Способ очистки липосом

 

Изобретение относится к медицине . Цель изобретения - повышение стабильности целевого продукта. Ионообменную смолу вводят в колбу с липосомной суспензией и перемешивают. Смесь фильтруют и чистую липосомную суспензию лиофилизируют. Способ позволяет получить высококонцентрированные липосомные суспензии, которые не подвергаются осаждению. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

as> SU <и> (дц 4 А 61 К 47/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР пО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 2869298/28-14 (22) 17.01.80 (31) 19434A/79 (32) 19.01.79 (33) IT (46) 15.01.88. Бюл. 1Ф 2 (71) Фармиталия Карло Эрба С.п.А (IT) (72) Луиджи Моро, Гвидо Нери и Александро Ригамонти (IT) (53) 615.45 (088.8) (56) Biochem and Biophys.Res Comm.

406, 397, 1975. (54) СПОСОБ. ОЧИСТКИ ЛИПОСОМ (57) Изобретение относится к медицине. Цель изобретения — повышение стабильности целевого продукта. Ионообменную смолу вводят в колбу с липосомной суспензией и перемешивают.

Смесь фильтруют и чистую липосомную суспензию лиофилизируют. Способ позволяет получить высококонцентрированные липосомные суспензии, которые не подвергаются осаждению. 1 табл.

1367839

Изобретение относится к медицине, в частности к способам получения и очистки фармацевтических составов (лиофильные липосомы).

Целью изобретения является повышение стабильности липосомы за счет очистки липосомной суспензии с помощью ионообменных смол.

Способ осуществляется следующим образом.

Ионообменную смолу, например, из группы стирола, дивинилбензола, акриловой и метакриловой кислоты вводят непосредственно в колбу с липосомной суспензией, после чего содержимое колбы перемешивают 10- 60 мин.

Затем фильтруют через фильтр из спекшегося стекла, способного задерживать ионообменную смолу, на которой адсорбировался незахваченный препарат. Получаем чистую липосомную суспензию, которую затем лнофилизируют.

Предложенный способ очистки позволяет получать высококонцентрированные липосомные суспензии (до 5 мг/мл хлористоводородного доксорубицина),которые не могут быть получены посредством.хроматографии на колонке с молекулярным ситом (максимум 0,3 мг/мл)

Кроме того, данная липосомная суспен. зия является более устойчивой и не подвергается осаждению в отличие от суспензий, полученных ультрацентрифугированием.

Пример 1. В колбе для омыления растворяют в хлороформе следующее количество липидов: 1,5 r яичного лецитина, 0,4 г холестерина и 0,2 r дицетилфосфата, и выпаривают в условиях вакуума до сухого состояния.

Раствор хлористоводородного доксорубицина (с концентрацией 10 мг/мл) и 0,007 Н буферный раствор фосфата выливают в колбу, после чего полученную суспензию подвергают ультразвуковому перемешиванию в течение

1 мин. Суспензию отстаивают 30 мин под слоем азота при комнатной температуре. Затем в нее добавляют 2 г смолы, предварительно активированной в муравьинокислом натрии и полученной посредством полимеризации метилметакрилата, образовавшего поперечную связь с дивинилбензолом, обладающей функциональностью карбоновой кислоты и имеющей макропористую структуру, что позволяет ее использовать также в гидрофобных растворах, имеющих фирменное наименование

IRC = 50 (сухой вес эквивалентен

5 мл наполненной смолы) . Содержимое колбы перемешивают 30 мин, после чего суспензию фильтруют через пористый лист, размер G 1. Липосомы, размер которых изменяется от 0,5 до 2 мк и содержащие около 60Х начального

10 количества доксорубицина,стабилизируют посредством лиофилизации.

Пример 2..Используют те же количества липидов и те же условия проведения растворения, что в приме1Г ре 1. Затем в колбу добавляют раствор доксорубицина и перемешивают полученную суспензию в течение 10 мин для получения липосом с размером менее 1 мк. Поскольку размер липосом

20 был неоднороден, применяют негранулированную смолу, которая также выполняет и функцию сита. Пбэтому добавляют 10 мл смолы с торговым знаком Дауэкс-50-Х4 (100-200 меш),пред26 варительно активированную в муравьинокислом натрии. После фильтрования была получена суспензия, содержащая липосомы с размером 0,2-0,8 мк и, включающая 75Х исходного доксорубициЗ0 на. Липосомы стабилизируют лиофилизацией.

Пример 3. Раствор 5-фторура-. цила с концентрацией 10 мг/мл в

0,007 Н буферном растворе фосфата при рН 8 выливают в колбу для омыления, содержащую также липидную фазу, полученную аналогично примеру 1. Полученную суспензию обрабатывают по примеру 1 с использованием 10 мл фильтрующей смолы, имеющей фирменное наименование Амберлит IRA = 400 (С1), предварительно активированной в хлоргидра- .те. Полученные липосомы стабилизировали лиофилизацией.

4 Пример 4.. Липосомы готовят аналогично примеру 1, используя следующие липиды: 1,5 г яичного лецитина, 0,4 r холестерина и 0,,2 r стеариламина. Для очистки использовали

10 мл смолы Дауэкс-1 (50-100 меш), которую предварительно активировали.

Полученные липосомы стабилизировали лиофилизацией.

Пример 5. Все операции проводят аналогично примеру 1, за исключением того, что для очистки исполь.зуют 15 r смолы Дауэкс-50WX (100

200 меш), при этом время перемешивания увеличивали до 40 мин. После з 13678 фильтрования через фильтр из спекшегося стекла G 1 была получена суспен зия липосом, содержащая около 507 первоначального количества доксоруби5 цина. Липосомы стабилизировали лиофилизацией.

Пример 6. Все операции проводят аналогично примеру 1, за исключением того, что для очистки исполь- 1ð зуют IRC = 50 (эквивалентную 5 г сухой смолы), перемешивание проводят

1 ч, после чего липосомную суспензию фильтруют на фильтре из спекшегося стекла с последующей лиофилизацией 15 продукта..

Предложенный способ является менее дорогостоящим (за счет экономии времени и материала) по сравнению с известным. Кроме того, он пригоден 20 для промышленного использования. Полученный продукт более концентрирован (в соотношении не менее 1:20 к продукту, полученному с применением гель-фильтрации), в процессе исполь- 25 зования гель-фильтрации продукт получают в 20 раз более разбавленный

39 более стабилен, что очень важно для промышленного применения и обусловлено тем фактом, что диализ, используемый в известном способе, требует не менее 24 ч. В данном способе процесс осуществляется за 30 мин.

Поскольку данный продукт меньшее вре мя остается в растворе, то он более стабилен.

Сведения о стабильности и других характеристик липосом, а также условий обработки приведены в таблице.

Формула изобретения

Способ очистки липосом, включающий обработку препаратов с последующей лиофилизацией, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью повышения стабильности целевого продукта, обработку проводят встряхиванием в течение 10-60 мин с ионообменной смолой: Амберлит ЕКС = 50 илн Дауэкс-50, или Амберлит IRA = 400 (Cl), или

Дауэкс-1, или Дауэкс-50WX, а затем фильтруют через стеклянный фильтр.

1367839

11 1 и A ) dl, м

Э Й

О Э

Эk ф tf, 0l оэо

34 и cd

V X O I.

4I Cd М

u o, л о ! о х ь

M о м!

Ч о

53 а

Э I

1О д

5 О а

Э 1

4й.р о

Х M

d! Х

cd D ц л о и

D о о

D о о.

О л

Х л Э о в ов1

E.

М cd

6 <Ч

«о@о !

1о> чехо

Х !

I» т щ ов о ug о в ов о в3

СЧ И о !а

» Ц

О

СЧ

О (Ч

О

СЧ о о с»с о

Ccd

I а

O dI Cd сП аcd

Ж ф Cd с3

М

Ol

Ц ж о v

1 э о! а о и

5 !»

В Э ф

1 и с; о йе око оldца

И Id Ct dc, \ о

Ol и

hf О Г» с»с

<Ч

СЧ е

Ф а 1 Ill

2 ЙЭ25

I ! л

A л

gx Ftо ха 64

Ж Э I Ж м Х-а .83

I 1 1

1 cd

31, !

Ь! .

vip

1 а ! 2

» >» и

2cdI eg

М2@аcd

RI л м о м ° со м »О

1367839.1

5 о Ä

Э оео бб g б» ббб

vxoIOl М й

1! и

I Н

X 1 л Ф

33у оЗм

1 kI" I.

wvz

v о и и

IA о

Э 1 бб

Э и б»

* б»б

Ф

Сб и!ох

Cl О 0l

x2oI!

v e

К5 бО б:(5 б. бб б:б бб о ж о

g ooa

l3

I и о

1 ф сбб! (1j б б»

:. 3i

v бС

Р ф й»