Образец для визуального определения оптической плотности бактерийных взвесей

 

Изобретение относится к микробиологии . Для повышения стабильности образец для визуального определения оптической плотности бактерийных взвесей содержит, мас.%: нитроцеллюлозу 0,25-0,35, мертиолят 0,0066 - 0,01 и буферный раствор остальное. Нитроцеллюлозу при нагревании растворяют в 3%-ном растворе едкого калия , добавляют ледяную уксусную кислоту . Суспензию центрифугируют, ресуспендируют в фосфатном буфере рН 7-7,2 и добавляют мертиолят. 3 табл. со . О5 ОЭ C7I

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) А1 (50 4 С 12 1/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

OllHCAHHE ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3921324/28-14 (22) 13.05.85 (46) 23.10.87. Бюл. 1(39 (71) Кишиневский государственный медицинский институт (72) В.М.Никитин, В.А.Нахаба и Л.А.Сичинский (53) 616.093,048 (088.8) (56) Лабораторное дело, 1958, М 2, с. 53-55, (54) ОБРАЗЕЦ ДЛЯ ВИЗУАЛЪНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОПТИЧЕСКОЙ ПЛОТНОСТИ БАКТЕРИЙНЫХ ВЗВЕСЕЙ (57) Изобретение относится к микробиологии. Для повышения стабильности образец для визуального определения оптической плотности бактерийных взвесей содержит, мас,Х: нитроцеллюлозу 0,25-0,35, мертиолят 0,0066

0,01 и буферный раствор остальное.

Нитроцеллюлозу при нагревании растворяют в 37-ном растворе едкого калия, добавляют ледяную уксусную кислоту. Суспензию центрифугируют, ресуспендируют в фосфатном буфере рН

7-7,2 и добавляют мертиолят. 3 табл.

55 ниц.

1 I 34

Изобретение относится к микробиологии, а именно оптической стандартизации бактерийных нэвесей, исполь— зуемых в бактериологической и иммунологической практике °

llелью изобретения является повьппение стабильности образца.

Указанная цель достигается тем, что используют суспенэию из частиц нитроцеллюлозы, взвешенных в фосфатно-буферном растворе с рН 7,0-7,2 при следующем соотношении ингредиентов, мас,7.:

Нитроцеллюлоза 0,25-0,35

Мертиолят 0,0066-0,01

Фосфатно-буферный раствор Остальное

Приготовление и использование образца на 10 единиц.

Приготовление суспензии частиц нитроцеллюлоэы размерами 1-3 мкм.

В пробирку помещают 30 мг нитроцеллюлоэы в виде пленки, добавляют I мл

37-ного раствора едкого калия. Пробирку подогревают на пламени горелки до бурного вскипания щелочи и полного растворения пластинки нитроцеллюлозы с образованием желтоватой окраски. Содержимое пробирки нейтрализуют путем добавления ледяной уксусной кислоты до помутнения за счет образования суспензии из частиц нитроцеллюлозы с размерами 1-3 мкм.Размеры частиц измеряются с помощью окулярного и объективного микрометров, установленных в фазово-контрастном микроскопе. Полученную суспензию трехкратно отмывают с помощью центрифугирования в фосфатно-буферном растворе при 1000 об/мин в течение

15 мин, Образовавшийся осадок объемом 0,1 мл ресуспендируют в 0,9 мл фосфатно-буферного раствора с рН

7,2, получая такиМ образом 17-ную суспензию частиц нитроцеллюлозы °

Приготовление образца на 10 едиВ пробирку-эталон (ампулу) диаметром 0,8 см вносят мл 17-ной суспензии частиц нитроцеллюлозы размерами

1 — 3 мкм на фосфатно-буферном растворе, 2-3 капли мертиолята (1:100) и добавляют до 10,0 мл фосфатно-буферного раствора с рН 7,0-7,2, получая таким образом мутность, равную эталоннсму стеклянному стандарту на

1О единиц, что подтверждается на фотоэлектрокалориметре (ФЗK) . Пробирку-эталон (ампулу) запаивают или закрывают пробкой из химически нейтральной резины с последующим парафинированием и используют для стандартизации бактерийных вэвесей.

Оптическую стандартизацию проводят путем внесения н стандартную пробирку или близкую к ней по диаметру и толппгне стенок 1-2 мл смыва 18

24-часовой стандартизуемой микробной культуры и прилинания небольших, но точно учитываемых порций физиологического раствора, сравнивая при этом мутность опытной пробирки со стандартом мутности. Сравнение степени мутности в опытной и эталонной (предлагаемой) пробирках производят невооруженным глазом при хорошем дневном рассеянном освещении, подложив под обе пробирки общеизвестную шрифтовую таблицу. Перед каждым определением образец взбалтывают путем n< ðåâoðàчивания пробирки до полного суспенэирования осадка. Хранят при обычной температуре.

С помощью испытуемого образца и стеклянного стандарта мутности проведена оптическая стандартизация

I07 культур эшерихий, шигелл, сальмонелл, коклюшных микробов для следующих целей: посева в жидкие и на плотные питательные среды (56 культур); определения антибиотикоустойчиности (17 культур); постановки иммунологических реакций (26 культур); приготовления вакцинных препаратов (8 культур).

При этом концентрации микробов, определенные с помощью испытуемого образца и стеклянного стандарта мутности, при их последующем сравнении на ФЭК-е оказались идентичными (1007-ное совпадение результатов).

Мутность бактериальных взвесей, определяемая с помощью предлагаемого образца, выражается в международных единицах мутности. Мутность образца на 1О единиц эквивалентна 10 международным единицам мутности, которые соответствуют следующим концентрациям микробов: 935 млн/мл микробов кишечной группы; ll млрд/мин микробов коклюшной группы; 1,65 млрд/мл бруцеллезных микробов;

1346675

Сроки наблюдения ес 1 год 2 года 3 года 5 лет

Образец

6 м )

10 лет

Бактериальный

Химический

Стеклянный

Предлагаемый

П р и м е ч а н и е: "-" "+" — агрегация частиц суспензии.

Таблица

При- Ингредиенты, мг (Х) мер

Нитроцеллюлоза Мертиолят

Фосфатно-буферный раствор

30 (0,30) 0,83 (0,0083=0,01) 9900 99,69

25 (0,25) 1,0 (0,01) 9950 99,74

35 (0,35) О,бб (0,0066=0,01) 9850 99,64

30 (0,30) О,бб (0,0066=0,01) 9900 99,69

30 (0,30) 1,0 (0,01) 9900 99,69

2,2 млрд/мл холерных вибрионов;

4,95 млрд/мл туляремийных микробов.

Наблюдения во времени показывают стабильность сохранения свойств предлагаемого образца °

В табл.! приведены результаты многолетних наблюдений эа изменениями свойств предложенного стандарта параллельно с известными стандартами мутности: бактериальный, химический (бариевый), стеклянный.

В табл.2 представлены весовые значения ингредиентов. 15

В табл, 3 даны сведения об образцах стандартов мутности при соответствующих значениях рН, Как видно из табл.3, оптимальны- 20 ми для рН следует считать значения

7,0-7,2 (пробы 5 — 7), в пределах которых частицы нитроцеллюлаэы сохраняют длительно агрегативную и кинетическую устойчивость.

Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я

Образец для визуального определения оптической плотности бактерийных взвесей, содержащий суспенэию частиц вещества размером 1-3 мкм, отличающийся тем, что, с целью повышения стабильности, он содержит суспензию частиц нитроцеллюлоэы в 0,015 М фосфатном буфере рН 7,0-7>2 и дополнительно мертиолят при следующем соотношении ингредиентов, мас.7.:

Нитроцеллюлоза 0,25 — 0,35

Мертиолят О, 0066 — О, 0.1

Фосфатный буфер Остальное

Таблица 1

1346675

Продолжение табл.2

Пример

Ингредиенты, мг (Х) Нитроцеллюлоэа Мертиолят

Фосфатно-буферный раствор

6 35 (0,35) 0,66 (0,0066%0,O)) 9850 99,64

7 25 (0,25) I,О (0,01) 9950 99,74

П р и м е ч а н и е: пример 1 — образец изготовлен по средним значениям всех ингредиентов; примеры 2 и 3 — образцы приготовлены по граничным значениям нитроцеллюлоэы; примеры 4 и 5 — образцы приготовлены по граничным значениям мертиолята; примеры 6 и 7 — образцы приготовлены по граничным значениям фосфатно-буферного раствора.

Таблица 3

Про- Сведения об образцах стандартов мутности рН

) 6,6,Агрегация частиц нитроцеллюлозы в первые дни (2-3 дня) после приготовления стандарта и снижение за счет этого степени его мутности

2 6,7

То же

3 6,8 Медленная агрегация частиц нитроцеллюлозы (первь)е недели) после приготовления стандарта, что также приводит к снижению степени мутности

4 6,9

То же

5 7,0 Агрегативная и кинетическая устойчивость частиц нитроцеллюлоэы

6 7,)

7 7,2

То же степени мутности

9 7,4

То же

7,5 и бо- Процесс усиления степени мутности ускоряется лее по мере увеличения рН

ВНИИПИ Заказ 5096/26 Тираж 499 Подписное

Произв.-полигр. пр — тие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

8 7,3 В течение первых месяцев наблюдается постоянное выпадение в осадок солей иэ состава фосфатнобуферного раствора с усилением эа счет этого