Средство для определения @ - @ -галактозидазы

 

Изобретение относится к медицине , точнее к средствам для определения .энзимов, в частности p-D-ra- лактозидазы. Цель изобретения - повышение чувствительности средства - достигается тем, что средство, содержащее активное вещество (0,001-5) И водный буферный р-р с рН 3,5-3,8 (до 1 мл), в качестве активного вещества содержит соединение, включающее следующие компоненты: водород, фтор, хлор, бром или нитрогруппу, дополнительную аминогруппу, алкил или метоксигруппу, галоген, гидроксии/или карбоксильную группы , протон, ион лития, натрия, кальция , тетраметиламмония, трибеизиламмония или бензилдиэтиламмония4 табл, СП

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (5ц 4 Ь 01 N 33/48

®ЕГСЛу -, g r.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

H flATEHTV (21) 3826173/28-14 (22) 17. 12, 84 (3 1) P 3345748.4 (32) 17,12,83 (33) DE (46) 30.04.88. Бюл. - 16 (71) Берингер Маннхайм ГмбХ (DE) (72) Манфред Кур, Рудольф Махат, Вольфганг Векерле, Ханс-Георг Батц, Руперт Херрманн, Вольфганг Клееманн и Херберт Бушек (DE) (53) 612.015 (088.8) (56) Biochemische Zeitschrift, 1960, 333, с.209-225. (54) СРЕДСТВО ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ p»I)ГАЛАКТОЗИДАЗЫ (57) Изобретение относится к медици„„SU„„1393322 А 3 не, точнее к средствам для определения .энзимов, в частности р-D-галактозидазы. Цель изобретения — повышение чувствительности средства— достигается тем, что средство, содержащее активное вещество (0,001-5) и водный буферный р-р с рН 3,5-3;8 (до 1 мл), в качестве активного вещества содержит соединение, включающее следующие компоненты: водород, фтор, хлор, бром или нитрогруппу, дополнительную аминогруппу, С -С алкил или метоксигруппу, галоген, гидрокси- и/или карбоксильную группы, протон, ион лития, натрия, кальция, тетраметиламмония, трибензиламмония или бензилдиэтиламмония4 табл

1393322

Изобретение относится к медицине, а именно к средствам для определения энзимов, в частности к средству для определения р -D-галактоэидазы.

Цель изобретения — повыюение чувс- 5 твительности средства — достигается тем, что предлагаемое средство, содержащее активное вещество и водный буферный раствор с величиной РН 3,58 5 в качестве активного вещества содержит соединение общей формулы

НО

ОН 8 0 12

R, - 1 ЗО, 3 R1

СН20Н

Но 0"

О

Н0 в которой К,-К,q имеют указанные

20 значения, подвергают взаимодействию с соединением общей формулы

СН20йц

ВФ

) . (yyy) водород, фтор, хлор, бром или нитрогруппа; 25 как R., или дополнительно аминогруппа; водород, фтор, хлор, бром; водород, хлор, бром, 30

С 1-С q --алкил или метоксигруппа; где К1, Кэ

1 5 8 6 1О водород, галоген, С „-С -алкил, нитро— гРуппа, гидроксильная, карбоксильная или метоксильная группа, водород, хлор, бром, С,-С -алкил или метоксигруппа; 40 водород» иод хлОР бром, С„--С -алкил, нитрогруппа; протон, ион лития, натрия, кальция, тетраметиламмония, трибензиламмония или бензилдиэтиламмония при спедующем соотношении компонентов, мас.%:

В.э, R

Rv>

Соединение формулы (1) 0,001-5

Водный буферный раствор РН 3,5-8,5 jto 1 мл

Предлагаемое средство получают путем смешивания активного вещества с водным буфернлпч раствором в указанном соотнощг нии.

Приведенные в табл,1 новые соединения получают способами, известными из химии углеводородов.

Tàê например, их можно получать за счет того, что соединение общей формулы где Х вЂ” галоген;

R1 — защитные группы„ обычно применяемые в химии углеводородов, с последующим удалением защитных групп известными приемами.

Пример 1 ° 1000 мкл водного оксиэтилпиперазинэтансульфокислого буфера с РН 7, содержащего 0,001 или

0,1 мас ° % указанного в табл ° 2 активного вещества, смешивают с 35 мкл водного раствора р-В-галактозидаэы из E.coli (0,08 ед/мл) и при 37 С фотометрическим путем определяют при

578 нм активность средства за счет измерения изменения миллиэкстинкции в минуту (Л мэкс/мин), При этом ход процесса характеризуется окраской в красный или красно-Аиолетовый (согласно изобретению) или в желтый (согласно прототипу) цвет, которая становится все интенсивнее. В сравнительном опыте используют средство, содержащее в качестве активного вещества соответствующий п-нитрофенил- р-D-галактозид, фотометрическое изменение осуществляют при 405 нм.

Результаты опытов сведены в табл,2.

Сравнение данных по мэкс/мин свидетельствует о том, что предлагаемое средство обеспечивает более вы1393322

Ри, НО где R и Кз

Кг

5 8

Кби К,о

R и К,, К и К

35 при следующем тов, мас.%:

Соединение указанной формулы

Водный буферный раствор рН 3,5-8,5

О, 001-5

До 1 мл. сокую степень определения p-D-галактозидазы, чем известное средство.

Пример 2. Повторяют пример

1 с той разницей, что используют

1000 мкл водного раствора натриевофосфатного буфера с рН 8,5, содержащего 1 или 5 мас.% указанного в табл.3 активного вещества.

Результаты опытов сведены в табл.3 10

Сравнение данных табл.3 свидетельствует о том, что и при более высоком содержании в средстве активного вещества предлагаемое средство обеспечивает более высокую степень 15 определения р -D-галактозидазы, чем известное средство.

Пример 3. Повторяют пример

1 с той разницей, что используют водный буферный раствор с рН 3,5 или 20

4,0,содержащий 0,5 мас.% указанного в табл.4 активного вещества. При этом в случае рН 3,5 используют

p --D-галактозидазу из бобов (опыт I), а в случае рН 4,0 — из Aspergillus 25

niger (опыт II).

Результаты опытов сведены в табл.4.

Сравнение данных табл.4 свидетельствует о том, что и при исполь- 30 зовании средства с буферным раствором с кислой величиной рН предлагаемое средство обеспечивает более высокую степень определения энзима, чем известное средство.

Формула изобретения

Средство для определения j -Dгалактозидазы, содержащее активное вещество и водный буферный раствор, о т л и ч а ю щ е е с я тем, что, с целью повышения чувствительности средства, в качестве активного вещества используют соединение общей формулы

2 () "6

Р2 водород, фтор, хлор, бром или нитрогруппа; как R èëè дополнительно аминогруппа; водород, фтор, хлор, бром водород хлор, бром, С1-С -алкил или метоксигруппа; водород, галоген, С„-С -алкил, нитрогруппа, гидроксильная, карбоксильная или метоксильная группа; — водород, хлор, бром, С,-С -алкил или метоксигруппа; водород, иод, хлор, бром, С „-С -алкил, нитрогруппа; — протон, ион лития, натрия, кальция, тетраметиламмониятрибензиламмония или бензилдиэтиламмония, соотношении компонент

1393322

Тзблица1 но о о!

И1 Rg/Rtg ы ю!Ис.

?. пл., с,!я, R» R)I вещ

3 4

5 6

1О

С»/И и(н

ci/H

21О (разлом.) 190 (разлом.) 250 (разлом.) 190-195 (разлом.) 140-150 яа

ci/и н/н

Cl/H и

С»/Ы

С»(н к/н

Са с»/ы

Ci/H я(сн,), IY

CitH н/н

Ci/H елзлл)з

- бензил (С»нз)1

Ci/l» н/н

ci/a я тп я/н

ы/я н/ы яа г/н н/н

Fla

ы/н

H/Í

a(0easiin)3 с яа с?/с»

ci/ci он(и

ZI он/н

H/Í яа.»(3 и/н

Н(Н

СН,(H

a/H

Br/СН Н/Н

Br/ÑÍ, - Na сн,(н н(н сн 3/H

Na си, ск(н сн, сн, Вт/-),И с»» 3

С»» 3

-сн/н

СН1

C(l з

Br/-CH

СИ, си,/н

Na

205-209 си,!и

190-195

Na н(н

cu,н!и

Вс(&r яо /И с»!яо, си,(и

Na н/н

ZI I н(н

СН»/яоз Н/И

ОСК 1/И н(н

F(H н/н

F/Í

IIY ЯО, Н Н Н Сн 3/И H/H сн,/н яо,!ы яо,/н яо,/н сн !н

ы н н н н(н н н н н н/н

ХП H Н Н Н Н/И и н н н н/н н н н н н/н и н, н н н н/ы н н н н ы/н тп? а н н a ata

?х н н к н a/a

Н Н Н Н H/H

ы н к н н/н

ХП Н Н H Н Н/Н

Х1Т Н Н Н Н Н/Н н ы н н н/н

III Н Н Н Н СН,/Н хтп н н н н сн,!н

XYIII Н Н Н Н Н/И

XIZ Н Н Н Ы СН,(Н

ы н н н н/н

Н И Н Н Н/Н ххп я н н к к/н хх?п н н ы . н н/н

IIIY Br Br Br Br Н/Н игп и н н н си (и

1 со и(н

Br/Br яо»/н

Ci/NÎ, сн з(яо, ОС»1,/Н

245-г48

218-гго

Стемлоемдво

157-165

145-150

115-120

210-215

205-209

200-ZO3 гоо-го4

17&-180

10О-»ОЗ

167-170

115-118

155-158

160-165

195-200

212-215

230-235

1393322

Продолжение табл.1!!!

3ОО

H/Н Ха н/н

240

Н/Н н/н

Н/Н

Cl /Н

290

С1/Н

Н/Н

Р/Н

Р/Н

Н/Н

260

ХО g/Н На

Н/Н На

Н/Н

295

NO1/í

Н/Н

Н/Н

Н/Н

Н/Н

H/Í

Cl/С1 Н/Н

Cl/Cl Na

CH /H Na

br/br . На

Cl/Cl На

NO q Н Н Н/Н сн /н

Н/Н

Br/Sr . Вг/Br

C1/Cl С1/С1

ЙОИТ Cl Cl С) Cl br/Br

XZZTII P P Р P Cl/Cl

Н/Н На

Таблица2

80/83

88/90

XII

65/66

XIII

68//0

XIY

66/68

45

68/70

70/72

71/7?

XYI

XYII

XYIII

YI

XIX

5? /54

YII

74/75

ХХ

YIII

96/99

76/79

XXI

XXII

120/121

35/88

ZZTI 1 Н Ног Н Н Н/Н Н/И

ZXTIII Н Н ХО« Н Н/Н

ZZIX Н NO« Н Н Ы/Н

Ш Н НО Ы Н H/H

XZZI Е НО, Н Е H/H

XIII1 Н NH s Н Н Н/Н

ВАХШ Вг br Sr Вг Ы/Н

XXXIT Вг Вг Вг Вг Н/Н йШШ Е Н Н Н СаН, /Csb««CsH«« /СВН«СРН„ /С«Ни Сгн«« /CsH««Na ехпх н í í " осн,/осн, н/н осн,/осн, аЯИР С(, ЩО - «t4) s 3,1-3,9 (и,6Н), 4,1-5,3 (и«4Н) °

4 ° 95 (л«Л 7 гц« IH) ° 6«2 6«6 (и,1Н)6,8-7,6 (и, 8Н), 7,8-8,0 (и, IH).

Активное вещество д мэкс/мин при в средстве 0,001/0,1 мас.Х

130-135

185-190

215 (paar«.)

210-220

150 (раал,)

220 (раал.)

160 (раал.)

170-175

105/t06

98/101

102/105

123/124

118/119

102/104

115/1 t 6

98/100

1393322

Продолжение табл,2

Продолжение табл.3

XYl

XXI I I

124/125

112/114 XXI

XXIY

XXII I

XXY

89/93

ХХУ I

XXY I

94/9/

94/98

XXIX

XXYII

82/85

111/115

XXYIII

/7/80

90/94

86/90

ХХХХ

103/107

96/100

85/87

XXX I

13/15 и-нитроАенил- 1 -Р-га" лактозид (известен) 87/90

Т а б л и ц а 4

96/100

105/107

Д мэкс/MHH

Активное вещество в средстве

Опыт I Опыт II

92/95

116/117

108/110

55

YII

80/83

75 хт

99/102

XIII

116

112

XYI

11/12 и-нитроАенил- Д -D-галактозид (известен) 40

106

109

XIX

119

115

Таблица3

105

102

Активное вещество g M3Kc/мин при в средстве 1 — 5 мас.%

92

XXXIII

69/71

XXXY

YII

55/58

XXXYlII

92/95

55 и-нитроАенил — p-D-галактозид (известен) XI

86/89

XIY

103/107

XXXII

XXXIII

XXX IY

XXXY I

XXXYII

XXXYII I

XXXIX с!

XXXYII

XXXYIII

ХХХIX

XX I 1 I

ХХП

XXIX

126/129

100/104

126/130

101/105