2,2-трифторэтил)-гуанидино) -пиразол-1-ил3валеронитрил в виде масла. Образец этого масла растворяют в ацетоне и добавляют 5 M эквиваленты малеиновой кислоты. К образующемуся прозрачному раствору добавляют диэтиловый эфир, в результате чего получается крйсо таллический малеат, т. пл. 123-125 С.

Кроме того, 5-(3-j2-(2,2,2-трифторэтил)-гуанидино) -пиразол-1-ил)-валеронитрил может быть получен в результате реакции 3-аминопиразола с

2,2,2-трифторэтилизотиоцианатом, реакции полученной тиомочевины с аммиаком в присутствии окиси ртути и алкилирования у атома азота в 1-м по ложении 3- (2-(2,2,2-трифторэтил)-гуанидино) -пиразола с 5-бромвалеронитрилом.

Активность антагониста гистамина

Н-2.может быть продемонстрирована посредством стандартных испытаний предложенного соединения ингибировать вызванную гистамином положительную хронотропную ответную реакцию при спонтанном биении правого предсердия морских свинок или по способности этого соединения ингибировать вызванное гистамином поглощение аминопирина в кислотное пространство париетальных клеток (т ° е ° обкладочных клеток желез желудка).

Испытания на морских свинках осуществляют следующим образом.

Правое предсердие морской свинки подвешивают с натяжением 1 г (изометрическое натяжение) в тканевой ванне с термостатическим регулированием (80 С) емкостью 25 мм, содержащей насьпценный кислородом (957. Oz, 57 СО ) буфер Krebs-Hehseleit (рН7,4).

Ткань стабилизируют в течение 1 ч, и в течение этого времени ее промывают 2-4 раза. Отдельные сокращения регистрируют посредством датчика силового смещения с использованием измерителя деформации, мгновенные частоты сокрашения регистрируют пос25

50 редством кардиотахометра. Получают значение контрольной ответной реакции на 1 мкмоль гистамина, после чего ткань промывают три раза и снова приводят в равновесное состояние до основного показателя частоты. После установления равновесия, длящегося

15 мин, вводят испытываемое соединение по желаемой конечной концентрации. Через 10 мин после введения соединения снова вводят гистамин (1 мкмоль) и ответную реакцию на гистамин в присутствии антагониста сравнивают с контрольной ответной реакцией на гистамин. Результат выражен в процентах от контрольной реакции на гистамин. После этого стандартными методами определяют кажущуюся константу диссоциации антагониста гистамина Н-2.

Испытание с .аминопропином осуществляют следующим образом.

Удаляют слизистую оболочку желудка из мьппц дна желудка и промывают ее в буфере 1 (содержащем 1 л раствора, r: NaCV 8,007; KCl 0,201; Na HP04

0,113* КН2Р04 0,204 Састг 2Н20

О,!32; М8С2 0,101; глюкоза 1 с регулированием рН до 7,4 посредством

Na0H). Ткань тонко измельчают, суспензируют в буфере и промывают три раза буфером 1, Затем ткань суспен— зируют в .диспергирующей среде (Коллагеназа (Sigma Chemical Со Тип У;

100 мг) и альбумин коровьей сыворотки (Nibs habaratories Ltd, фракция †;

100 мг (в 100 мл буфера 1) в количестве 50 мл на 10 г чистого веса ткани, и термостатируют при 30 С и рН 7,4 (поддерживается путем непрерывного регулирования) при перемешивании в атмосфере кислорода. Через несколько минут ткани дают возможность осесть и поверхностный жидкостный слой удаляют. Вводят свежую .порцию диспергирующей среды и продолжают термостатирование с использованием ткани, которая в большей своей части диспергируется в железы и целые клетки через 40-60 мин. Оставшиеся большие кусочки ткани удаляют путем фильтрации через нейлоновую сетку.

Смесь желез и клеток центрифугируют при 200 g и суспензируют в буфере l, содержащем 1Ж альбумина коровьей сыворотки (Miles Laboratories

Ltd, Фракция У). Затем железы и клет1233799 ки промывают три раза буфером 1 и суспенэируют в буфере 2, содержащем

lagb% MEM (500 мл), Апротин (Sigma

Chemical Со, 10 мг) и НЕРЕЯ (т.е.

2- (4-(2-оксиэтил) пипераэин-1-ил) этансульфокислоты ; 150ммоль; 20мл), при поддержании рН 7,4 посредством

Na0H (150 мл на 10 r чистого веса ткани). Эту тканевую суспензию 10 перемешивают в атмосфере кислорода о при 32 С в течение по меньшей мере

1 ч, после чего ее можно испольэовать.

Тканевую суспензию термостатируют вместе с испытуемым соединением и аминопирином (10 мкмоль), меченым

С в диметиламиновой группе (0,1 мк дюйм /мл), в течение 20 мин. Затем поглощение амидопирина стимулируют 20 путем добавления гистамина и ингибитора фосфодиэстеразы ICI 63197 до конечных концентраций 10 и 5х10 7моля соответственно. По истечении

18 мин клетки/железы извлекают иэ 25 термостатированной среды путем фильтрации суспензии через стеклянный микрофибрильный фильтр. Клетки / железы быстро (в течение менее чем

10 с) промывают три раза буфером 1, щ охлажденным льдом. Аминопирин, меченый С, удерживаемый тканью, изме1+ ряют с помощью сцинтилляционного счетчика и степень ингибирования поглощения испытываемьм соединением рассчитывают путем сопоставления с контрольным образцом. Затем с помощью графиков, полученных в ряде испытаний, проводимых при различных концентрациях, рассчитывают концент- 0 рацию испытуемого соединения, дающую ингибирование íà 50Х.

Предлагаемое соединение испытывают либо в экспериментах с предсердием морских свинок, либо в экспе- 15 риментах с аминопирином. Это соединение, подвергнутое испытанию в экспериментах с предсердием морских свинок, является активным и при концентрации в тканевой ванне 10 мкмоль или ниже показывает полное ингибирование ответной реакции при этой концентрации. Все соединения, подвергнутые испытанию в экспериментах с аминопирином, показывают 507-ное ингибирование поглощения аминопиридина при концентрации 3 мкмоль или менее.

Ингибирование секреции кислоты желудочного сока демонстрируют стандартными испытаниями, например по способности соединения при вводе его путем внутривенной инъекции, через желудок или через рот, ингибировать секрецию кислотного желудочного сока, например, у крыс или собак, у которых имеется желудочный свищ или денервированные углубления дна желудка и у которых секреция желу,дочного сока стимулируется путем ввода секретогенного агента, например гистамина, пентагастрина, бетанехола или пищи.

Испытание на крысах проводят следующим образом.

Самок крыс (весом 200-230 г) анестезируют путем внутримьнпечного вво,ца уретана (1,5 г/кг), в трахею вводят полую хирургическую иглу. Гибкую трубку пропускают через пищевод в желудок и укрепляют ее путем стягивания в области шеи. Многодырочную пластмассовую трубку (диаметром 3мм) пропускают в полостную зону желудка через надрез в двенадцатиперстной кишке и закрепляют, привязывая ее поаредством хирургической нити к привратнику желудка. Солевой раствор (9 г/л NaCl) пропускают через желудок (посредством вставленной в пищевод полой иглы) со скоростью

7 мл/мин, извлекают его из пилорического отвода через каждые 10 мин и собирают в химических стаканах.

Секрецию кислоты стимулируют путем подкожного ввода специфического агониста Н-2 димаприта, вводимого дозой 10 мг/кг, с последующим вливанием 30 мг/кг. ч. Выделение кислоты рассчитывают путем титрования 20 ммоль гидрата. окиси натрия 10-минутных образцов до конечного значения рН 6,4 (выделяемых в течение 10 мин).

Когда секреция достигает постоянного значения (плато на.кривой — три последовательных показания с расхождением в пределах 5 ), испытуемое соединение вводится путем внутривенной инъекции через полую иглу, введенную в левую наружную яремную вену, Затем измеряют секрецию в течение последующих 2 ч. Приготавливают основной раствор каждого испытуемого соединения (10 мг/мл в диметилсульфоксиде) и разбавляют соответствующим образом солевым раствором, так

1233799 чтобы обеспечивалась возможность ввода в организм дозы 1 мг/кг (диметилсульфоксид < 2%).

Испытание на собаках с хроническим свищом осушествляют следующим образом.

Испытания проводят на самках собак чистой бельгийской породы весом

9-12 кг, имеющих хронический желудочный свищ. В течение ночи их не кормят и лишь при желании дают воду.

В ходе эксперимента собаки находятся в стоячем положении в слегка расслабленном состоянии. При вводе испытуемого соединения путем внутри= венной инъекции свищ открывается, и после полного убеждения в том, что базальная секреция не происходит в течение 30 мин, начинают осуществлять непрерывное внутривенное вливание секретогенного агента (гистамина

0,5 мкмоль/кг ч или пентагастрина 2 мкг/кг ч) в солевом растворе (15 мл/ч) . Пробы желудочной кислоты собирают каждые 15 мин. Измеряют объем каждой пробы, 1-миллилитровую аликвотную пробу титруют до нейтральной 100 ммоль NaOH с целью определения концентрации кислоты. Когда достигается постоянная секреция (плато кривой; 1-2 ч), путем внутривенной инъекции вводят испытуемое соединение в солевом растворе и пробы кислоты желудочного сока собирают в течение дальнейших 23 ч, в ходе чего непрерывно продолжается вливание секретогенного агента.

При исследовании испытуемого соединения путем внутрижелудочного ввода после полной убежденности в отсутствии базальной секреции в течение 30 мин испытуемое соединение, содержащееся в 25 мл 0,5%-ной (мас./об,) оксипропилметилцеллюлозы и 0,1%-ного (мас./об.) Твина 80 в воде, вливается по каплям в желудок через доэируюшую пробку, вставленную в свиш,. Спустя 1 ч свищ снова открывается, и тотчас начинается вливание секретогенного агента. Пробы кислоты желудочного сока измеряют и приближение секреции кислоты к постоянному значению сравнивают с приближением секреции кислоты к постоянному значению для контрольного животного, в организм которого вводят путем внутрижелудочного вливания лишь один носитель.

При изучении испытуемого соединения, вводимого через рот, оно используется в форме желатиновых капсул вместе с 15 мл воды. Через 1 ч после ввода свищ открывается. и

Tcò÷àñ начинается внутривенное вли— вание секретогенного агента. Пробы желудочной кислоты измеряют и приближение секреции кислоты к постоян1р ному значению (к плато кривой) срав— кивают с приближением секреции для контрольного животного, з которое не вводилось испытуемое соединение.

Испытачие на собаках с денервированным углублением дна желудка осу— ществляют следующим образом.

Испытания проводят на самках собак коротконогой гончей породы весом 14-22 кг. Денервированные углубления в области железы дна желудка у этих собак получаются при подго— тозке их к испытаниям способом Rudick и др. В течение 4-6 нед животные поправляются от операции, и в дальнейший гериод в течение 2-3 мес до обычного использования проводится подготовка таблиц и нормализация секреторных реакций. Собак не кормят в течение 23 ч перед эксперимен-. том (по желанию дают воду) и в процессе эксперимента повязку, которой они перевязаны, расслабляют . После промывки углубления теплой водой путем подкожной инъекции вливают гистамин со скоростью 10 мкг/мин.

Такая доза приводит к менее чем максимальному (б0-90% от максимального) увеличению выделения кислоты при всех используемь|х дозах. Выделения желудочного сока из углубления собирают через каждыс 15 мин в градуированные стеклянные пробирки и измеряют объем секреторных выделений, приближающийся в 0„1 мл. Пробу в количестзе 500 мкл разбавляют 5 мл солевого растзора и рН доводят до 7,0 с помощью 100 ммсль ИаОН. Общее выделение кислоты ра".считывают как произведение концентрации кислоты на объем выделенного желудочного сока.

Испытуемые соединения вводятся внутривенно (0,1 мл/кг) через лучевую подкожную вену или через рот в виде желатиновой капсулы после достижения постоянной секреции (расхождение в трех последовательных показаниях в пределах 10%). Секрецию измеряют в течение 3 ч после ввода испытуемого соединения

1233799

Составитель И. Куликова

Техред И.Попович Корректор Е. Сирохман

Редактор В. Петраш

Заказ 2787/59 Тираж 379

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Результаты, полученные при испытании на предсердии и с использованием Ъминопирина, позволяют предсказать активность данных соединений. При испытаниях на собаках и крысах не обнаружено явной токсичности или побочных эффектов данного соединения.

В соответствии с указанной методикой соединение, полученное предложенным способом, активно в концентрации 0,0036мкМ,а известное 0,29мкМ.