Штамм бактерий рsеudомоnаs species-продуцент триптофан- синтазы

 

Изобретение относится к биотехнологии и касается получения нового штамма-продуцента триптофан-синтазы, которая может быть использована для ферментативного синтеза L-триптофана, из индола и серина. Цель изобретем НИН - получение штамма-продуцента триптофан-синтазы на-основе бактерий рода Pseudomonas, обладающего более высокой активностью Штамм Pseudomonas ВКПМ В-3835 (Ml5) является trpA. мутантом бактерий Pseudomonas sp. М, вьщеленных из сточных вод Минского завода медпрепаратов. Бактерии Pseu- g domonas sp. Ш5, вьфащенные в минеральной среде с ограниченным количеством L-триптофана, обладают ТС-Б активностью триптофан-синтазы, катализирующей превращение индола и серина в L-триптрфан, равной 200 нмоль/мин/мг белка. (Л 4 4i О ;о N5 00

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„„1440923 А 1 ду 4 С 12 0 9/88, 1/20

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИ1ЕТ СССР

ПО.ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (2) ) 4208726/31-13 (22) 10.03.87 (46) 30.11.88. Бюл. У 44 . (71) Белорусский государственный университет им.В.И.Ленина (72) И.Н.Олехнович, Н.П.Максимова и Ю.К.Фомичев (53) 577. 15 (088.8) (56) Максимова Н.П. и др. Регуляция синтеза триптофана, у факультативных метилотрофных Pseudompnas sp, М. — Тезисы УП съезда Всесоюзного .микробиологического общества, т.2 °

Алма-Ата: Наука, 1985, с.91.

Sigimoto S., Shito Х. Agric.Biol.

Chem. 1982, v.46, р ° 271-1-2718. (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ PSEUDOMONAH SPECIES — ПРОДУЦЕНТ ТРИПТОФАН-CHHTA3bl (57) Изобретение относится к биотехнологии и касается получения нового штамма-продуцента триптофан-синтаэы, которая может быть использована для ферментативного синтеза L-триптофана, из индола и серина. Цель изобретения — получение штамма-продуцента триптофан-синтазы на основе бактерий рода Pseudomonas, обладающего более высокой активностью. Штамм Pseudomonas ВКПМ В-3835 (М15) является trpA мутантом бактерий Pseudomonas sp. M, выделенных из сточных вод Минского завода медпрепаратов. Бактерии Pseudomonas sp. М15, выращенные в минеральной среде с ограниченным количеством L-триптофана, обладают ТС-Б активностью триптофан-синтазы, катализирующей превращение индола и серина в L-триптрфан, равной

200 нмоль/мин/мг белка.

1440923

Физиолого-биохимические признаки

По отношению к кислороду — аблигатный аэроб. Оптимальная температура о роста 28-30 С, рН среды в пределах

6,8-7,3. Азот утилизируют в виде солей аммония, мочевины, нитратов.

Пигменты. Образует желто-зеленый водорастворимый флуоресцируюший пигмент на среде Кинг В. Внутриклетачпс>r o пигмента не образует.

5с

Изобретение относится к биотехнологии и касается получения нового штамма-продуцента триптофан-синтазы (КФ 4.2. 1.20), которая может быть использована для ферментативного синтеза I òðèïòîôàíà из индала и серина.

Цель изобретения - получение штамма-продуцента триптофан-синтазы на основе бактерий рода Pseudemonas, обладающего более высокой активностью.

Штамм бактерий Pseudomonas sp.

ВКПМ В-3835 (М15) является trpA хутантом бактерий Pseudomonas sp. М, 15 выделенных из сточных вод Минского завода медпрепаратов. Бактерии Pseudomonas sp. M15, выращенные в среде с ограниченным количеством L-триптафана, обладают ТС-Б активностью трип- 20 тофан-синтазы, на много превосходящую у известных продуцентов Bzevibacterium f1axrum. Среда, применяемая для культивирования Pseugornonas sp.

М15,состоит из дешевыхи легкодос- 25 тупных веществ. Время, затрачиваемое на культивирование штамма, составляет всего 12 ч, вместо 24 ч у известного-При выращивании Pseudoшопаз вр. М15 не надо создавать вы- 30 сокую степень аэрации культуры.

Штамм Pseudomonas sp. M15 имеет следующие характеристики.

Морфологические признаки. Клетки дрямые палочковиднай формы с округ 5 лыми концами О,бх2-3j подвижные с

2-4 монаполярными жгутиками, грамотрицательные, спор не образуют.

Культуральные признаки. Колонии на агаризованнык питательных средах (мяса-пептонном агаре, Кинг В araре) гладкие плоские круглые край ровный серовато-белые. Через 24 ч при

28 С образуют колонии размером Z3 мм. Рост по уколу в МПА умеренный, в основном на поверхности среды. В жидкой питательной среде образует интенсивную муть.

Реакция на оксидазу и каталазу положительная. Реакция Фогес-Проскауэра отрицательная. Индал не образует. Тест на анаэробную аргинилдегидролазу положительный. 1 еакция на анаэробную денитрификацию отрицательная„ Лецитиназная активность отсутствует.

Не гидрализует крахмал, желатину, Твин-80.

В качестве источника углерода использует глюкозу, глицерин, сахарозу, галактозу, мальтозу, фруктозу, этанол, метанол, тирозин, фенилалалин, орнитин, глицин, лейцин, глутаминовую кислоту, аспарагиновую кислоту. Не утилизирует арабинозу, маннosу„ ксилозу, лактозу, маннит, раффинозу, дульцит, сор6НТ> целлобиозу, инозит, серин, лизин, триптофан, антранилавую кислоту, ацетамид.

Пример 1. Бактерии Pseudomoпав яр. М15 инокулируют в минимальную срерур г/л: Na HPO4 — 6: КН Р04

3; Na01 0,5; КН4С1 1; СаС1 0,015;

MgSO4 ° 7Н О 2; глюкоза 2 л, содержащую 1.-триптофан в концентрации о

0 005 г/л и культивируют при 28 С с аэрацией 12 ч. Выращенные таким образом бактерии Pseudomonas sp. М15 обладают ТС-Б активностью триптоQaH-синтазы, равной 200 нмоль/мин/мг белка.

Пример 2. Бактерии Pseudomonas sp. М15 инокулируют в известную среду г/л: KHgÐO4 1; (NH4)gS04

2 ; MgS04 < 7H O 1; MnS04 ° 4H O 0,008; глюкоза 130; фумаровая кислота 12, уксусная кислота 3; биотин 0,00005; тиамин гидрохлорид 0,002 г/л; Е-тирозин 0,65; DL метионин,0,4; СаСО>

50; гидролизат саевык бобов 50, рН 6,5 и культивируют при 28 С с аэрацией 12 ч. Выращенные таким образом бактерии Pseudomonas sp М15 обладают ТС-Б активностью триптофан-синтазы, равной 170 нмоль/мин/мг белка.

Пример 3. Бактерии Pseudomonas sp. М15 инокулируют в среду, используемую для культивипования представителей рода Pseudomonas, г/л:

К НРО4 10; 1aNH4HPO4 4Н<0 3,5;

MgSO4 /Н О 0,2; лимонная кислота

2 г/л; глюкоза 2; рН 7,0, содержащую L-триптофан в концентрации о

0,005 г/л, и культивируют при 28 С с аэрацией 12 ч. Выращенные таким

1440923 образом бактерии Pseudomonas sp ° M15 обладают ТС-b активностью триптофансинтазы, равной 190 нмоль/мин/мг белка.

Формула изобретения

Техред А. Кравчук Корректор А.Обручар

Редактор M.Håäoëóæåíêo а»

Заказ 6143/29

Тираж 520 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Определение ТС-Б активности триптофан-синтаэы осуществляли по общепринятой методике. Этот же метод использовался для штамма прототипа.

Таким образом, предлагаемый штамм обладает более высокой ТС-Б активкостью триптофан-синтаэы по сравнению с известным. Время, затрачиваемое на выращивание Pseudomonas sp

М15, в 2 раза меньше, чем для Brevibacterium flavum.

10 Штамм бактерий Pseudomonas species BIGIM В-3835 — продуцент триптофан-синтазы.