Способ определения т-лимфоцитов
Изобретение относится к иммунологии . Цель изобретения - повьшение точности способа. Суспензию мононуклеаров смешивают с взвесью эритроцитов барана, центрифугируют и инкубируют . После суспендирования снова центрифугируют суспензию и инкубируют о Осадок суспендируют, каплю суспензии помещают на предметное стекло и подсчитывают количество лимфоцитов с 3 и более прикрепившимися эритроцитами барана на 100 лимфоцитов Точность способа повьшается в 2 разао 1 табЛо со сд со о
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛ ИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИК
А1 (191 01) (50 4 G 01 N 33/48
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К A BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ИЪЛйОТЕ11А
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР по делАм изОБРетений и ОтнРытий (21) 3976368/28-14 (22) 10. 11.85 (46) 15.12.87. Бюл. 11 46 (71) Институт клинической иммунологии СО ANH СССР (72) В.С.Кожевников, И,А. Волчек, Т.С.Белохвостикова и В.П.Лозовой (53) 615.375 (088 ° 8) (56) Кожевников В.С. Изучение зависимости рецепции эритроцитов барана
Т-лимфоцитамн от их дифференцировки и функционального состояния. Автореферат канд.дисс. Новосибирск, 1983, с. 22. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ Т-ЛИИФОЦИТОВ (57) Изобретение относится к иммунологии. Цель изобретения — повышение точности способа. Суспензию мононуклеаров смешивают с взвесью зритроцитов барана, центрифугируют н инкубируют, После суспендирования снова центрифугируют суспензию и инкубируют. Осадок суспендируют, каплю суспензии помещают на предметное стекло и подсчитывают количество лимфоцитов с 3 и более прикрепившимися эритроцитами барана на 100 лимфоцитов, Точность способа повышается в 2 раза,1 табл.
40
13
Изобретение относится к медицине, а именно к исследованию биологических материалов человека и животных иммунологическими методами. Оно Мо жет .быть использовано в клинической иммунологии, хирургии, терапии и других областях медицины в научноисследовательских, диагностических и лечебных целях.
Целью изобретения является повышение точности определения T-лимфоцитов за счет выявления T-лимфоцитов, на несущих Е-рецепторы, Пример. Выделение мононуклеаров. 5 мл венозной крови стабилизируют гепарином (250 ед./мл) и наслаивают на 3 мл раствора верографинфиколл ((3=1,082 г/см ). После центрифугирования при 400g в течение 40 мин мононуклеары собирают пастеркой с поверхности раствора и трижды отмывают первый раз при 400g 10 мин, второй — при 200g 5 мин (в забуференном физрастворе) и третий — 200g
5 мин в среде 199, Клетки суспендируют в 1 и среды 199, подсчитывают в камере Горяева и разводят средой
199 до концентрации 2,5 10 кл /мп.
Приготовление эритроцитов барана„
Венозную кровь барана хранят не более двух недель после забора с консервантом (157. от общего объема); используют трижды отмытые средой 199 (первая и вторая отмывка при 200g
5 мин, третья — при 400g 5 мин) эритроциты барана в виде 1Х-ной суспензии, Розеткообразование, 0,2 мл суспензии мононуклеаров смешивают с 0,2 мл взвеси эритроцитов барана, центрифугируют 5 мин при 200g, инкубируют о
1,5 ч при 37 С, суспендируют энергичным встряхиванием пробирок до получения гомогенной суспензии (без видимых на глаз сгустков), вновь центрифугируют 5 мин при 200g и инкубируют при 4 С 1б-18 ч. Перед подсчетом уда: ляют 0,2 мл надосадочной жидкости, осадок суспендируют осторожным покачиванием пробирок (обычно 10-15 движений), каплю полученной суспензии помещают на предметное стекло и нак59740 2 рывают покровным, При 300-400-кратном увеличении под воздушной иммерсией подсчитывают количество лимфоцитов с 3 и более прикрепившимися эритроцитами барана (розетки) на 100 лимфоцитов.
В таблице приведены результаты исследования Т-лимфоцитов периферической крови здоровых людей и больных ревматоидным артритом, хирургическим сепсисом и перитонитом. Для сравнения приведем результаты исследования тех же образцов крови методом-прототипом и методом-аналогом, Предлагаемый способ во всех обследованных группах дает более высокие результаты определения количества
T-лимфоцитов (повышение количества
T-клеток при ревматоидном артрите недостоверно) по сравнению со способом-аналогом и способом-прототипом, которые почти в два раза отличаются друг от друга в случае сепсиса и перитонита (таблица).
Метод розеткообразования для идентификации T-лимфоцитов тем более точен, чем больший процент розеткообразующих клеток он выявляет, следовательно, предлагаемый способ примерно в два раза более точен, чем способ-прототип при исследовании здоровых и больных, и также в два раза более точен по сравнению со способоманалогом при исследовании больных сепсисом и перитонитом.
Формула изобретения
Способ определения T-лимфоцитов, включающий смешивание мононуклеарных клеток с эритроцитами барана, центрифугирование, инкубирование при 37 о и 4 С, ресуспендирование и подсчет розеткообразующих клеток, о т л и— ч а.ю шийся тем, что, с целью повышения точности способа эа счет
50 выявления T-лимфоцитов не несущих
Е-рецепторы, после инкубирования при о
37 С осадок клеток суспендируют и центрифугируют.
3 1359740
Процентное содержание розеткообразующих клеток среди мононуклеаров здоровых и больных, определяемое разными методами
Группа обследованных
Количе ство наблюдений
Способ розеткообразования
Аналог
Прототип
Предлагаемый
61, 3 -2,92
1О
67,1+2,13
Здоровые
P 0,05
67,8 3,22
Ревматоидный артрит
P 0,05
25, 1 3, 20
52,4+4,45
Сепсис
Р i 0,01
27, 3 -2, 81
P «0,05
58,4+5,01
Перитонит
Р <0,05
Примечание. Достоверность различий по сравнению с предлагаемым способом вычислена с помощью парного критерия t Стьюдента.
Составитель Г.Крюкова
Редактор Т.Парфенова Техред Л. Сердюкова Корр ек тор И. Му ск а
Тираж 776 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д.4/5
Заказ 6151/48
Производственно-полиграфическое предприятие r.Óæãîðoä, ул. Проектная,4
30,9+1,98
P <0,01
40,6+2,82
65,1+3,15
P ) 0,05
30,0+5,25
Р (0%01
35, 3 4, 17
