Способ получения селективной питательной среды без аденина или урацила,или лейцина

 

Изобретение относится к области биотехнологии и конструирования микробиологических питательных сред. Для получения минимальной питательной среды без аденина, урацила или лейцина на питательной среде, из состава которой нужно удалить или сни зить концентрацию определенного компонента , культивируют мутант дрожжей Saccharomyces cerevisiae, ауксотрофный по данному веществу. На среде с содержанием гидролизата кормовых дрожжей, содержащей аминный азот 3000 мг %, в течение 48 ч на качалке культивируют ауксотроф по аденину (р192-15В-П4). После этого центрифугированием удаляют биомассу ауксотрофа, в культуральную жидкость добавляют агар (25 г/л), глюкозу (15 г/л), среду разделяют на две части и в одну часть добавляют аденин (10 мкг/мл) стерилизуют, разливают по чашкам и производят посевы протои ауксотрофных штаммов дрожжей (по 220+50 колоний на чашку) для установления селективности среды, полученной предлагаемым Способом. с (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

COL1HAЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTKPblTHA (21) 3611730/28-13 (22) 27.06.83 (46) 15.05.87. Бюл, Р 18 (71) Дагестанский научно-исследовательский институт по производству питательных сред (72) А. И. Ибрагимов (53) 577.15(088.8) (56) Стейниер Р. и др. Мир микробов.

М.; 1р1ир, 1979, т. 1, с. 250. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СЕЛЕКТИВНОЙ

ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДИ БЕЗ АДЕНИНА ИЛИ

УРАЦИЛА, ИЛИ ЛЕЙЦИНА (57) Изобретение относится к области биотехнологии и конструирования микробиологических питательных сред.

Для получения минимальной питательной среды без аденина, урацила или лейцина на питательной среде, из со- става которой нужно удалить или сниЯ0 ШИ26 А1 (59 4 С 12 N 1/16 //(С 12 N 1/16

С 12 8 1:865) зить концентрацию определенного ком- . понента, культивируют мутант дрожжей

Saccharomyces cerevisiae, ауксотроф— ный по данному веществу, На среде с содержанием гидролизата кормовых дрожжей, содержащей аминный азот

3000 мг Ху в течение 48 ч на качалке культивируют ауксотроф по аденину (р192-15В-П4). После этого центрифугированием удаляют биомассу ауксотрофа, в культуральную жидкость добавляют агар (25 г/л), глюкозу (15 г/л), среду разделяют на две части и в одну часть добавляют аденин (10 мкг/мп) стерилизуют, разливают по чашкам и производят посевы прото- и ауксотроф- а

Щ нмк штаммов дравшей (по 220+50 колоний на чашку) для установления селективности среды, полученной предлагаемым способом. С:

13104

Изобретение относится к биотехно-. логии и конструированию микробиологических питательных сред, Способ заключается в том, что для получения селективной среды для изби- 5 рательного культивирования прототрофных клеток дрожжей Saccharomyces

cerevisiae на питательной основе, из состава которой нужно удалить или снизить концентрацию определенного компонента, культивируют мутант дрожжей Saccharomyces cerevisiae ауксотрофный по данному веществу.

Изобретение иллюстрируется следу-ющими примерами.

Пример 1. Для удаления биотехнологическим способом аденина из состава гидролизата кормовых дрожжей (ГКД), полученного ферментативным гидролизом, применяют среду следующего состава:

Жидкий гидролизат кормовых дрожжей (аминный азот—

3000 мгЖ), мл 200

Глюкоза г 15

Дистиллированная вода, мг рН = 5,0 800

Среду стерилиэуют при 0 5 атм в течение 30 мин.

На этой среде в течение 48 ч культивируют ауксотроф по аденину (штамм р192-15В-П4), Затем центрифугированием удаляют биомассу ауксотрофа, в культуральную жидкость добавляют

35 агар (25 г/л), глюкозу (15 г/л), среду разделяют на две части и в одну часть добавляют аденин (10 мкг/мл), стерилизуют разливают по чашкам и

Э

40 производят посевы прото- и ауксотрофных штаммов дрожжей (по 200+50 колоний на чашку) для установления селективности среды, полученной предлагаемым способом. Результаты приведены

45 в табл. 1.

Пример 2. Удаление урацила.

Процедура получения культуральной жидкости без урацила такая же, как и в примере 1. Для удаления урацила ис-50 пользуют ауксотроф по урацилу

25 2

1Г-П188. Результаты приведены в табл. 2.

Пример 3. Удаление лейцина.

Процедура получения культуральной жидкости без лейцина такая же, как и в примерах 1 и 2. Для удаления лейцина используют штамм 7А-П192 ауксотрофный по лейцину. Результаты приведены в табл. 3.

Предлагаемый способ обеспечивает нужную глубину очистки питательной ососновы от нежелательного компонента, т,е. отпадает необходимость в дополнительной проверке степени очищения среды сложными биохимическими или другими методами.

Нужная степень очищения среды, т.е. селективности, достигается тем, что культивирование ауксотрофных клеток ведется до момента выхода "кривого роста культуры на плато, что означает доступный для данного ауксотрофа ресурс компонента (по которому ауксотрофен данный штамм) в питательной основе исчерпан.

Предлагаемый способ очистки питательных основ позволяет получать минимальные среды селективные по отношению к штаммам ауксотрофным по какому-то определенному биохимическому соединению.

Формула изобретения

Способ получения селективной питательной среды без аденина или урацила,или лейцина для избирательного культивирования ауксотрофных клеток дрожжей Sacchoromyces cerevisiae, отличающийся тем, что на питательной среде, содержащей гидролиэат биологического сырья с содержанием аминного азота от 1500 до

3000 мгЕ, глюкозу и воду культивируют исходную культуру ауксотрофного по аденину или урацилу, или лейцину мутанта дрожжей Sacchoromyces cerevisiae до достижения стационарной фазы роста с последующим отделением культуральной жидкости.

1310425

Таблица 1

Среда без аденина, полученная предлагаемым способом

Штаммы

Sacch. cerevisiae

158-П4 (прототроф) +1,5-2,0

+1,0-1,5 +1,5-2,0

pl92-158-П4 (ауксотроф по аденину) -0,0

+1,5

+1,0-1,5

1Г-П188.(ауксотроф по урацилу) +l,5

+1,0

+l,0-1,5

7А-П192 (ауксотроф по лейцину) +1,5 +1 0

+1,0-1,5

П р и м е ч а н и е. (+) — Наличие роста. (-) — Отсутствие роста. (2,0) — Диаметр колоний, мм

Таблица 2

Контроль

Среда без

Штаммы

Saccharomyces cerevisiae урацила, полученная предлагаемым способом +

+ урацил

+1,5-2,0

+1,0-1,5 +1,5-2,0

-0,0

+1,5

+1,5

+1,0

+1,5

+1,0

Таблица 3

Штаммы

Saccharomyces cerevisiae

Контроль

Среда без лейцина, полученная предлагаемым способом +

+ лейцин

+1,5-2,0

+1,0-1,5

+1,5

-0,0

+1,5

+1,0

+1,5

+l 0

+l,0-I 5

ВНИИПИ Заказ 1866/25 Тираж 500 Подписное

Г!роизв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

158-П4

1Г-П188 р192-158-П4

7А-Л192

158-П4

7А-П192

pl92-158-П4

1Г-П188

Среда с ГКД без обработки (контроль) Среда без урацила, полученная предлагаемым способом

Среда без лейцина, полученная предлагаемым способом

Среда без аденина, полученная предлагаемым способом +

+ аденин

+1,0-1,5

+1,0-1,5

+1,0-1,5

+1,5-2,0

+1,0-1 5

+1,0-1,5