Способ окраски эритроцитов для люминесцентной микроскопии

 

Для повышения контрастности клеток и удлинения времени свечения красителя эритроциты свежевзятой цельной крови отмывают физиологическим раствором, фиксируют во взвешенном состоянии в растворе параформглютарового альдегида на 0,1 И фосфатном буфере рН 7,2-7,3 в течение 2 ч при °С в соотношении эритроциты: фиксирующая смесь 1:1. Эритроциты отмывают цитратно-фосфатным буфером с рН 6,8-7,2 и центрифугируют при 2000 об/мин 15 мин. Затем готовят мазки и окрашивают раствором акридинового оранжевого на цитратно-фосфатном буфере рН 6,8-7,2 в разведении 1:10000 в течение 10-15 мин при 18- 24 С. о СП СЛ СП 00

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (!9) (! !) А1 (5D 4 G 01 И 1/28

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (2I) 3863670/28-14 (22) 09.01.85 (46) 23.04.87. Бюл. В !5 (7!) Семипалатинский государственный медицинский институт (72) М.Э.Керхер, Т.П.Генинг и В.В.Иванов (53) 616.20.88.8(088.8) (54) СПОСОБ ОКРАСКИ ЭРИТРОЦИТОВ ДЛЯ

ЛЮМИНЕСЦЕНТНОЙ МИКРОСКОПИИ (57) Для повышения контрастности клеток иудлинения времени свечения красителя эритроциты свежевзятой цельной крови отмывают физиологическим раствором, фиксируют во взвешенном состоянии в растворе параформглютарового альдегида на 0,1 М фосфатном буфере рН 7,2-7,3 в течение

2 ч прн 4 С в соотношении эритроци-. о ты: фиксирующая смесь 1: 1 . Эритроциты отмывают цитратно-фосфатным буфером с рН 6,8-7,2 и центрифугируют при

2000 об/мин 15 мин. Затем готовят мазки и окрашивают раствором акридинового оранжевого на цитратно-фосфатном буфере рН 6,8-7,2 в разведении

1:10000 в течение 10-15 мин при 1824 С.

05558 микроскопируют при длине волны

436 нм.

Составитель Л. Соловьев ,Редактор А.Козориз Техред Н.Глущенко Корректор А.Зимокосов

Заказ 1421/40 Тираж 777 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Иосква, l;l-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная, 4

5 13

Изобретение относится к медицине, а именно к методам морфофункциональ-, ного анализа клеток крови, и может быть использовано в гематологии для изучения структуры и функционального состояния эритроцитов.

Цель изобретения — повышение контрастности клеток и удлинение времени свечения красителя путем оптимального сочетания фиксатора и красителя.

Пример. Для флуорохромирования эритроциты свежевзятой цельной крови белых беспородных крыс трижды отмывают физиологическим раствором и фиксируют во взвешенном состоянии в растворе параформглютаровый альдегид на 0,1 И фосфатном буфере при рН 7,2-7,3 в течение 2 ч при 4 С в соотношении эритроциты:фиксирующая смесь 1:1 (объем-объем). Затем эритроциты трижды отмывают от фиксатора цитратпо-фосфатным буфером с рН 6,87,2 центрифугируя взвесь . при

2000 об/мин в течение 15 мин. Из отмытых эритроцитов готовят мазки и окрашивают их раствором акридинового оранжевого, приготовленным на цитратно-фосфатном буфере рН 6,8-7,2 в разведении 1:10000 в течение 1015 мин при 18-24 С, Окрашенный мазок двукратно промывают в течение 1 мин в том же буфере, покрывают покровным стеклом и

Преимуществом предложенного способа является возможность выявления безъядерных эритроцитов методом люминесцентной микроскопии, получение контрастных длительно и стабильно флуоресцирующих безъядерных эритроцитов, а также возможность проведения одновременных исследований окрашенных данным способом эритроцитов методами люминесцентной, фазово-контрастной и электронной микроскопии.

Формула изобретения

Способ окраски эритроцитов для люминесцентной микроскопии путем

20 приготовления мазков, фиксации и

oKpGcKH в красителе, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью повьш ения контрастности клеток и удлинения времени свечения красителя, фиксацию проводят цельной кровью до приготовления мазков, при этом для фиксации используют растворы параформглютарового альдегида на 0,1 M фосфатном буфере при рН 7,2-7,3, а в качестве красителя используют 1:10000 растворы акридинового оранжевого на цитратно-фосфатном буфере при рН 6,87,2, при этом окраску проводят в течение 10-15 мин.