Штамм бактерий viвriо сноlеrае еlтоr-источник умеренного фага хш серовара уп гетероиммунной категории

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при эпидемиологическом обследовании при холере. Штамм Vibrio cholerae eltor 893 дикий, депонирован под номером КМ-18(893), Путем искусственной лизогенизации реципиентного штамма с использованием штамма 893 получают новую тест-культуру , которую используют при фаготипировании холерных вибрионов. Штамм продуцирует фаг XIII серовара VII гетероиммунной категории.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) А1 (Я) 4 С 12 Н 1/20, С 12 Н 7/00//

//(С 12 N 11//2200, С 12 R. 1:63) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (57) Изобретение относится к меди- цинской микробиологии и может быть .использовано при эпидемиологическом обследовании при холере. Штамм Vibrio cholerae e1tor 893 дикий, депонирован под номером КМ-18(893), Путем искусственной лизогенизации реципиентного штамма с использованием штамма 893 получают новую тест-культуру, которую используют при фаготипировании холерных вибрионов. Штамм продуцирует фаг XIII серовара VII гетероиммунной категории.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

Il0 ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4264925/28-13 (22) 18.06.87 (46) 30.01.89. Бюл. ¹ 4 (71) Всесоюзный научно-исследовательский противочумный институт

"Микроб" (72) Н.М. Остроумова, В.П. Мороз, Г.И. Коровкина, Л.В. Успенская, Т.Б. Караваева и Н.П. Коннов (53) 576.8.093.1(088.8) (54) ШТА1Ф1 БАКТЕРИЙ VIBRIO CHOLERAE

ELTOR 1 CT0 HHK YMKPFHHOI 0 AFA XIII

CEPOBAPA VII ГЕТЕРОИММУННОИ КАТЕГОРИИ

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при эпидемиологическом обследовании при холере методом фаготипирования. 5

Штамм Vibrio cholerae eltor 893 несет фаг не описанной ранее VII гетероиммунной категории 893, отличающийся от фагов I,II,III,IV,V u VI гетероиммунных категорий спецификой иммунитета.

Штамм № 893 дикий. Депонирован под номером КМ-18(893) и характеризуется следующими признаками.

Культурально-морфологические признаки. Подвижные, слегка изогнутые палочки 1,4-2,9 мкм в длину и 0,30,6 мкм в ширину с одним полярно расположенным жгутиком, спор и капсул не образует, грамотрицательны.

На твердых питательных средах (агар Мартена, агар Хоттингера рН

7,6-0,2) образуют через 18 ч выращио вания при 37+1 С круглые, диаметром

3,0-0,4 мм полупрозрачные колонии с голубоватым оттенком, ровным краем, слегка уплотненным центром. На жидких питательных средах (бульон

Мартена, 1Х-ная пептонная вода, бульон Хоттингера, рН 7,8+0,2) через

6 ч выращивания при 37+1 С образует равномерную муть и нежную пленку на поверхности.

Физиологические признаки. Тест на оксидазу положителен, разлагает до кислоты без газа маннозу, глюкозу, сахароэу, маннит, не разлагает арабинозу, иноэит, лактозу, ферментирует и окисляет глюкозу в среде Хью-Лейфсона; ферментирует крахмал и желатину; не образует дигидролазу аргинина и декарбоксилазы лизина и орнитина, не растет при повышенной (7-107) концентрации хлорида натрия, гемолизирует эритроциты барана по Грейгу.

Серологические свойства. Агглютинируется до титра холерными сыворот9

4 го до 45 С), перемешивают и выливают на 2 -ную агаровую пластинку в чашке Петри, дают застыть и инкуби" о руют 18 ч при 37 С ° При просмотре чашек отбирают одну типичную негативную колонию фага, Уколом платиновой иглы в центр колонии фаг переносят в 10 пробирок с 1,0 мл бульона. Туда же добавляют индикаторный штамм 570 и 0„7 -ный агар, как указано выше, Содержимое каждой пробирки выливают на отдельную агаровую пластинку и инкубируют 18 ч при 37 С, после чего в каждую чашку добавляют по 10 мл бульона и шпателем перемешивают с верхним агаровым слоем, жидкую часть переносят во флакон и фильтруют, как указано выше. Полученный концентрированный фаг 893 (!О -10у корпускул в 1 мл) в количестве 1,0 мл соединяют с 0,2 мл реципиентного штамма ME-7, добавляют 0,7%-ный агар и выливают на агаровую пластинку. Через 18 ч инкубирования при 37 С на поверхности реципиентного штамма обнаруживают единичные негативные колонии модифицированного фага 893, из центра которых высевают клоны, лизогенные по фагу 893 (МЕ-7/893) .

Применение штамма 893 V,cholerae

eltor и полученного с его помощью лиэогенного клона ME-7/893 в качестве тест-культуры при фаготипировании холерных вибрионов повышает точность эпидемиологических исследований при холере.

Составитель Г, Смирнова

Редактор Н. Киштулинец Техред М.Ходанич Корректор С. Шекмар

Тираж 500

Заказ 7411/30

Подписное

ВНИИПИ Государотвенного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 з 145484 ками 0 и Oraaa, не агглютинируется холерными сыворотками R. 0 и Инаба.

Спонтанно продуцирует умеренный фаг 893 ранее неизвестной VII гете" роиммунной категории, которыйлиэиру5 ет куль гуры холерных вибрионов, лизогенные по фагам I-VI категорий, и при лизогениэации чувствительной ,культуры холерных вибрионов создает у нее иммунитет (резистентность) только к фагам своей иммунной категории,не создает иммунитета к фагам

I-VI иммунных категорий. Фаг 893 используют при получении специфической 15 тест-культуры МЕ-7/893, применяемой для прямого фаготипирования холерных вибрионов классического и эльтор биовара при проведении эпидемиологического анализа. 20

Умеренный Aar 893 по электронномикроскопической структуре относится к II морфологической группе по классификации А.С. Тихоненко,по серологическим свойствам принадлежит к ра 25 нее не описанному ХЕТТ серотипу холерных фагов. На газоне индикаторного штамма Vibrio cholerae eltor 570 образует типичные колонии с прозрачным центром, окруженным узкой зоной З0 неполного лизиса 1,0+0 5 мм в диаметре.

Размножают штамм 893 на бульоне и агаре Мартена, рН 7,6+0,2, хранят в лиофилизированном состоянии.

Пример. Для получения специфической тест-культуры ME-7/893 готовят фильтрат (фильтрацией через бактериологические фильтры Ф-5) бульонной кУльтуры 18 ч роста при 4п Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я

37 С штамма 893 и в-количестве 1 мл соединяют с 0,2 мл бульонной культу,ры трехчасового роста индикаторного штамма 570 и 5,0 мл 0,7 -ного агара

Мартена (расплавленного и охлажденно- 45