Способ изготовления коллагенового покрытия для использования в офтальмологии
Изобретение относится к офтальмологии . Цель изобретения - снижение воспалительных реакций и повышение прозрачности. Склеру глаз свиньи подвергают щелочно-солевой обработке , нейтрализуют, промывают и растворяют в уксусной кислоте. Полученный раствор разливают на матрицы .дпя формования и проводят воздушную сушку . После радиационной стерилизации определяют рН воднойвытяжки навески целевого продукта. Дпя материала, контактирующего с тканями переднего отрезка глаза, оптимальное значение рН 7,2. ;; N5
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИК (19) (11) (5D4 А61 К37 12
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ
13,", . 13
НЙЛВ1йЕЮ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3915990/? 8 — 14 (22) 19.06.85 (46) 07.07.87. Бюл. Р 25 (71) Московский научно-исследовательский институт микрохирургии глаза (72) С. Н. Федоров, С. Н. Багров, Т. С. Амстиславская, И. А. Маклакова и С. В. Масленков (53) 617.7(088,8) (56) Авторское свидетельство СССР
У 561564, кл. А 61 К 37/00, 1977. (54) СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ КОЛЛАГЕНОВОГО ПОКРЫТИЯ ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В
ОФТАЛЬМОЛОГИИ (57) Изобретение относится к офтальмологии. Цель изобретения — снижение воспалительных реакций и повышение прозрачности. Склеру глаз свиньи подвергают щелочно-солевой обработке, нейтрализуют, промывают и растворяют в уксусной кислоте. Полученный раствор разливают на матрицы.для формования и проводят воздушную сушку. После радиационной стерилизации определяют рН водной вытяжки навески целевого продукта. Для материала, контактирующего с тканями переднего отрезка глаза, оптимальное значение рН 7,2.
1 13214
Изобретение относится к офтальмологии, а именно к области коллагенопластики, и может быть использовано ь при кератомии, кератопластике.
ITель изобретения — снижение вос5 палительных реакций при использовании покрытия и повышение их прозрачности.
Способ осуществляется следующим образом. 10
Склеру глаз свиньи тщательно очищают от внутренних оболочек глаза, остатков конъюнктины, мышц и прочего и выделяют строму, которую нарезают небольшими кусками, Навеску ткани 15 промывают дистиллированной водой до полного удаления механических приме— сей и крови,.переносят в колбу и заливают 10Х-ным раствором едкого натра в насыщенном растворе сернокисло- 20
ro натрия (из расчета 500 мл раство—
О ра на 10 r ткани) на 48 ч при 18-20 С.
Раствор сливают и проводят нейтрализацию ткани до рН 6,0-7,0, перемеши-. вая ее в 2%-ном растворе борной кислоты и неоднократно меняя раствор, Ткань промывают дистиллированной водой до полного удаления иона сульфата в промывной жидкости и заливают
1 М раствором уксусной кислоты из 30 расчета, чтобы конечная концентрация белка в растворе составила 1%. Массу перемешивают и оставляют в холодиль нике на 1-3 сут.при 4 С. Кассу гомогенизируют, центрифугируют 30 мин при ?000 об/мин и оставляют на сутки ь при 4 С. Полученный раствор фильтруют через стеклянный фильтр с помощью водоструйного насоса.
Для нейтрализации и десольнатации
1Х-ный уксусный раствор коллагена разбавляют 0,5 M уксусной кислотой до концентрации белка 0,7-0,8Х и диализуют против 0,2 М фосфатного или цитратного буфера при 18-20 С до рН
4,5-7,5. Диализ продолжают, снижая концентрацию буфера от 0„2 до 0,002 М в 3-4 этапа, на последнем этапе используют подогрев до 28-30 С. Полученный раствор коллагена центрифугируют 15 мин при 1000 об/мин, разливают на матрицы, повторяющие контур переднего отрезка глаза, и проводят воздушную сушку в пылезащитном шкафу в течение 48 ч при !0-20 С. Готовые покрытия стерилизуют гамма-излучением при дозе 2,5 Крад и мощности
0,5 Мрад/ч.
0 2
Пример 1. 20 r очищенной и нарезанной стромы склеры заливают
1 л 10%-ного раствора едкого натра н насыщенном растворе сернокислого натрия и оставляют при 18-20 на 48ч, Затем раствор сливают, ткань промывают небольшим количеством дистиллированной воды, заливают 1 л 2%-ного раствора борной кислоты и перемешивают на магнитной мешалке 2 ч, дважды меняя раствор борной кислоты.
Ткань при непрерывном перемешивании тщательно промывают дистиллированной водой (общий объем воды 5 л) до полного удаления сульфат-иона из промывной жидкости. К 250 мл полученной обводненной ткани добавляют 350 мл
0,5 M уксусной кислоты, перемешивают и оставляют на 1 сут при 4 С, Затем о массу гомогенизируют при помощи микрораэмельчителя тканей, центрифугируют 30 мин при 2000 об/мин и оставляют на 3 сут при 4 С. Полученный раствор фильтруют через стеклянный фильтр
Полученный 1Х-ный раствор коллагена разводят 0,5 К раствором уксусной кислоты до концентрации 0,8%, Диализ
0,8%-ного раствора коллагена проводят против 0,2 М цитратного буфера, доводя рН раствора коллагена до 6,8.
Диализ продолжают, снижая концентрацию буфера от 0,2 до 0,002 К в 3-4 этапа, на последнем этапе используют подогрев до 28-30 С, Полученный раствор коллагена центрифугируют 15 мин при 1000 об/мин, разливают на матрицы, повторяющие контур переднего отрезка глаза, и проводят воздушную сушку в пылезащить ном шкафу в течение 48 ч при 15 С и относительной влажности 40-50Х. Готовые покрытия стерилизуют гамма-лучами при дозе 2,5 Мрад и мощности
0,5 Mpад/ч.
После радиационной стерилизации определяют рН водной вытяжки навески целевого продукта„ Полученное значение рН 7,2 оптимально для материала, контактирующего с тканями переднего отрезка глаза.
Пример 2„Аналогичен примеру 1 за исключением того, что после предварительной подготовки склеру подвергают щелочно-солевой обработке, нейтрализуют; промывают и растворяют в уксусной кислоте по предлагаемой методике. Диализ 0,8Х-ного раствора коллагена в уксусной кислоте провоФормула изобретения
Составитель В, Гаврилюк
Техред M. Морг ентал
Корректор Н. Король
Редактор А, Шишкина
Заказ 2487 Тираж 595
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, F,-35, Раушская наб,, д, 4/5
Подпи сное
Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4
3 13214 дят против буфера до рН 4,5. Полученный раствор разливают на матрицы для формования и проводят воздушную cymку в пылезащитном шкафу ° После радиационной стерилизации определяют рН водной вытяжки навески целевого продукта. Полученное значение рН 5,2
„ лежит на нижнем пределе, допустимом для материала, контактирующего с тканями переднего отрезка глаза. 10
Пример 3. Аналогичен примеру 1, после предварительной подготовки склеру подвергают щелочно-солевой обработке, затем нейтрализуют, промывают и растворяют в уксусной кисло- 15 те по предлагаемой методике, Диализ
0,8Х-ного раствора коллагена в уксусной кислоте проводят против буфера до рН 7,5. Полученный раствор разливают на матрицы для формования и про- 20 водят воздушную сушку в пылезащитном шкафу. После радиационной стерилизации определяют рН водной вытяжки навески целевого продукта, Полученное значение рН 8,3 лежит на верхнем пре- 25 деле, допустимом для материала, контактирующего с тканями переднего отрез ка глаз а, В результате получают прозрачные коллагеновые покрытия, при импланта- 30 ции которых в слой роговицы отмечается почти полное отсутствие воспалительных реакций: в строме обнаружены
20 4 лишь единичные лейкоциты, плазматические клетки практически отсутствовалн. В покрытиях, изготовленных из коллагена кожи, аллергические реакции имеют место в 607 случаев, наблюдается инфильтрация стромы большим количеством лейкоцитов и плазматических клеток.
Предлагаемые покрытия обладают гораздо большей прозрачностью по сравнению с покрытиями из коллагена кожи — коэффициент светопропускания на
ЗОБ выше.
Способ изготовления коллагенового покрытия для использования в офтальмологии путем щелочно-солевой обработки животного сырья, нейтрализации, промывки, растворения коллагена, сушки, отличающийся тем, что, с целью снижения воспалительных реакций, повышения прозрачности, в качестве животного сырья используют склеру глаз, удаление низкомолекуляр ных примесей из растворов коллагена одновременно с доведением рН этих растворов до 4,5-7,5 проводят диализом, а сушку проводят одновременно с формованием тонкого прозрачного сферического покрытия.
