Способ определения липазной активности ферментного препарата
Изобретение относится к химии белков, а именно к способу определения липазной активности, который может быть использован для определения ее в объектах пищевой и микробиологической , промьшшенности, медицинских препаратах, а также в клинических целях . Целью изобретения является упрощение способа определения липазной активности и повышение чувствительности способа. Способ определения липазной активности заключается в том, что каплю исследуемого раствора помещают на стеклянную пластинку с нанесением на нее оливковым маслом и наблюдают за высокоспецифическиь явлением растекания капли по поверхности . Скорость растекания капли пропорциональна активности липазы. 1 ил. ( С оо 4 Сд
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 4062991/31 — 13 (22) 20.04.86 (46) 30.09.87. Бюл, И- 36 (71) ИГУ им. M.В.Ломоносова (72) В.Н.Измайлова, Б.Д.Сумм, Г.П.Ямпольская (SU), К.Д.Хиггинсон (CU), А.В.Еленский и M.Â.Êoæèícêàÿ (sv) (53) 577.15(088.8) (56) Pried R., Hoellmoyr I.,Z.
Klin chem und Klin Biochem, 1973, 11, 189-192.
Posner I., Basch V.I. Lipid Res, 1971, 12, р. 768-772.
Авторское свидетельство СССР
Ф 484223, кл. С 07 С 7/00, 1975. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛИПАЗНОЙ
АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА
„„SU„„1341175 А1 (5д 4 С 12 N 9/00; С 12 Q 1/00 (57) Изобретение относится к химии белков, а именно к способу определения липазной активности, который может быть использован для определения ее в объектах пищевой и микробиологической.промышленности, медицинских препаратах, а также в клинических целях. Целью изобретения является упрощение способа определения липазной активности и повышение чувствительности способа. Способ определения липазной активности заключается в том, что каплю исследуемого раствора помещают на стеклянную пластинку с нанесением на нее оливковым маслом и наблюдают за высокоспецифическим явлением растекания капли по поверхности. Скорость растекания капли пропорциональна активности липазы. 1 ил.
1341175
Изобретение относится к химии белков, а именно к способу определения липазной активности, который может быть использован для определения ее в объектах пищевой и микробиологической промышленности, медицинских препаратах, а также в клинических целях.
Цель изобретения — упрощение и по- 10 вышение точности способа.
Способ определения липазной активности заключается в том, что каплю исследуемого раствора помещают на стеклянную пластинку с нанесенным 15 на нее оливковым маслом и наблюдают за высокоспецифическим явлением растекания капли по поверхности.
Скорость растекания капли пропорциональна активности липазы. 20
Пластинки для измерения активности липазы готовят следующим образом.
Раствор оливкового масла в этиловом эфире наносят в виде мономолекулярного слоя на поверхность стекла, Концентрация раствора оливкового масла в этиловом эфире, .соответствующая образованию мономолекулярного слоя на поверхности стекла, рассчитывается по формуле 30
C=- — — —, о где С вЂ” концентрация раствора оливкового масла в этиловом эфире, моль/л;
S — площадь стеклянной пластинки, см ;
Б — площадь, приходящаяся на молекулу триолеина (основного компонента оливкового масла) 40 при монослойном заполнении поверхности, равная 126 » и10 см2;
- ь
N — число Авогадро;
V — объем раствора, наносимого на поверхность стекла, л .
После испарения этилового эфира пластинки пригОдны для измерения активно с ти лип азы . Дл я определения актив нос ти каплю водного раствора, с одержащего липа з у (рН 8, 0 ) помещают на пластинку и с помощью микроскопа измеряют диаметр капли сразу после е е нанесения н а твердую поверхность и через определенные промежутки вр еме н и для построения зависимости д 1 (у в еличе ние диаме тра капли) о т (в р еме ни ) . Танг е нс угла наклона прям о и зависимости g l =f (i ) есть в еличина, равная скорости растекания капли в мм/мин и является мерой активности липазы.
Удельная активность рассчитывается как отношение скорости растекания капли к количеству белка в капле и выражается в мм/мин мг:
А (2) где А — удельная активность препал рата, мм/мин-мг;
А — активность препарата, численно равная скорости растекания капли, мм/мин;
m — количество белка в капле, мг. или
А
С, (3) где обозначения соответствуют формуле (2), С вЂ” концентрация белка, мг/мл;
V — объем капли, мл.
Способ позволяет определить активность растворов липазы концентрации не менее 1 10 моль/л, Пример 1. Пластинку для измерения активности лин готовят следующим образом. О, 1 мл раствора оливкового масла в этиловом эфире концентрации 5 10 моль/л наносят на поверхь ность стекла площадью 4 см . После испарения эфира пластинка пригодна для определения активности липазы.
Каплю водного раствора высокоочищенной липазы (препарат Опытного завода органического синтеза биопрепаратов института химии АН ЭССР) объемом 2 мм (рН 8,0, активность 5700 липазных единиц., концентрация раст вора 2,8 -10 8 моль/л, что составляет
1,4 10 мг/мл) наносят на стекло, покрытое мономолекулярным слоем оливкового масла и наблюдают в микроскоп увеличение диаметра капли, делая в течение 30 мин 5-8 измерений.
На чертеже (прямая 1) представлена зависимость увеличения диаметра капли во времени. Скорость растекания капли равна 0,07 мм/мин, удельная активность липазы, рассчитанная по формуле (3), составляет
25000 мм/мин мг.
Так как активность данного препарата липазы известна и составляет
57000 липазных единиц, то следовательно, 1 лип. ед, соответствует
4,4 мм/мин мг.
1341175 а,з
20 P,íöí
Составитель Л.Борисова
Редактор Н. Киштулинец Техред А. Кравчук Корректор М.Демчик
Заказ 4397/29 Тираж 499 Подписное
ВНИИНИ Государственного комитета СССР по делам .изобретений и открытий .
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная, 4
Этот коэффициент может быть использован для пересчета активности липазы, .выраженной в мм/мин мг, в липазные единицы, 5
Пример 2. Каплю водного раствора препарата липазы Олайненского завода химреактивов объемом 2 мм (концентрация О, 1 мг/мл) наносили на 10 стеклянную пластинку, покрытую мономолекулярным слоем оливкового масла и наблюдали в микроскоп увеличение диаметра капли как в примере 1 (чертеж, прямая 2) . 15
Скорость растекания капли равна
0,045 мм/мин, удельная активность препарата 225 мм/мин мг, что соответствует 50 липазным единицам. 20
Предлагаемый способ позволяет в
500 раз сократить объем раствора, необходимый для анализа, и повысить чувствительность метода.
Способ прост в аппаратурном оформлении.
Формула изобретения
Способ определения липазной активности ферментного препарата путем приготовления раствора оливкового масла в эфире, адсорбции его на носителе, удаления эфира, нанесения исследуемой пробы ферментного препарата и установления его активности, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью упрощения и повышения точности способа, раствор оливкового масла готовят в этиловом эфире, в качестве носителя используют стеклянные пластины, при этом адсорбцию ведут путем растекания капли раствора оливкового масла
Ма их поверхности с образованием мономолекулярного слоя, причем пробу ферментного препарата вводят путем нанесения его капли на мономолекулярный слой, а активность устанавливают по скорости ее растекания.
