Способ иммунизации бактериальными препаратами,содержащими эндотоксин

 

Изобретение относится к медицине , точнее к микробиологии, предназначено для получения антибактериальных сывороток, не содержащих аутоантител, в частности антител к нативной ДНК. Цель изобретения - сниже ние токсических свойств бактериальных препаратов, содержащих эндотоксин . Для этого коклюшный гамма-глобулин в реакции агглютинации 1:64 т) выделяют из ослиной стандартной коклюшной сыворотки серии 143, полученной путем спиртового осаждения на холоду. Препарат вводят подкожно б елым беспородным мьшам в разведении 1:25. Через 4 ч мышей иммунизируют внутримышечно коклюшными бактериями в дозе микробных тел (м.т.) , другую группу - S-брюшно-тифозными бактериями в дозе I-IO м.т., третью группу мьш1ей - эндотоксином E.coli в дозе 50 мг. 3 контрольные группы животных иммунизируют аналогично , но без предварительного введения коклюшного гамма-глобулина. На 14-е сутки после иммунизации проводят анализ крови, центрифугируют при 5000 об/мин, адсорбируют 50%-ными формалинизированными эритроцитами барана , подогревают при 56 С 30 мин. Иммунизация животных бактериями и эндотоксином E.coli без предварительного введения коклюшного гамма-глобулина в 100% случаях приводит к появлению в сывороТке крови животных антител к нуклеиновым кислотам, причем зти антитела специфически реагируют с нативной ДНК. Введение предварительно коклюшного гамма-глобулина перед иммунизацией бaктepиaJiьными препаратами, содержащими эндотоксин, способствует снижению уровня антител к нуклеиновым кислотам, а антитела, специфически реагирующие с нативной ДНК в сыворотке крови животных не обнаружены . 2 табл. а S (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

А1 (SD 4 А 61 К 39/02

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3416500/28-14 (22) 15.04.82 (46) 30.04.87. Бюл. № 16 (71) Ростовский медицинский институт (72) Е.П.Москаленко, С.И.Ильина, С.Ф.Уразовский и О.А.Кубасова (53) 615.373 (088.8) (56) Fournic J.З. et а1. J. exp.

Мед., 1974, v. 140, р. 1189. (54) СПОСОБ ИММУНИЗАЦИИ БАКТЕРИАЛЬНЫМИ ПРЕПАРАТАМИ, СОДЕРЖАЩИМИ ЗНДОТОКСИН (57) Изобретение относится к медицине, точнее к микробиологии, предназначено для получения антибактериальных сывороток, не содержащих аутоантител, в частности антител к нативной ДНК. Цель изобретения — снижение токсических свойств бактериальных препаратов, содержаших эндотоксин. Для этого коклюшный гамма-глобулин титр в реакции агглютинации

1:64 т) выделяют из ослиной стандартной коклюшной сыворотки серии 143, полученной путем спиртового осаждения на холоду. Препарат вводят подкожно белым беспородным мышам в разведении 1:25. Через 4 ч мьппей иммунизируют внутримышечно коклюшными бактериями в дозе 1 ° 10 микробных тел (M.т.), другую группу — S-брюшно-тифозными бактериями в дозе 1 10 м.т., 9 третью группу мьппей — эндотоксином

E.coli в дозе 50 мг. 3 контрольные группы животных иммунизируют аналогично, но без предварительного введения коклюшного гамма-глобулина. На

14 — е сутки после иммунизации проводят анализ крови, центрифугируют при

5000 об/мин, адсорбируют 507 †ны формалинизированными эритроцитами бао рана, подогревают при 56 С 30 мин.

Иммунизация животных бактериями и эндотоксином Е.coli без предварительного введения коклюшного гамма-глобулина в 100Е случаях приводит к появлению в сыворотке крови животных антител к нуклеиновым кислотам, причем яти антитела специфически реагируют с нативной ДНК. Введение предварительно коклюшного гамма-глобулина перед иммунизацией бактериальными препаратами, содержащими эндотоксин, способствует снижению уровня антител к нуклеиновым кислотам, а антитела, специфически реагирующие с нативной

ДНК в сыворотке крови животных не обнаружены. 2 табл.

1306582 2

Изобретение относится к медицине, а точнее к микробиологии и может быть использовано для получения антибактериальных сывороток, не содержащих аутоантител, в частности антител к нативной ДНК.

Целью изобретения является снижение токсических. свойств бактериальных препаратов, содержащих эндотоксин.

Способ осуществляется следующим образом.

Коклюшный гамма-глобулин (титр в реакции агглютинации I:64 т) выделяо ют из ослиной стандартной коклюшной сыворотки серии 143, полученной путем спиртового осаждения на холоду.

Полученный таким образом коклюшный гамма-глобулин вводят подкожно белым беспородным мышам массой 16-18 г в разведении I:25. Через 4 ч мышей им-. мунизируют внутримышечно коклюшными ю бактериями в дозе IxlO м.г, дру гую группу — S-брюшно-тифозными бактериями в дозе lх10 м.т., третью

9 группу мышей — эндотоксином Е.coli в дозе 50 мкг.

Три контрольные группы животных иммунизируют теми же бактериальными препаратами, но без предварительного введения коклюшного гамма-глобулина. Каждая группа животных со1 .тояла из 10 мышей. Кровь для анализа забирают общепринятым методом на 14-е сутки после иммунизации, центрифугируют при 5000 об/мин в течение 10 мин, адсорбируют 50%-ными формалинизированными эритроцитами барана и прогревают при 56 С в течение 30 мин. о

Затем с обработанной таким образом сывороткой ставят РПГА с эритроцитами, сенсибилизированными формализированлой ДНК с последующим торможением формилинизированной и нативной

ДНК для дифференциации антител к нуклеиновым кислотам. Иммунизация животных коклюшными, брюшно-тифозными бактериями и эндотоксином Е.со11 без предварительного введения коклюшного гамма-глобулина в IOO случаях приводит к появлению в сыворотке крови экспериментальных животных антител к нуклеиновым кислотам, причем эти антитела в 68-90 случаях специфически реагируют с нативной ДНК. Предварительное введение коклюшного гаммаглобулина перед иммунизацией бактериальными препаратами, содержащими эндотоксин, способствует снижению уровня антител к нуклеиновым кислотам, а антитела, специфически реагирующие с нативной ДНК, в сыворотке

5 крови экспериментальных животных не обнаружены.

Пример 1. Перед введением бактериальных препаратов, содержащих

1эндотоксин, в организм мышей подкож— но вводят коклюшный гамма-глобулин в разведении I:5, затем I-ю группу коклюшной вакциной, 2-ю группу животных— брюшно-тифозной вакциной, 3-ю группу — эндотоксином Е.со1>. Контрольными группами являлись животные, иммунизированные бактериальными препаратами без предварительного введения коклюшного гамма-глобулина. Полученные результаты приведены в табл.!.

4О

Антитела к ДНК определяли на 14-е сутки в РПГА„ Как видно из табл,1, предварительное введение коклюшного гамма-глобулина в организм животных перед иммунизацией бактериальными препаратами в разведении l:5 приводит к значительному, снижению уровня антител к ДНК в сыворотке крови опыт ных мышей, а антитела, специфически реагирующие с нативной ДНК, в этих сыворотках практически не выявлены.

Пример 2.Перед введением бактериальных препаратов, содержащих эндотоксин, в организм мышей подкожно ввели коклюшный гамма-глобулин в разведении I:25 и сбъеме 0,2 мл. Через 14 сут в сыворотке крови животных определяли антитела к ДНК. Контрольные группы животных иммунизировали бактериальными препаратами без предварительного введения коклюшного гамма-глобулина.

Результаты исследования свидетельствуют о том, что предварительное введение в организм коклюшного гамма-глобулина в разведении I:25 перед иммунизацией бактериальными препаратами приводит к снижению их токсических свойств„ В сыворотке крови экспериментальных животных антитела к нативной ДНК не обнаружены.

Пример 3. Перед иммунизацией бактериальными препаратами, содержащими эндотоксин, мышам подкожно вводили коклюшный гамма-глобулин в разведении 1:125. Затем на 14-е сутки исследовали сыворотку крови мышей в

1306582

1g титров антител к (1g7c+ m) Процент сывороток, реагирующих с нативной

ДНК

Коклюшный гамма-глобулин в разведении 1:5

Препарат

2, 29+0,11

0,99+0,13

Не вводили

Коклюшная

Вводили вакцина

83

l,94+0,ll

0,84+0,13

2,45+0,13

0,89+0,13

Не вводили

Зндотоксин

Е.со11

Вводили

Таблица 2

1g титров антител к

ДНК (lgx+m) Коклюшный гамма-глобулин в разведении

I:125

Процент сывороток, реагирующих с нативной

ДНК

Препарат

Коклюшная

Не вводили

2,29+0,)1

1,59+0,15

Вводили

20 вакцина

l,94+0,ll

l,44+0,09

83

2,45+0,13

),56+0,13

Эндотоксин

Е.coli

Не вводили

Вводили

РПГА на наличие антител к ДНК. Результаты приведены в табл.2.

Как видно из табл.2, введение коклюшного гамма-глобулина в разведении

1:125 не приводит к выраженному снижению токсических свойств бактериальных препаратов. В сыворотке крови иммунизированных животных обнаружены в 20-357 случаях антитела, специфически реагирующие с нативной ДНК.

Таким образом, коклюшный гамма— глобулин снижает токсические свойст— ва бактериальных препаратов, содержащих эндотоксин, и используемых для получения антибактериальных сывороток, в пределах от цельного препарата до разведения его 1:5 — l 25. Ис— пользование гамма-глобулина в максиБрюшко-тифоз- Не вводили ная вакцина Вводили

Брюшно-тифоз- Не вводили ная вакцина Вводили мальной дозе (цельный) считается неэкономичным ввиду повышенного его расхода, что влечет лишние затраты, Формула и э о б р е т е н и я

Способ иммунизации бактериальными препаратами, содержащими эндотоксин, путем их внутримышечного введения, отличающийся тем, что, с целью снижения токсических свойств бактериальных препаратов, перед иммунизацией в организм подкожно вводят коклюшный гамма-глобулин в разведении 1:5 — 1:25 в объеме

0,2 мл, выделенный из ослиной стандартной коклюшной сыворотки и соответствующий ее исходному титру.

Таблица 1