Способ определения диметилсульфоксида

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

А1 (19) (И) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ,";;

H АВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3975053/28-14 (22) 20,11.85 (46) 23 ° 07,87. Бюл. 9 27 (71) Институт высшей нервной деятельности и нейрофизиологии АН СССР (72) Н.В.Гуляева и А.Б.Обидин (53) 612.015 (088.8) (56) З.Pharmacol. Exp. ther., 1967, ч. 55, р. 309-317, (51)4 А 61 К 31/10 С 01 N 21/78 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДИИЕТИЛСУЛЬФОКСИДА (57) Изобретение относится к биохимии. Цель изобретения — упрощение способа, Гомогенат мозга крысы центрифугируют. Супернатант вносят в пробирки с дим4тилсульфоксидом, раствором додецилсульфата натрия, тиобарбитуровой кислоты и выдерживают на кипящей водяной бане. Пробы охлаждают и измеряют оптическую плотность при 533 нм. 1 ил. 1 табл.

1324б

ОД

DWGo К

Изобретение относится к биохимии и медицине и может быть использовано в фармакологии для определения концентрации диметилсульфоксида (ДМСО) в биологических объектах и лекарственных препаратах.

Цель изобретения — упрощение способа за счет сокращения числа стадий, Цель достигается за счет того, что пробу с ДМСО добавляют в систе- 10 му, содержащую липиды, в условиях, обеспечивающих протекание перекисного окисления липидов и образование малонового диальдегида, измеряют уровень малонового диальдегида спект- 15 рофотометрически в реакции с тиобарбитуровой кислотой, а концентрацию

ДМСО определяют по ингибированию образования малонового диальдегида, причем степень ингибирования пропор- 20 циональна десятичному логарифму концентрации ДМСО. Концентрацию ДМСО в опытной пробе определяют по предварительно построенному калибровочному графику зависимости оптической плот- 25 ности от концентрации ДМСО.

На чертеже показана зависимость оптической плотности от концентрации

ДМСО.

Пример 1, В качестве систе- 30 мы, обеспечивающей протекание перекисного окисления липидов и генерацию малонового диальдегида, используют гомогенат мозга крысы. Крысу декапитируют, выделяют мозг и гомогенизируют в тройном объеме холодного физиологического раствора. Гомогенат центрифугируют 5 мин при

4000 o6/мин и вносят по 200 мкл супернатанта в ряд пробирок. В эти про-40 бирки вносят также ДМСО в концентрации or 0,5 мкг до 20 мг/мл„ затем последовательно вносят 200 мкл 8,1 .— ного раствора додецилсульфата натрия, 1,5 мл 0,8 -ного раствора тиобарбиту- 15 ровой кислоты, объем пробы доводят. до 4 мл дистиллированной водой и выдерживают на кипящей водяной бане в течение б0 мин, Пробы охлаждают и измеряют оптическую плотность при 50

533 нм. Определение малонового диальдегида проводят по известному методу.

Полученные данные представлены в таблице и на чертеже. 55

Как видно из чертежа, оптическая плотность линейно зависит от десятичного логарифма концентрации ДМСО в

68 2 интервале концентраций 0,5-200 мкг/мл, Таким образом,, концентрация gHCO может быть определена по кривой или по формуле д Самса концентрация ДМСО

10 мкг/мл

К вЂ” тангенс угла наклона калибровочной кривой;

ОД вЂ” оптическая плотность при

533 нм.

В качестве системы генерации малонового диальдегида можно использовать любую систему, содержащую липиды в присутствии кислорода: суспензию эритроцитов, эритроцитарные мембраны, гомогенаты тканей, модельные. системы, содержащие фосфолипиды или ненасыщенные жирные кислоты и т.д.

Объекты, в которых определяется

ДМСО, также могут быть любыми. В случае раствора ДМСО неизвестной концентрации этот раствор вносят в пробы непосредственно по примеру 1, Если необходимо определить концентрацию ДМСО в ткани, проводят экстракцию ДМСО из пробы обычным способом, например хлороформом, затем при необходимости концентрируют в ацетоне и добавляют в пробирки. Возможна экстракция ДМСО из тканей водой с последующим непосредственным внесением экстракта в пробу.

Пример 2. Крысам в течение трех недель вводят ДМСО в дозе l мл

20%-ного ДМСО в день внутрибрюшинно.

Затем крыс декапитируют, выделяют мозг, гомогенизируют и экстрагируют гомогенат хлороформом„ Хлороформенный экстракт переводят в ацетон, концентрируют и вносят аликвоту в пробы, содержащие супернатант гомогената мозга контрольных животных и все реактивы для определения малонового ди-, альдегида с тиобарбитуровой кислотой (пример 1). Пробы обрабатывают как описано выше и измеряют их оптическую плотность. По опти еской плотности

0,09 при помоши калибровочной кривой (чертеж) находят содержание ДМСО в пробе 0,1 мг/мл. С учетом разведения гомогената, объемов экстрагентов и объема аликвоты рассчитывают, что содержание ДМСО в пробе мозга крыс составляет 35 мкг/мл.

Предлагаемый способ определения

ДМСО по сравнению с иэвестными спо1324668

0 27+0,005

0,0064, 0,25 0,005

О 0128 О 22йО 004

0,0256 О,!9+0,004

0 5

Формула изобретения

50, 1 0

2,0

0,256

100

1,28

200

2,56!

000

12,8

2000

25 6

Заказ 2988/4

Производственно-полиграфическое предприятие, r, Ужгород, ул. Проектная, 4 собами не менее чувствителен и точен.

Чувствительность известного способа

0,1-1 мкг в пробе, предлагаемого.—

0,5 мкг. Точность по известному способу — выход 762, по предлагаемому— среднее квадратичное отклоненние не более lOX (2-10X).

Способ определения дим тилсульфоксида путем анализа физико-химических свойств исследуемой пробы, о т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью упрощения способа эа счет сокращения числа стадий, пробу с диметилсульфоксидом добавляют в систему, содержащую липиды, смесь нагревают в кислой среде с тиобарбитуровой кислотой, спектрофотометрируют, а концентрацию 20 диметилсульфоксида определяют по степени ингибирования развивающейся окраски.

ОХ 10 Zg РР fH РРР 10О 7ФО

Щ(ТИСО) икг ил

Составитель Л.Сабурова

Редактор П,Гереши Техред И.Попович Корректор Т.Колб

Тираж 595 Подписное

ВНИИПИ Тосударственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

1)3035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4!5

0,14+0,004

0,09+0,003

0 05 0 002

0,02 0,002

O,О!+0,001