Способ определения активности фосфолипазы а @

Авторы патента:

АНТОНЕНКО ЮРИЙ НИКОЛАЕВИЧ

БАРСКИЙ ЕВГЕНИЙ ЛЬВОВИЧ

НАЗАРЕНКО АЛЕКСАНДР ВИКТОРОВИЧ

САМУИЛОВ ВИТАЛИЙ ДМИТРИЕВИЧ

ХАКИМОВ САРДОР АДЫЛОВИЧ

ЯГУЖИНСКИЙ ЛЕВ СЕРГЕЕВИЧ

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

Изобретение относится к способам, определения активности липолитических ферментов , предназначено для микробиологической промышленности, биотехнологии, биофизики , биохимии, энзимологии. Цель изобретения - повышение чувствительности и упрощение способа определения активности фосфолипазы А2. Для этого берут кювету с 2 отделениями, разделенными перегородкой (отверстие в перегородке0 0,9 мм), и заполняют р-рами следующего состава, мас.%: трис-НС1 0,121; KCI 0,745; CaCU 0,011; остальное - дистиллированная вода, рН 8,1. Затем отверстие закрывают азолектиновой бислойной липидной мембраной (БЛМ) из 2%-ного р-ра азолектина в декане путем отбора 0,005 р-ра азолектина на пробу. Фосфолипазу АО добавляют в оба отделения кюветы и определяют время жизни азолектиновой БЛМ (время регистрации электрического сопротивления БЛМ от момента добавления фосфолипазы АО в оба отделения кюветы до разрыва мембраны). § 1 ил. (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (Я1 4 G 01 N 33 48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

H АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4171499/28-14 (22) 04.01.87 (46) 15.08.88. Бюл. № 30 (71) МГУ им. М. В. Ломоносова (72) Ю. Н. Антоненко, Е. Л. Барский, А. В. Назаренко, В. Д. Самуилов, С. А. Хакимов и Л. С. Ягужинский (53) 612.015 (088.8) (56) Journal of Biol. Chem; 1976, ч 251; № 10, р. 3428 вЂ” 3133. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ФОСФОЛИПАЗЫ А, (57) Изобретение относится к способам. определения активности липолитических ферментов, предназначено для микробиологической промышленности, биотехнологии, биофизики, биохимии, энзимологии. Цель изобретения вЂ” повышение чувствительности и

„„Я0„„1416918 А 1 упрощение способа определения активности фосфолипазы А. Для этого берут кювету с 2 отделениями, разделенными перегородкой (отверстие в перегородкеф 0,9 мм ), и заполняют р-рами следующего состава, мас.%: трис-НС1 0,121; KCl 0,745; СаС1

0,011; остальное вЂ” дистиллированная вода, рН 8,1. Затем отверстие закрывают азолектиновой бислойной липидной мембраной (БЛМ) из 2%-ного р-ра азолектина в декане путем отбора 0 005 р-ра азолектина на пробу. Фосфолипазу А добавляют в оба отделения кюветы и определяют время жизни азолектиновой БЛМ (время регистрации электрического сопротивления БЛМ от момента добавления фосфолипазы А в оба

Р отделения кюветы до разрыва мембраны) .

1 ил.

1416918

Изобретение относится к способам определения активности липолитических ферментов и может быть применено в биотехнологии, микробиологической промышленности, биофизике, биохимии, энзимологии.

Целью изобретения является повышение чувствительности и упрощение способа определения активности фосфолипазы А .

Пример 1. Берут кювету с двумя отделениями, разделенными перегородкой (с отверстием в ней диаметром 0 9 мм) и заполненными раствором следующего состава, мас.Я: трис вЂ” HCl 0 121 КС1 0,745;

СаС1> 0,011; дистиллированная вода вЂ” остальное рН 8,1. Затем на отверстии формируют азолектиновую бислойную липидную мембрану (БЛМ) из 2Я -ного раствора азолектина в декане путем отбора 0,005 мл раствора азолектина на пробу. Фосфолипазу А, добавляют в оба отделения кюветы и определяют время жизни азолектиновой БЛМ (время регистрации электрического сопротивления БЛМ от момента добавления фосфолипазы А в оба отделения кюветы до разрыва мембраны) при воздействии на нее фосфолипазы А, оно составляет < =24,8 мин (R вЂ” электрическое сопротивление БЛМ вЂ” составляет 2,5 х

X 10 Ом). Получают концентрацию (активность) фосфолипазы А>, равную 1,8"

X 10 г/мл (см. чертеж, кривая А).

Пример 2. Берут кювету с двумя отделениями и дальше все операции проделывают, как в примере 1. Диаметр отверстия 1,0 мм. Состав инкубационного раствора, мас.Я: трис-НС1 0,121„KCl 0,745;

СаС1 0,001; дистиллированная вода вЂ” остальное рН 8,0. Фосфатидилхолиновую БЛМ формируют нз 2О -ного раствора яичного фосфатидилхолина в декане, нанося на отверстие раствор фосфатидилхолина в количестве 0,003 мл на пробу. Добавляют фосфолипазу А> в отделения кюветы и определяют время жизни фосфатидилхолиновой БЛМ при воздействии на мембрану фосфолипазы A., оно составляет 70 мнн г (R.-.=10" Ом) . Получают концентрацию (активность) фосфолипазы А, равкую

5,6 10 " г/мл (см. чертеж, кривая Б) .

Пример 3. Берут кювету с двумя отделениями и дальше все операции проделывают, как в примере 1. Диаметр отверстия 1,0 мм. Состав инкубационного раствора, мас.Я трис-НС! 0,121; КС1 0,745;

СаС1,0,001; дистиллированная вода вЂ” остальное, рН 8,0. Фосфатидилэтаноламиновую

БЛМ формируют из 2Я-ного раствора бактериального фосфатидилэтаноламина в декане, нанося на отверстие раствор фосфатидиэтаноламина в количестве 0,003 мл на пробу. Добавляют фосфолипазу А в отделения кюветы и определяют время жизни фосфатидилэтаноламиновой БЛМ при воздействии на мембрану фосфолипазы А, оно составляет 52,5 мин (R. 10" Ом). Получают концентрацию (активность) фосфолипазы А, равную 5,6 10 г/мл (см. чертеж, 20 кривая В), Формула изобретения

Способ определения активности фосфолипазы Ар, включающий формирование фосфолипидной мембраны, инкубацию ее в .-.роде, содержащей хлористый калий, буферный растфор и ионы СА+ при рН 8,0 в присутствии раствора фосфолипазы А определенной концентрации с последующим изме30 рением активности, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа и его упрощения, формируют плоскую бислойную мембрану на отверстии диаметром 0,9 вЂ” 1,0 мм, в разделяющей перегородке кюветы, сорстоящей из двух отсеков.

35 путем нанесения 1,9 вЂ” 2,0 мас.,о раствора фосфолипидов в декане, инкубацию проводят в среде, содержащей 0,74 вЂ” 0,745 мас.Я хлористого калия и 0.001 вЂ” 0,011 мас. Я хлористого кальция, причем средой инкуоации заполняют оба отсека кюветы, а актив40 ность определяют по времени жизни мембраны, регистрируя ее электрическое сопротивление.

14!691г!

///7И/, //7 Ы/;/

nC//ynunu nZ//neman/7 /7//Р7 К .". ги "/.ущ . . Тс . 7 . (и,,;iIi|i í .i рыт iil! 1;: ii i и; и. .

Составится!, I. (. ип, Редактор М. ((иткина Текред И. Верее !i ."

Зак:! 106!/43 Тираж 847 1(i

В(1(!((((И Государственного комитета СССР по лс.;аii и i<юр,:.

113035, Москва, Ж --35, Раушская пб., !!роизводственно-попиграфическое предприятие, г. У иго(и>.;,; i.

Способ определения активности фосфолипазы а @

Изобретение относится к медицине, точнее к акушерству и гинекологии, и предназначено для определения состояния новорожденного сразу после рождения и ранней диагностики непроявляюшихся клинических заболеваний

Способ диагностики туберкулезного менингита // 1416916

Изобретение относится к медицине, точнее к неврологии и фтизиатрии, касается кристаллографического способа диагностики туберкулезного менингита

Педаль для стоматологического аппарата // 1416117

Способ определения миоглобина // 1415916

Способ прогнозирования родов крупным плодом // 1415190

Изобретение относится к акушерству

Способ определения глубины ожога // 1415189

Изобретение относится к медицине , касается способа диагностики глубины ожогового поражения и предназнагчено для ранней дифференциальной диагностики поверхностных и глубоких ожогов , в том числе у детей

Способ диагностики злокачественных новообразований // 1414110

Изобретение относится к онкологии

Способ определения активности аргиназы мозга в сыворотке крови // 1413530

Изобретение относится к биохимии

Способ определения стадий хронической почечной недостаточности // 1413529

Изобретение относится к урологии и нефрологии

Способ исследования состояния сурфактанта при туберкулезе легких // 1413528

Изобретение относится к пульмонологии

Способ контроля состояния сельскохозяйственных и пищевых веществ или лекарственного препарата и устройство для его осуществления // 2100805

Способ определения в пробе цельной крови распределения вероятностей в популяции эритроцитов их подмножеств и устройство для его осуществления // 2100807

Способ определения гетероциклических нитросоединений в биологическом материале // 2100808

Способ выявления лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах // 2101699

Изобретение относится к медицине, а именно к анатомии, топографической анатомии, патологической анатомии и может быть использовано для изучения лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах макромикроскопическом поле видения в норме, в возрастном аспекте, в эксперименте и патологии

Способ ионного парамагнитного резонанса на нервном волокне // 2101700

Изобретение относится к медицине, в частности к способам неинвазивной диагностики функционирования биологических мембран и соответствующей оценке метаболических процессов в организме на клеточном уровне

Способ прогноза хронического рецидивирующего течения заболевания у лиц, перенесших первичную рожу // 2101701

Изобретение относится к медицине, а именно инфекционным болезням и дерматологии, и может найти применение как в стационарных, так и поликлинических условиях

Способ определения реактивного лизиса клеток // 2101702

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской биохимии, и может быть использовано для определения реактивного лизиса клеток в содержащей комплемент биологической жидкости в клинической практике и в научных исследованиях

Способ определения наличия активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите // 2101703

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите путем биохимического исследования сыворотки крови

Способ дифференциальной диагностики миокардита и миокардитического кардиосклероза // 2102749

Устройство для локального подведения биологически активных веществ // 2102750