Способ диагностики активной фазы ревматического заболевания

 

Изобретение относится к области медицины, в частности, к кардиологии. Целью изобретения является повышение точности. Для этого бестромбоцитарную плазму крови обрабатывают протаминсульфатом. Смесь перемешивают и выдерживают при температуре 25°С в течение 30 мин., после чего центрифугируют, осадок промывают раствором хлорида натрия, растворяют в уксусной кислоте и спектрофотометрируют при длиннах волн 280 и 320 нм. Затем проводят расчет концентрации комплекса растворимого фибрин/фибриногена в мг/л с учетом объема взятой крови, объема спектрофотометрированного раствора, разницы экстинкций раствора при 280 и 320 нм и коэффициента экстинкции фибриногена в кислой среде и при его наличии диагностируют активную фазу ревматического заболевания. Способ позволяет повысить точность за счет увеличения на 43% частоты положительных результатов в активной фазе этого заболевания и уменьшения на 33% ложно-положительных результатов в неактивной фазе заболевания. 3 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ, РЕСПУБЛИН g 4 G 0l N зз/49

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО HBOBPETEHHßM И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21 ) 407741 7/28-1 4 (22) 10.06.86 (46) 07.04,89. Бюл. Р 13 (71) Киевский медицинский институт им. акад. А.А.Богомольца (72) Т.Д.Никула, Л.И.Михаловская, И.А.Палиенко, Г.А.Белицкая и Н.Е,Федорова (53) 612.015 (088.8) (56) Arthr. à Rheum., 1971, v. 14, р. 267-275. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АКТИВНОЙ

ФАЗЫ РЕВМАТИЧЕСКОГО ЗАБОЛЕВАНИЯ (57) Изобретение относится к области медицины, в частности к кардиологии. Целью изобретения является повышение точности. Для этого бестромбоцитарную плазму крови обрабатывают протаминсульфатом, Смесь перемешивают и выдерживают при температуре

Изобретение относится к лабораторной диагностике и может быть использовано для диагностики активной фазы ревматических заболеваний.

Цель изобретения — повышение точности способа.

Поставленная цель достигается тем, что. в бестромбоцитной плазме венозной крови комплекс фибрин — фибриноген осаждают протаминсульфатом, центрифугируют, промывают осажденный комплекс с последующим растворением его и спектрофотометрированием,после чего количество растворимого фибрина определяют из соотношения фибрнн

„„SU „„ЯДддя А 1

25 С в течение 30 мин, после чего центрифугируют, осадок промывают раствором хлорида натрия; растворяют в уксусной кислоте и спектрофотометрируют при длинах волн ?80 и 320 нм.

Затем проводят расчет концентрации комплекса растворимого фибрин — фибриногена в мг/л с учетом объема взятой крови, обьема спектрофотометрированного раствора, разницы экстинкций раствора при 280 и 320 нм н коэффициента экстинкции фибриногена в кислой среде и при сго наличии диагностируют активную фазу ревматического заболевания. Способ позволяет повысить точность за счет увеличения с на 43Х частоты положительных резульЯ татов в активной фазе этого заболевания и уменьшения на ЗЗЕ ложно-половвтельвых рееультетав в веектввнов С фазе заболевания. 3 табл.

2 к осадку 1:(2,80-2,92), при обнаружении растворимого фибрина диагностируют активную фазу ревматических заболеваний.

Способ осуществляется следующим .образом.

К 0,5 мл исследуемой бестромбоцитной плазмы венозной крови прибавляют 0,5 мл 17.-ного раствора протаминсульфата в 0,06 М фосфатном буфере, рН 7,4, М 0,15. Смесь перемешио вают и выдерживают 30 мин при 25 С, после чего центрифугируют 15 мин при

2500 об/мин. Полученный осадок дважды промывают 0,9Х-ным раствором хло1471132 рида натрия и после второго промывания выдерживают пробирку 5 мин в перевернутом виде. Ватем осадок растворяют в 3 мл 1,5%-ного раствора уксусной кислоты и. спектрофотометрируют при 280 и 320 нм. Расчет концентрации растворимого фибрина осуществляют из соотношения фибрина к осадку 1 : (2,80-2,92).

Расчет концентрации фибрина (мг/л) производят по формуле:

h,F V )0000

Q Ч.К где С вЂ” концентрация комплекса растворимый фибрин — фибриноген мг /л;

K = 2,86 — коэффициент, учитываюший Отношение белка в осадке к фибрину;

3.

V — обьем Взятой плазмы, мм

7 — Объем спектрофотометри е з рованного раствора, мм

F2 ; э с, — разница экстинкций алло раствора при длинах волн

280 и 320 нм;

15,0 — коэффи31иент экстинкции фибриногена в кислой среде.

Например, если V = 0,5 мл, V

= 3,0 мл, то h F. = 0,290-0,024

0,266, Следовательно, С = 372 мг/л.

При обнаружении растворимого фибрина в плазме крови диагностируют активную фазу ревматических заболеванийй.

У всех 28 обследован13ых здоровых лиц растворимый фибрин в плазме кро-. ви не определялся.

Пример 1, Больной Л,, 32 лет.

Клинический диагноз: Ревматоидный артрит, серонегативный, быстропрогрессирующее течение, активность Т Х степени, с множественным поражением мелких и крупных c" cTRBQB верхних и нижних конечностей, @НС ТТ Тстепени, Исследование при поступлении в ста ционар: K 0,5 мл цитратной плазмы венозной крови больного, лишенной тромбоцитов, центрифугированием при

3000 Об/мин в течение 20 мин, прибавили 0,5 мл 1%-ного раствора протаминсульфата в 0,06 М фосфатном буфере, рН 7,4, М 0,15. Смесь переме-о шали и выдержали 30 мин при 25 С, после чего центрифугировали 15 мин при 3500 Об/мин. Полученный осадок дважды промь|пи 0,9/-ным раствором хлорица натрия, затем выдержали пробирку 5 мин в перевернутом виде.Осадок растворили в 3 мл 1,5%-ного раствора уксусной кислоты и спектрофотометрировали при 280 нм. После спектрофотометриронания получили величину экстинкции раствора 0,405 при длине волны 280 нм и поправку на мутность 0,063 при длине волны 320 нм, Количество растворимого фибрина рассчитали по формуле

hF. V 10000

С

X V (О 405-0 063) 3 i10000

2. 2.

0,5 I 15,0 2,86

478 мг/л.

Количество растворимого фнбрина значительно повьш3ено. Другие лабораторные данные: СОЗ 48 мм/ч, С-реактивный белок сыворотки 3 мм, концентрация сиалОВых кислот 0 у 390 ммОль/л

К -глобулины сыворотки 2,4%, It -глобулины 28,6%.

В приводимом примере клинические данные и известные лабораторные данные соответствуют активности воспалительного процесса ХТТ степени, Резкое повышение концентрации растворимого фибрина в плазме адекватно клиническим и известным лабораторным данным, Диагноз Т1Т степени активности ревматоидного артрита подтвержден.

Пример 2. Тот же больной,что и в примере 1. Исследование после двухнедельного лечения в стационаре, сопровождавшегося значительным клиническим улучшением. Ход исследования идентичный описанному в примере 1. После спектрофотометрирования получили величину экстинкции раствора 0,210 при длине Волны 280 нм и

45 поправку на мутность 0,020 при длине волны 320 нм, Расчет количества растворимого фибрина в исследуемой плазме

АЕ U 10000

50 С—

V К (О 210-0 020) 3 10000

А А

0,5 . 15 2,86

266 мг/л.

Таким образом, концентрация раст- воримого Ьибрина в плазме крови боль ного значительно снизилась, что со1471132

6 ответствует клиническому улучшению.

В то же время 003 у больного продол4 жает оставаться резко повышенной (46 MM/÷), С-реактивный протеин по-прежнему 3 мм, а концентрация глобулинов в сыворотке повысилась до 31,47,. Известные лабораторные показатели активности ревматического процесса оказались менее динамичными, чем концентрация растворимого фибрина в крови.

Пример 3. Больной R., 39 лет.

Клинический диагноз: Остеоартроз (остеоартрит?) коленных суставов,ФНС

l степени.

Ход исследования тот же, что и в предыдущих примерах. После спектрофотометрирования получили величину экстинкции раствора 0,050 при длине волны 280 нм и поправку на мутность

0,050 при длине волны 320 нм. Расчет концентрации растворимого фибрина в исследуемой плазме:

I Я V !0000

Т v к

1О

30

Растворимый фибрин в испытуемой плазме не обнаружен, что позволило исключить диагноз остеоартрита (т.е. активную фазу воспалительного процесса) и подтвердить диагноз остеоартроэа (т.е. неактивной фазы воспалительного процесса).

Для проверки диагностической ценности предлагаемого метода проведены параллельные исследования растворимого фибрина и ПРФ (известный способ) в плазме крови у 28 здоровых лиц, у 49 больных ревматическими заболеваниями в активной фазе (2! больной ревматоидным артритом, !3 — остеоартритом, 9 — системной красной волчанкой, .2 — системной склеродермией, 2 — геморрагическим васкулитом, 2 — интестинальным полиартритом) и у

18 больных ревматическими заболеваниями в неактивной фазе (4 больных ревматоидным артритом, 13 — остеоартрозом, одна больная склеродермией), Как видно из табл.1, частота обнаружения в плазме растворимого фибрина у больных ревматоидным артритом, остеоартритом и ревматическими заболеваниями в целом достоверно (соответственно на 48-777,) превышает

50 (О 050-0,050) 3 1 0000

Д У О, 0 5 15 2 86 частоту обнаружения ПРФ у тех же лип.

Следовательно, точность диагностики с использованием пред;;агаемого способа вопле по cpRBHeHHfo с известным— опр ед ел е ни ем ПРФВ табл. 2 сравнивается частота обнаружения растворимого фибрина и

ПРФ в плазме крови одних и тех же больных ревматическими заболеваниями в зависимости от активности процесса (49 больных активной и 18 больных в неактивной фазе), Таким образом, наличие растворимого фибрина в крови является достоверно (на 33-437,) более точным критерием активности процесса при ревматических заболеваниях, чем наличие

ПРФ, В табл.3 сравниваются абсолютные значения концентрации растворимого фибрина, ПРФ и концентрации фибриногена в плазме крови у 12 больных ревматоидным артритом до начала лечения и через 2 недели после начала лечения.

Концентрация фибриногена выбрана как известный показатель активности ревматического процесса, Из приведенных в табл.3 данных следует, что концентрация растворимого фибрина в крови является более лабильным критерием активности ревматоидного артрита, чем концентрация фибриногена и ПРФ. У одного из 12 больных, у которого двухнедельное лечение было неэффективным, концентрация растворимого фибрина существенно не изменилась (соответственно 508 и 483 мг/л). У. остальных 11 больных концентрация растворимого фибрина в крови существенно снизилась, но не достигла нормы, поскольку активность воспалительного процесса при эффективном лечении ревматоидного артрита снижается, но не ликвидируется в двухнедельный срок, Снижение концентрации растворимого фибрина в крови, таким образом, является ранним лабораторным признаком снижения активности ревматического процесса и может служить надежным объективным критерием эффективности проводимого лече55 ния, что имеет несомненное практическое значение.

Использование предлагаемого способа обеспечивает повышение точности лабораторной диагностики ревма.1471132 тических заболенаний (по сравнению с известным) за счет увеличения (на

43%) частоты положительных результатов в активной фазе этих заболеваний, уменьшения (на 33%) — практически устранения — ложноположительных результатов н неактивной фазе заболеваний и более адекватного (статистически достоверного) отражения динамики активности ревматического процесса. хлорида натрия, растворяют в уксусной кислоте, спектрофотометрируют при ?80 и 320 нм, затем рассчитывают содержание комплекса растворимый

5 фибрин — фибриноген по формуле

b F-" V 10000

V К где С вЂ” концентрация комплекса,мг/л, V — объем взятой плазмы, мм ;

V — объем спектрофотометри-:

3, рованного раствора, мм

b E. = Е ао — E — разница экстинк15 ций раствора при 280 и

320 нм; — 15,0 — коэффициент экстинкции фибриногена в кислой среде;

К = 2,86 — коэффициент, учитывающий

20 отношение белка в осадке к фибрину, и при обнаружении растворимого фибрина диагностируют активную фазу ревматического заболевания, Таблица!

Группа обследоРастворимый фибрин

ПРФ в анных

Растворимый фиби рин обнаружен

ПРФ обнаружены число p + Blp больных число p+ mp больных

Ренматоидный артрит

Остеоартрит

Другие ревматические забо?1 21 1Г)0 5 21

) 3 13 100-13 13

93+7

15 13 87+9

15 14 левания

Ревматические заболевания

98+? 49 27 55+7 0,001

49 48 суммарно

Т а б л и ц а 2

Группа обслецонанных

Растворимый фибрин

ПРФ

Растворимый фибрин обнаружен и ПРФ обнаружен число р+ шр больных

Ревматические заболевания в активной фазе

Ревматические заболевания в неактивной фазе

49 27 55+ 7 "0,001

49 48 92+2

18 6 33 «+ 11 . (005

18 0 0+6

Формула изобретения

Способ диагностики активной фазы ревматического заболевания путем биохимического исследования крови, о т л и ч а и шийся тем, что, с целью повышения точности способа, отделяют бестромбоцитарную плазму крови, обрабатывают ее протаминсульфатом, полученпую смесь центрифугируют, осадок IIpoMb)BBIOT раствором

11 52+ 11 (0,001

3 23+ 12 (0,001

)471132

Т а б л и ц а 3

Больные ревматоидным артритом

Здоровые лица

Сравниваемые показатели

До лечения

После двухнедельного лечения

28

О»+ 0

Растворимый фибрин,мг/л

28

289510,8

Фибриноген, мг/л

ПРФ, мг/л

28

0 0 — сравнение соответствующих величин с группой здоровых лиц сравнение средних величин соответствующего показателя до и после лечения, Составитель Л.О)илина

Техред A.Êðàâ÷óê,Корр ек тор А. Обруч ар

P ед а к тор Е . Папи

Подписно е

Заказ 1603/47

Тираж 788

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãîðoä, ул. Гагарина,101 п 12

М+ 438,6+ 21,6

-,Р (0 001

Р -Ф п 12

М+ 5112+ 31

P 0,001

М.+ и 12

M+ 21 33+6, 27

P (0,001

P ф- Ф.

12

217,8 «+ 62,2 (0,001

<0 05

12

5063+ 47 (O» 00)

0 О, 2

12

12,11+2,42

° 0,001

)0,05