Способ выделения профаг-излеченных клонов из культур лизогенных штаммов молочнокислых бактерий

Авторы патента:

C12N7 - Вирусы, например бактериофаги; их композиции; приготовление или очистка их (лекарственные препараты, содержащие вирусы A61K 35/76; получение лекарственных составов, содержащих вирусные антигены или антитела, например вакцин из вирусов A61K 39/00)

Изобретение относится к биологии молочнокислых бактерий и может найти применение в исследованиях, связанных с защитой производства ферментируемых молочных продуктов от действия бактериофага. Цель изобретения - повышение выхода профагизлеченных клонов. Индукцию бактериофага проводят повторяющимися циклами с инкубацией обработанных клеток в условиях, исключающих адсорбцию высвобождающихся частиц умеренных бактериофагов на поверхности клеток профаг-излеченных клонов. сл

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„„1458387

А1 (51)4 С 12 N 7/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4192688/30-13 (22) 18.12.86 (46) 15.02.89.. Бюл. 1! 6 (71) Алтайский филиал Всесоюзного научно-исследовательского института маслодельной и сыродельной промышленности . (72) Я.P. Каган, И.Я. Сергеева и О.Б. Матвеева (53) 576.858.9(088.8) (56) Мытник Л.Г. Исследование причин возникновения бактериофагии в заквасках для производства творога.

Канд.дис. М., !975 r., с. 155.

Gasson M.I., Davres F.Ь. Propha. ge-cured deiivatives of Streptococcus

lactis and. Streptococcus cremoris.

Applied and Environmental Microbiology 1980, v. 40, !е 5 р..964-966.

Целью изобретения является повышение выхода профаг-излеченных клонов из культур лизогенных штаммов молочнокислых бактерий.

Пример. Лизогенный штамм

Streptococcus lactis 140-1Оа вырастили 18 ч при 30 С с 10 смз бульона из обезжиренного молока, гидролизованного панкреатином и разбавленного водой 1:2 (БГМ), переводят (1% ино(54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ПРОФАГ.-HÇJIE EHНЫХ КЛОНОВ ИЗ КУЛЬТУР ЛИЗОГЕННЫХ

lllTAMM0B МОЛОЧНОКИСЛЫХ БАКТЕРИЙ (57) Изобретение относится к биологии молочнокислых бактерий и может найти применение в исследованиях, связанных с защитой производства ферментируемых молочных продуктов от действия бактериофага. Цель изоб" ретения вЂ” повышение выхода профагизлеченных клонов. Индукцию бактериофага проводят повторяющимися циклами с инкубацией обработанных клеток в условиях, исключающих адсорбцию высвобождающихся частиц умеренных бактериофагов на поверхности клеток профаг-излеченных клонов.

i 2

Ь кулюма) в 10 см> БГМ, инкубируют вф

4 ч при 30 С, выросшие клетки соби- { д рают центрифугированием (10 мин при О

5000 об/мин) в асептических условиях, ресуспендируют в физиологическом растворе до концентрации 5 10 KOE/см .8 Ъ и 10 смэ суспензии экспонируют в открытой стерильной чашке Петри под . УФ-лампой (БУВ-15, энергетическая экспозиция !0,8 Дж/м ) при постоянном перемешивании на магнитной мешалке. Облученную суспензию смешивают с равным объемом фагозащитного . бульона ФЗБ; БГМ, обогащенный 1Ж

Na>C

0,25% KgHP0, рН 7,0) удвоенной кон-, центрации и инкубируют 18 ч при 30 С, переводят (1% инокулюма) в 10 см ь

7 4

Способ применим к лизогенным культурам, содержащим значительно мень" шую пропорцию профаг-излеченных клонов (до 1:5000000).

Применение предлагаемого способа позволило вьщелить профаг-иэлеченнйЕ клоны у.3 из 12 исследованных лизогенных штаммов, тогда как при использовании способа, принятого за прототип, такие клоны не были выделены.

Эффективность предлагаемого спасо. ба проверена на примере лизогенного штамма $. lactis 174 и его профагизлеченного клона С з (получен поеллагаемым способом) . Смесь штаммов

174 и С в соотношении 9:1. подвергали 3 циклам УФ-индукции и инкубации

B ФЗБ, как описано в примере, в результате чего доля профаг-излеченных клеток в культуое возросла до 70/.

3 145838

ЗБ (нормальной концентрации), инкуируют 4 ч при 30 С и из полученной куль туры готовят суспензию клеток в физио1 логическом растворе, как указано выше„, 5 фля УФ-облучения. Цикл УФ-обработкй последующей инкубации в ФЗБ повтояют 4 раза, после чего 10-кратные азведения культуры рассеивают на оверхностЬ фагозащитного агара

ФЗА; ФЗБ + 1,5Х агара) и чаши инкубируют 48 ч при 30 С; Маериал из 100 индивидуальных колоний фтвивают в пробирки, содержащие по

,5 см ФЗБ (нормальной концентрации) 15 и после 4 ч инкубации при 30 С клоны роверяют на чувствительность к фагоизату, полученному УФ индукцией исодного штамма. Пробу на фагочувстительность проводят двуслойным мето- 20 ом. Газоны клонов с нанесенными капями фаголизата инкуЬируют 18 ч при

0 С. У клона 9 82 обнаружена лити-.. еская реакция в месте нанесения фарлизата. При анализе клона установ- 25 ено, что он чувствителен к литичес кому действию умеренного фага, лизо енизирующего исходный штамм; в отрет на действие индуцирующих агентов не дает ростовой реакции, характерной 30 для исходного штамма и других лизо енных штаммов стрептококков,. и не родуцирует частиц умеренного бактериофага.; при обработке фаголизатом, полученным из исходного штамма, образует вторичные фагоустойчивые (рели,зогенизированные) клоны, Полученный клон использован в исследованиях в качестве индикаторного штамма для. умеренного бактериофага, лизогенизирующего штамм $. lactis 140-10а. Его использование позволяет, в частности, оптимизировать методику приготовления фа:. олизата с высоким титром.

Формула изобретения

Способ выделения профаг-излеченнь1х клонов из культур лизогенных. штаммов молочнокислых бактерий. путем обработки культур лизогенных пгтаммов агентом, индуцирующим профаги с последую-. щим отбором клонов и их проверкой на -отсутствие профагов, о т л ивЂ” ч а ю шийся тем, что, с целью повышения выхода профаг-излеченных клонов, экспоненциальную культуру бактерий помещают в питательный фагозащитный бульбн, индуцируют профаг УФ-излучением, инкубируют при оптимальной температуре роста, перевивают в свежую порцию фагозащитного бульона с последующим 3-4-кратным повторением цикла, а отЬор индивидуальных колоний ведут на фагозащитном агаре по их чувствительности к лизату исходного штамма.

Составитель Н. Кузенкова

Редактор А. 31ежнина Техред М.Дидык Корректор М. Демчик

Заказ 326/29

Тираж 500

Подписное

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужт ород, ул, Проектная, 4

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Способ выделения профаг-излеченных клонов из культур лизогенных штаммов молочнокислых бактерий

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при эпидемиологическом обследовании при холере

Питательная среда для получения бактериофагов энтеробактерий // 1452104

Способ культивирования вирусов в органных культурах трубчатых органов // 1451163

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в вирусологии

Способ внутригрупповой дифференциации вирусов коксаки в // 1425204

Изобретение относится к вирусологии и касается способа внутригруппой дифференциации вирусов Коксаки В

Способ выделения бактериофагов // 1412302

Изобретение относится к медицинской промышленности и может быть использовано при производстве лечебно-профилактических бактериофагов

Штамм аденовируса серотипа 3 архангельск /1511/79, используемый для приготовления диагностических препаратов // 1412300

Изобретение относится к вирусологии и может быть использовано при производстве диагностических препа- ,ратов

Способ получения специфической сыворотки к вирусу классической чумы свиней // 1410319

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, в частности к диагностике вирусных болеяней

Штамм полиовируса типа п,используемый для исследования объектов окружающей среды // 1406158

Штамм фага бактерий вида yersinia еnтеrоliтiса для получения антифаговой сыворотки 1 типа // 1406157

Изобретение относится к медицинской вирусологии и микробиологии, а именно к классификации вирулентных фагов кишечных иерсиний

Штамм бактерий viвriо сноlеrаl 042 серовара, используемый для получения вирулентного фага 781 (781в)с-170 042/1 серовара // 1405298

Способ получения вакцинных штаммов вируса гриппа в для производства инактивированных и живых гриппозных вакцин // 2100033

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть применено при производстве вакцинных препаратов для массовой профилактики гриппа

Штамм coronavirus canine, используемый для контроля иммуногенной активности вакцин и получения сывороток для лечения и диагностики коронавирусной инфекции собак // 2100433

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, в частности, к штамму коронавируса собак, используемого для контроля иммуногенной активности вакцин и получения сывороток для лечения и диагностики коронавирусной инфекции собак

Поливалентная сыворотка против чумы, парвовирусного энтерита и аденовирусных инфекций плотоядных "витакан-с" и поливалентный иммуноглобулин против чумы, парвовирусного энтерита и аденовирусных инфекций плотоядных "витакан" // 2103009

Штамм вируса influenza в (ленинград) 14/76/50, предназначенный для получения безвредных и высокорепродуктивных вирусов гриппа в для производства инактивированных и живых гриппозных вакцин // 2105063

Аттенуированный штамм вируса чумы плотоядных virus pestis carnivorum // 2108385

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, а именно к аттенуированным вирусам чумы плотоядных, и может быть использовано при изготовлении препаратов для диагностики и специфической профилактики заболевания пушных зверей и собак, вызванного вирусом чумы плотоядных

Препарат "локферон" для лечения и профилактики вирусных заболеваний и способ его получения // 2108804

Изобретение относится к биотехнологии и медицине и касается лечебно-профилактического препарата на основе человеческого лейкоцитарного интерферона

Способ выделения бактериофагов // 2109055

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к производству медицинских биологических препаратов и может быть использовано при получении лечебно-профилактических бактериофагов, предназначенных для парентерального и внутривенного введения

Штамм а(17)иоганесбург (94)1 (нз n2) для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых // 2110277

Изобретение относится к медицинской вирусологии и касается получения вакцинного штамма для живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых, соответствует по антигенным свойствам актуальному вирусу А/Иоганесбург/33/94 (Н3N2)

Штамм а(47) иоганесбург (94)1 (нз n2) для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для детей // 2110278

Изобретение относится к медицинской вирусологии и касается получения вакцинного штамма для живой гриппозной интраназальной вакцины для детей, соответствующего по антигенным свойствам актуальному вирусу А/Иоганесбург/33/94 (Н3N2)

Рекомбинантная плазмидная днк pc-ns3, обеспечивающая интеграцию комплекса генов c, prm, e, ns1, ns2a, ns2b, ns3 вируса клещевого энцефалита (вкэ) в геном вируса осповакцины (вов) и рекомбинантный штамм вируса осповакцины, экспрессирующий в клетках иммунизированного организма комплекс генов c, prm, e, ns1, ns2a, ns2b, ns3 вируса клещевого энцефалита // 2112038

Изобретение относится к области генетической инженерии и биотехнологии, в частности, к получению рекомбинантной плазмидной ДНК рС-NS3, обеспечивающей интеграцию комплекса генов C, prM, E, NSI, NS2A, NS2B, NS3 вируса клещевого энцефалита (ВКЭ) в геном вируса осповакцины (ВОВ), и соответствующего штамма ВОВ